Per iniziare, tritare i cervelli isolati in pezzi di circa un millimetro quadrato con una lama di bisturi sterile usa e getta. Trasferisci con cura i cervelli tritati in una nuova provetta sterile da 50 millilitri. Aggiungere una concentrazione finale dello 0,25% di tripsina al cervello tritato.
Incubare il tessuto in un bagno d'acqua a 37 gradi Celsius per 20 minuti. Aggiungere cinque millilitri di terreno di coltura gliale completo per neutralizzare la tripsina e mescolare delicatamente la sospensione tissutale utilizzando una pipetta da 10 millilitri. Decantare con cura la sospensione cellulare attraverso il filtro cellulare.
Quindi rimuovere lo stantuffo da una siringa sterile da un millilitro e macinare il tessuto nella rete usando lo stantuffo. Aggiungere volumi uguali di sospensione cellulare contenente uno o due cervelli con terreni di coltura gliale a ciascun pallone, ottenendo un volume finale di 15 millilitri. Il primo giorno sono state osservate cellule sparse e detriti cellulari eccessivi.
Entro il quarto giorno, sono stati generati astrociti aderenti. Cellule confluenti con morfologia tipica degli astrociti sono state osservate all'ottavo giorno di coltura.
