Processo di infezione in vivo di piantine di Pinus pinaster con nematodi del pino

Per iniziare, impostare le sospensioni di nematodi misti del pino in fase di vita a 1000 nematodi per millilitro. Contare i nematodi su un vetrino concavo al microscopio binoculare con ingrandimento fino a 40x. Prima di inoculare i nematodi, rimuovere manualmente gli aghi da una sezione al di sotto dei cinque centimetri superiori del gambo di pino e praticare un'incisione longitudinale superficiale utilizzando un bisturi sterilizzato.

Nella zona della ferita, posizionare un pezzo di cotone sterilizzato per contenere 0,5 millilitri di sospensione di nematodi di pino e fissarlo con una striscia trasparente per mantenere l'umidità. Mantenere la serra in condizioni di umidità e annaffiare frequentemente. Segui regolarmente la progressione della malattia dell'avvizzimento del pino e valuta la sintomatologia quantificando la percentuale di aghi scoloriti e appassiti.

A 20 giorni dall'inoculazione, tagliare le piantine alla base del fusto per l'estrazione dei volatili. Metti le piantine in sacchetti di carta marrone e congelale a meno 20 gradi Celsius. L'infezione riuscita delle piantine di pino con il nematode del pino ha provocato i sintomi della malattia dell'avvizzimento del pino circa 20 giorni dopo l'infezione.