Imaging confocale 3D migliorato di tessuti cardiaci umani puliti con solvente

Per iniziare, utilizzare un bisturi per sezionare il tessuto cardiaco umano fissato con paraformaldeide al 4% per adattarlo all'interno della camera per la microscopia confocale. Disidratare i campioni cardiaci in una serie di metanolo graduato per un'ora ciascuno a temperatura ambiente con agitazione, seguita da immersione notturna in una soluzione di diclorometano al 66% e metanolo al 33% con agitazione. Il giorno successivo, candeggiare il campione eseguendo i passaggi indicati.

Quindi reidratare il campione con una serie di metanolo graduato per un'ora ciascuna con agitazione. Dopo l'immunomarcatura, eseguire i seguenti passaggi per preparare il tessuto per l'imaging. Fissare una camera contenente adesivo su un vetrino e applicare lo smalto per unghie attorno al perimetro della camera.

Accendere il microscopio confocale a scansione laser verticale dotato di una lente 5X. Utilizzando linee laser adeguate agli spettri di emissione dei fluorofori utilizzati, acquisire immagini Tile scan e z-stack con una risoluzione di 1024 per 1024. A livello di microscala, la pulizia dei tessuti dei campioni cardiaci consente la visualizzazione dei gangli contenenti neuroni cardiaci e il patterning neurale dell'innervazione miocardica.