Per iniziare, mescolare 0,1 molari di acetato di sodio e 0,1 molari di acido acetico in acqua deionizzata a pH 4,5. Quindi preparare 100 millimolari di tampone solfato di sodio in acqua deionizzata a temperatura ambiente. Pesare il chitosano commercializzato per preparare una soluzione allo 0,02% in peso per volume e scioglierla nel tampone di acetato di sodio da 100 millimolari preparato.
Quindi sciogliere 20 microgrammi di RNA a doppio filamento o dsRNA in 50 microlitri di acqua priva di nucleasi. Aggiungere questa soluzione a 50 microlitri di tampone solfato di sodio per ottenere una soluzione di dsRNA da 100 microlitri. Quindi, aggiungere 100 microlitri della soluzione di chitosano preparata a 100 microlitri ciascuno della soluzione di dsRNA e 50 millimolari di solfato di sodio.
Dopo aver mescolato, scaldare le soluzioni a 55 gradi Celsius per un minuto. Agitare immediatamente la miscela ad alta velocità per 30 secondi per facilitare la formazione di nanoparticelle. Centrifugare la miscela a 13.000 g a temperatura ambiente per 10 minuti fino ad ottenere un pellet bianco.
Trasferire il surnatante in un tubo fresco da 1,5 millilitri e lasciare asciugare il pellet all'aria a temperatura ambiente per 10 minuti. Utilizzando uno spettrofotometro a micro volume, determinare la concentrazione di dsRNA nel surnatante. Per calcolare la percentuale di dsRNA incapsulato, dividere la quantità rimanente nel surnatante per la quantità iniziale di dsRNA.
