Isolamento di cellule epiteliali di superficie ovarica primaria umana per l'ottenimento di organoidi per studi tissutali in vitro

Per iniziare, trasporta le ovaie umane in laboratorio in cloruro di sodio allo 0,9% o in una soluzione salina sterile simile su ghiaccio. Sciacquare le ovaie con una soluzione salina fresca e fredda in una capsula di Petri. Trasferisci ogni ovaia in una provetta conica da 50 millilitri e aggiungi due o tre millilitri di terreno di digestione per coprire l'ovaio.

Mettere il tubo in un bagno di perline, temperato a 37 gradi Celsius per 30 minuti. Quindi trasferire con cura l'ovaio in una capsula di Petri da 60 millimetri contenente 10 millilitri di terreno di raccolta. Usando un raschietto cellulare, strofinare delicatamente la superficie ovarica contenente le cellule epiteliali della superficie ovarica umana.

Lavare il raschietto nel mezzo prima di raschiare almeno altre due volte. Trasferire le cellule epiteliali della superficie ovarica umana nel terreno di raccolta in una provetta da 15 millilitri. Far girare le celle a 240 G per cinque minuti.

Se il pellet mostra un colore rosso indicativo di contaminazione con globuli rossi, risospendere il pellet in un millilitro di tampone di lisi dei globuli rossi. Quindi, aggiungere quattro millilitri di PBS con calcio e magnesio e centrifugare a 240 g per cinque minuti. Crioconservare il pellet di cellule epiteliali della superficie ovarica umana per un futuro uso in coltura.