Per iniziare, collegare un grande puntale per pipetta tagliato P200 a una siringa da 10 millilitri e riempirla con PBS. Utilizzare una pinza per inserire la punta della siringa nell'apertura di un segmento intestinale isolato dal topo soppresso. Tenere il segmento intestinale sulla siringa con la pinza e sciacquare delicatamente a una velocità di circa 50 microlitri al secondo per rimuovere il contenuto.
Raccogli il contenuto intestinale in una bilancia vuota. Quindi stendere il segmento intestinale umido in linea retta su una striscia di carta da filtro di cellulosa etichettata a secco. Usando le forbici da dissezione, tagliare l'intestino longitudinalmente lungo la linea mesenterica, circa cinque millimetri alla volta.
Usa il bordo inferiore delle forbici o un paio di pinze per stendere il tessuto tagliato sulla carta da filtro. Ora posiziona un altro pezzo di carta da filtro sopra il segmento intestinale per evitare che si arricci o perda la sua forma durante la fissazione. Per fissare il fazzoletto in posizione, pinzare i bordi della carta da filtro evitando di pinzare il fazzoletto.
Immergere i tessuti in formalina tamponata normale al 10%. Rimuovere delicatamente il pezzo superiore di carta da filtro che tocca il lato luminale dell'intestino. Usa una pinza per staccare con cura l'intestino dal pezzo di carta da filtro inferiore prima di gettarlo.
Quindi lavare il fazzoletto in PBS tre volte per rimuovere la formalina dal fazzoletto. Usando una pinza ad azione inversa, raccogli un pezzo di intestino lungo il bordo corto con il lato luminale rivolto verso l'alto e gira la pinza per arrotolare il tessuto. Metti il fazzoletto in una bocchetta asciutta.
Tenere il fazzoletto in posizione con una pinza in una mano. Aprire con cautela la pinza ad azione inversa e rilasciare il tessuto, utilizzando le altre pinze per rimuovere il tessuto dalla pinza ad azione inversa. Inserire uno spillo da dissezione misura 00 nel fazzoletto.
Utilizzare tronchesi per rimuovere la punta affilata del perno. Una volta che tutti i campioni sono stati arrotolati, posizionare tutti e quattro i rotoli di tessuto nella stessa cassetta e inserire la cassetta in un processatore di tessuti. In una stazione di inclusione, mettere una piccola quantità di paraffina in uno stampo.
Togliete i quattro rotoli svizzeri dalla cassetta e metteteli in uno stampo individuale, stendendoli il più possibile piatti. Aggiungere altra paraffina per riempire lo stampo. Spostare lo stampo sulla piastra fredda e assicurarsi che tutti i rotoli svizzeri siano piatti sul fondo dello stampo.
Posizionare un piccolo tappo a cassetta etichettato sullo stampo. Una volta che la cera si sarà solidificata, togliete il blocco dallo stampo.
