Per eseguire il passaggio delle neurosfere ottenute da cellule staminali neuronali isolate dalla zona subventricolare dei neuroni, raccogliere il terreno contenente le neurosfere dalle piastre multipozzetto e trasferirle in una provetta da centrifuga da 15 millilitri. Centrifugare le neurosfere per cinque minuti a 300 G.Dopo aver rimosso il surnatante, aggiungere 200 microlitri di soluzione enzimatica al pellet e picchiettare delicatamente il fondo del tubo per rimuoverlo. Incubare per 10 minuti a temperatura ambiente per facilitare la dissociazione della neurosfera.
Quindi aggiungere un millilitro di terreno di controllo per arrestare la reazione enzimatica. Dissociare meccanicamente le neurosfere con una micropipetta P 1000 pipettando su e giù da 10 a 20 volte. Aggiungere un volume aggiuntivo di quattro millilitri di terreno di controllo e mescolare per inversione per lavare le cellule.
Centrifugare le cellule per cinque minuti a 300 g prima di rimuovere il surnatante. Aggiungere un millilitro di terreno completo e risospendere il pellet per omogeneizzare la sospensione cellulare pipettando su e giù 10 volte. Dopo aver diluito una parte di un'aliquota della sospensione cellulare con una parte di blu di tripano, contare la sospensione cellulare utilizzando una camera Neubauer.
Per espandere la coltura, seminare le cellule a una densità di 10.000 cellule per centimetro quadrato utilizzando un terreno completo in una piastra di coltura o in un pallone appropriato.
