Per iniziare, confermare l'anestesia del topo valutando l'assenza di una risposta a un pizzico di dita. Fissa il topo nel supporto interno dell'animale con la testa e la parte superiore delle spalle posteriori esposte attraverso l'apertura rettangolare mentre il dorso e gli arti posteriori inferiori rimangono protetti. Applicare del nastro chirurgico sulla parte superiore delle spalle posteriori per fissare il mouse.
Inserire il supporto interno per animali nel supporto esterno. Dopo aver aperto la linea di anestesia secondaria all'interno del supporto per animali, sigillare l'estremità del supporto per evitare che l'anestetico fuoriesca dal tubo e che il topo si muova durante l'esperimento. Allinea l'apertura circolare di quattro millimetri del supporto esterno dell'animale direttamente sopra l'occhio sinistro del mouse.
Posizionare il supporto per animali sul tavolo XY utilizzando le manopole di controllo, in modo che la sua apertura sia allineata con la canna della pistola da paintball e la superficie esterna sia a cinque millimetri dall'estremità della canna. Dopo la calibrazione, avviare la sequenza di aria in sovrapressione per erogare due raffiche di 15 PSI a un intervallo di 0,5 secondi. Per il mouse del gruppo fittizio, allontanare il supporto dell'animale dalla canna, bloccare l'aria con uno scudo di cartone ed esporlo al rumore dell'aria in sovrapressione.
Nel gruppo sham sono stati osservati assoni sani e densamente impacchettati. Al contrario, il gruppo ITON ha mostrato segni di degenerazione degli assoni, tra cui irregolarità nella forma degli assoni e rottura della guaina mielinica. Il numero totale di assoni è diminuito significativamente nel gruppo ITON rispetto al gruppo sham.
Un aumento significativo dei profili degenerativi è stato rilevato nel gruppo ITON rispetto al gruppo sham. È stato osservato un aumento della proliferazione della microglia nella retina dei topi ITON, con la microglia che si estende nello strato nucleare esterno. Rispetto al gruppo sham, dove le microglia sono rimaste nei loro tipici strati retinici.
Connessioni sinaptiche intatte tra le cellule bipolari dei bastoncelli e i fotorecettori sono state osservate sia nei topi ITON che in quelli fittizi, senza sinaptopatia rilevata.
