Per iniziare, fissare il supporto a sbalzo di un AFM sul cavalletto a sbalzo. Utilizzare una pinza da orologiaio per montare il cantilever selezionato sul supporto. Serrare la vite sul supporto per fissare il cantilever.
Posizionare e bloccare il supporto a sbalzo sulla testa AFM che poggia sul supporto. Utilizzare la funzione del motore passo-passo nel software AFM per estrarre la testa AFM nel punto più alto. e impostare tale posizione su 0.0.
Sollevare con cautela la testa AFM dal suo supporto, quindi montarla sul sample stage posizionando le gambe nelle rispettive fessure. Per calibrare il cantilever, utilizzare la funzione del motore passo-passo per avvicinarlo alla superficie del campione. Quindi fare clic su Avvicinamento nella finestra Modalità di contatto per spettroscopia.
Abbassare il cantilever con piccoli incrementi di 15 micrometri. Premere Acquisisci per acquisire una curva di forza. Quindi selezionare la curva di forza, aprirla nella finestra Gestione calibrazione e selezionare Modalità basata su contatto nella sezione Metodo.
Ora utilizzare la funzione di selezione dell'intervallo di adattamento e selezionare la curva di retrazione a sbalzo per un adattamento della curva lineare. Quindi, seleziona la casella di controllo Sensibilità per convertire l'unità di forza da volt a Newton. Sollevare il cantilever da 100 a 200 micrometri nel liquido e selezionare la funzione del rumore termico Ancora una volta, fare clic su Seleziona intervallo di adattamento e adattare la curva della campana del rumore termico con una curva di Lawrence.
Dopo l'adattamento della curva, selezionate la casella Costante molla K (Spring Constant K). Verificare che la costante della molla sia vicina al valore del produttore e annotarla per riferimento futuro. Successivamente, posizionare il campione montato su vetrino di oculi di roditori, vasi retinici o matrice subendoteliale sullo stadio AFM e visualizzare i vasi retinici.
Selezionare Modalità di contatto per la spettroscopia nella sezione Esperimento del software. Quindi impostare la forza del set point su 0,5 nano-Newton e fare clic su Avvicinamento. Utilizzare le viti del tavolino sul tavolino AFM per posizionare con cura la sonda a sbalzo nella posizione desiderata sul campione.
Fare clic su Avvicinamento per posizionare il cantilever più vicino al campione, quindi fare clic su Acquisisci per acquisire le curve di forza. Infine, salvate tutte le curve di forza per l'analisi. Le curve di approccio e retrazione ottenute da un capillare retinico isolato da un topo diabetico erano più ripide di quelle ottenute da un topo non diabetico.
