Per iniziare, estrai il DNA dai campioni di mosca utilizzando un kit di estrazione del DNA. Quindi utilizzare un lettore di micropiastre per determinare i valori di OD260 e OD280 per confrontare la purezza del DNA e la concentrazione di acido nucleico. Successivamente, preparare le soluzioni standard del fluorimetro aggiungendo 190 microlitri di soluzione di lavoro a due provette da centrifuga da 0,5 millilitri.
Quindi aggiungere 10 microlitri ciascuno di standard uno e standard due alle soluzioni di lavoro. Tenere i tubi al riparo dalla luce per almeno 15 minuti. Mescolare due microlitri di DNA di prova con 198 microlitri di soluzione di lavoro in una provetta da centrifuga da 0,5 millilitri e tenere la miscela al buio per almeno 15 minuti.
Dopo 15 minuti, accendere il fluorimetro e selezionare la misurazione della concentrazione di dsDNA, impostazione a lungo raggio. Testare lo standard uno e lo standard due per ottenere la curva standard. Quindi posizionare i campioni da analizzare nei pozzetti del saggio.
Regolare il volume di picco del DNA a due microlitri ed eseguire la misurazione. Per visualizzare il DNA, impostare prima 20 microlitri della reazione di amplificazione della PCR. Posizionare le provette in un termociclatore ed eseguire i cicli di PCR.
Dopo la PCR, sottoporre i prodotti a elettroforesi su gel di agarosio al 2%. Quindi posizionare il gel su un sistema di imaging su gel per l'analisi fotografica. La valutazione della purezza del DNA estratto mediante lettore di micropiastre ha mostrato che tutti i campioni freschi e il vecchio campione avevano rapporti da OD260 a OD280 superiori a due.
Al contrario, il vecchio campione due mostrava un rapporto più basso. La concentrazione di DNA derivata dalle letture OD260 era più alta nei campioni freschi, seguita dal vecchio campione e più bassa nel vecchio campione due. L'analisi elettroforetica ha rivelato bande nell'intervallo da 250 a 400 paia di basi, che erano più pronunciate nei campioni freschi, rispetto a quelli vecchi.
