Per iniziare, raccogli i semi delle piante mutanti e X134 e lasciali asciugare naturalmente a temperatura ambiente fino a quando il contenuto di umidità raggiunge circa il 13-15%Dopo aver attivato la pelatrice, introduci 10 g di chicchi di riso nell'alimentatore per rimuovere efficacemente il guscio della gluma. Trasferire i semi di riso sbucciati nella risiera e azionare la macchina per 60 secondi per eliminare lo strato di aleurone che produce riso lucido. Quindi, metti il riso lucidato nel macina fazzoletti.
Regolare la frequenza di macinatura a 60 Hz e far funzionare il macinacaffè per 15 secondi per due cicli per produrre polvere di riso. Depositare la polvere di riso macinata in una capsula di Petri e metterla in forno preriscaldato a 37 C per 12 ore. Quindi aggiungere 100 mg di polvere di riso in una provetta da microcentrifuga da 2 ml e picchiettare delicatamente la provetta.
Aggiungere 180 L di acqua purificata alla provetta e far bollire il campione a bagnomaria per 20 minuti. Dopo che il campione si è raffreddato, introdurre nella provetta 4 ml di AMG contenente alfa amilasi pancreatica. Quindi, mescolare il contenuto su un oscillatore a vortice e incubare la provetta a 37 C per 16 ore con agitazione continua.
Ora, aggiungere 4 mL di etanolo e mescolare il campione usando un vortice. Quindi centrifugare la provetta a 1,500 G per 10 minuti. Dopo aver travasato il surnatante, aggiungere 2 mL di etanolo al 50%, seguiti da 6 mL di 50% IMS nella provetta e mescolare.
Dopo aver centrifugato la provetta, versare con cura il surnatante e capovolgere la provetta per drenare il liquido in eccesso. Immergendo la provetta in un bagno di ghiaccio, aggiungere 2 ml di idrossido di potassio a 2 molari e agitare il campione per 20 minuti per risospendere il flock e sciogliere l'amido resistente. Aggiungere 8 mL di tampone molare in acetato di sodio da 1,2 molari regolato a pH 3,8 nella provetta e mescolare utilizzando un agitatore magnetico.
Quindi introdurre immediatamente 0,1 mL di AMG nella miscela e mescolare accuratamente. Incubare il campione per 30 minuti a 50 C in un bagno d'acqua con miscelazione intermittente utilizzando un vortice. Dopo l'incubazione, centrifugare la provetta a 1.500 g per 10 minuti.
Trasferire ora 0,1 mL di surnatante in una provetta di vetro fresca. Aggiungere 3 mL di reagente glucosio ossidasi perossidasi e incubare il campione a 50 C per 20 minuti. Pipettare con cautela 200 L di ciascuna soluzione campione bianca e soluzione standard in una piastra a 96 pozzetti.
Misurare l'assorbanza di ciascun campione a 510 nm rispetto alla soluzione in bianco e calcolare il contenuto di amido resistente utilizzando la formula. Infine, presentare ai partecipanti 50 g di riso preparato con 200 ml di acqua. Dopo il pasto, raccogliere campioni di sangue venoso in vari momenti per eseguire l'analisi della glicemia.
Il contenuto di amido resistente era significativamente più alto nel mutante SBEIIb con il 5,2% rispetto al tipo selvatico. Il consumo del riso preparato ha portato a una risposta glicemica più lenta e ridotta a 15 e 30 minuti con riduzioni rispettivamente del 9,7% e del 3,7%.
