Utilizzando il kit consigliato, procedere alla preparazione di 95 microlitri della soluzione di nucleofecazione in una provetta da 1,5 millilitri per ogni condizione di nucleofecazione desiderata. Preparare anche un pallone T25 riempito con quattro millilitri di terreno completo preriscaldato per condizione e conservarlo nell'incubatrice fino all'uso. Per eseguire la nucleofezione, centrifugare il numero desiderato di cellule per cinque minuti a 300 G prima di rimuovere il surnatante.
Aggiungere un millilitro di DPBS e risospendere il pellet in modo omogeneo pipettandolo su e giù 10 volte. Dopo aver ripetuto la centrifugazione, risospendere il pellet in 95 microlitri di soluzione di nucleofezione. Combinare i 95 microlitri di cellule con una soluzione premiscelata contenente cinque microlitri di ciascun plasmide selezionato per la nucleofezione.
Dopo aver trasferito questa soluzione in una cuvetta, posizionarla nel dispositivo nucleofector per nucleofettare le cellule con i plasmidi utilizzando il programma ottimizzato di cellule staminali neurali del sistema nucleofector. Dopo aver completato l'elettroporazione, utilizzando la pipetta Pasteur fornita nel kit, introdurre con cura il terreno completo caldo nella cuvetta. Trasferire il contenuto della cuvetta nel pallone T25 precedentemente preparato contenente il terreno completo preriscaldato.
Incubare le cellule nucleofettate in un incubatore umidificato a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica per tre-cinque giorni e visualizzare le neurosfere nucleofettate.
