Per iniziare, scongelare il passaggio, un preadipociti sottocutanei bianchi umani e aggiungere le cellule in una fiaschetta T75 contenente da 12 a 15 millilitri di terreno di crescita preadipocitario caldo-2. Dopo che le cellule hanno raggiunto il 90% di confluenza, lavarle con PBS e incubarle con un millilitro di soluzione di tripsina-EDTA allo 0,25% per due minuti. Utilizzando un microscopio ottico, confermare il distacco cellulare e aggiungere 23 millilitri di terreno di crescita preadipocitario-2 alle cellule.
Erogare un millilitro di sospensione cellulare in ciascun pozzetto di una piastra di co-coltura da 24 pozzetti e incubare la piastra per ottenere la confluenza cellulare. Quindi sostituire il terreno con un millilitro di terreno di differenziazione preadipocitaria e incubare a 37 gradi Celsius con il 5% di anidride carbonica per 10 giorni. Il sesto giorno di differenziazione, seminare cinque volte 10 alla potenza di quattro MVEC SAT umani in 500 microlitri di terreno di coltura MVEC completo su un inserto transwell.
Posizionare l'inserto in un pozzetto contenente 500 microlitri di terreno di coltura MVEC completo e incubare a 37 gradi Celsius con il 5% di anidride carbonica. Il giorno 10, quando gli adipociti sono completamente differenziati, rimuovere metà del terreno da ciascun pozzetto e trasferire gli inserti transwell contenenti MVEV SAT di confluenza in ciascun pozzetto. Incubare la piastra per 24 ore per ottenere una co-coltura.
Man mano che i preadipociti bianchi sottocutanei umani diventano più differenziati, si può notare lo sviluppo di vacuoli lipidici.
