Questo lavoro è stato supportato dal programma di ricerca e sviluppo, dall'ospedale di stomatologia della Cina occidentale, dall'Università del Sichuan (RD-02-202107), dal programma di supporto alla scienza e alla tecnologia della provincia del Sichuan (2022NSFSC0743) e dalla sovvenzione della Fondazione scientifica post-dottorato del Sichuan (TB2022005) a H. Huang.

Tutte le procedure sugli animali in questo studio sono state esaminate e approvate dal Comitato Etico della Scuola di Stomatologia della Cina Occidentale, Università del Sichuan. Per il presente studio sono stati utilizzati topi adulti C57BL/6 (femmine).
1. Preparazione chirurgica
<ol><li>Raccogli gli strumenti chirurgici necessari per la procedura: germinatore, cauterizzazione oftalmologica, forbici microchirurgiche, pinzette microchirurgiche, siringhe e aghi (26 g x 0,63 pollici) (Figura 1A,B) (vedi Tabella dei materiali). NOTA: Prima della procedura chirurgica, sterilizzare in autoclave gli strumenti chirurgici, inclusi il cauterizzatore oftalmologico, le pinzette microchirurgiche e le forbici microchirurgiche, a 102,9 kPa (1,05 kg/cm2) e 121 °C per 20 minuti.</li>
	<li>Raccogliere le forniture chirurgiche necessarie: teli chirurgici, guanti in lattice, cotone sterile, fogli sterili, fogli di metallo sterili, pannelli di schiuma come piattaforma chirurgica, elastici (che possono essere ottenuti strappando un guanto in lattice medico) e nastro adesivo (Figura 1C) (vedere Tabella dei materiali). NOTA: Utilizzare un set separato di materiali di consumo per ciascun topo, comprese siringhe e fogli sterili per il campo chirurgico.</li>
	<li>Pulire l'area chirurgica e l'apparecchio (sorgente luminosa, pannello in schiuma e dispositivo di mantenimento della temperatura, vedere la tabella dei materiali) utilizzando salviette imbevute di alcol. Coprire le manopole e le maniglie degli strumenti che potrebbero essere necessari durante la procedura con un foglio di metallo sterile.</li>
	<li>Aprire in modo asettico i singoli strumenti e posizionarli con cura nell'area chirurgica. Attivare il germinatore (vedi Tabella dei materiali) e le luci per l'uso durante la procedura. Mettere il cauterizzazione oftalmologica nel germinatore e riscaldarlo a 250 °C per 20 min.</li>
</ol>2. Procedura chirurgica
<ol><li>Eseguire la fissazione del mouse e aprire la cavità orale seguendo i passaggi seguenti.<ol><li>Selezionare una femmina di topo C57BL/6J del peso di 20-25 g e di 8-12 settimane. Tenere a casa il topo per 7 giorni prima di eseguire qualsiasi procedura.</li>
		<li>Anestetizzare il topo mediante iniezione intraperitoneale di Zoletil50 (80 mg/kg) e xilazina (5 mg/kg) (vedere Tabella dei materiali). Applicare un unguento oftalmico per gli occhi sull'occhio del topo. Attendi fino a quando non c'è una risposta di pizzicamento delle dita dei piedi. NOTA: Il mouse è pronto per la procedura quando non è in grado di capovolgersi autonomamente.</li>
		<li>Fissare il mouse a un pannello di schiuma rivestito con fogli sterili. Utilizzare del nastro adesivo per legare il mouse alla piattaforma chirurgica in posizione supina (Figura 2A).</li>
		<li>Aprire la cavità orale del topo. Posizionare due aghi (26 g x 0,63 pollici) davanti al piano orbitale dell'orecchio e altri due dietro di esso. Metti un elastico intorno agli aghi e incrocia gli incisivi per tenere la bocca aperta. Utilizzare una pinzetta microchirurgica per aprire gli angoli della bocca (Figura 2B). NOTA: Assicurarsi che il palato duro sia chiaramente esposto. Fissare la linguetta sotto l'elastico per evitare l'ostruzione del campo visivo e il bruciore durante gli esperimenti successivi.</li>
	</ol></li>
	<li>Creare la fistola oronasale (ONF) sul palato duro (Figura 3A-F).<ol><li>Recuperare il cauterizzazione oftalmologica, che è stato riscaldato a 250 °C per 20 min. Posizionare la punta del cauterismo a 1 mm di distanza dall'intersezione tra la linea mediana del palato e la linea del primo premolare, creando una lesione della mucosa a tutto spessore al palato duro nella linea mediana. NOTA: Evitare di scottare la lingua del mouse.</li>
		<li>Dopo alcuni secondi, rimuovere il cauterismo oftalmologico quando la mucosa intorno alla punta del cauterio diventa bianca.</li>
		<li>Posizionare il cauterizzazione oftalmologica nel germinatore e continuare a riscaldarlo a 250 °C per 10 min. Ripetere il passaggio precedente per allargare la ferita lungo i bordi fino a raggiungere una lunghezza di 2,0 mm e una larghezza di 1,5 mm. NOTA: Ogni estensione deve seguire il bordo dell'ultima lesione. Usa un calibro a corsoio per misurare la lunghezza e la larghezza della lesione. La lesione dovrebbe coprire il 10% del palato.</li>
		<li>Utilizzare forbici microchirurgiche per rimuovere i tessuti molli denaturati in eccesso intorno alla ferita. Utilizzare cotone sterile per fermare l'emorragia e prevenire l'asfissia per inalazione del topo. Misurare la ferita per assicurarsi che formi una lesione della mucosa del palato duro a tutto spessore che misura 2,0 x 1,5 mm nella linea mediana.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Cure post-operatorie
<ol><li>Somministrare Meloxicam al topo al momento del risveglio postoperatorio, alla dose di 5 mg/kg/die per 3 giorni, per via sottocutanea29.</li>
	<li>Posizionare il mouse su un dispositivo di mantenimento della temperatura fino a quando non riprende completamente conoscenza. NOTA: Assicurarsi che il mouse sia posizionato in modo da facilitare la respirazione. Ruotare i topi ogni 10-15 minuti per prevenire il ristagno di sangue o il collasso dei lobi polmonari. Una volta che il topo si è riscaldato, rimettilo nella sua gabbia. Fornire gelatina sterile e mangime irradiato sul fondo della gabbia per i topi.</li>
</ol>4. Verifica della creazione della fistola oronasale
NOTA: Il successo della creazione della fistola oronasale (ONF) viene valutato il 7° giorno successivo alla procedura chirurgica.
<ol><li>Preparare le forniture chirurgiche necessarie: elastico, nastro adesivo, siringhe, teli chirurgici, guanti in lattice, fogli sterili, fogli di metallo sterili e pannelli di schiuma.</li>
	<li>Indossare teli chirurgici e guanti sterili per mantenere le condizioni asettiche. Disinfettare il pannello in schiuma, la fonte di luce e il dispositivo di mantenimento della temperatura con alcol.</li>
	<li>Indurre l'anestesia generale mediante iniezione intraperitoneale di Zoletil50 (80 mg/kg). Attendi fino a quando non c'è una risposta di pizzicamento delle dita dei piedi. Utilizzare lo stesso metodo descritto nei passaggi 2.1.3 e 2.1.4 per immobilizzare il mouse ed esporre il palato duro.</li>
	<li>Eseguire la verifica strutturale anatomica assicurandosi che il setto sia ancora visibile nel sito della ferita, indicando la corretta creazione di ONF (Figura 4A,B).</li>
	<li>Eseguire la verifica funzionale: chiudere la cavità orale del topo e iniettare acqua sterile nella sua cavità orale utilizzando una siringa sterile. Il successo della creazione di ONF è confermato quando il fluido scorre dalle narici del topo.</li>
	<li>Posizionare il mouse sul dispositivo di mantenimento della temperatura (37 °C) fino a quando non riprende completamente conoscenza. Ruotare i topi ogni 10-15 minuti per prevenire il ristagno di sangue o il collasso dei lobi polmonari.</li>
</ol>

Sviluppo di un modello murino efficace per lo studio delle fistole oronasali

<ol>
	<li>Alonso, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-layered+repair+with+a+collagen+membrane+and+a+mucosal+rotational+flap+reinforced+with+fibrine+for+palatal+fistula+closure+in+children.">Three-layered repair with a collagen membrane and a mucosal rotational flap reinforced with fibrine for palatal fistula closure in children.</a> International Journal of Pediatric Otorhinolaryngology. 127, 109679 (2019).</li><li>Garg, R., Shah, S., Uppal, S., Mittal, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statistical+analysis+of+incidence,+etiology,+and+management+of+palatal+fistula.">A statistical analysis of incidence, etiology, and management of palatal fistula.</a> National Journal of Maxillofacial Surgery. 10 (1), 43-46 (2019).</li><li>Mahajan, R. K., Kaur, A., Singh, S. M., Kumar, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+retrospective+analysis+of+incidence+and+management+of+palatal+fistula.">A retrospective analysis of incidence and management of palatal fistula.</a> Indian Journal of Plastic Surgery. 51 (3), 298-305 (2018).</li><li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+the+Chinese+Velopharyngeal+Insufficiency+Effects+on+Life+Outcomes+Instrument.">Validation of the Chinese Velopharyngeal Insufficiency Effects on Life Outcomes Instrument.</a> Laryngoscope. 129 (11), E395-E401 (2019).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+Postoperative+Outcomes+in+Two+Cleft+Palate+Repair+Techniques+without+Relaxing+Incisions.">Evaluation of Postoperative Outcomes in Two Cleft Palate Repair Techniques without Relaxing Incisions.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. , (2023).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+late+cleft+palate+repair+by+a+modified+technique+without+relaxing+incisions.">Evaluation of late cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions.</a> Journal of Stomatology, Oral and Maxillofacial Surgery. 124 (4), 101403 (2023).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sommerlad-Furlow+modified+palatoplasty+technique:+postoperative+complications+and+implicating+factors.">The Sommerlad-Furlow modified palatoplasty technique: postoperative complications and implicating factors.</a> Laryngoscope. 133 (4), 822-829 (2023).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+cleft+palate+repair+by+a+modified+technique+without+relaxing+incisions.">Early cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions.</a> The Cleft Palate-Craniofacial Journal. , (2022).</li><li>Chen, J., Yang, R., Shi, B., Xu, Y., Huang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obturator+manufacturing+for+oronasal+fistula+after+cleft+palate+repair:+a+review+from+handicraft+to+the+application+of+digital+techniques.">Obturator manufacturing for oronasal fistula after cleft palate repair: a review from handicraft to the application of digital techniques.</a> Journal of Functional Biomaterials. 13 (4), 251 (2022).</li><li>Yussif, N., Wagih, R., Selim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propylene+mesh+versus+acrylic+resin+stent+for+palatal+wound+protection+following+free+gingival+graft+harvesting:+a+short-term+pilot+randomized+clinical+trial.">Propylene mesh versus acrylic resin stent for palatal wound protection following free gingival graft harvesting: a short-term pilot randomized clinical trial.</a> BMC Oral Health. 21 (1), 208 (2021).</li><li>Miron, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+and+soft+tissue+wound+healing:+a+systematic+review.">Platelet-rich fibrin and soft tissue wound healing: a systematic review.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 23 (1), 83-99 (2017).</li><li>Ballestas, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+hard+palate+wound+healing+using+immune+modulatory+autotherapies.">Improving hard palate wound healing using immune modulatory autotherapies.</a> Acta Biomaterialia. 91, 209-219 (2019).</li><li>Ferreira, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+stimulation+enhances+early+palatal+wound+healing+in+mice.">Electrical stimulation enhances early palatal wound healing in mice.</a> Archives of Oral Biology. 122, 105028 (2021).</li><li>Lindley, L. E., Stojadinovic, O., Pastar, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+and+Biomarkers+for+Wound+Healing.">Biology and Biomarkers for Wound Healing.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 18s-28s (2016).</li><li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Additive+Manufacturing+of+a+Superlight+Obturator+for+Large+Oronasal+Fistula+in+Pediatric+Patient.">Rapid Additive Manufacturing of a Superlight Obturator for Large Oronasal Fistula in Pediatric Patient.</a> Laryngoscope. 133 (6), 1507-1512 (2022).</li><li>Leenstra, T. S., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+healing+process+of+palatal+tissues+after+palatal+surgery+with+and+without+implantation+of+membranes:+an+experimental+study+in+dogs.">The healing process of palatal tissues after palatal surgery with and without implantation of membranes: an experimental study in dogs.</a> Journal of Materials Science: Materials in Medicine. 9 (5), 249-255 (1998).</li><li>In de Braekt, M. M., van Alphen, F. A., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+and+wound+contraction+after+palatal+surgery+and+implantation+of+poly-(L-lactic)+acid+membranes+in+beagle+dogs.">Wound healing and wound contraction after palatal surgery and implantation of poly-(L-lactic) acid membranes in beagle dogs.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 50 (4), 359-365 (1992).</li><li>Suragimath, G., Krishnaprasad, K. R., Moogla, S., Sridhara, S. U., Raju, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+carbonated+drink+on+excisional+palatal+wound+healing:+A+study+on+Wistar+rats.">Effect of carbonated drink on excisional palatal wound healing: A study on Wistar rats.</a> Indian Journal of Dental Research. 21 (3), 330-333 (2010).</li><li>Zhu, T., Park, H. C., Son, K. M., Yang, H. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+dimethyloxalylglycine+on+wound+healing+of+palatal+mucosa+in+a+rat+model.">Effects of dimethyloxalylglycine on wound healing of palatal mucosa in a rat model.</a> BMC Oral Health. 15 (1), 60 (2015).</li><li>Kirschner, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+oronasal+fistulae+with+acellular+dermal+matrices.">Repair of oronasal fistulae with acellular dermal matrices.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 118 (6), 1431-1440 (2006).</li><li>Rohleder, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+oronasal+fistulae+by+interposition+of+multilayered+amniotic+membrane+allograft.">Repair of oronasal fistulae by interposition of multilayered amniotic membrane allograft.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 132 (1), 172-181 (2013).</li><li>Kesting, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+oronasal+fistulas+with+human+amniotic+membrane+in+minipigs.">Repair of oronasal fistulas with human amniotic membrane in minipigs.</a> British Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 48 (2), 131-135 (2010).</li><li>Ayvazyan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-gelatin+scaffold+impregnated+with+bFGF+accelerates+palatal+wound+healing+of+palatal+mucosa+in+dogs.">Collagen-gelatin scaffold impregnated with bFGF accelerates palatal wound healing of palatal mucosa in dogs.</a> Journal of Surgical Research. 171 (2), e247-e257 (2011).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+responses+in+mouse+models+greatly+mimic+human+inflammatory+diseases.">Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).</li><li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+function+of+human+innate+immune+cells+in+a+humanized+mouse+model.">Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model.</a> Nature Biotechnology. 32 (4), 364-372 (2014).</li><li>Shan, L., Flavell, R. A., Herndler-Brandstetter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+humanized+mouse+models+for+studying+human+NK+cells+in+health+and+disease.">Development of humanized mouse models for studying human NK cells in health and disease.</a> Methods in Molecular Biology. 2463, 53-66 (2022).</li><li>Keswani, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+salivary+vascular+endothelial+growth+factor+(VEGF)+in+palatal+mucosal+wound+healing.">Role of salivary vascular endothelial growth factor (VEGF) in palatal mucosal wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration. 21 (4), 554-562 (2013).</li><li>Amanso, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+delivery+of+FTY720+induces+neutrophil+activation+through+chemokine+signaling+in+an+oronasal+fistula+model.">Local delivery of FTY720 induces neutrophil activation through chemokine signaling in an oronasal fistula model.</a> Regenerative Engineering and Translational Medicine. 7 (2), 160-174 (2021).</li><li>Antiorio, A. T. F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+meloxicam+to+improve+the+welfare+of+mice+in+research:+a+systematic+review+(2000+-+2020).">Administration of meloxicam to improve the welfare of mice in research: a systematic review (2000 - 2020).</a> Veterinary Research Communications. 46 (1), 1-8 (2022).</li></ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

I ricercatori hanno esplorato vari materiali, farmaci e nuove tecniche per il trattamento dell'ONF 10,11,12,13,14,15,16,17. Con i progressi nelle procedure chirurgiche, l'incidenza e la recidiva di ONF sono state ridotte. Tuttavia, a causa delle caratterist...

La fistola oronasale (ONF), un'apertura anomala tra la cavità orale e quella nasale, si manifesta clinicamente come un difetto in un'area strutturale dal processo alveolare all'ugola, che si verifica comunemente come complicanza dopo la riparazione della palatoschisi1. I pazienti con ONF soffrono di reflusso alimentare, disturbi articolari e compromissione della funzione velofaringea, con un impatto significativo sulla qualità della vita 2,3,4. Il tasso di ONF post-operatoria varia dal 2,4% al 55% a causa di fattori quali la larghezza della schisi, il tipo di Veau e il metodo chirurgico 5,6,7,8. Inoltre, il tasso di recidiva dopo la riparazione dell'ONF è elevato, compreso tra lo 0% e il 43%9.
Diversi nuovi trattamenti si sono recentemente dimostrati promettenti nel campo dell'ONF, tra cui diversi materiali, farmaci e nuove tecniche 10,11,12,13,14,15,16,17. Una valutazione accurata degli effetti terapeutici è essenziale in quanto fornisce la base per la selezione e l'ulteriore sviluppo dei trattamenti per l'ONF. Tuttavia, ottenere una valutazione valida a breve termine per gli effetti terapeutici diversi dalla chirurgia è difficile, poiché le caratteristiche degli ONF variano tra i diversi pazienti. Pertanto, è necessario stabilire un modello di malattia ONF per verificare l'efficacia di questi metodi di trattamento.
Per diversi decenni, i ricercatori hanno generato il modello della fistola oronasale (ONF) in varie specie animali, tra cui ratti18,19, suinetti20,21, minipig22 e cani23, poiché queste specie possiedono un palato duro sostanziale adatto alla manipolazione chirurgica. Tuttavia, i topi hanno una sequenza genetica e un intero genoma simili a quelli degli esseri umani, il che li rende un modello importante per la ricerca e lo sviluppo di nuovi farmaci24,25,26. Inoltre, i topi offrono poche variazioni da lotto a lotto, il che li rende una scelta favorevole per stabilire il modello ONF12,13,27.
Tuttavia, i passaggi dettagliati per la creazione di ONF non sono stati descritti e la stabilità delle dimensioni ONF non è stata presa in considerazione. Inoltre, la verifica della formazione di ONF si basava esclusivamente sull'osservazione28, senza garantire la comunicazione diretta tra la cavità orale e quella nasale. Non è stato dimostrato con altri mezzi, come la perdita di peso corporeo del topo a causa delle difficoltà alimentari causate dall'ONF. Inoltre, non è stata presa in considerazione la normale variazione delle dimensioni della ferita, che è fondamentale per gli studi su farmaci o materiali che promuovono o inibiscono la guarigione della ferita. Pertanto, vi è una forte necessità di stabilire un modello ONF stabile e convalidato.
L'obiettivo di questo studio è stato quello di sviluppare un modello pratico di ONF che affronti le questioni di cui sopra, con la speranza che questo protocollo serva come base per la ricerca futura sui meccanismi di guarigione delle ferite palatali e nuovi trattamenti per l'ONF.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Germinator</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences&#160;</td>
			<td>66118-20</td>
			<td>Heating and disinfection equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex gloves</td>
			<td>Allmed</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lights</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>A1813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>MedChemExpress</td>
			<td>HY-B0261</td>
			<td>crushed; 5 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical instruments (scissors and tweezers)</td>
			<td>Jiangsu Tonghui Medical Devices Co.</td>
			<td>M-Y-0087</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmologic cautery</td>
			<td>Suqian Wenchong Medical Equipment Co.</td>
			<td>1.00234E+13</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile cotton,</td>
			<td>Yancheng Begu Technology Co.</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile metal foil</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile sheets</td>
			<td>3M</td>
			<td>XH003801129</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drapes</td>
			<td>Yancheng Begu Technology Co.</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes</td>
			<td>Yancheng Begu Technology Co.</td>
			<td>S-015301</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>Bkmamlab</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature maintenance device</td>
			<td>Harvard Apparatus&#160;</td>
			<td>LE-13-2104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zoletil50</td>
			<td>Virbac</td>
			<td></td>
			<td>80 mg/kg</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of an oronasal fistula mice model

Questo studio presenta un metodo che utilizza il cauterizzazione oftalmologica riscaldata per sviluppare un modello praticabile per lo studio delle fistole oronasali. I topi C57BL/6 sono stati utilizzati per stabilire il modello di fistola oronasale (ONF). Per creare l'ONF, i topi sono stati anestetizzati e immobilizzati e i loro palati duri sono stati esposti. Durante la procedura chirurgica, è stata indotta una lesione della mucosa a tutto spessore di 2,0 x 1,5 mm nella linea mediana del palato duro utilizzando la cauterizzazione oftalmologica. Era fondamentale controllare le dimensioni dell'ONF e ridurre al minimo il sanguinamento per garantire il successo dell'esperimento. La verifica dell'efficacia del modello ONF è stata condotta il 7° giorno dopo l'intervento, comprendendo sia valutazioni anatomiche che funzionali. La presenza del setto nasale all'interno della cavità orale e il deflusso di acqua sterile dalle narici al momento dell'iniezione nella cavità orale hanno confermato il successo del modello ONF. Il modello ha dimostrato una fistola oronasale pratica e di successo, caratterizzata da un basso tasso di mortalità, variazioni di peso significative e variazioni minime nelle dimensioni dell'ONF. Studi futuri potrebbero prendere in considerazione l'adozione di questa metodologia per chiarire i meccanismi di guarigione delle ferite del palato ed esplorare nuovi trattamenti per le fistole oronasali.

Oronasal fistula (ONF), an abnormal opening between the oral and nasal cavities, clinically manifests as a defect in a structural area from the alveolar process to the uvula, which commonly occurs as a complication following cleft palate repair1. Patients with ONF experience food reflux, articulation disorders, and impaired velopharyngeal function, significantly impacting their quality of life2,3,4. The rate of post-operative ONF ranges from 2.4% to 55% due to factors such as cleft width, Veau type, and surgical method5,6,7,8. Additionally, the recurrence rate after ONF repair is high, ranging from 0% to 43%9.
Several novel treatments have recently shown promise in the field of ONF, including different materials, drugs, and novel techniques10,11,12,13,14,15,16,17. Accurate evaluation of therapeutic effects is essential as it provides the basis for selecting and further developing ONF treatments. However, obtaining a valid assessment in the short term for therapeutic effects other than surgery is challenging, as the characteristics of ONFs vary among different patients. Therefore, establishing an ONF disease model is necessary to verify the effectiveness of these treatment methods.
For several decades, researchers have generated the oronasal fistula (ONF) model in various animal species, including rats18,19, piglets20,21, minipigs22, and dogs23, as these species possess a substantial hard palate suitable for surgical manipulation. However, mice have a genetic sequence and whole genome similar to that of humans, making them an important model for researching and developing new drugs24,25,26. Furthermore, mice offer little variation from batch to batch, making them a favorable choice for establishing the ONF model12,13,27.
However, the detailed steps for creating ONF were not described, and the stability of the ONF size was not taken into consideration. Additionally, the verification of ONF formation relied solely on observation28, without ensuring direct communication between the oral and nasal cavities. It was not demonstrated through other means, such as the mouse&#39;s loss of body weight due to difficulties in eating caused by the ONF. Furthermore, normal variation in wound size was not considered, which is crucial for studies on drugs or materials that promote or inhibit wound healing. Therefore, there is a strong need to establish a stable and validated ONF model.
The objective of this study was to develop a practical ONF model that addresses the aforementioned issues, with the hope that this protocol will serve as the foundation for future research on the mechanisms of palatal wound healing and novel treatments for ONF.

Autore in primo piano: Indagine sulla guarigione delle ferite nei modelli murini di fistole oronasali 

Creazione di un modello murino di fistola oronasale

Per valutare la fattibilità e la stabilità di questo metodo sperimentale, la stessa procedura è stata eseguita su dieci topi e sono state fatte osservazioni riguardanti la mortalità, i cambiamenti nelle dimensioni della ferita, il peso corporeo e l'analisi istologica. I topi sono stati soppressi il giorno 7.
La procedura ha mostrato un basso tasso di mortalità. Il cauterizzazione oftalmologica e il germinatore, raffigurati nella Figura 1A-C<s...

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Questo articolo delinea una procedura passo passo per stabilire un modello di topi con una fistola oronasale. La fistola oronasale è stata creata impiegando un cauterizzatore oftalmologico riscaldato per danneggiare la porzione mediana del palato duro, con conseguente formazione di un'apertura tra le cavità orali e nasali.

This study presents a method utilizing heated ophthalmologic cautery to develop a viable model for investigating oronasal fistulas. C57BL/6 mice were used ...

La nostra ricerca si è concentrata su come stabilire il modello murino stabile e standardizzato della fistola oronasale. Questo protocollo ha anche dimostrato i cambiamenti del peso corporeo, i cambiamenti delle dimensioni della ferita e le caratteristiche istologiche della formazione della fistola nasale orale. Le attuali sfide sperimentali per la creazione di modelli di fistola oronasale sono la mortalità dei topi per soffocamento o perdita di sangue, nonché la standardizzazione delle dimensioni della ferita.Il nostro protocollo riduce significativamente la quantità di sanguinamento nei topi durante l'intervento chirurgico rispetto all'uso tradizionale di un punzone da biopsia. In questo modo si riduce il rischio di soffocamento a causa di gravi emorragie. Inoltre, il nostro metodo sperimentale è anche più semplice e meno sensibile dal punto di vista tecnico.La nostra ricerca futura mira a concentrarsi sull'osservazione della risposta infiammatoria durante la formazione della fistola oronasale. Abbiamo anche in programma di sviluppare nuove strategie per ridurre la risposta infiammatoria, promuovendo al contempo la guarigione delle ferite palatali per ridurre l'incidenza della fistola oronasale.

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Research

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Medicine

Establishment of an Oronasal Fistula Mice Model

829 Views.  Sichuan University. La nostra ricerca si è concentrata su come stabilire il modello murino stabile e standardizzato della fistola oronasale. Questo protocollo ha anche dimostrato i cambiamenti del peso corporeo, i cambiamenti delle dimensioni della ferita e le caratteristiche istologiche della formazione della fistola nasale orale. Le attuali sfide sperimentali per la creazione di modelli di fistola oronasale sono la mortalità dei topi per soffocamento o perdita di sangue, nonché la standardizzazione delle di...

Video: Autore in primo piano: Indagine sulla guarigione delle ferite nei modelli murini di fistole oronasali 

This study presents a method utilizing heated ophthalmologic cautery to develop a viable model for investigating oronasal fistulas. C57BL/6 mice were used to establish the oronasal fistula (ONF) model. To create the ONF, the mice were anesthetized, immobilized, and their hard palates were exposed. During the surgical procedure, a 2.0 x 1.5 mm full-thickness mucosal injury was induced in the midline of the hard palate using ophthalmologic cautery. It was crucial to control the size of the ONF and minimize bleeding in order to ensure the success of the experiment. Verification of the ONF model's effectiveness was conducted on the 7th-day post-operation, encompassing both anatomical and functional assessments. The presence of the nasal septum within the oral cavity and the outflow of sterile water from the nostrils upon injection into the oral cavity confirmed the successful establishment of the ONF model. The model demonstrated a practical and successful oronasal fistula, characterized by a low mortality rate, significant weight changes, and minimal variation in ONF size. Future studies may consider adopting this methodology to elucidate the mechanisms of palate wound healing and explore novel treatments for oronasal fistulas.

This article outlines a step-by-step procedure for establishing a mice model with an oronasal fistula. The oronasal fistula was created by employing heated ophthalmologic cautery to damage the midline portion of the hard palate, resulting in the formation of an opening between the oral and nasal cavities.