Per iniziare, utilizzando un contagocce, impiattare 250 semi di Arabidopsis per ogni gruppo di condizioni su carta da filtro posta su una piastra di agar Murashige e Skoog Basal Media senza saccarosio, integrata con l'1,2% di fitoagar. Avvolgere il piatto con un foglio di alluminio per bloccare la luce e metterlo in un'incubatrice a quattro gradi Celsius per due giorni per indurre la vernalizzazione. Dopo due giorni, scartare la pellicola e trasferire i semi vernalizzati in una camera di crescita.
Lascia che le piante crescano per cinque giorni. Quindi, sigilla la piastra contenente piantine di cinque giorni con nastro adesivo impermeabile. Mettere la piastra in un bagnomaria a 40 gradi Celsius per un'ora per il trattamento da stress termico.
Subito dopo il trattamento termico, raffreddare la piastra e trasferirla in una camera di crescita impostata a 22 gradi Celsius per due ore per consentire il recupero. Raccogli 250 piantine trattate termicamente o non trattate in provette per microcentrifuga da 1,5 millilitri. Congelare immediatamente i campioni raccolti in azoto liquido.
Preparare la soluzione di gradiente di saccarosio con concentrazioni di 12,5%24,4%36,3%48,1% e 60%Per preparare un gradiente di densità di saccarosio discontinuo, caricare prima 2,2 millilitri di soluzione di saccarosio al 60% sul fondo del tubo. Quindi, metti il tubo in un congelatore a 80 gradi Celsius per congelare la soluzione di saccarosio allo stato solido. Dopo la solidificazione, caricare 2,2 millilitri di ciascuna delle altre concentrazioni di saccarosio nella serie dal basso verso l'alto.
Conservare la sfumatura di saccarosio preparata a 80 gradi Celsius fino al momento dell'uso.
