Gli autori desiderano ringraziare Eliana Beraldi per l&#39;esecuzione di trasduzione virale di linee cellulari tumorali e Ben Deeley per la sua istruzione sull&#39;uso della piccola piattaforma ecografica animale. Questo progetto è stato sostenuto dalla Fondazione Sistema tedesco (DFG, JA 2117/1-1: 1), il Research Institute Canadian Cancer Society e Mentored medico Scientist Award da Vancouver Coastal Health Research Institute. La piattaforma di imaging ad ultrasuoni è stato finanziato dalla Fondazione canadese per l&#39;innovazione.

Tutte le procedure sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida del Canadian Council on Animal Care (CCAC). Il protocollo è stato approvato dal Comitato Animal Care della University of British Columbia (Numero di protocollo: A10-0192). 1. Preparazione delle linee cellulari <ol><li> Confermare l&#39;identità delle rispettive linee di cellule di cancro della vescica umana di DNA fingerprinting 7. </li><li> Per l&#39;analisi della crescita di tumori trapiantati da bioluminescenza, linee cellulari transfettate con un costrutto lentivirale trasportano il gene della luciferasi di lucciola 3. </li><li> Scongelare ed espandere le linee cellulari esistenti in mezzo di Eagle modificato da Dulbecco (DMEM) con 10% di siero bovino fetale (FBS) a 37 ° C in un umidificata al 5% CO 2 nell&#39;atmosfera. Passage le cellule almeno 3 volte, ma evitare i tempi di coltura superiore a 3 mesi. </li></ol> 2. Preparazione della sospensione cellulare <ol><li> Scongelare Matrigel. Mantenere la temperatura al di sotto4 ° C per evitare un aumento della viscosità del gel. </li><li> Trypsinize le cellule ad una confluenza del 70% e sospendere in terreni di crescita normale. </li><li> Contare il numero di cellule con un emocitometro o contatore di cellule automatico. </li><li> Centrifugare la sospensione di cellule per 5 minuti a 200 x g. Rimuovere il surnatante. </li><li> Aggiungere il volume appropriato di DMEM (10% FBS) e Matrigel (rapporto 1:1) per raggiungere la concentrazione cellulare desiderata che dipende dalla linea cellulare utilizzata e cinetica di crescita desiderati (8-15 x 10 6 / ml). Il volume iniettato di sospensione cellulare tumorale sarà di 40 microlitri. </li><li> Mescolare bene pipettando su e giù (P1000), evitare di creare bolle d&#39;aria nella sospensione. </li></ol> 3. Preparazione degli animali Nota: A causa della potenziale necessità di cateterizzazione transuretrale nella fase 4.7, topi di sesso femminile sono il genere preferito in questo modello animale. <ol><li> Mice House secondo gu istituzionale e la cura degli animali nazionaleidelines. Ottenere l&#39;approvazione del comitato etico per tutti gli esperimenti che coinvolgono topi. </li><li> Anestetizzare i topi con 3% miscela di isoflurano / ossigeno. Verificare il corretto anestesia degli animali (ad esempio mancata risposta a pizzichi punta). </li></ol> 4. Setup sperimentale <ol><li> Tagliare la stabilizzazione vescica da qualsiasi tipo di materiale plastico rigido piatta [Figura 2 I]. Ispezionare con cura la cinghia e rimuovere eventuali spigoli vivi prima applicazione per i topi. </li><li> Montare l&#39;animale sul tavolo di imaging riscaldata [Figura 1 I] della piccola piattaforma di imaging animale con monitoraggio continuo dei parametri vitali. Fissare gli arti inferiori con un elastico [Figura 1 III]. </li><li> Disinfettare l&#39;addome con 2% clorexidina gluconato e pulire la pelle con una punta di cotone sterile. </li><li> Immobilizzare la vescica con la cinghia di stabilizzazione vescica [Figura 2 II]. Così, un evasionedella vescica durante l&#39;iniezione intramurale nel passaggio 5.6 sarà evitata. </li><li> Applicare il gel per ultrasuoni sterile al basso ventre. </li><li> Lentamente avvicinare la sonda ad ultrasuoni (frequenza 40 MHz) [Figura 1 IV] per la pelle (longitudinale con un angolo di 45-70 ° cranica) e visualizzare la vescica sullo schermo ultrasuoni [Figura 3 I]. </li><li> Se la vescica è vuota, riempirla con 50 ml sterile, calda salina tampone fosfato (PBS) attraverso un G angiocatheter transuretrale 24. </li></ol> 5. Separazione degli strati della parete della vescica <ol><li> Attaccare una siringa da 1,0 ml riempito con PBS e collegato ad un 30 G, ¾ in ago (smussatura rivolta anteriormente) al morsetto della siringa. </li><li> Posizionare l&#39;ago verso la pelle appena sopra l&#39;osso pubico in un angolo di 30-45 ° (80-90 ° rispetto all&#39;asse longitudinale la sonda ad ultrasuoni [Figura 1]). </li><li> Rileva l&#39;agosullo schermo ultrasuoni. </li><li> Lentamente perforare la pelle ed i muscoli della parete addominale [Figura 3 II]. </li><li> Girare la smussatura dell&#39;ago 180 ° (ora diretto posteriormente). </li><li> Inserire la punta dell&#39;ago nella parete della vescica senza penetrare la mucosa [Figura 3 III] </li><li> Iniettare lentamente 50 ml di PBS tra lo strato muscolare e la mucosa al fine di creare uno spazio artificiale [Figura 3 IV]. Nota: Se la mucosa viene accidentalmente forata durante la fase 5.6, lentamente tirare indietro l&#39;ago e iniettare 50 ml di PBS dopo strato mucoso ha capovolto di nuovo sulla punta dell&#39;ago. </li><li> Ritirare l&#39;ago. </li></ol> 6. Intramurale inoculazione delle cellule del cancro della vescica <ol><li> Attaccare una seconda siringa 1,0 ml (riempito con cellule tumorali sospese in Matrigel) con 30 G, ¾ in dell&#39;ago al morsetto della siringa. </li><li> Guida la punta dell&#39;ago alla stessaSpazio PBS-riempita che è stato creato nel passo 5.7. </li><li> Iniettare 40 ml di sospensione cellulare in questo spazio [figure 3 V e VI]. </li><li> Ritirare l&#39;ago. </li></ol> 7. Post-interventistica terapia di supporto <ol><li> Smontare il mouse dalla piattaforma di imaging. </li><li> Tenere l&#39;animale in un ambiente caldo e confortevole sotto sorveglianza continua, mentre il recupero dall&#39;anestesia. </li><li> Dopo aver ripreso coscienza e riprendere la deambulazione normale, posizionare l&#39;animale torna nella sua gabbia casa. </li></ol>

<ol>
	<li>Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+orthotopic+models+for+bladder+cancer+research.">Mouse orthotopic models for bladder cancer research.</a> BJU Int. 104, 1286-1291 (2009).</li><li>Kubota, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+models+of+human+cancer+xenografted+in+the+nude+mouse:+the+importance+of+orthotopic+transplantation.">Metastatic models of human cancer xenografted in the nude mouse: the importance of orthotopic transplantation.</a> J. Cell. Biochem. 56, 4-8 (1994).</li><li>Hadaschik, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumour+inoculation+and+bioluminescence+imaging.">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU Int. 100, 1377-1384 (2007).</li><li>Kang, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Orthotopic+Bladder+Tumor+Model+and+the+Evaluation+of+Intravesical+saRNA+Treatment.">An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment.</a> J. Vis. Exp. (65), (2012).</li><li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Orthotopic+Model+of+Murine+Bladder+Cancer.">An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer.</a> J. Vis. Exp. (48), (2011).</li><li>Dinney, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+metastatic+variants+from+human+transitional+cell+carcinoma+passaged+by+orthotopic+implantation+in+athymic+nude+mice.">Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice.</a> J. Urol. 154, 1532-1538 (1995).</li><li>Fu, C., Apelo, C. A., Torres, B., Thai, K. H., Hsieh, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Bladder+Wall+Injection.">Mouse Bladder Wall Injection.</a> J. Vis. Exp. (53), (2011).</li><li>Xiao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+novel+transplantable+orthotopic+rat+bladder+transitional+cell+tumour+model.">Characterization of a novel transplantable orthotopic rat bladder transitional cell tumour model.</a> Br. J. Cancer. 81, 638-646 (1999).</li><li>Iinuma, S., Bachor, R., Flotte, T., Hasan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+and+phototoxicity+of+5-aminolevulinic+acid-induced+PpIX+in+an+orthotopic+rat+bladder+tumor+model.">Biodistribution and phototoxicity of 5-aminolevulinic acid-induced PpIX in an orthotopic rat bladder tumor model.</a> J. Urol. 153, 802-806 (1995).</li><li>J&#228;ger, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hiding+in+plain+view:+Genetic+profiling+reveals+decades+old+cross-contamination+of+bladder+cancer+cell+line+KU7+with+HeLa.">Hiding in plain view: Genetic profiling reveals decades old cross-contamination of bladder cancer cell line KU7 with HeLa.</a> J. Urol. (13), (2013).</li><li>Horiguchi, Y., Larchian, W. A., Kaplinsky, R., Fair, W. R., Heston, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravesical+liposome-mediated+interleukin-2+gene+therapy+in+orthotopic+murine+bladder+cancer+model.">Intravesical liposome-mediated interleukin-2 gene therapy in orthotopic murine bladder cancer model.</a> Gene Ther. 7, 844-851 (2000).</li><li>Dinney, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+metastatic+variants+from+human+transitional+cell+carcinoma+passaged+by+orthotopic+implantation+in+athymic+nude+mice.">Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice.</a> J. Urol. 154, 1532-1538 (1995).</li><li>Black, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validating+bladder+cancer+xenograft+bioluminescence+with+magnetic+resonance+imaging:+the+significance+of+hypoxia+and+necrosis.">Validating bladder cancer xenograft bioluminescence with magnetic resonance imaging: the significance of hypoxia and necrosis.</a> BJU Int. 106, 1799-1804 (2010).</li></ol>

Accesso aperto per questo video-articolo è sponsorizzato da FUJIFILM VisualSonics, Inc.

Quasi tutti i grandi progressi nella terapia del cancro richiedono test su modelli animali prima di iniziare le sperimentazioni cliniche. Modelli animali di cancro sono strumenti essenziali che permettono ai ricercatori di studiare la biologia del tumore in vivo. Modelli di xenotrapianto ortotopico rimangono l&#39;oro standard di 1,2 e continuano ad offrire la massima flessibilità (in termini di selezione delle linee di cellule) e hanno l&#39;utility più pratico. La procedura illustrata è una modifica minimamente invasiva del modello ortotopico precedentemente descritto da Dinney et al. 12 Abbiamo stabilito tumori xenotrapianto da ecoguidato iniezione percutanea di tre linee cellulari differenti con un tasso di successo tecnico del 100%. Durante continuo follow-up, il 98% dei topi ha dimostrato costante aumento del volume del tumore. Eseguendo una tecnica minimamente invasiva siamo stati in grado di affrontare i limiti attuali del modello intramurale. Oltre respeamen benessere degli animali, l&#39;invasività ridotta di questo procedimento contribuisce anche alla riproducibilità di esperimenti in vivo diminuendo il numero di complicazioni chirurgiche. E &#39;molto tempo efficace per evitare una laparotomia addominale e conseguente necessità per la chiusura della ferita. Siamo riusciti a ridurre significativamente il tempo di procedura per animale a 3,4 min (± 1.6). Tuttavia, il vantaggio principale del nostro nuovo approccio è la sua precisione. Ad alta risoluzione ultrasuoni ci permette di visualizzare lo spazio creato da iniezione salina sotto la mucosa della parete della vescica. Questa prima iniezione passo facilita l&#39;iniezione delle cellule tumorali in una seconda fase e minimizza il rischio di fuoriuscita delle cellule tumorali. Ciò contrasta con la tecnica di iniezione intramurale dopo laparotomia, dove è impossibile visualizzare posizionamento dell&#39;ago e c&#39;è sempre un elemento di incertezza circa l&#39;esatta profondità di iniezione. Inoltre, come stiamo inoculando cellule tumorali rigorosamente nella parete vescicale anteriore, growt tumoreh sulla parete posteriore della vescica è evitata. Successivamente il tasso di complicanze ostruttive causa della crescita del tumore in prossimità degli orifizi ureterali è estremamente raro. Questo effetto di accompagnamento consente periodi di crescita e di trattamento più lunghi. La limitazione principale del tumore inoculazione ecografico è la necessità di misure tecniche adeguate. Pertanto le prestazioni di questa procedura sarà probabilmente limitata ai centri che sono specializzati in modelli animali di cancro umano. Ciò dovrebbe incoraggiare le collaborazioni tra gruppi di ricerca al di fuori di queste istituzioni e dei gruppi con competenze in tale modellizzazione animali romanzo. Anche se dipende dalla familiarità con ecografia e una certa destrezza manuale, questo modello è facile da imparare sotto istruzione competente. Il passaggio chiave nella procedura è la creazione di un sottomucosa spazio artificiale nella parete della vescica con soluzione fisiologica. Una volta che questo spazio è creato senza perforazione of strato mucoso, rimane stabile per diversi minuti. La guida del secondo ago in questo spazio per inoculare le cellule tumorali è relativamente semplice. La complicazione principale durante la creazione dello spazio sottomucosa è perforazione dell&#39;ago nel lume della vescica. La creazione di uno spazio sottomucosa, tuttavia, rimane fattibile. L&#39;ago deve essere ritirato lentamente nella parete della vescica e la soluzione salina iniettata solo quando lo strato mucoso ribalta la punta dell&#39;ago. Dopo questa manovra spazio sottomucosa è meno stabile (soluzione fisiologica fluisca al lume vescicale entro 30-60 sec) e l&#39;iniezione delle cellule tumorali deve essere eseguita rapidamente. Fuoriuscita di cellule tumorali nel lume della vescica può verificarsi in questi casi con perforazione della mucosa. Anche se la perdita di cellule tumorali dallo spazio intramurale potrebbe portare a un volume del tumore è diminuito durante il follow-up, non abbiamo mai osservato alcun assorbimento del tumore intravesical. Un altro potenziale complication è la fuoriuscita di cellule tumorali nella cavità peritoneale attraverso il canale di iniezione. Abbiamo osservato una sola intraperitoneale disseminazione tumorale delle cellule in 50 animali, e questo si è verificato in uno dei nostri primi tentativi. Noi attribuiamo questo l&#39;iniezione di un volume eccessivo sospensione di cellule tumorali. Ciò è stato confermato dal fatto che la riduzione del volume di 50-40 ml non ha comportato ulteriori spargimenti intraperitoneale. Questo inoculazione minimamente invasiva murino ortotopico xenotrapianto cancro della vescica rappresenta una modifica innovativa del &quot;modello intramurale&quot; esistenti, beneficiando sia l&#39;investigatore e gli animali allo stesso modo. I vantaggi di questo modello incoraggiare il suo adattamento ad altri organi come il rene, prostata e fegato per stabilire tumori xenotrapianto ortotopiche in modo minimamente invasivo.

La ricerca sul cancro dipende da modelli animali di cancro umano utilizzando linee cellulari derivate da tumori di pazienti, al fine di approfondire la nostra comprensione della biologia del tumore. Per l&#39;analisi in vivo crescita sotto strategie di trattamento diversi modelli murini ortotopici cancro della vescica rimane lo standard di riferimento 1,2. L&#39;inoculazione delle cellule tumorali della vescica umane in topi immunocompromessi (modello di xenotrapianto) si basa sulla instillazione intravescicale (&quot;modello intravesical&quot;) 3,4,5 o iniezione diretta nella parete vescicale (&quot;modello intramoenia&quot;) 6,7. Entrambe le tecniche possono essere condotti in ratti 8,9. Instillazione intravescicale induce la formazione di tumori sulla superficie uroteliale della vescica che poi sono suscettibili di successiva instillazione intravescicale di agenti terapeutici innovativi. Tuttavia, il numero di linee cellulari che sono attendibilmente oncogeno quando distribuito mediante questo metodo è limitato und una di queste linee cellulari, KU7, è stato recentemente dimostrato di essere HeLa 4,10. Instillazione intravescicale è anche molto tempo a causa di tempi di sosta necessarie, e induce frequentemente la crescita tumorale in elementi adiacenti del tratto urinario, incluse uretra, uretere e pelvi renale 11. Inoltre, l&#39;instillazione intravescicale spesso porta alla crescita del tumore sul pavimento della vescica in cui gli ureteri entrano nella vescica, e questo può causare ostruzione del tratto superiore ed insufficienza renale concomitante. Xenotrapianti primarie carcinoma vescicale invasivo che sono adatti per trattamenti sistemici sono creati mediante iniezione diretta di cellule tumorali nella parete della vescica 12. Sebbene numerose linee cellulari crescono adeguatamente in questo modello, la sua limitazione è l&#39;invasività del modello relativo alla necessità di un&#39;incisione addominale 13. Il modello è anche difficile da imparare a causa della difficoltà tecnica di iniezione di cellule precisamente nella parete muscolaredella vescica. Un nuovo approccio per stabilire ortotopici xenotrapianti tumorali della vescica invasivo primarie nei topi è stato sviluppato nel nostro reparto, al fine di affrontare le carenze esistenti del &quot;modello intramurale&quot;. Siamo stati in grado di ottimizzare l&#39;iniezione percutanea eco-guidata delle cellule tumorali della vescica nella parete vescicale anteriore, con conseguente questa nuova tecnica per sostituire con successo il modello invasiva stabilita. Inoltre abbiamo potenzialmente migliorato l&#39;accuratezza e la riproducibilità del &quot;modello intramurale&quot;.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col span="4" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine gluconate (2%)</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>82-319</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="121">
			<td height="121" style="height:121px;width:64px;">Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td style="width:64px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:64px;">SH3008101</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:64px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:64px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:64px;">SH3007103</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Matrigel</td>
			<td style="width:64px;">BD Bioscience</td>
			<td align="right" style="width:64px;">356234</td>
			<td style="width:64px;">Keep between 2-4&#8304;C</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:64px;">Baxter Corporation</td>
			<td style="width:64px;">402-069-02</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:64px;">Trypsin (0.25%)</td>
			<td style="width:64px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:64px;">SH3004202</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Syringe (1ml)</td>
			<td style="width:64px;">BD Bioscience</td>
			<td align="right" style="width:64px;">309659</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="101">
			<td height="101" style="height:101px;width:64px;">Hypodermic needle (30G; &#190; inch)</td>
			<td style="width:64px;">Kendall</td>
			<td align="right" style="width:64px;">830340</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Angiocatheter (24G)</td>
			<td style="width:64px;">BD Bioscience</td>
			<td align="right" style="width:64px;">381112</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="101">
			<td height="101" style="height:101px;width:64px;">Vevo 770 small animal imaging platform</td>
			<td style="width:64px;">VisualSonics</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="101">
			<td height="101" style="height:101px;width:64px;">RMV 706 ultrasound scanhead</td>
			<td style="width:64px;">VisualSonics</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">IVIS Lumina III</td>
			<td style="width:64px;">&#160;Caliper Life Science</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

minimally invasive establishment of murine orthotopic bladder xenografts

Ortotopici xenotrapianti cancro della vescica sono il gold standard per lo studio manipolazioni cellulari molecolari e di nuovi agenti terapeutici in vivo. Le linee cellulari adeguate sono inoculate mediante instillazione intravescicale (modello di crescita invasiva non muscolari) o iniezione intramurale nella parete vescicale (modello di crescita invasiva). Entrambe le procedure sono complesse e molto tempo. Inoltre, il modello superficiale ha i suoi difetti dovuti alla mancanza di linee cellulari che sono oncogeno seguente instillazione. Iniezione intramurale, d&#39;altra parte, è viziata da l&#39;invasività della procedura e la morbilità associata per il mouse ospitante. Con queste carenze in mente, abbiamo modificato i metodi precedenti per sviluppare un approccio mini-invasivo per la creazione di ortotopici xenotrapianti cancro della vescica. Utilizzando guida ecografica abbiamo svolto con successo l&#39;inoculazione percutanea delle linee di cellule di cancro alla vescica UM-UC1, UM-UC3 e UM-UC13 in 50 nude atimico. Siamo stati in grado di dimostrare che questo approccio è tempo efficiente, preciso e sicuro. Con questa tecnica, inizialmente uno spazio viene realizzato sotto la mucosa vescicale con PBS, e le cellule tumorali sono poi iniettato in questo spazio in una seconda fase. La crescita del tumore è monitorata ad intervalli regolari con bioluminescenza e gli ultrasuoni. I volumi medi di tumore sono aumentati costantemente in in tutti, ma uno dei nostri 50 topi durante il periodo di studio. Nel nostro istituto, questo nuovo approccio, che permette di xenotrapianto cancro alla vescica inoculazione in modo minimamente invasivo, rapido ed estremamente preciso, ha sostituito il modello tradizionale.

<html> Iniezione intramurale di tre diverse linee cellulari tumorali (UM-UC1 luc, UM-UC3 luc e UM-UC13 luc) è stata eseguita in 50 animali sotto ultrasuono-guida per tre giorni consecutivi. L&#39;inoculazione è stata eseguita in modo efficiente (tempo medio di 5.7 min / animale) e non era associata a complicazioni intra o post-interventistiche. Monitoraggio della crescita tumorale è stata eseguita ecografia e bioluminescenza. Il giorno # 3 un tumore potrebbe essere rilevato con l&#39;ecografia nella vescica anteriore di tutti i 50 animali [Figura 4 I]. 98% di topi hanno mostrato crescita tumorale costante durante il periodo di follow-up [Figure 4 e 5]. A seguito della inoculazione di UM-UC3 luc, un mouse sviluppato intraperitoneale diffusione del tumore e il tumore involuta dopo giorno # 7 in un secondo animale [Tabella 1]. Questo è stato il primo gruppo di topi inoculati con questa nuova tecnica. nt &quot;&gt; I topi sono stati sacrificati il ​​giorno # 24, # 28 e # 37 dopo l&#39;inoculazione di UM-UC3 luc, UM-UC1 luc e UM-UC13 luc, rispettivamente. tumori xenotrapianto sono state raccolte ed esaminate in ematossilina ed eosina (H &amp; E sezioni). Tutti i tumori erano muscolo invasiva e alcuni infiltrati nel grasso perivescicale, ma nessuna invasione in organi adiacenti è stato osservato [Figura 6 I]. il 60% dei topi portatori di tumori luc UM-UC13 e il 20% dei topi portatori di UM-UC3 luc I tumori retroperitoneali sviluppato metastasi linfonodali che sono state confermate dalla colorazione H &amp; E [Figura 6 II]. <img alt="Figura 1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig1.jpg" /> Figura 1. Immagine e illustrazione schematica del setup sperimentale. Il mouse è montato sul tavolo operatorio riscaldato (I) e tenuto sotto anestesia (&lt;strong&gt; II) con 3% miscela isoflurano / ossigeno. Gli arti inferiori sono fissate con un nastro di gomma (III). Dopo aver raggiunto la sonda ad ultrasuoni (IV) alla pelle (allineamento longitudinale con un angolo di 45-70 ° cranica) vescica (V) viene visualizzato sullo schermo ultrasuoni. Una siringa con un ago 30 G (VI) è guidato alla pelle con un angolo di 30-45 ° (80-90 ° rispetto all&#39;asse longitudinale la sonda ad ultrasuoni). <img alt="Figura 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig2.jpg" /> Figura 2. Immobilizzazione della vescica. Dimensioni e illustrazione per costruire la cinghia di stabilizzazione vescica (I) la cinghia viene fissata al basso addome e immobilizza la vescica (II). Così un evasione del<html> vescica durante l&#39;iniezione intramurale è evitata. <img alt="Figura 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig3.jpg" /> Figura 3. Intramurale inoculazione delle cellule tumorali. Visualizzazione della vescica sullo schermo ultrasuoni (I). Perforazione della pelle e dei muscoli della parete addominale (II). Inserimento dell&#39;ago nella parete della vescica senza penetrazione della mucosa (III). PBS (50 microlitri) tra lo strato muscolare e la mucosa dopo l&#39;iniezione lenta (IV). Le cellule tumorali sospese in Matrigel in intramurale spazio creato artificialmente (V, VI). 1123fig4.jpg &quot;/&gt; Figura 4. . Follow-up con l&#39;ecografia di follow-up continuo con l&#39;ecografia ha mostrato significativo aumento del volume del tumore (I: giorno # 3, II: giorno # 7, III: giorno # 13). <img alt="Figura 5" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig5.jpg" /> Figura 5. Follow-up da bioluminescenza. Follow-up continuo per bioluminescenza ha mostrato costante incremento luminescenza durante il periodo di studio. <img alt="Figura 6" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig6.jpg" /> Figura 6. Istologia del tumore xenotrapianto e di metastasi linfonodali. In toto H &amp; E della sezione di un xenotrapianto rappresentante tu<html> mor dimostrando crescita invasiva nel muscolo senza invasione in organi adiacenti (I). Il 60% dei topi portatori di tumori luc UM-UC13 e il 20% dei topi portatori di UM-UC3 luc tumori metastasi linfonodali retroperitoneali presentati (II). <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="320"><colgroup><col span="5" /></colgroup><tbody><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> Linea cellulare inoculato </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> UM-UC1 luc </td><td style="width:64px;"> UM-UC3 luc </td><td style="width:64px;"> Luc UM-UC13 </td></tr><tr height="41"><td height="41" style="height:41px;width:64px;"> Numero di topi </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 20 </td><td style="width:64px;"> 15 </td><td style="width:64px;"> 15 </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> Volume iniettato, microlitri </td>idth: 64px; &quot;&gt; </td><td style="width:64px;"> 40 </td><td style="width:64px;"> 50 </td><td style="width:64px;"> 50 </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> Il conteggio delle cellule, assoluta </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 3,6 x 10 5 </td><td style="width:64px;"> 6 x 10 5 </td><td style="width:64px;"> 5,5 x 10 5 </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> Tempo per animali, min </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 3.4 (± 1.6) </td><td style="width:64px;"> 7.7 (± 3.7) </td><td style="width:64px;"> 6.8 (± 2.9) </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> Incidenza di tumori </td><td style="width:64px;"></td><td colspan="3" style="width:192px;"> 49 (98%) </td></tr><tr height="41"><td height="41" style="height:41px;width:64px;"></td><td style="width:64px;"&gt; </td><td style="width:64px;"> 20 (100%) </td><td style="width:64px;"> 14 (93%) </td><td style="width:64px;"> 15 (100%) </td></tr><tr height="81"><td height="81" style="height:81px;width:64px;"> Metastasi linfonodali </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 0 </td><td style="width:64px;"> 3 (20%) </td><td style="width:64px;"> 9 (60%) </td></tr><tr height="81"><td height="81" style="height:81px;width:64px;"> Follow up (giorni) </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 28 </td><td style="width:64px;"> 22 [prima del trattamento] </td><td style="width:64px;"> 28 [prima del trattamento] </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> Volume del tumore (microlitri) </td><td style="width:64px;"> giorno 4 </td><td style="width:64px;"> 11.6 (± 1.3) </td><td style="width:64px;"> 12,5 (± 1,7) </td><td style="width:64px;"> 14.4 (± 1.3) </td></tr><tr height="20"><td height="61" rowcampata = &quot;2&quot; style = &quot;height: 61px; width: 64px;&quot;&gt; </td><td style="width:64px;"> fine </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> 394,6 (± 72,4) </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> 288,7 (± 66.1) </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> 78,3 (± 13,4) </td></tr><tr height="41"><td height="41" style="height:41px;width:64px;"> follow-up </td></tr><tr height="56"><td height="100" rowspan="2" style="height:100px;width:64px;"> Tumore luminescenza (fotoni / sec) </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> giorno 4 </td><td style="width:64px;"> 4,6 x 10 8 </td><td style="width:64px;"> 2,0 x 10 8 </td><td style="width:64px;"> 5,8 x 10 8 </td></tr><tr height="44"><td height="44" style="height:44px;width:64px;"> (± 9.4 x 10 7) </td><td style="width:64px;"> (± 3,7 x 10 7) </td><td style="width:64px;"> (± 1,3 x 10 8) </td></tr><tr height="23"><td height="67" rowspan="2"style = &quot;height: 67px; width: 64px;&quot;&gt; </td><td style="width:64px;"> fine </td><td style="width:64px;"> 1,9 x 10 10 </td><td style="width:64px;"> 1,4 x 10 10 </td><td style="width:64px;"> 1,5 x 10 10 </td></tr><tr height="44"><td height="44" style="height:44px;width:64px;"> follow-up </td><td style="width:64px;"> (± 4,0 x 10 9) </td><td style="width:64px;"> (± 2,3 x 10 9) </td><td style="width:64px;"> (± 1,9 x 10 9) </td></tr></tbody></table> Tabella 1. Iniezione di cellule tumorali eco-guidata - procedura e risultati.

Watch this Scientific Journal Video about Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts at JoVE.com

Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts

La tecnica istituita per inoculare ortotopici xenotrapianti carcinoma vescicale invasivo primarie richiede laparotomia e la mobilitazione della vescica. Questa procedura infligge significativa morbilità sui topi, è tecnicamente difficile e richiede molto tempo. Abbiamo quindi sviluppato una alta precisione, approccio percutaneo utilizzando guida ecografica.

Mini-Invasiva Istituzione di murini ortotopico vescica Xenotrapianti

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable ...

minimally-invasive-establishment-murine-orthotopic-bladder

Research

JoVE Journal

Medicine

15.8K Views.  University of British Columbia.  La tecnica istituita per inoculare ortotopici xenotrapianti carcinoma vescicale invasivo primarie richiede laparotomia e la mobilitazione della vescica. Questa procedura infligge significativa morbilità sui topi, è tecnicamente difficile e richiede molto tempo. Abbiamo quindi sviluppato una alta precisione, approccio percutaneo utilizzando guida ecografica. 

Video: Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

Un modello ortotopico di cancro alla vescica Murine

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Ricerca

Medicina

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder tumor model. The mouse model is established by urethral catheterization under inhaled general anesthetic. Chemical burn is then introduced to the bladder mucosa using intravesical silver nitrate solution to disrupt the bladder glycosaminoglycan layer and allows cells to attach. Following several washes with sterile water, human bladder cancer KU-7-luc2-GFP cells are instilled through the catheter into the bladder to dwell for 2 hours. Subsequent growth of bladder tumors is confirmed and monitored by in vivo bladder ultrasound and bioluminescent imaging. The tumors are then treated intravesically with saRNA formulated in lipid nanoparticles (LNPs). Tumor growth is monitored with ultrasound and bioluminescence. All steps of this procedure are demonstrated in the accompanying video.

Establishing an orthotopic bladder tumor model to evaluate antitumor effects of intravesically delivered saRNA and monitoring tumor growth by ultrasound and bioluminescent imaging.

Un modello ortotopico tumore della vescica e la valutazione del trattamento intravescicale sarna

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are needed. The tumor microenvironment can significantly influence tumor development and therapy response. It is therefore often desirable to grow tumor cells in the organ from which they originated. This protocol describes an orthotopic model of bladder cancer, in which MB49 murine bladder carcinoma cells are instilled into the bladder via catheterization. Successful tumor cell implantation in this model requires disruption of the protective glycosaminoglycan layer, which can be accomplished by physical or chemical means. In our protocol the bladder is treated with trypsin prior to cell instillation. Catheterization of the bladder can also be used to deliver therapeutics once the tumors are established. This protocol describes the delivery of an adenoviral construct that expresses a luciferase reporter gene. While our protocol has been optimized for short-term studies and focuses on gene delivery, the methodology of mouse bladder catheterization has broad applications.

Implantation of cancer cells into the organ of origin can serve as a useful preclinical model to evaluate novel therapies. MB49 bladder carcinoma cells can be grown within the bladder following intravesical instillation. This protocol demonstrates catheterization of the mouse bladder for the purpose of tumor implantation and adenoviral delivery.

Un ortotopico cancro della vescica Modello di Gene Studi di consegna

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

Primary Orthotopic Glioma Xenografts Recapitulate Infiltrative Growth and Isocitrate Dehydrogenase I Mutation

Malignant gliomas constitute a heterogeneous group of highly infiltrative glial neoplasms with distinct clinical and molecular features. Primary orthotopic xenografts recapitulate the histopathological and molecular features of malignant glioma subtypes in preclinical animal models. To model WHO grades III and IV malignant gliomas in transplantation assays, human tumor cells are xenografted into an orthotopic site, the brain, of immunocompromised mice. In contrast to secondary xenografts that utilize cultured tumor cells, human glioma cells are dissociated from resected specimens and transplanted without prior passage in tissue culture to generate primary xenografts. The procedure in this report details tumor sample preparation, intracranial transplantation into immunocompromised mice, monitoring for tumor engraftment and tumor harvesting for subsequent passage into recipient animals or analysis. Tumor cell preparation requires 2 hr and surgical procedure requires 20 min/animal.

Malignant gliomas constitute a heterogeneous group of highly infiltrative glial neoplasms with distinct clinical and molecular features. Primary orthotopic xenografts recapitulate the histopathological and molecular features of malignant glioma subtypes in preclinical animal models.

Gli xenoinnesti glioma ortotopici primari ricapitolano la crescita infiltrativa e la mutazione isocitrato deidrogenasi I

Malignant gliomas constitute a heterogeneous group of highly infiltrative glial neoplasms with distinct clinical and molecular features. Primary ...

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold standard treatment for the high-grade non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC). However, since the treatment-related side effects are relevant, newer biological response modifiers with a better benefit/side effects ratio are needed.
The tumour microenvironment can influence both tumour development and therapy efficacy. In order to obtain a good model, it is desirable to implant tumour cells in the organ from which the cancer originates.
In this protocol, we describe a method for establishing a tumour in the bladder cavity of female mice and subsequent delivery of therapeutic agents; the latter are exemplified by our use of Helicobacter pylori neutrophil activating protein (HP-NAP). A preliminary chemical burn of the mucosa, followed by the injection of mouse urothelial carcinoma cell line MB49 via urethral catheterization, enables the cells to attach to the bladder mucosa. After a period, required to allow an initial proliferation of the cells, mice are treated with HP-NAP, administrated again via catheterization. The anti-tumour activity of HP-NAP is evaluated comparing the tumour volume, the extent of necrosis and the degree of vascularization between vehicle- and HP-NAP-treated animals.

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Here the method to establish a syngeneic mouse model of orthotopic bladder tumour to evaluate the anti-tumour efficacy of the bacterial protein HP-NAP is described.

Valutazione dell&#39;efficacia della<em&gt; H. pylori</em&gt; Proteine ​​HP-NAP come strumento terapeutico per il trattamento del cancro della vescica in un ortotopico Modello murino

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular weight metabolites in tissues of the treated host to achieve long-term survival. The semipermeable membrane allows engrafted encapsulated cells to avoid rejection by the immune system. The encapsulation procedure was designed to enable a controlled release of bioactive compounds, such as insulin, other hormones, and cytokines. Here we describe a method for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production and energy dissipation (thermogenesis) in the intra-abdominal adipose tissue of obese mice. Encapsulation of thermogenic catabolic cells may be potentially applicable to the prevention and treatment of obesity and type 2 diabetes. Another potential application of catabolic cells may include detoxification from alcohols or other toxic metabolites and environmental pollutants.

Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

Incapsulamento termogenico preadipocytes al trapianto nel tessuto adiposo Depositi tessuti

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard open-chest transverse aortic constriction (TAC). Although transverse aortic constriction is a highly functional method for the induction of high pressure in the left ventricle, it is a more difficult and lengthy procedure due to its use of artificial ventilation with tracheal intubation. TAC is oftentimes also less survivable, as the newer method, MTAC, neither requires the cutting of the ribs and intercostal muscles nor tracheal intubation with a ventilation setup. In MTAC, as opposed to a thoracotomy to access to the chest cavity, the aortic arch is reached through a midline incision in the anterior neck. The thyroid is pulled back to reveal the sternal notch. The sternum is subsequently cut down to the second rib level, and the aortic arch is reached simply by separating the connective tissues and thymus. From there, a suture can be wrapped around the arch and tied with a spacer, and then the sternal cut and skin can be closed. MTAC is a much faster and less invasive way to induce left ventricular hypertension and enables the possibility for high-throughput studies. The success of the constriction can be verified using high-frequency trans-thoracic echocardiography, particularly color Doppler and pulsed-wave Doppler, to determine the flow velocities of the aortic arch and left and right carotid arteries, the dimension of the blood vessels, and the left ventricular function and morphology. A successful constriction will also trigger significant histopathological changes, such as cardiac muscle cell hypertrophy with interstitial and perivascular fibrosis. Here, the procedure of MTAC is described, demonstrating how the resulting flow changes in the carotid arteries can be examined with echocardiography, gross morphology, and histopathological changes in the heart.

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) conserves the essentials of regular transverse aortic constriction (TAC) while eliminating the use of a ventilator with tracheal intubation. It proves to be a highly desirable method for high-throughput studies on left ventricular overload, particularly in translational studies.

Minimamente invasiva trasversale aortica costrizione nei topi

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard ...

An Anatomical Study of Nerves at Risk During Minimally Invasive Hallux Valgus Surgery

The growing popularity of minimally invasive surgical (MIS) procedures makes it necessary that new anatomical references arise, to aid in tridimensional orientation and localization of structures that are not directly visible to the surgeon. This is especially critical for structures at risk like nerves or blood vessels. Optimization of the handling of cadaveric material and the combination of multiple techniques compensate for the limited availability of adequate specimens. The described protocol combines anatomical plane-by-plane dissection and sectional anatomy of fresh-frozen specimens to help localize relevant structures, such as nerves, arteries, veins and to correctly position the portals during MIS procedures. Depiction of these structures in anatomy textbooks can differ from what is encountered in the surgical field; and for this reason, new anatomical studies with a surgical orientation are needed. However, this is a complex, time-consuming technique requiring specific training. The anatomical references described with the so-called 'clock method' provide the surgeon with an easy and reproducible system to locate the path of the nerves at risk in Hallux Valgus MIS procedures. This model can be extrapolated to many other minimally invasive surgical procedures.

Minimally invasive surgical (MIS) procedures rely on anatomical references to localize structures not directly visible to the surgeon. This manuscript describes a combined method of plane-by-plane dissection and sectional anatomy of fresh-frozen specimens to locate the structures at risk during MIS procedures.

Uno studio anatomico dei nervi a rischio durante mininvasiva alluce valgo chirurgia

The growing popularity of minimally invasive surgical (MIS) procedures makes it necessary that new anatomical references arise, to aid in tridimensional ...

Electromagnetic Navigation Transthoracic Nodule Localization for Minimally Invasive Thoracic Surgery

The increased use of chest computed tomography (CT) has led to an increased detection of pulmonary nodules requiring diagnostic evaluation and/or excision. Many of these nodules are identified and excised via minimally invasive thoracic surgery; however, subcentimeter and subsolid nodules are frequently difficult to identify intra-operatively. This can be mitigated by the use of electromagnetic transthoracic needle localization. This protocol delineates the step-by-step process of electromagnetic localization from the pre-operative period to the postoperative period and is an adaptation of the electromagnetically guided percutaneous biopsy previously described by Arias et al. Pre-operative steps include obtaining a same day CT followed by the generation of a three-dimensional virtual map of the lung. From this map, the target lesion(s) and an entry site are chosen. In the operating room, the virtual reconstruction of the lung is then calibrated with the patient and the electromagnetic navigation platform. The patient is then sedated, intubated, and placed in the lateral decubitus position. Using a sterile technique and visualization from multiple views, the needle is inserted into the chest wall at the prechosen skin entry site and driven down to the target lesion. Dye is then injected into the lesion and, then, continuously during needle withdrawal, creating a tract for visualization intra-operatively. This method has many potential benefits when compared to the CT-guided localization, including a decreased radiation exposure and decreased time between the dye injection and the surgery. Dye diffusion from the pathway occurs over time, thereby limiting intra-operative nodule identification. By decreasing the time to surgery, there is a decrease in wait time for the patient, and less time for dye diffusion to occur, resulting in an improvement in nodule localization. When compared to electromagnetic bronchoscopy, airway architecture is no longer a limitation as the target nodule is accessed via a transparenchymal approach. Details of this procedure are described in a step-by-step fashion.

Presented here is a protocol for lung nodule localization using dye marking via electromagnetically navigated transthoracic needle access. The technique described here can be accomplished in the peri-operative period to optimize nodule localization and to successful resection when performing minimally invasive thoracic surgery.

Localizzazione di noduli transtoracici di navigazione elettromagnetica per chirurgia toracica minimamente invasiva

The increased use of chest computed tomography (CT) has led to an increased detection of pulmonary nodules requiring diagnostic evaluation and/or ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many areas of biomedical research due to its cost-effectiveness and its translation to humans. This protocol describes a method to create a preclinical free skin flap model in rats with ischemia-reperfusion injury. The described 3 cm x 6 cm rat free skin flap model is easily obtained after the placement of several vascular ligatures and the section of the vascular pedicle. Then, 8 h after the ischemic insult and completion of the microsurgical anastomosis, the free skin flap develops the tissue damage. These ischemia-reperfusion injury-related damages can be studied in this model, making it a suitable model for evaluating therapeutic agents to address this pathophysiological process. Furthermore, two main monitoring techniques are described in the protocol for the assessment of this animal model: transit-time ultrasound technology and laser speckle contrast analysis.

Here, we describe a pre-clinical animal model for studying the pathophysiology of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery. This free skin flap model based on the superficial caudal epigastric vessels in the rat may also allow for the evaluation of different therapies and compounds to counteract ischemia-reperfusion injury-related damage.

Un modello di ratto preclinico per lo studio delle lesioni ischemia-reperfusione in microchirurgia ricostruttiva

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...