Immunocolorazione e conteggio automatizzato delle cellule gangliari retiniche di topo utilizzando un programma basato sull'intelligenza artificiale

Dopo aver isolato l'intera retina dal topo, lavare la retina in PBS con leggera agitazione per cinque minuti. Immergere la retina lavata in un tampone bloccante per 30 minuti. Dopo l'incubazione, sostituire il tampone bloccante con l'anticorpo primario BRN3A.

Incubare la retina durante la notte a quattro gradi Celsius per consentire il legame con l'antigene specifico dell'anticorpo. Il giorno successivo, lavare la retina tre volte con PBS per cinque minuti ciascuna prima di incubare con Alexa 594 o Alexa 488 l'anticorpo secondario coniugato anti-coniglio per due ore per visualizzare gli antigeni bersaglio. Dopo aver lavato la retina immunocolorata con PBS, trasferirla delicatamente su un vetrino da microscopio.

Appiattire la retina per ridurre al minimo la piegatura o la distorsione. Posizionare un vetrino coprioggetti sulla retina montata assicurandosi che non si formino bolle d'aria. Scaricare il codice dal collegamento GitHub.

Quindi scarica i file necessari dal disco cloud e decomprimili. Individua la configurazione. ini e modificarne il contenuto in modo che punti al percorso yolov5_cpu.

Quindi fare clic su Interfaccia utente. exe per aprire l'interfaccia grafica. Controlla se il pmse_plus.

pt model si trova nella directory principale dell'unità C.In caso contrario, copiarlo dalla cartella weights della cartella yolov5. Aprire il software di conteggio delle celle. Fare clic su Apri immagine per importare l'immagine, quindi fare clic su Esegui per consentire al software di contare automaticamente le celle.

Il software di conteggio cellulare automatizzato ha identificato con precisione 15.231 cellule gangliari retiniche nel modello murino di glaucoma indotto da N-metil-D-aspartato, mostrando una significativa perdita di cellule rispetto a circa 45.000-50.000 RGC in una retina normale.