Colorazione blu all'anilina per visualizzare i plasmodesmi nelle foglie di piante agroinfiltrate utilizzando la microscopia confocale

Per iniziare, ottenere foglie di Nicotiana benthamiana infiltrate con le cellule dell'agrobacterium tumefacien che ospitano i vettori desiderati. Per la visualizzazione dei plasmodesmi, aggiungere un'aliquota di 200 microlitri di blu anilina all'1% su un vetrino da microscopio. Quindi, utilizzando una lama, asportare l'area fogliare infiltrata lontano dalla vena e trasferirla nella soluzione di blu anilina sul vetrino con il lato aassiale rivolto verso l'alto.

Assicurarsi che il campione di tessuto fogliare sia completamente immerso prima di coprirlo con un vetro di copertura. Posizionare il vetrino con il campione in un essiccatore collegato a una pompa a vuoto. Evacuare per due minuti a meno di 0,8 pascal.

Quindi, rilasciare lentamente la pressione e incubare il vetrino al buio per 30 minuti a temperatura ambiente. Ora, visualizza il segnale fluorescente del blu di anilina con un microscopio confocale a scansione laser.