Per iniziare, verificare la sequenza dei geni desiderati isolati dai parassiti Plasmodium falciparum trattati con farmaci. Dopo aver diluito i globuli rossi parassitizzati, aggiungere un volume appropriato per ottenere un totale di 50 parassiti in 10 millilitri di terreno, garantendo il 2% di ematocrito. Quindi, aggiungere 100 microlitri di questo terreno contenente 50 parassiti a ciascun pozzetto della piastra a 96 pozzetti.
Posizionare la piastra in un Secador ermetico lavato con gas miscelato. E incubare a 37 gradi Celsius, rifornendo il terreno ogni due giorni. Sostituire il terreno con RPMI completo contenente il 2% di ematocrito ogni sette giorni fino alla comparsa dei parassiti.
Inclinare la piastra a 96 pozzetti a un angolo di 45 gradi per consentire ai globuli rossi di stabilizzarsi. Rimuovere con cautela il terreno da ciascun pozzetto utilizzando una pipetta multicanale. Osservare un cambiamento di colore in giallo o rosso scuro nei pozzetti contenenti parassiti, che contrasta con il colore rosa dei terreni nei pozzetti privi di parassiti.
Quindi, estrarre una piccola quantità di coltura dal pozzetto che mostra il cambiamento di colore e preparare una sbavatura su un vetrino etichettato. Dopo aver eseguito la colorazione Giemsa, osservare il vetrino al microscopio. Trasferire il contenuto del pozzetto in cui sono stati osservati i parassiti in una fiaschetta T25 e incubare per far crescere i parassiti per quattro o cinque giorni.
Una volta che la parassitemia raggiunge il 2-3% di saponina, lisa 500 microlitri di coltura del parassita. Ed estrarre il materiale genetico del parassita.
