Questo lavoro è stato sostenuto in parte dal NIH / NCI Grants Numero 1R01CA158372-01 (Qi) e New Drug State Key Project di Grant Numero 009ZX09102-205 (Qi). Assistenza Scrittura è stato fornito dal Dr. Judy Racadio, ed è stato finanziato dall&#39;Università di Cincinnati Dipartimento di Ematologia e Oncologia. Vontz Nucleo Imaging Lab (VCIL) presso la Facolta &#39;di Medicina presso l&#39;Università di Cincinnati.

Etica dichiarazione di utilizzo degli animali. Tutti gli studi su animali sono stati approvati dal Comitato Istituzionale cura degli animali ed uso dell &#39;Università di Cincinnati (Numero IACUC Protocol: 11-05-05-02) e l&#39;Ospedale Research Foundation dei Bambini di Cincinnati (Animal Welfare Assurance Number A3108-01). Tutti gli esperimenti che coinvolgono i topi hanno seguito le linee guida per la cura degli animali dell&#39;Università di Cincinnati e l&#39;Ospedale Fondazione di Ricerca Pediatrico di Cincinnati. 1. Preparare Modelli Animali Nota: Tre diversi modelli animali descritti di seguito sono stati utilizzati nei nostri studi precedenti: <ol><li> Ortotopico tumore al cervello di topo: Usare Nu / Nu atimico topi femmina che sono stati intracranially iniettati con cellule U87-ΔEGFR-Luc umani. Questi topi sviluppano un tumore aggressivo che mostra le caratteristiche tipiche di glioblastoma umano. </li><li> Modelli di cervello di topo tumore geneticamente 13: Breed MUT3 (GFAP-cre; Nf1loxP / +; Trp53-/ +) topi maschi con Trp53loxP/loxP; Femmine PtenloxP / loxP per generare topi Mut6 (GFAP-CRE; Nf1loxP / +; Trp53-/loxP, PtenloxP / +). Mantenere topi MUT3 in ceppo B6CBAF1 / J allevando topi MUT3 maschio con B6CBAF1 femmina / J topi. Genotipo topi tra P9 e P12 e confermare i genotipi dopo la raccolta i loro tessuti. </li><li> Artrite K / BXN: topi Usa C57BL/6J che sono stati somministrati per via intraperitoneale con 150 microlitri sieri di KRN x topi NOD F1. Questi topi sviluppano l&#39;artrite 24-48 ore dopo l&#39;iniezione sieri. Imaging dei topi artritici viene effettuata il giorno 7 dopo somministrazione sieri, un punto di tempo in cui i topi mostrano artrite macroscopico palese. I topi dovrebbero essere valutati in base ai criteri delineati nella fase successiva. <ol><li> Valutazione del mouse per l&#39;artrite macroscopica utilizzando un indice di sistema di punteggio macroscopico artritici come segue: 0 = nessuna artrite rilevabile, 1 = gonfiore e / o arrossamento della zampa o una cifra, 2 = due articolazioni coinvolte, 3 = tre giunti coinVED, e 4 = artrite severa di tutta la zampa e cifre. Il sistema di punteggio artritico è utilizzato per determinare il numero di articolazioni colpite e la gravità di artrite nelle zampe di topo. Anche i topi con il più alto punteggio possibile artritico raramente mostrano segni di immobilità. Tuttavia, l&#39;artrite è 3x/settimana monitorato e topi nel dolore eccessivo (come grave immobilità da zampe gonfie che inibisce il consumo di cibo e acqua) sono sacrificati. </li><li> Nota: Fluidi IV iniettato nella vena della coda del mouse sono sterilità mantenuta per tutto l&#39;esperimento. Pulito, sterili, siringhe monouso e fiale vengono utilizzati per la preparazione e la somministrazione soluzione studio. </li></ol></li></ol> 2. Preparazione di fluorescenza marcata SAPC-DOPS nanovesicles <ol><li> SAPC produzione di proteine: proteine ​​ricombinanti SAPC con esatta sequenza SAPC umana è stata prodotta in E. coli come precedentemente descritto con modifiche 4.SAPC è stato precipitato da etanolo seguita da purificazione cromatografia liquida ad alte prestazioni. Dopo liofilizzazione, asciutto SAPC stato utilizzato e la sua concentrazione è stata determinata mediante il suo peso. </li><li> Mix di proteine ​​SAPC come descritto in precedenza 7,10,11. Mix DOPS (0,18 mg) e CVM (0,03 mg) in una provetta di vetro e utilizzando gas azoto per evaporare solventi lipidici. </li><li> Aggiungi SAPC proteine ​​in polvere (0,32 mg) alla miscela, sospendere la miscela secca in 1 ml di tampone PBS e bagno a ultrasuoni per circa 15 minuti come descritto in precedenza 7,10,11. Poi passare la sospensione attraverso una colonna Sephadex G25 (PD-10) per rimuovere libera CVM colorante. Eccitazione e massimi di emissione del prodotto finale, cioè nanovesicles SAPC-DOPS-CVM, sono 653 nm e 677 nm, rispettivamente. </li></ol> 3. Imaging <ol><li> Utilizzare tumore al cervello e modelli murini artrite (sopra descritto nella Fase 1) per testare il sistema Maroi. Anestetizzare topi di effettuare con il 2% isoflurano. 1-2% isoflurano è maintainato per la durata della procedura di imaging. L&#39;aria calda viene continuamente e delicatamente trasportato nella camera di imaging per la durata di imaging. Una piccola quantità di sterile lacrime artificiali unguento viene applicato a ciascun occhio del mouse in modo da coprire e lubrificare l&#39;occhio. Posizionare topi nel sistema MARS posizionando il mouse in posizione supina con la spina dorsale inizialmente diretta verso la telecamera (Figura 1). Calibrare il film di supporto ° MARS 380 e posizionare il mouse utilizzando il software di rotazione nella scheda protocollo Bruker MI. Ottenere immagini di base di topi prima della somministrazione SAPC-DOPS-CVM nel modo descritto di seguito. </li><li> Iniettare 200 ml di SAPC-DOPS-CVM via endovenosa nella vena della coda del topo. Somministrare ai topi di controllo e topi portatori di tumore artritici o cerebrali. </li><li> Topi Immagine 24 ore dopo l&#39;iniezione e di nuovo a 7-9 giorni dopo l&#39;iniezione prendendo fluorescenza (25 sec tempo di esposizione) e X-ray (10 sec tempo di esposizione), imaghi a incrementi di 10 ° su un percorso di 380 °, creando una leggera sovrapposizione per garantire non ci sono lacune nel dataset rotazionale. Utilizzando il software Bruker MI, sovrapporre fluorescente su immagini a raggi X per la localizzazione anatomica. </li></ol> 4. Image Analysis <ol><li> Disegnare un ROI rettangolare che comprende la larghezza del campo di vista (FOV) del sito malattia (tumore e artrite). Il ROI deve essere grande abbastanza per mantenere la caratteristica malattia nel FOV come l&#39;animale si muove nel corso della rotazione di 380 °. Per i topi di tumore cerebrale (modelli ortotopici e transgenici), utilizzare lo stesso ROI rettangolare su ogni modello di tumore e le sue tre (3) topi rispettivo controllo di tutti i tempi (di base, 24 ore e 9 giorni). Il posizionamento della ROI rettangolare per ogni mouse viene conservato per tutti i punti temporali utilizzando punti di riferimento anatomici sulle corrispondenti immagini radiografiche di ogni animale. Il riferimento anatomico (s) identificato dal modello tumore deve essere utilizzato anche per place ROI rettangolari identici rispettivi controlli di ciascun modello. Punti di repere anatomici individuati sulle immagini a raggi X che consentono il posizionamento coerente ROI sono alla base del cranio e la faccia posteriore dell&#39;arcata zigomatica. Essi sono visualizzate a destra e sinistra del cranio laterale dell&#39;immagine postero-anteriore (PA) in. </li><li> Dopo automatico background sottrazione, determinare l&#39;intensità di fluorescenza media per ogni immagine. Convertire le immagini di fluorescenza di fotoni / s / mm 2 utilizzando software di imaging Bruker MI. Tracciare i valori di fluorescenza in funzione degli angoli di imaging, e applicare come errore sbarra la deviazione standard dei valori di fluorescenza medi ottenuti da topi di controllo usando Excel o altro software grafici. </li></ol>

<ol>
	<li>Pizzonia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodality+animal+rotation+imaging+system+(Mars)+for+in+vivo+detection+of+intraperitoneal+tumors.">Multimodality animal rotation imaging system (Mars) for in vivo detection of intraperitoneal tumors.</a> Am J Reprod Immunol. 67, 84-90 (2012).</li><li>Al-Mehdi, A. 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H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pten+haploinsufficiency+accelerates+formation+of+high-grade+astrocytomas.">Pten haploinsufficiency accelerates formation of high-grade astrocytomas.</a> Cancer Res. 68, 3286-3294 (2008).</li></ol>

Non c&#39;è nulla da rivelare.

Determinazione accurata della posizione e grandezza dei tumori solidi e focolai infiammatori in condizioni reumatiche è fondamentale per attuare un adeguato trattamento e follow-up progressione della malattia o la remissione. Mentre, preziose strategie attuali di imaging (raggi X, risonanza magnetica, ultrasuoni, raggi X tomografia computerizzata) fornire valutazioni incomplete di stato della malattia. Ad esempio, il danno articolare artritico è comunemente valutata dai raggi X, che fornisce informazioni sulla struttura ossea ma non l&#39;infiammazione dei tessuti molli e la distruzione, caratteristica dei primi stadi della malattia. Il metodo Maroi presentato qui unisce i vantaggi di entrambi i raggi X e sofisticate modalità di imaging dei tessuti molli (ad esempio MRI o ultrasuoni) in una piattaforma integrata, non invasiva e semplice che consente anche una mappatura completa in 3D e la ricostruzione del tessuto malato o organo in piccoli animali come topi. Questo metodo sfrutta l&#39;affinità selettiva of SAPC-DOPS nanovesicles per residui fosfatidilserina esposti, che sono abbondanti nelle membrane di cancro e cellule infiammatorie. Il determinante di questa associazione è SAPC, una proteina lisosomiale fusogenica con una forte affinità per i fosfolipidi anionici come fosfatidilserina 7,10,11. Quando coniugata con una sonda fluorescente (CVM), sistemica iniettato SAPC-DOPS possono essere ricondotte al tumore e siti artritici da imaging di fluorescenza. Limiti del nostro metodo sono legati alla sua sensibilità, che attualmente limita l&#39;uso di imaging di piccoli animali come topi. Come con altri metodi di imaging, segnale fluorescente ottimale di rumore è limitato dalle dimensioni del tumore o la portata di artrite, e può essere compromessa quando imaging di tessuti o organi, con fondo elevato (autofluorescenza) come orecchie (brain imaging), intestino / feci (di imaging addominale) e zampe (imaging arti posteriori). A questo proposito, abbiamo scoperto che un colorante rosso lontano come CVM profornisce una maggiore separazione risoluzione spettrale e nell&#39;impostazione in vivo di altre sonde fluorescenti nella gamma visibile. Altre insidie ​​sono potenzialità del movimento dell&#39;animale durante l&#39;imaging, sia mentre anestetizzato e post mortem (rigor mortis). Posizionamento dell&#39;arto posteriore, in particolare, è spesso difficile da stabilizzare per evitare movimenti durante la rotazione. Allo stato attuale della tecnica è anche molto tempo, con tempi di scansione fino a 60 minuti per completare una rotazione completa e acquisire immagini di alta qualità. Il metodo Maroi presenta una serie di vantaggi rispetto ad altre modalità di imaging. La capacità di immagine tessuto malato da 38 (o più) diverse angolazioni permette la visualizzazione di fluorescenza che può essere ostacolato nel valutare da un unico piano; questo è prezioso in studi sugli animali perché può aiutare a minimizzare il numero di falsi negativi che derivano dalle immagini ad angoli inappropriati. Per OVERLying raggi X e immagini di fluorescenza, una precisa localizzazione anatomica della zona malata può essere determinato. Infine, la possibilità di vivere l&#39;imaging (in vivo) consente studi longitudinali da eseguire.

Tutta la rappresentazione degli animali è diventato un potente strumento nello studio della fisiopatologia animale. Tra i sistemi di imaging attuali, MS PRO FX permette ai ricercatori di accuratamente etichettati dettagli di fluorescenza (o luminescenti) composti e / o tessuti nei topi viventi, e contemporaneamente ottenere immagini radiografiche. Con il sistema (MARS) recentemente introdotto multimodale rotazione animale un completo, la rotazione automatica del mouse è realizzata in modo da catturare sia fluorescente / luminescenti e immagini a raggi X ad angoli specifici 1. Acquisizione delle immagini può essere programmato in modo tale che immagine serie sequenziale può essere catturato a specifici angoli incrementali piccolo come 1 °. Questo permette di identificare l&#39;orientamento ottimale dell&#39;animale, cioè. quello in cui la distanza tra il segnale fluorescente / luminescenti generato internamente e dispositivo di rilevazione del sistema è il più corto. Questo, a sua volta, facilita il riposizionamento preciso dell&#39;animale per l&#39;imaging successiva séssions durante gli studi longitudinali. In questo rapporto, descriviamo l&#39;implementazione di un sistema multi-angolo di imaging ottico di rotazione (Maroi) in vivo quantificazione dell&#39;intensità marcatore fluorescente. Maroi analisi della curva di segnale può essere utilizzato in studi longitudinali per correlazione diretta di distribuzione del segnale fluorescente per mappare con precisione i siti malate o processi biologici di interesse. Questo sistema è stato utilizzato per monitorare l&#39;assorbimento di fluorescente nanovesicles SAPC-DOPS da tumori ortotopiche e spontanei, nonché da foci artritici, nei topi vivente; forniva insiemi di dati multispettrali e multimodali derivati ​​da copertura completa rotazione degli animali. Tra le numerose sonde fluorescenti attualmente disponibili per imaging in vivo, quelli che emettono nelle regioni spettrali nel vicino infrarosso e lontano-rosso conferisce l&#39;interferenza minima con la pelle e tessuti, e forniscono la penetrazione e di immagine più alta risoluzioneolution. Abbiamo usato CellVue Maroon (CVM) 2,3, un linker lontano globuli rossi fluorescenti (Ex 647/Em 667), per etichettare SAPC-DOPS (SAPC-DOPS-CVM) 4-12.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1246">
	<colgroup>
		<col /> 
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Dulbecco&#39;s modified eagle medium</td>
			<td style="width:423px;">Gibco (Grand Island, NY)</td>
			<td style="width:307px;">11965</td>
			<td style="width:167px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:423px;">Gibco (Grand Island, NY)</td>
			<td style="width:307px;">16000077</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Penicillin-streptomycin</td>
			<td style="width:423px;">Hyclone (Logan, Utah)</td>
			<td style="width:307px;">SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Dioleoylphosphatidylserine</td>
			<td style="width:423px;">Avanti Polar Lipids (Alabaster, AL)</td>
			<td style="width:307px;">840035C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">CellVue Maroon</td>
			<td style="width:423px;">Molecular Targeting Technologies, Inc. (Exton, PA)</td>
			<td style="width:307px;">C-1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Sephadex G25 column PD-10</td>
			<td style="width:423px;">Amersham Pharmacia Biotech, (Piscataway, NJ)</td>
			<td style="width:307px;">17-0851-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:351px;">New Standard Stereotaxic for Rats and Mice</td>
			<td style="width:423px;">Harvard Apparatus (Holliston, MA)</td>
			<td style="width:307px;">726335</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Bransonic Ultrasonic Cleaners Model 1510</td>
			<td style="width:423px;">Branson Ultrasonics (Danbury,CT)</td>
			<td style="width:307px;">CPN-952-118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Multi-spectral FX system</td>
			<td>Bruker Corporation (Billerica, MA)</td>
			<td style="width:307px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multi-angle Rotational Optical Imaging Device</td>
			<td>Bruker Corporation (Billerica, MA)</td>
			<td style="width:307px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo optical imaging of brain tumors and arthritis using fluorescent sapc-dops nanovesicles

Descriviamo un multi-angolo di rotazione del sistema di imaging ottico (Maroi) per il monitoraggio in vivo di processi fisiopatologici marcati con un marcatore fluorescente. Modelli murini (tumore al cervello e artrite) sono stati usati per valutare l&#39;utilità di questo metodo. Saposin C (SAPC)-dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles taggati con CellVue Maroon (CVM) fluoroforo sono stati somministrati per via endovenosa. Gli animali sono stati quindi posti nel supporto rotazionale (MARS) del sistema di imaging in vivo. Le immagini sono state acquisite in 10 ° passi oltre 380 °. Una regione rettangolare di interesse (ROI) è stato posto su tutta la larghezza dell&#39;immagine presso il sito della malattia modello. All&#39;interno del ROI, e per ogni immagine, intensità di fluorescenza media è stata calcolata dopo la sottrazione del fondo. In modelli murini studiati, i nanovesicles etichettati state riprese in entrambi i tumori cerebrali ortotopiche e transgeniche, e nei siti artritici (punte e caviglie). Analisi della curva dell&#39;angolo più image ROI determinato l&#39;angolo con il segnale più elevato. Così, l&#39;angolo ottimale per l&#39;imaging ogni sito malattia è stata caratterizzata. Il metodo Maroi applicata all&#39;imaging di composti fluorescenti è uno strumento non invasivo, economico e preciso per l&#39;analisi quantitativa in vivo degli stati di malattia nei modelli murini descritti.

Abbiamo dimostrato qui che nanovesicles SAPC-DOPS marcate con un colorante rosso lontano (CVM) specificamente accumulano nei tumori cerebrali topo ortotopico e spontanee, nonché nelle articolazioni artritiche di topi K / BXN. Immagini seriali fluorescenza / radiografiche acquisite da un ROI disposta sopra ciascun sito malattia durante rotazioni complete dei topi sono stati sottoposti ad analisi Maroi curva, che ha rivelato l&#39;angolo di visione ottimale con la massima intensità di fluorescenza. Lo scopo principale per utilizzare il sistema MARS è quello di determinare l&#39;angolo ottimale della fluorescenza in modo che possano essere adottate le misure più accurate. Sono mostrati i risultati rappresentativi di tre esperimenti su topi con tumori cerebrali o artrite. Uso SAPC-DOPS-CVM e il sistema MARS (Figura 1), l&#39;angolo migliore immagine possibile per l&#39;osservazione del tumore o infiammazione a causa di artrite è stata determinata. Immagini di fluorescenza, seguita da una acquisizione radiografica, sono stati acquisiti ogni 10 °durante una rotazione di 380 ° del mouse. Immagini di fluorescenza sono stati sovrapposti sulle corrispondenti immagini a raggi X per la visualizzazione delle immagini e la generazione di film di rotazione. I risultati del modello di tumore cerebrale ortotopico sono dimostrate in Figura 2. L&#39;immagine di fluorescenza di un rappresentante ortotopico topo portatore di tumore (Ortho1) è mostrato in Figura 2A. L&#39;angolo di immagine ottimale per questo animale è 10 °, la posizione in cui l&#39;intensità di fluorescenza fotone è il più grande (Figura 2B). Le misure sono state prese prima iniezione con SAPC-DOPS-CVM (baseline) e 24 ore dopo l&#39;iniezione. Topi di controllo (tumore libero) hanno ricevuto un trattamento simile. La figura 3 mostra dati comparabili dal tumore al cervello modello di topo geneticamente modificato. Le immagini a fluorescenza e le misure di fotoni sono state prese prima iniezione con SAPC-DOPS-CVM (baseline) e 24 ore (figure 3A e &lt;strong&gt; 3B) e 9 giorni (Figura 3C) dopo l&#39;iniezione. Questi grafici mostrano che l&#39;angolo di imaging ottimale nel tumore-cuscinetto animali (Tumor Mut49) è di 20 ° 24 ore dopo l&#39;iniezione, ma le modifiche ai 10 ° 9 giorni dopo l&#39;iniezione. Ciò suggerisce che l&#39;alterazione del segnale di fluorescenza correlato con i cambiamenti morfologici, probabilmente riflette la crescita tumorale. Come mostrato nella Tabella 1, il metodo Maroi dimostra chiaramente che il segnale fluorescente diminuisce per proiezioni ad aumentare la rotazione distanti l&#39;angolo ottimale di imaging. In tumori cerebrali, una diminuzione media 7% del segnale fluorescente è stato ottenuto se orientamento fisico dell&#39;animale stato di ± 10 ° rispetto alla dall&#39;angolo di imaging ottimale. Una diminuzione media del 21% nel segnale fluorescente è stata misurata a ± 20 °. Quindi relativamente piccoli spostamenti dall&#39;angolo ottimale può portare a notevoli attenuazione del segnale. Utilizzando la tecnica Maroi per il posizionamento dell&#39;immagine consentirà investigators per produrre dati più coerenti e affidabili. Il metodo Maroi è stato infine utilizzato per valutare l&#39;orientamento dei articolazioni artritiche da SAPC-DOPS-CVM 24 ore dopo l&#39;iniezione SAPC-DOPS-CVM. Questo animale ha ottenuto 3 con tre articolazioni artritiche. Immagini di fluorescenza di punta e caviglia del mouse artritici sono mostrate nelle Figure 4A e 4B. Misure fotoni corrispondenti a intervalli di 10 ° di rotazione sono rappresentati graficamente nelle figure 4C e 4D. Gli angoli di imaging ottimali trovati per la punta e caviglia sono 140 ° e 120 ° rispettivamente. In sintesi, la combinazione del sistema Maroi con fluorescenti nanovesicles SAPC-DOPS rappresenta una strategia non invasiva, precisa e altamente sensibile per l&#39;imaging in tempo reale, che consente studi quantitativi e progressione tumorale artrite nei piccoli animali. La possibilità di acquisire un set di dati di imaging multimodale ° 360 notevolmente improvvisazioneanalisi e interpretazione dei dati ES, rispetto a quanto ottenibile con tecniche di imaging di un singolo angolo. <img alt="Tabella 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51187/51187table1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51187/51187table1.jpg" width="600px" /> Tabella 1. Angoli di imaging ottimali per ogni modello di topo. Le differenze tra l&#39;angolo di massima fluorescenza fotone (FLR angolo ottimale) e l&#39;angolo anatomico standard (raggi X) può essere visto. Quando questi due angoli diventano sempre diverso, il segnale misurato cambia in modo significativo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51187/51187table1highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita</a> . <img alt="Figura 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51187/51187fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51187/51187fig1.jpg" width="600px"/&gt; Figura 1. Dispositivo di rotazione imaging ottico (Maroi) Multi-angolazione. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51187/51187fig1highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita</a> . <img alt="Figura 2" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51187/51187fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51187/51187fig2.jpg" width="600px" /> Segnale di fluorescenza vs angolo di Figura 2. Immagine di un tumore al cervello modello ortotopico del mouse. (A). Immagine del segnale di picco fluorescente all&#39;angolo immagine ottimale di 10 °. La scatola blu indica il ROI utilizzato per quantificare i fotoni emessi. (B). Grafico dell&#39;angolo dell&#39;immagine rispetto emissione di fotoni. Il rappresentante del mouse ortotopico tumore-cuscinetto (Ortho1) viene rappresentata graficamente con i valori di fluorescenza medi di ROI identico in tre topi non tumorali. Le misurazioni sono state prese al basale (prima dell&#39;iniezione) e 24 ore di post injection. Le barre di errore rappresentano la deviazione standard. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51187/51187fig2highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita</a> . <img alt="Figura 3" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51187/51187fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51187/51187fig3.jpg" width="600px" /> Figura 3. Segnale di fluorescenza vs angolo di immagine in un tumore cerebrale spontanea di un modello di topo transgenico. (A). Immagine del segnale fluorescente picco di ROI 1 (top box blu) con l&#39;angolo ottimale di immagine di 20 °. (B) e (C). Grafici dell&#39;angolo immagine contro emissione di fotoni da ROI 1. Valori da una rappresentante cerebrale spontanea del mouse del tumore-cuscinetto, Tumor-Mut 49, sono rappresentati graficamente rispetto ai valori medi di tre topi non tumorali. Le misurazioni sono state prese al basale (prima dell&#39;iniezione) e iniezione 24 ore (B) e 9 giorni (C) post. Errore b<html> ars rappresentano Deviazione Standard. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51187/51187fig3highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita</a> . <img alt="Figura 4" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51187/51187fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51187/51187fig4.jpg" width="600px" /> Segnale di fluorescenza vs angolo di Figura 4. Immagine di un topo con l&#39;artrite del piede e della caviglia. (A) e (B). Le immagini mostrano il segnale di picco fluorescente per le dita dei piedi (A) e le articolazioni della caviglia (B), entro i ROI indicati nel riquadro rosso. (C). Grafico dell&#39;angolo rispetto significano emissione di fotoni per la punta. Emissione di fotoni picco può essere visto con un angolo di 140 ° (D) Grafico di angolo rispetto significa emissione di fotoni per la caviglia..; massima intensità si verifica ad un angolo di 120 °.target = &quot;_blank&quot;&gt; Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita.

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In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

Descriviamo un multi-angolo di rotazione imaging ottico del sistema (Maroi) in vivo quantificazione di un marcatore fluorescente consegnato da saposin C (SAPC)-dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles. Impiegando modelli murini di cancro e artrite, si dimostra come l&#39;analisi della curva Maroi segnale può essere utilizzato per la mappatura precisa e caratterizzazione biologica dei processi patologici.

In Vivo Imaging ottico dei tumori cerebrali e artrite Uso fluorescente SAPC-DOPS nanovesicles

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent ...

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Medicine

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

11.2K Views.  University of Cincinnati College of Medicine.  Descriviamo un multi-angolo di rotazione imaging ottico del sistema (Maroi) in vivo quantificazione di un marcatore fluorescente consegnato da saposin C (SAPC)-dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles. Impiegando modelli murini di cancro e artrite, si dimostra come l'analisi della curva Maroi segnale può essere utilizzato per la mappatura precisa e caratterizzazione biologica dei processi patologici. 

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Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues as well as altered cytokine homeostasis. The innate immune system plays a crucial role in recognizing pathogens and other endogenous danger stimuli. One of the major cytokines released by innate immune cells is Interleukin (IL)-1. Therefore, we utilize a whole blood stimulation assay in order to measure the secretion of inflammatory cytokines and specifically of the pro-inflammatory cytokine IL-1&beta; 1, 2, 3.
Patients with genetic dysfunctions of the innate immune system causing autoinflammatory syndromes show an exaggerated release of mature IL-1&beta; upon stimulation with LPS alone. In order to evaluate the innate immune component of patients who present with inflammatory-associated pathologies, we use a specific immunoassay to detect cellular immune responses to pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), such as the gram-negative bacterial endotoxin, lipopolysaccharide (LPS). These PAMPs are recognized by pathogen recognition receptors (PRRs), which are found on the cells of the innate immune system 4, 5, 6, 7. A primary signal, LPS, in conjunction with a secondary signal, ATP, is necessary for the activation of the inflammasome, a multiprotein complex that processes pro-IL-1&beta; to its mature, bioactive form 4, 5, 6, 8, 9, 10.
The whole blood assay requires minimal sample manipulation to assess cytokine production when compared to other methods that require labor intensive isolation and culturing of specific cell populations. This method differs from other whole blood stimulation assays; rather than diluting samples with a ratio of RPMI media, we perform a white blood cell count directly from diluted whole blood and therefore, stimulate a known number of white blood cells in culture 2. The results of this particular whole blood assay demonstrate a novel technique useful in elucidating patient cohorts presenting with autoinflammatory pathophysiologies.

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&amp;#946; using a Whole Blood Stimulation Assay

We describe a simple immunoassay to measure the production of pro-inflammatory cytokines, such as IL-1 beta production, in patients presenting with autoinflammatory phenotypes. By activating cells in whole blood cultures with pathogen-associated molecular patterns, specifically with lipopolysaccharide, cytokine secretion can be conveniently evaluated in whole blood supernatants.

Misurazione accurata e semplice della citochina pro-infiammatoria IL-1β utilizzando un intero saggio stimolazione del sangue

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

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Medicina

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

Valutazione della captazione nanoparticelle nei tumori in tempo reale utilizzando intravitale Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Probing the Brain in Autism Using fMRI and Diffusion Tensor Imaging

Newly emerging theories suggest that the brain does not function as a cohesive unit in autism, and this discordance is reflected in the behavioral symptoms displayed by individuals with autism. While structural neuroimaging findings have provided some insights into brain abnormalities in autism, the consistency of such findings is questionable. Functional neuroimaging, on the other hand, has been more fruitful in this regard because autism is a disorder of dynamic processing and allows examination of communication between cortical networks, which appears to be where the underlying problem occurs in autism. Functional connectivity is defined as the temporal correlation of spatially separate neurological events1. Findings from a number of recent fMRI studies have supported the idea that there is weaker coordination between different parts of the brain that should be working together to accomplish complex social or language problems2,3,4,5,6. One of the mysteries of autism is the coexistence of deficits in several domains along with relatively intact, sometimes enhanced, abilities. Such complex manifestation of autism calls for a global and comprehensive examination of the disorder at the neural level. A compelling recent account of the brain functioning in autism, the cortical underconnectivity theory,2,7 provides an integrating framework for the neurobiological bases of autism. The cortical underconnectivity theory of autism suggests that any language, social, or psychological function that is dependent on the integration of multiple brain regions is susceptible to disruption as the processing demand increases. In autism, the underfunctioning of integrative circuitry in the brain may cause widespread underconnectivity. In other words, people with autism may interpret information in a piecemeal fashion at the expense of the whole. Since cortical underconnectivity among brain regions, especially the frontal cortex and more posterior areas 3,6, has now been relatively well established, we can begin to further understand brain connectivity as a critical component of autism symptomatology.
A logical next step in this direction is to examine the anatomical connections that may mediate the functional connections mentioned above. Diffusion Tensor Imaging (DTI) is a relatively novel neuroimaging technique that helps probe the diffusion of water in the brain to infer the integrity of white matter fibers. In this technique, water diffusion in the brain is examined in several directions using diffusion gradients. While functional connectivity provides information about the synchronization of brain activation across different brain areas during a task or during rest, DTI helps in understanding the underlying axonal organization which may facilitate the cross-talk among brain areas. This paper will describe these techniques as valuable tools in understanding the brain in autism and the challenges involved in this line of research.

Neuroimaging techniques, such as functional MRI and Diffusion Tensor Imaging have become increasingly useful in characterizing the cognitive and neural deficits in autism. An examination of brain connectivity in autism at a network level along with adaptations for scanning children with developmental disabilities is presented.

Probing the Brain in Autismo Utilizzando fMRI e imaging del tensore di diffusione

Newly emerging theories suggest that the brain does not function as a cohesive unit in autism, and this discordance is reflected in the behavioral ...

Non-invasive Optical Measurement of Cerebral Metabolism and Hemodynamics in Infants

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can accurately screen for brain injury, monitor injury evolution, or assess response to therapy. The energy used by neurons is derived largely from tissue oxidative metabolism, and neural hyperactivity and cell death are reflected by corresponding changes in cerebral oxygen metabolism (CMRO2). Thus, measures of CMRO2 are reflective of neuronal viability and provide critical diagnostic information, making CMRO2 an ideal target for bedside measurement of brain health.
Brain-imaging techniques such as positron emission tomography (PET) and single-photon emission computed tomography (SPECT) yield measures of cerebral glucose and oxygen metabolism, but these techniques require the administration of radionucleotides, so they are used in only the most acute cases.
Continuous-wave near-infrared spectroscopy (CWNIRS) provides non-invasive and non-ionizing radiation measures of hemoglobin oxygen saturation (SO2) as a surrogate for cerebral oxygen consumption. However, SO2 is less than ideal as a surrogate for cerebral oxygen metabolism as it is influenced by both oxygen delivery and consumption. Furthermore, measurements of SO2 are not sensitive enough to detect brain injury hours after the insult 1,2, because oxygen consumption and delivery reach equilibrium after acute transients 3. We investigated the possibility of using more sophisticated NIRS optical methods to quantify cerebral oxygen metabolism at the bedside in healthy and brain-injured newborns. More specifically, we combined the frequency-domain NIRS (FDNIRS) measure of SO2 with the diffuse correlation spectroscopy (DCS) measure of blood flow index (CBFi) to yield an index of CMRO2 (CMRO2i) 4,5.
With the combined FDNIRS/DCS system we are able to quantify cerebral metabolism and hemodynamics. This represents an improvement over CWNIRS for detecting brain health, brain development, and response to therapy in neonates. Moreover, this method adheres to all neonatal intensive care unit (NICU) policies on infection control and institutional policies on laser safety. Future work will seek to integrate the two instruments to reduce acquisition time at the bedside and to implement real-time feedback on data quality to reduce the rate of data rejection.

We combined frequency-domain near-infrared spectroscopy measures of cerebral hemoglobin oxygenation with diffuse correlation spectroscopy measures of cerebral blood flow index to estimate an index of oxygen metabolism. We tested the utility of this measure as a bedside screening tool to evaluate the health and development of the newborn brain.

Non invasiva di misurazione ottica del metabolismo cerebrale ed emodinamica nei neonati

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality  and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can  accurately ...

In vivo Macrophage Imaging Using MR Targeted Contrast Agent for Longitudinal Evaluation of Septic Arthritis

Macrophages are key-cells in the initiation, the development and the regulation of the inflammatory response to bacterial infection. Macrophages are intensively and increasingly recruited in septic joints from the early phases of infection and the infiltration is supposed to regress once efficient removal of the pathogens is obtained. The ability to identify in vivo macrophage activity in an infected joint can therefore provide two main applications: early detection of acute synovitis and monitoring of therapy.
In vivo noninvasive detection of macrophages can be performed with magnetic resonance imaging using iron nanoparticles such as ultrasmall superparamagnetic iron oxide (USPIO). After intravascular or intraarticular administration, USPIO are specifically phagocytized by activated macrophages, and, due to their magnetic properties, induce signal changes in tissues presenting macrophage infiltration. A quantitative evaluation of the infiltrate is feasible, as the area with signal loss (number of dark pixels) observed on gradient echo MR images after particles injection is correlated with the amount of iron within the tissue and therefore reflects the number of USPIO-loaded cells.
We present here a protocol to perform macrophage imaging using USPIO-enhanced MR imaging in an animal model of septic arthritis, allowing an initial and longitudinal in vivo noninvasive evaluation of macrophages infiltration and an assessment of therapy action.

In vivo Macrophage Imaging Using MR Targeted Contrast Agent for Longitudinal Evaluation of Septic Arthritis

We demonstrate how to perform macrophage MR imaging using ultrasmall superparamagnetic contrast agent (USPIO) in septic arthritis, allowing an initial and longitudinal in vivo non-invasive evaluation of macrophages infiltration and an assessment of therapy efficacy.

In vivo Macrofago Imaging Utilizzando MR mirata di contrasto agente per la valutazione longitudinale di artrite settica

Macrophages are key-cells in the initiation, the development and the regulation of the inflammatory response to bacterial infection. Macrophages are ...

Combined In vivo Optical and &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in vivo optical and &#956;CT imaging allow the visualization of biological phenomena in an anatomical context. These imaging modalities may be especially useful to study conditions that impact bone. In particular, orthopaedic implant infections are an important problem in clinical orthopaedic surgery. These infections are difficult to treat because bacterial biofilms form on the foreign surgically implanted materials, leading to persistent inflammation, osteomyelitis and eventual osteolysis of the bone surrounding the implant, which ultimately results in implant loosening and failure. Here, a mouse model of an infected orthopaedic prosthetic implant was used that involved the surgical placement of a Kirschner-wire implant into an intramedullary canal in the femur in such a way that the end of the implant extended into the knee joint. In this model, LysEGFP mice, a mouse strain that has EGFP-fluorescent neutrophils, were employed in conjunction with a bioluminescent Staphylococcus aureus strain, which naturally emits light. The bacteria were inoculated into the knee joints of the mice prior to closing the surgical site. In vivo bioluminescent and fluorescent imaging was used to quantify the bacterial burden and neutrophil inflammatory response, respectively. In addition, &#956;CT imaging was performed on the same mice so that the 3D location of the bioluminescent and fluorescent optical signals could be co-registered with the anatomical &#956;CT images. To quantify the changes in the bone over time, the outer bone volume of the distal femurs were measured at specific time points using a semi-automated contour based segmentation process. Taken together, the combination of in vivo bioluminescent/fluorescent imaging with &#956;CT imaging may be especially useful for the noninvasive monitoring of the infection, inflammatory response and anatomical changes in bone over time.

Combined In vivo Optical and  &amp;#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Combined optical and &#956;CT imaging in a mouse model of orthopaedic implant infection, utilizing a bioluminescent engineered strain of Staphylococcus aureus, provided the capability to noninvasively and longitudinally monitor the dynamics of the bacterial infection, as well as the corresponding inflammatory response and anatomical changes in the bone.

Combinato<em&gt; In vivo</em&gt; Optical e μCT Imaging Monitor per infezione, infiammazione, e Bone Anatomy in una infezione ortopedica impianto in topi

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in ...

Creating Anatomically Accurate and Reproducible Intracranial Xenografts of Human Brain Tumors

Orthotopic tumor models are currently the best way to study the characteristics of a tumor type, with and without intervention, in the context of a live animal &#8211;&#160;particularly in sites with unique physiological and architectural qualities such as the brain. In vitro and ectopic models cannot account for features such as vasculature, blood brain barrier, metabolism, drug delivery and toxicity, and a host of other relevant factors. Orthotopic models have their limitations too, but with proper technique tumor cells of interest can be accurately engrafted into tissue that most closely mimics conditions in the human brain. By employing methods that deliver precisely measured volumes to accurately defined locations at a consistent rate and pressure, mouse models of human brain tumors with predictable growth rates can be reproducibly created and are suitable for reliable analysis of various interventions. The protocol described here focuses on the technical details of designing and preparing for an intracranial injection, performing the surgery, and ensuring successful and reproducible tumor growth and provides starting points for a variety of conditions that can be customized for a range of different brain tumor models.

The brain is a unique site with qualities that are not well represented by in vitro or ectopic analyses. Orthotopic mouse models with reproducible location and growth characteristics can be reliably created with intracranial injections using a stereotaxic fixation instrument and a low pressure syringe pump.

Creazione anatomicamente accurati e riproducibili intracranica xenotrapianti di tumori cerebrali umani

Orthotopic tumor models are currently the best way to study the characteristics of a tumor type, with and without intervention, in the context of a live ...

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo: A Model of Single Vessel Stroke

In vivo imaging techniques have increased in utilization due to recent advances in imaging dyes and optical technologies, allowing for the ability to image cellular events in an intact animal. Additionally, the ability to induce physiological disease states such as stroke in vivo increases its utility. The technique described herein allows for physiological assessment of cellular responses within the CNS following a stroke and can be adapted for other pathological conditions being studied. The technique presented uses laser excitation of the photosensitive dye Rose Bengal in vivo to induce a focal ischemic event in a single blood vessel. 
The video protocol demonstrates the preparation of a thin-skulled cranial window over the somatosensory cortex in a mouse for the induction of a Rose Bengal photothrombotic event keeping injury to the underlying dura matter and brain at a minimum. Surgical preparation is initially performed under a dissecting microscope with a custom-made surgical/imaging platform, which is then transferred to a confocal microscope equipped with an inverted objective adaptor. Representative images acquired utilizing this protocol are presented as well as time-lapse sequences of stroke induction. This technique is powerful in that the same area can be imaged repeatedly on subsequent days facilitating longitudinal in vivo studies of pathological processes following stroke.

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo:  A Model of Single Vessel Stroke

Here, we describe a semi-invasive optical microscopy approach for the induction of a Rose Bengal photothrombotic clot in the somatosensory cortex of a mouse in vivo. The technical aspects of the imaging procedure are described from induction of a photothrombotic event to application and data collection.

Rosa Bengala Photothrombosis da confocale Optical Imaging<em&gt; In Vivo</em&gt;: Un modello di singolo vaso Stroke

In vivo imaging techniques have increased in utilization due to recent advances in imaging dyes and optical technologies, allowing for the ability to ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

L&#39;esaurimento delle cellule di topo da xenotrapianti tumorali umani migliora in modo significativo Analisi A valle delle cellule bersaglio

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the present protocol, mice expressing green fluorescent protein (gfp) under the promoter of Cx3cr1 (BALB/c-Cx3cr1gfp/gfp) were used to image microglia cells in vivo in the retina. Microglia are resident macrophages of the retina and have been implicated in several retinal diseases1,2,3,4,5,6. This protocol provides a detailed approach for generation of retinal B-scans, with SD-OCT, and imaging of microglia cell distribution in Cx3cr1gfp/gfp mice with SLO in vivo, using an ophthalmic imaging platform system. The protocol can be used in several reporter mouse lines. However, there are some limitations to the protocol presented here. First, both SLO and SD-OCT, when used in the high-resolution mode, collect data with high axial resolution but the lateral resolution is lower (3.5 &#181;m and 6 &#181;m, respectively). Moreover, the focus and saturation level in SLO is highly dependent on parameter selection and correct alignment of the eye. Additionally, using devices designed for human patients in mice is challenging due to the higher total optical power of the mouse eye compared to the human eye; this can lead to lateral magnification inaccuracies7, which are also dependent on the magnification by the mouse lens among others. However, despite that the axial scan position is dependent upon lateral magnification, the axial SD-OCT measurements are accurate8.

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

This protocol describes how high-resolution imaging techniques such as spectral domain optical coherence tomography and scanning laser ophthalmoscopy can be utilized in small rodents, using an ophthalmic imaging platform system, to obtain information on retinal thickness and microglial cell distribution, respectively.

In Vivo Imaging dei topi Reporter Cx3cr1gfp/gfp con tomografia a coerenza ottica Spectral-domain e scansione Laser oftalmoscopia

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the ...