Per iniziare, prendi il brodo di lisogenesi o il terreno LB e aggiungi gli antibiotici al terreno. Aliquotare cinque millilitri di terreno in provette sterili con tappo. Inoculare il terreno con ceppi di Escherichia coli che esprimono plasmidi prelevati da scorte congelate e incubare la coltura in uno shaker per una notte.
Successivamente, preparare una soluzione di tiofene sulfamidico da 10 millimolari in DMSO e vortice per mescolare accuratamente. Diluire nuovamente le colture da 1 a 100 volte in 10 millilitri di terreno prelevati in provette coniche da 15 millilitri. Agitare brevemente per mescolare.
Aggiungere le colture ai pozzetti appropriati di una piastra a 96 pozzetti. Dopo la miscelazione, preparare una serie di diluizioni dalle file A alla E, trasferendo ogni volta 50 microlitri di soluzione. Coprire la piastra con nastro microporoso e incubarla.
Dopo aver rimosso il nastro, utilizzando un lettore di piastre, leggere la densità ottica a 600 nanometri GFP e mCherry. Infine, registra e traccia i dati come fluorescenza normalizzata per cella. I dati per i composti 3-tiofene sulfonamide hanno suggerito che i composti 1A e 3B erano inibitori di LuxR/HapR in misura diversa, mentre 2B non aveva alcuna attività.
