La recidiva del tumore è un problema molto importante della resezione del parto. In questo studio, stiamo cercando di capire di più sulla crescita tumorale in un ambiente rigenerativo. È stato dimostrato che gli organoidi tumorali ricapitolano istologicamente e geneticamente il tumore del paziente, sebbene i modelli in vivo siano scarsi e privi di stabilità.
Abbiamo innestato con successo l'organoide derivato dal paziente nel fegato del topo. Lo abbiamo dimostrato per due casi di esempio. Le colorazioni immunoistochimiche istologiche mostrano che gli organoidi e lo xenotrapianto assomigliano al tumore originale del paziente.
Lo sviluppo di organoidi dal tumore originale assomiglia a un modello più accurato del tumore del paziente rispetto ad altre possibilità come le colture cellulari 2D. L'incorporazione di questo modello nel complesso ambiente della rigenerazione epatica aiuterà a comprendere meglio le interazioni esistenti tra le cellule tumorali e l'ambiente rigenerativo. Speriamo di acquisire conoscenze nel nostro campo per quanto riguarda la comprensione della recidiva dell'HCC della resezione epatica.
Pertanto, con questo modello, vogliamo creare le basi per futuri progetti di ricerca. Per iniziare, usa un bisturi e una pinza per tagliare il tessuto tumorale del fegato raccolto in piccoli frammenti di uno o due millimetri quadrati. Trasferire i pezzi di tessuto in una provetta da 15 millilitri contenente cinque millilitri di tampone di dissociazione.
Posizionare il tubo su un dispositivo di rotazione a 37 gradi Celsius. Dopo l'incubazione, passare la miscela di cellule su un colino da 100 micrometri posto sopra una provetta da 50 millilitri. Utilizzare uno stantuffo di una siringa da cinque millilitri per frantumare i frammenti di tessuto attraverso il filtro.
Ora aggiungi cinque millilitri di DMEM avanzato integrato sul filtro per lavarlo. Trasferire il filtrato in un tubo conico da 15 millilitri. Dopo aver aspirato il surnatante, risospendere il pellet in cinque millilitri di tampone di lisi dei globuli rossi.
Centrifugare nuovamente la sospensione per cinque minuti a 300g. Quindi risospendere il pellet in un millilitro di PBS prima di contare. Prima della placcatura delle celle, rimuovere il surnatante dalla sospensione della cella della centrifuga.
Risospendere con circa un millilitro di matrice della membrana basale al tubo e posizionare sul ghiaccio. Pipettare 20 microlitri di sospensione cellulare nei pozzetti di una piastra a sei pozzetti di preriscaldamento per creare gocce. Dopo aver atteso due o tre minuti, posizionare la piastra in posizione capovolta in una cappa di flusso per cinque minuti.
Quindi trasferire la piastra in un'incubatrice per solidificarla. Infine, aggiungere due millilitri di terreno di coltura di organoidi in ciascun pozzetto. La linea di organoidi derivata dal paziente presentava le caratteristiche morfologiche del tumore originale del paziente.
Per iniziare, posiziona un topo anestetizzato in posizione supina con gli arti fissati con nastro adesivo. Utilizzare pinze e forbici microchirurgiche per praticare un'incisione sul sito chirurgico impoverito lungo l'alba lineare dal basso addome alla cartilagine xifoidea. Inserire i divaricatori nell'incisione, regolando la direzione di trazione per ottenere un'esposizione ottimale della parte superiore dell'addome.
Posiziona un tovagliolo pulito bagnato con soluzione salina proprio accanto al sito di incisione. Ora, esteriorizza l'intestino tenue e il cieco sul tovagliolo bagnato. Esporre il lobo superiore destro fino a quando non è possibile un'iniezione.
Aspirare la miscela di organoidi in una siringa di Hamilton con risciacquo. Iniettare costantemente la sospensione nel mouse fino al segno senza muovere l'ago. Applicare pressione con un batuffolo di cotone sul sito di iniezione.
Quindi controllare l'addome per eventuali rotture o riflusso del lobo. Sciacquare l'addome con 0,5 millilitri di soluzione fisiologica sterile. Posizionare una sutura in esecuzione con una sutura riassorbibile per chiudere l'addome.
Il tumore sviluppato nel topo assomigliava sia agli organoidi derivati dal paziente che al tumore originale del paziente. Per iniziare la resezione epatica minore, eseguire la laparotomia su un topo anestetizzato in posizione supina. Con dei batuffoli di cotone umidi, spingere il lobo mediale cranialmente per creare più spazio nel campo chirurgico.
Capovolgere cranialmente il lobo epatico laterale sinistro per esporre il lobo caudato e il legamento. Tagliare completamente il legamento. Quindi inserire una legatura sotto il lobo epatico laterale.
Ora capovolgi il lobo epatico laterale sinistro caudalmente e guida l'estremità libera sinistra della legatura attorno alla punta sinistra del lobo epatico laterale sinistro. Guida l'estremità libera destra attorno all'altra punta. Utilizzare un batuffolo di cotone per applicare la trazione sul lobo, assicurandosi che la legatura sia posizionata centralmente.
Quindi fare un doppio mezzo nodo. Fissa questo nodo con un altro secondo mezzo nodo legato nell'altra direzione senza stringerlo completamente. Quando la legatura è posizionata correttamente, tenere l'estremità libera del cranio della legatura con una pinza a punta smussata e tirare l'estremità caudale con un altro paio di pinze.
Fissare il nodo con un secondo nodo legato nella direzione opposta. Tagliare vicino alla legatura senza tagliarla per resecare il fegato. Dopo la resezione minore del lobo epatico laterale sinistro, sezionare il legamento falciforme.
Capovolgere il lobo cranialmente, quindi inserire una legatura sotto di esso e capovolgerlo caudalmente. Ora avvolgi gli ens liberi della legatura attorno al labiale. Una volta posizionata correttamente la legatura, fare lentamente un doppio mezzo nodo.
Stringere completamente un secondo mezzo nodo nella direzione opposta, quindi aggiungere un terzo mezzo nodo nella direzione opposta. Resecare il lobo, quindi sciacquare l'addome con una soluzione salina sterile. Rimetti gli intestini nella loro posizione anatomica.
Per chiudere l'addome, usa una pinza per afferrare la pelle e il peritoneo. Posizionare un punto con una sutura riassorbibile sull'estremità superiore della linea di incisione. Eseguire un secondo punto sull'altro lato dell'incisione uscendo dal lato della pelle.
Legare bene il nodo lasciando l'estremità libera senza l'ago corto. Lasciare l'estremità dell'ago del punto lunga. Termina la sutura con un nodo all'estremità inferiore dell'incisione.
Pulisci l'addome dal sangue residuo. Il contributo relativo dei lobi del fegato è paragonabile tra i diversi topi dello stesso ceppo. Il peso medio del lobo inferiore destro è aumentato allo 0,82% del peso corporeo totale dopo una resezione minore.
La resezione maggiore ha comportato un aumento dello 0,99% del peso corporeo totale. La resezione maggiore del lobo superiore destro ha comportato un pronunciato aumento del suo peso rispetto al lobo inferiore destro.
