Immunoprecipitazione di RapR-Shp2 per studiare il controllo chemiogenetico della tirosina fosfatasi

Per iniziare, coltivare e preparare le cellule T HEK 293 che esprimono RapR-Shp2 per l'immunoprecipitazione. Per preparare il Sefarosio, aggiungere la proteina G-Sefarosio risospesa in un tubo da 1,5 millilitri. Dopo aver aggiunto il tampone di lisi, microcentrifugare la provetta per un minuto a 2000 G e rimuovere con cautela il tampone di lisi.

Quindi risospendere il Sepharose in 380 microlitri di tampone di lisi capovolgendo il tubo alcune volte. Incubare il Sefarosio con BSA e l'anticorpo su un rotatore a quattro gradi Celsius per 1,5 ore. Dopo aver lavato il Sepharose come dimostrato in precedenza, utilizzare una punta tagliata per risolverlo con cura nel tampone di lisi.

Aggiungere il surnatante delle cellule T HEK 293 preparate che esprimono RapR-Shp2 a 50 microlitri di Sepharose sospeso in una nuova provetta da 1,5 millilitri e incubare la provetta su un rotatore a quattro gradi Celsius per 1,5-2 ore.