Induzione in vitro di cellule Th17 patogene in cellule T CD4⁺ naive di topi

Per iniziare, rimuovere il PBS dalla piastra a 24 pozzetti pre-rivestita. Risospendere le cellule CD4+T native allo splenic di topo arricchito in un terreno di coltura cellulare Th17 e dispensarle in diversi pozzetti di una piastra a 24 pozzetti pre-rivestita con anti-CD3. Aggiungere il terreno di coltura cellulare Th0, il classico terreno di coltura Th17 non patogeno e il classico terreno di coltura patogeno Th17 per il contrasto nei restanti pozzetti della piastra.

Aggiungere un microlitro di soluzione anti-CD28 a ciascun pozzetto. Coltiva le cellule in un incubatore al 5% di anidride carbonica a 37 gradi Celsius per cinque giorni. Il secondo giorno, sostituire metà del terreno di coltura surnatante con un terreno di coltura fresco.

Osserva le cellule al microscopio ottico il quinto giorno. Raccogli i surnatanti cellulari da ciascun gruppo e crioconservali a 80 gradi Celsius. Le cellule T CD4+naive sono state coltivate con terreno di differenziazione Th0 e Th17 per cinque giorni, con il risultato che le cellule T hanno mostrato una crescita a grappolo in entrambi i mezzi.

L'analisi della citometria a flusso ha rivelato che il 90% delle cellule CD4+T naive si è differenziato con successo in cellule Th17 patogene sotto la stimolazione di un nuovo terreno di coltura cellulare Th17.