Per iniziare, posiziona un'arpa di platino in una pesa vicino alla piattaforma MEA. Quindi coprire l'arpa con circa tre millilitri di aCSF per ridurre le sue tendenze idrofobiche. Usa le forbici per tagliare circa 1,5 pollici dalla punta stretta di una pipetta di trasferimento.
Quindi, utilizzare la pipetta modificata per raccogliere una fetta di cervello dalla camera di contenimento delle fette. Erogare delicatamente la fetta di cervello e l'eventuale soluzione nella pipetta nel pozzetto del chip. Per posizionare correttamente la fetta, utilizzare un pennello morbido per creare una corrente nella soluzione che spinge la fetta di cervello sugli elettrodi di registrazione.
Usando una pinza, posiziona delicatamente l'arpa sopra la fetta cerebrale con i fili rivolti verso il basso per premere la fetta sugli elettrodi di registrazione. Orientare l'arpa in modo che il lato senza telaio sia rivolto verso l'ago di afflusso e che il telaio dell'arpa non entri in contatto con nessuno degli elettrodi di registrazione. Ora prendi una pipetta di scarto e rimuovi l'eccesso di aCSF.
Quindi prendi una salvietta antistatica, ruota un angolo per creare una punta e usala per assorbire l'aCSF rimanente che circonda gli elettrodi di registrazione senza toccare gli elettrodi di registrazione, la fetta cerebrale o l'arpa. Utilizzando una pipetta designata per aCSF, aggiungere rapidamente circa due millilitri di aCSF carbogenato per coprire la fetta di cervello. Riempire il pozzetto con circa tre millilitri di aCSF carbogenato fino a riempirlo per circa tre quarti.
Quindi utilizzare un microscopio o una fotocamera per scattare una foto ad alta risoluzione della fetta di cervello sul chip MEA. Posizionare i tubi di afflusso e di deflusso nel becher riempito con aCSF. Posizionare l'ago di afflusso vicino al fondo del pozzetto del chip, appena fuori dagli elettrodi di registrazione.
Quindi posizionare l'ago di deflusso vicino alla parte superiore del pozzetto del chip, verso il bordo, in modo che il liquido salga quasi fino all'orlo del pozzetto del chip, circa quattro millilitri. Ora impostate l'afflusso di perfusione a cinque millilitri al minuto e il deflusso di perfusione a sette millilitri al minuto. Attiva l'afflusso e il deflusso.
Rimuovere bene l'ago di afflusso dal chip fino a quando non inizia a emettere soluzione invece di aria. Dopodiché, riposiziona l'ago all'interno del pozzetto del chip. Quindi utilizzare un riscaldatore per soluzioni per mantenere la soluzione alla temperatura fisiologica o quasi, tra i 34 e i 37 gradi Celsius.
Lasciare che l'aCSF persi sulla fetta di cervello per 10 minuti. Trascorsi 10 minuti, spostare il tubo di deflusso nel becher di smaltimento. Quindi spostare il tubo di afflusso nel becher contenente la soluzione pro-convulsivante.
Lasciare che l'aCSF non convulsivante venga espulso dal sistema di perfusione nel becher di scarto per 10 minuti. Infine, trasferire il tubo di deflusso nel becher contenente la soluzione pro-convulsivante e lasciarlo scorrere fino al termine dell'esperimento. Una potente attività elettrografica simile a una crisi epilettica è stata frequentemente osservata nelle regioni neocorticali sia con i paradigmi zero magnesio che con 4-amminopiridina.
Le regioni dell'ippocampo hanno mostrato una maggiore variabilità tra le fette di cervello, con alcune che dimostravano un'attività simile a una crisi epilettica e altre che mostravano scariche transitorie. L'attività neocorticale sotto il paradigma zero magnesio ha mostrato una potenza più elevata in più bande di frequenza rispetto al paradigma 4-aminopiridina. L'attività dell'ippocampo nel paradigma zero magnesio ha dimostrato una potenza maggiore nelle bande di frequenza ad alta gamma rispetto alla neocorteccia ed entrambe le regioni cerebrali nel paradigma 4-aminopiridina.
