Per iniziare, rimuovi dall'incubatrice la piastra di coltura contenente i vermi femmina ermafroditi adulti. Dopo aver sincronizzato i vermi lui-5, lava i vermi cinque volte con il tampone M9. Trasferire i maschi adulti di un giorno dalla piastra seminata a una provetta contenente tampone M9.
Posizionare i vermi su una piastra NGM non seminata per eliminare i batteri residui e prevenire interferenze dal cibo durante il saggio. Preparare una piastra per il test di chemioattrazione con coclea all'1,5%, 25 millimolari di cloruro di sodio, 1,5 millimolare di base Tris e 3,5 millimolari di Tris cloridrato. Riscaldare la coclea nella soluzione di chemioattrazione in un forno a microonde fino a completa dissoluzione.
Dopo il raffreddamento, utilizzare una pipetta per distribuire uniformemente la soluzione della coclea di chemioattrazione nelle piastre di Petri. Lasciare i coperchi aperti in una zona pulita per consentire alla superficie della coclea di asciugarsi leggermente. Una volta che la superficie si è asciugata adeguatamente, chiudere i coperchi.
Per eseguire il test di chemioattrazione, segnare tre punti distinti sul coperchio e sul lato inferiore della capsula di Petri. Applicare due microlitri di un molare di azoturo di sodio su ogni punto sperimentale e di controllo sulla piastra. Scegli 20 vermi maschi sani e che si muovono liberamente con un raccoglitore di vermi.
Sotto un microscopio da dissezione, rilasciare il verme dal punto di partenza. Aggiungere rapidamente due microlitri di tampone M9 al punto di controllo e due microlitri di feromone sessuale al punto sperimentale sul coperchio. Chiudere delicatamente il coperchio e posizionare il piatto in un'area tranquilla e stabile alla temperatura.
Dopo 30 minuti, valutare il test contando il numero di vermi in ogni punto. Per una migliore valutazione della chemiotassi, registrare le traiettorie dei vermi utilizzando una telecamera. L'indice di chemiotassi per i maschi lui-5 era costantemente superiore a 0,5, indicando una forte attrazione per la fonte di feromoni sessuali, mentre l'indice di chemiotassi per i maschi SRD-1 era intorno allo zero.
I test di chemioattrazione di successo hanno mostrato che i maschi di lui-5 si avvicinavano alla fonte di feromoni nel tempo, con traiettorie codificate a colori che indicavano tempo, distanza, velocità, rettilineità e correttezza della direzione.
