Una volta che le cellule epiteliali tracheali murine formano un monostrato intatto con un aspetto di ciottolo, sciacquare delicatamente le cellule con tre millilitri di PBS preriscaldato. Aggiungere tre millilitri di soluzione di dissociazione enzimatica animale priva di componenti al piatto e incubare a 37 gradi Celsius per cinque minuti. Pipettare delicatamente per rimuovere le cellule e trasferire la sospensione in tre millilitri di soluzione di inibizione enzimatica priva di componenti animali.
Centrifugare la sospensione cellulare a 400 G per cinque minuti a quattro gradi Celsius e risospendere il pellet in un millilitro di mezzo di espansione. Contare le cellule vitali utilizzando il blu di tripano e un emocitometro. Sospensione cellulare su piastra P1 su un piatto da 100 millimetri pre-rivestito con collagene di coda di ratto.
Coltivare le cellule a 37 gradi Celsius con il 5% di anidride carbonica.
