dopamine-release-at-individual-presynaptic-terminals-visualized-with

Dopamine Release at Individual Presynaptic Terminals Visualized with FFNs

The nervous system transmits signals between neurons via neurotransmitter release during synaptic vesicle fusion. To observe neurotransmitter uptake and ...

Columbia University

Columbia College

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Alterations in the cytosolic pool directly affect neurotransmitter synthesis and release and are suggested to be key factors in various neurodegenerative disorders. Although this cytosolic pool is the most metabolically active, it is miniscule compared with the amount of vesicular transmitter and has never been quantified separately. Here, we introduce intracellular patch electrochemistry (IPE), a technique that for the first time provides direct measurements of cytosolic oxidizable molecules in single mammalian cells. In amperometric mode, IPE detects total catechols, whereas in cyclic voltammetric mode, it preferentially measures catecholamines. In cultured chromaffin cells, the total cytosolic catechol concentration was 50-500 microm, of which approximately 10% were catecholamines. Reserpine, a vesicular monoamine transporter inhibitor, had no effect on the catecholamine pool but increased total catechols by fourfold to fivefold. Combined with pargyline, a monoamine oxidase inhibitor, reserpine increased catecholamine levels in the cytosol by approximately sixfold. Amphetamine induced a transient approximately fivefold accumulation of cytosolic catecholamines and a slow increase of total catechols. In cells incubated with 3,4-dihydroxy-L-phenylalanine (L-DOPA), catecholamines increased by approximately 2.5-fold and total catechols increased by approximately fourfold. Cytosolic catecholamines returned to control levels <or=10 min after L-DOPA withdrawal, whereas total catechols remained approximately twofold elevated even after a 1.5 hr incubation in L-DOPA-free media. Our data indicate that cytosolic catecholamines are strictly maintained at a defined level, and drug-induced increases in their concentrations lead to the accumulation of other catecholamine derivatives, such as DOPAC and 3,4-dihydroxyphenylethyleneglycol. These derivatives reside in the cytosol for hours after treatment and may be an underlying cause of drug-related cytotoxicity.

Intracellular patch electrochemistry: regulation of cytosolic catecholamines in chromaffin cells.

Alt&eacute;rations dans le pool cytosolique directement influer sur la lib&eacute;ration et la synth&egrave;se des neurotransmetteurs et on sugg&egrave;re des facteurs cl&eacute;s dans divers troubles neurod&eacute;g&eacute;n&eacute;ratifs. Bien que ce pool cytosolique est le plus m&eacute;taboliquement active, il est minuscule par rapport au montant d&#39;&eacute;metteur v&eacute;siculaire et n&#39;a jamais &eacute;t&eacute; chiffr&eacute; s&eacute;par&eacute;ment. Ici, nous introduisons &eacute;lectrochimie patch intracellulaire (IPE), une technique qui, pour la premi&egrave;re fois, fournit des mesures directes de cytosoliques mol&eacute;cules oxydables dans les cellules mammif&egrave;res. En mode amp&eacute;rom&eacute;trique, Rei d&eacute;tecte les cat&eacute;chols totales, alors qu&#39;en mode de voltamp&eacute;rom&eacute;trie cyclique, il mesure pr&eacute;f&eacute;rentiellement des cat&eacute;cholamines. Dans les cellules chromaffines cultiv&eacute;es, la concentration de cat&eacute;chol cytosolique totale &eacute;tait microm 50-500, dont environ 10 % &eacute;taient des cat&eacute;cholamines. La r&eacute;serpine, un inhibiteur de la monoamine v&eacute;siculaire transporteur, n&#39;avait aucun effet sur le pool de cat&eacute;cholamines mais a quadrupl&eacute; les cat&eacute;chols totales de jusqu&#39;&agrave; cinq fois. Combin&eacute; avec de la pargyline, un inhibiteur de la monoamine-oxydase, la r&eacute;serpine a augment&eacute; les taux de cat&eacute;cholamines dans le cytosol par environ six fois. Amph&eacute;tamine induit un transitoire environ cinq fois l&#39;accumulation des cat&eacute;cholamines cytosoliques et une augmentation lente des cat&eacute;chols totales. Dans les cellules incub&eacute;es avec 3, 4-dihydroxy-L-ph&eacute;nylalanine (L-DOPA), cat&eacute;cholamines augment&eacute; d&#39;environ 2,5 fois et cat&eacute;chols totales major&eacute; d&#39;environ quatre fois. Cat&eacute;cholamines cytosoliques retourna aux taux t&eacute;moins &lt; ou = 10 min apr&egrave;s le retrait de la L-DOPA, alors que totales cat&eacute;chols demeurent encore &eacute;lev&eacute; d&#39;environ deux apr&egrave;s 1,5 h d&#39;incubation dans des milieux sans L-L-dopa. Nos donn&eacute;es indiquent que les cat&eacute;cholamines cytosoliques sont strictement maintenues &agrave; un niveau d&eacute;fini, et augmentation de leurs concentrations m&eacute;dicamenteuse conduire &agrave; l&#39;accumulation d&#39;autres d&eacute;riv&eacute;s de cat&eacute;cholamines, tels que DOPAC et 3,4-dihydroxyphenylethyleneglycol. Ces d&eacute;riv&eacute;s se trouvent dans le cytosol pendant des heures apr&egrave;s le traitement et peuvent &ecirc;tre une cause sous-jacente de la cytotoxicit&eacute; li&eacute;e &agrave; la drogue.

&Eacute;lectrochimie patch intracellulaire : r&egrave;glement des cat&eacute;cholamines cytosoliques dans les cellules chromaffines.

Intrazellul&#xE4;re Patch Elektrochemie: Regulation der cytosolischen Katecholamine in chromaffinen Zellen.

Alterazioni nel pool citosolico direttamente influenzano il rilascio e la sintesi di neurotrasmettitori e sono suggeriti per essere fattori chiave in varie malattie neurodegenerative. Sebbene questo pool citosolico &egrave; metabolicamente pi&ugrave; attivo, &egrave; minuscola rispetto alla quantit&agrave; di trasmettitore vescicolare e mai &egrave; stato quantificato separatamente. Qui, presentiamo elettrochimica patch intracellulare (IPE), una tecnica che per la prima volta fornisce misurazioni dirette di molecole ossidabili citosolici in singole cellule di mammiferi. In modalit&agrave; amperometrico, IPE rileva polifenoli totali, mentre in modalit&agrave; ciclica voltammetrica, preferenzialmente misura catecolamine. Nelle cellule cromaffini colte, la concentrazione totale citosolico catecolo era microm 50-500, di cui circa il 10% erano catecolamine. Reserpina, un inibitore del trasportatore vescicolare di monoamine, ha avuto alcun effetto sulla piscina catecolamina ma quadruplicata catecoli totale al quintuplo. Combinato con pargyline, un inibitore della monoamino ossidasi, reserpina aumentati livelli di catecolamine nel citosol di approssimativamente sixfold. Amfetamina indotta da un transitorio circa quintuplo accumulo delle catecolamine citosolici e un lento aumento dei polifenoli totali. In cellule incubate con 3,4-diidrossi-L-fenilalanina (l-dopa), catecolamine &egrave; aumentato da circa 2.5-fold e polifenoli totali quadruplicata da approssimativamente. Catecolamine citosolici torn&ograve; a livelli di controllo &lt; o = 10 min dopo il ritiro di l-dopa, considerando che i polifenoli totali &egrave; rimasto approssimativamente duplice elevati anche dopo un&#39;incubazione di 1.5 hr in media L-DOPA-gratis. I nostri dati indicano che catecolamine citosolici sono rigorosamente mantenuti ad un livello definito, e farmaco-indotta aumenta nelle loro concentrazioni portano all&#39;accumulo di altri derivati delle catecolamine, quali DOPAC e 3,4-dihydroxyphenylethyleneglycol. Questi derivati risiedono nel citosol per ore dopo il trattamento e possono essere una causa di fondo di citotossicit&agrave; droga-correlati.

Elettrochimica patch intracellulare: regolamento delle catecolamine citosolici nelle cellule cromaffini.

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&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C;&#x7D04; 10% &#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;50-500 microm &#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30EC;&#x30BB;&#x30EB;&#x30D4;&#x30F3;, &#x5C0F;&#x80DE;&#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x963B;&#x5BB3;&#x85AC;&#x3001;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3; &#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x4E0A;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x5408;&#x8A08;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3092; 4 &#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B; 5 &#x500D;&#x3002;&#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x963B;&#x5BB3;&#x85AC;&#x3001;pargyline &#x3068;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x30EC;&#x30BB;&#x30EB;&#x30D4;&#x30F3; &#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3067;&#x7D04; 6 &#x500D;&#x5897;&#x52A0;&#x3002;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x904E;&#x6E21;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x7D04; 5 &#x500D;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3068;&#x9045;&#x3044;&#x5897;&#x52A0;&#x7DCF;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3002;3, 4-&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;-&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3; (L-DOPA) &#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D04; 2.5 &#x500D;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x5408;&#x8A08;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x985E;&#x304C;&#x7D04; 4 &#x500D;&#x5897;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3; &#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x8FD4;&#x3055;&#x308C;&#x308B; &lt; &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5408;&#x8A08;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB; L DOPA &#x81EA;&#x7531;&#x5A92;&#x4F53;&#x306E; 1.5 &#x6642;&#x9593;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5F8C;&#x7D04; 2 &#x500D;&#x3082;&#x9AD8;&#x67B6;&#x306B;&#x6B8B;&#x3063;&#x305F;&#x4E00;&#x65B9; L-DOPA &#x64A4;&#x9000;&#x5F8C; = 10 &#x5206;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; &#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x304C;&#x53B3;&#x5BC6;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7DAD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x85AC;&#x5264;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0; DOPAC&#x3001;3, 4-dihydroxyphenylethyleneglycol &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5185;&#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x85AC;&#x5264;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;: &#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x4E2D;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3002;

Cytosolic &#xD480;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC9C1;&#xC811; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; &#xBD84;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD558; &#xACE0; &#xAD8C;&#xC7A5; &#xB418;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC694;&#xC778;. &#xC774; cytosolic &#xD480;&#xC740; &#xAC00;&#xC7A5; metabolically &#xD65C;&#xC131;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30;&#xC758; &#xAE08;&#xC561;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC870;&#xAE08;&#xB9CC; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; &#xACC4;&#xB7C9; &#xC801;. &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD328;&#xCE58; &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559; (IPE), &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; cytosolic oxidizable &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Amperometric &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xB3C4; &#xC21C;&#xD658; voltammetric &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD574;&#xC8FC;&#xC5B4; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xCD1D; catechols&#xB97C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACBD;&#xC791;&#xB41C; &#xD55C; &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC;, &#xCD1D; cytosolic catechol &#xB18D;&#xB3C4; 50-500 microm, &#xC57D; 10% &#xD574;&#xC8FC;&#xC5B4; &#xD588;&#xB2E4; &#xD588;&#xB2E4;. Reserpine, &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xBAA8;&#xB178; &#xC804;&#xC1A1; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xCE74; &#xD14C; &#xCF5C; &#xC544;&#xBBFC; &#xD480;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD1D; catechols &#xC0AC;&#xC911;&#xC5D0; &#xC624;&#xBD80;. Pargyline, &#xBAA8;&#xB178; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; reserpine &#xC57D; &#xAE09;&#xBD80;&#xC0C1; &#xD558; &#xC5EC; cytosol&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE74; &#xD14C; &#xCF5C; &#xC544;&#xBBFC; &#xC218;&#xC900; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC554;&#xD398;&#xD0C0;&#xBBFC; cytosolic &#xD574;&#xC8FC;&#xC5B4; &#xC57D; &#xC624;&#xBD80; &#xCD95;&#xC801;&#xACFC; &#xCD1D; catechols&#xC758; &#xB290;&#xB9B0; &#xC99D;&#xAC00; &#xACFC;&#xB3C4; &#xC720;&#xB3C4;. 3, 4 Dihydroxy L-&#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; (L-DOPA)&#xC640; &#xC778; &#xD050;&#xBCA0;&#xC774; &#xD305; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0; &#xD574;&#xC8FC;&#xC5B4; &#xC57D; 2.5-fold&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xCD1D; catechols &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xC5EC; &#xC57D; &#xC0AC;&#xC911;. Cytosolic &#xD574;&#xC8FC;&#xC5B4; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3CC;&#xC544; &lt; &#xB610;&#xB294; &#xCD1D; catechols L DOPA &#xBB34;&#xB8CC; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; 1.5 &#xC2DC;&#xAC04; &#xBD80; &#xD654; &#xD6C4; &#xC57D; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC2B9;&#xB41C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; L-DOPA &#xCCA0;&#xC218; &#xD6C4; 10 &#xBD84; =. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; cytosolic &#xD574;&#xC8FC;&#xC5B4; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC9C0; &#xB418;&#xB294; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC720;&#xBC1C; &#xC99D;&#xAC00; DOPAC&#xC640; 3, 4 dihydroxyphenylethyleneglycol &#xAC19;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xCE74; &#xD14C; &#xCF5C; &#xC544;&#xBBFC; &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4;&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488;&#xC5D0;&#xB294; cytosol &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131; &#xC57D;&#xBB3C; &#xAD00;&#xB828;&#xC758; &#xADFC;&#xBCF8; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD328;&#xCE58; &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559;: &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC; cytosolic &#xD574;&#xC8FC;&#xC5B4;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;.

Alteraciones en la piscina citos&oacute;lica directamente afectan la liberaci&oacute;n y la s&iacute;ntesis del neurotransmisor y se sugieren que factores clave en varias enfermedades neurodegenerativas. Aunque esta agrupaci&oacute;n citos&oacute;lica es metab&oacute;licamente m&aacute;s activa, es min&uacute;sculo en comparaci&oacute;n con la cantidad de transmisor vesicular y nunca se ha cuantificado por separado. Aqu&iacute;, presentamos electroqu&iacute;mica parche intracelular (IPE), una t&eacute;cnica que por primera vez proporciona mediciones directas de mol&eacute;culas oxidables citos&oacute;licas en c&eacute;lulas mam&iacute;feras. En el modo amperom&eacute;trico, IPE detecta catecoles totales, mientras que en modo voltamperom&eacute;trica c&iacute;clico, preferentemente mide las catecolaminas. En cultivos de c&eacute;lulas cromafines, la concentraci&oacute;n total de catecol citos&oacute;lica fue microm de 50-500, de los cuales aproximadamente el 10% eran las catecolaminas. Reserpina, un inhibidor de monoamina vesicular transportador, no tuvo ning&uacute;n efecto en la piscina de catecolaminas pero cuadruplicado catecoles totales por hasta cinco veces. Combinado con pargilina, un inhibidor de la monoaminooxidasa, reserpina aumenta los niveles de catecolaminas en el citosol por aproximadamente sixfold. Anfetamina inducida por un transitorio aproximadamente qu&iacute;ntuplo acumulaci&oacute;n de catecolaminas citos&oacute;licas y un lento aumento de catecoles totales. En las c&eacute;lulas incubadas con 3, 4-dihidroxi-L-fenilalanina (l-dopa), las catecolaminas se incrementaron aproximadamente 2.5-fold y catecoles totales aumentaron en aproximadamente cuatro veces. Catecolaminas citos&oacute;licas volvieron a controlar los niveles &lt; o = 10 min despu&eacute;s del retiro de la l-dopa, mientras que total catecoles segu&iacute;a siendo aproximadamente doble elevada incluso despu&eacute;s de una incubaci&oacute;n de 1.5 horas en medios de comunicaci&oacute;n libres de L-DOPA. Nuestros datos indican que las catecolaminas citos&oacute;licas estrictamente se mantienen en un nivel definido, y droga-inducido incrementos en sus concentraciones suponen la acumulaci&oacute;n de otros derivados de la catecolamina, como DOPAC y 3,4-dihydroxyphenylethyleneglycol. Estos derivados residen en el citosol durante horas despu&eacute;s del tratamiento y pueden ser una causa subyacente de la citotoxicidad relacionados con las drogas.

Electroqu&iacute;mica de parche intracelular: Reglamento de catecolaminas citos&oacute;licas en c&eacute;lulas cromafines.

&#x7406;&#x89E3;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x95EE;&#x9898;&#x662F;&#x53D1;&#x5C04;&#x673A;&#x7684;&#x662F;&#x5426;&#x878D;&#x5408;&#x5B54;&#x9699;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7BA1;&#x5236;&#x671F;&#x95F4;&#x80DE;&#x91CA;&#x653E;&#x91CF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E86;&#x4ECE;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x5927;&#x9F20;&#x8111;&#x8179;&#x4FA7;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4F7F;&#x7528;&#x78B3;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5B89;&#x57F9;&#x7684;&#x5C0F;&#x7A81;&#x89E6;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x7684;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x5C0F;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x878D;&#x5408;&#x6BDB;&#x5B54;&#x95EA;&#x70C1;&#x4E00;&#x6B21;&#x6216;&#x591A;&#x6B21;&#x5FEB;&#x901F;&#x8FDE;&#x7EED;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x95EA;&#x70C1;&#x7EA6; 25-30%&#x7684;&#x6C34;&#x75B1;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x4E0E;&#x591A;&#x4E2A;&#x6447;&#x66F3;&#x7684;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x53D1;&#x751F;&#x7387;&#x4E5F;&#x662F;&#x76F8;&#x4E92;&#x53D7;&#x4F5B;&#x6CE2;&#x916F;&#x548C; staurosporine&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8C03;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x7A81;&#x89E6;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x53D1;&#x8868;&#x63A7;&#x5236;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x878D;&#x5408;&#x5B54;&#x9699;&#x95EA;&#x70C1;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x91D1;&#x989D;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6A21;&#x5F0F;&#x662F;&#x80DE;&#x7684;&#x5373;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8FC5;&#x901F;&#x91CD;&#x7528;&#x6C34;&#x6CE1;&#x800C;&#x7ECF;&#x5386;&#x7684;&#x56DE;&#x6536;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x76F8;&#x5BF9;&#x7F13;&#x6162;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x91CA;&#x653E;&#x53D1;&#x5C04;&#x5668;&#x901A;&#x8FC7;&#x95EA;&#x70C1;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x5B54;&#x9699;&#x3002;

A key question in understanding mechanisms of neurotransmitter release is whether the fusion pore of a synaptic vesicle regulates the amount of transmitter released during exocytosis. We measured dopamine release from small synaptic vesicles of rat cultured ventral midbrain neurons using carbon fiber amperometry. Our data indicate that small synaptic vesicle fusion pores flicker either once or multiple times in rapid succession, with each flicker releasing approximately 25-30% of vesicular dopamine. The incidence of events with multiple flickers was reciprocally regulated by phorbol esters and staurosporine. Thus, dopamine neurons regulate the amount of neurotransmitter released by small synaptic vesicles by controlling the number of fusion pore flickers per exocytotic event. This mode of exocytosis is a potential mechanism whereby neurons can rapidly reuse vesicles without undergoing the comparatively slow process of recycling.

Dopamine neurons release transmitter via a flickering fusion pore.

Une question cl&eacute; dans la compr&eacute;hension des m&eacute;canismes de lib&eacute;ration des neurotransmetteurs est si le pore de fusion d&#39;une v&eacute;sicule synaptique r&eacute;gule la quantit&eacute; de transmetteur lib&eacute;r&eacute; au cours de l&#39;exocytose. Nous avons mesur&eacute; la lib&eacute;ration de dopamine, de petites v&eacute;sicules synaptiques des neurones m&eacute;senc&eacute;phalique ventral de rat mis en culture &agrave; l&#39;aide de fibre de carbone amp&eacute;rom&eacute;trie. Nos donn&eacute;es indiquent que les pores de fusion de petites v&eacute;sicules synaptiques clignotent deux fois ou plusieurs fois &agrave; intervalles rapproch&eacute;s, avec chacun scintillent lib&eacute;rer environ 25-30 % de la dopamine v&eacute;siculaire. L&#39;incidence d&#39;&eacute;v&eacute;nements avec plusieurs pics &eacute;tait mutuellement r&eacute;gul&eacute;e par la staurosporine et esters de phorbol. Ainsi, les neurones dopaminergiques r&eacute;glementent la quantit&eacute; de neurotransmetteur lib&eacute;r&eacute; de petites v&eacute;sicules synaptiques en contr&ocirc;lant le nombre de clignote de pore de fusion par &eacute;v&eacute;nement exocytotique. Ce mode d&#39;exocytose est un m&eacute;canisme potentiel par lequel les neurones peuvent r&eacute;utiliser rapidement v&eacute;sicules sans subir le processus relativement lent du recyclage.

Neurones dopaminergiques sortie &eacute;metteur par un pore de fusion vacillante.

Dopamin-Neuronen Freisetzung Sender &#xFC;ber ein Flackern Fusionspore.

Una domanda chiave nei meccanismi di comprensione del rilascio di neurotrasmettitore &egrave; se il poro di fusione di una Vescicola sinaptica regola la quantit&agrave; di trasmettitore liberato durante esocitosi. Abbiamo misurato il rilascio di dopamina da piccole vescicole sinaptiche dei neuroni mesencefalo ventrale ratto coltivato utilizzando fibra di carbonio amperometria. I nostri dati indicano che i pori di fusione piccola Vescicola sinaptica sfarfallano o una volta o pi&ugrave; volte in rapida successione, con ogni sfarfallano rilasciando circa 25-30% di dopamina vescicolare. L&#39;incidenza di eventi con pi&ugrave; sfarfalla reciprocamente era regolata da staurosporine ed esteri del forbolo. Cos&igrave;, i neuroni della dopamina regolano la quantit&agrave; di neurotrasmettitore rilasciato da piccole vescicole sinaptiche controllando il numero di fusione poro sfarfalla per questo evento. Questa modalit&agrave; di esocitosi &egrave; un potenziale meccanismo per cui i neuroni possono riutilizzare rapidamente le vescicole senza subire il relativamente lento processo di riciclaggio.

I neuroni della dopamina rilasciano trasmettitore tramite un poro di fusione tremolante.

&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x8CEA;&#x554F;&#x306F;&#x3001;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x7D30;&#x5B54;&#x4E2D;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30BF;&#x306E;&#x91CF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x70AD;&#x7D20;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x3057;&#x305F;&#x96FB;&#x6D41;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x57F9;&#x990A;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x8179;&#x5074;&#x4E2D;&#x8133;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x5B54;&#x304C;&#x3061;&#x3089;&#x3064;&#x304D;&#x3092; 1 &#x56DE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8907;&#x6570;&#x56DE;&#x306E;&#x77E2;&#x7D99;&#x304E;&#x65E9;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30C9;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x7D04; 25-30% &#x3092;&#x89E3;&#x653E;&#x3059;&#x308B;&#x3061;&#x3089;&#x3064;&#x304D;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x3061;&#x3089;&#x3064;&#x304D;&#x3068;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x7387;&#x306F;&#x76F8;&#x4E92;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EB;&#x30DC;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x3068;&#x30B9;&#x30BF;&#x30A6;&#x30ED;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x7523;&#x751F;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x878D;&#x5408;&#x7D30;&#x5B54;&#x304C;&#x3061;&#x3089;&#x3064;&#x304F;&#x5206;&#x6CCC;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3054;&#x3068;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x91CF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; whereby &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x9045;&#x3044;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x7D4C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x306A;&#x304F;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3092;&#x30EA;&#x30E6;&#x30FC;&#x30B9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x7523;&#x751F;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x9001;&#x4FE1;&#x6A5F;&#x3061;&#x3089;&#x3064;&#x304D;&#x878D;&#x5408;&#x7D30;&#x5B54;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC758; &#xC774;&#xD574; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC740; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xC735;&#xD569; &#xAE30; &#xACF5; exocytosis &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xD45C; &#xD558;&#xB294; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30;&#xC758; &#xC591;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xBD80;. &#xD0C4;&#xC18C; &#xC12C;&#xC720; amperometry&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD50;&#xC591; &#xC950; &#xBCF5; &#xBD80; midbrain &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xD4E8;&#xC804; &#xBAA8; &#xACF5; &#xAE5C;&#xBC15;&#xC784;&#xC5D0; &#xD55C; &#xBC88; &#xB610;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBC88; &#xC5F0;&#xC18D;&#xC801;, &#xAC01; &#xAE5C;&#xBC15;&#xC784; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC;&#xC758; &#xC57D; 25-30% &#xD574;&#xC81C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC601;&#xD654;&#xAC00;&#xC640; &#xC0AC;&#xAC74;&#xC758; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xB960; phorbol &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974; &#xBC0F; staurosporine&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB41C;&#xB2E4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xC735;&#xD569; &#xAE30; &#xACF5; &#xAE5C;&#xBC15;&#xC784; exocytotic &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xC218;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558; &#xC5EC; &#xC791;&#xC740; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xD45C; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xC591;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Exocytosis&#xC758;&#xC774; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xBE7C;&#xC557;&#xC544; &#xB274;&#xB7F0; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC18C;&#xD3EC; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xB290;&#xB9B0; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC5C6;&#xC774; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xB274;&#xB7F0; &#xAE5C;&#xBC15;&#xAC70;&#xB9AC;&#xB294; &#xD4E8;&#xC804; &#xAE30; &#xACF5; &#xD1B5;&#xD574; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30;&#xB97C; &#xB193;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Una pregunta clave en los mecanismos de comprensi&oacute;n de la liberaci&oacute;n de neurotransmisores es si el poro de la fusi&oacute;n de una ves&iacute;cula sin&aacute;ptica regula la cantidad de transmisor liberado durante la exocitosis. Medimos la liberaci&oacute;n de dopamina de peque&ntilde;as ves&iacute;culas sin&aacute;pticas de las neuronas de mesenc&eacute;falo ventral rata cultivada mediante Amperometr&iacute;a de fibra de carbono. Nuestros datos indican que los poros de fusi&oacute;n de ves&iacute;culas sin&aacute;pticas peque&ntilde;as parpadean sea una vez o varias veces en r&aacute;pida sucesi&oacute;n, con cada parpadean liberando aproximadamente 25-30% de la dopamina vesicular. La incidencia de eventos con m&uacute;ltiples parpadea rec&iacute;procamente fue regulada por staurosporina y &eacute;steres de forbol. As&iacute;, las neuronas dopamin&eacute;rgicas regulan la cantidad de neurotransmisor liberado por peque&ntilde;as ves&iacute;culas sin&aacute;pticas controlando el n&uacute;mero de parpadeos de poro de fusi&oacute;n por evento exocit&oacute;tico. Este modo de exocitosis es un mecanismo potencial por el que las neuronas r&aacute;pidamente pueden reutilizar las ves&iacute;culas sin sufrir el comparativamente lento proceso de reciclaje.

Las neuronas dopamin&eacute;rgicas liberan transmisor mediante un parpadeo poro de fusi&oacute;n.

&#x4F7F;&#x7528;&#x7EC6;&#x80DE;&#x878D;&#x5408;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86;&#x5F7B;&#x5E95;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x5708;&#x5957;&#x8FD8;&#x4FC3;&#x8FDB; hemifusion &#x4F5C;&#x4E3A;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x7ED3;&#x5C40;&#x3002;&#x5927;&#x7EA6;&#x6709; 65%&#x7684;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5145;&#x5206;&#x878D;&#x5408;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728; hemifusion &#xFF1B; &#x5176;&#x4F59;&#x7684; 35 %&#x4EBA;&#xFF0C;&#x7EA6;&#x6709;&#x4E09;&#x5206;&#x4E4B;&#x4E8C;&#x662F;&#x6C38;&#x4E45;&#x6027;&#x7684;&#x5927;&#x7EA6;&#x6709;&#x4E09;&#x5206;&#x4E4B;&#x4E00;&#x662F;&#x53EF;&#x9006;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9884;&#x6D4B;&#x6B64;&#x6210;&#x679C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x63A5;&#x8FD1;&#x5E73;&#x8861;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5012;&#x7684;&#x5708;&#x5957;&#xFF0C;&#x8C03;&#x8282;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5141;&#x8BB8;&#x52A8;&#x6001;&#x751F;&#x7406;&#x8C03;&#x63A7;&#x4E4B;&#x95F4;&#x5B8C;&#x5168;&#x878D;&#x5408;&#x548C;&#x53EF;&#x9006;&#x543B;&#x8FD0;&#x884C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;

&#x5708;&#x5957;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5F7B;&#x5E95;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x548C; hemifusion &#x4F5C;&#x4E3A;&#x66FF;&#x4EE3;&#x6027;&#x6210;&#x679C;&#x3002;

Using a cell fusion assay, we show here that in addition to complete fusion SNAREs also promote hemifusion as an alternative outcome. Approximately 65% of events resulted in full fusion, and the remaining 35% in hemifusion; of those, approximately two thirds were permanent and approximately one third were reversible. We predict that this relatively close balance among outcomes could be tipped by binding of regulatory proteins to the SNAREs, allowing for dynamic physiological regulation between full fusion and reversible kiss-and-run-like events.

SNAREs can promote complete fusion and hemifusion as alternative outcomes.

Collets &agrave; l&#39;aide d&#39;un test de fusion de cellules, nous montrons ici que, en plus de la fusion compl&egrave;te &eacute;galement promouvoir hemifusion fruit d&#39;alternatives. Environ 65 % des &eacute;v&eacute;nements a abouti &agrave; la fusion compl&egrave;te et les 35 % restants en hemifusion ; ce nombre, environ les deux tiers sont permanentes et environ un tiers ont &eacute;t&eacute; r&eacute;versibles. Nous pr&eacute;disons que cet &eacute;quilibre relativement &eacute;troit entre les r&eacute;sultats puisse &ecirc;tre bascul&eacute; par la liaison des prot&eacute;ines r&eacute;gulatrices de pi&egrave;ges, permettant une r&eacute;gulation physiologique dynamique entre la fusion compl&egrave;te et r&eacute;versibles &eacute;v&eacute;nements kiss-and-run-like.

Collets peuvent favoriser la fusion compl&egrave;te et hemifusion comme r&eacute;sultats alternatifs.

SNAREs k&#xF6;nnen vollst&#xE4;ndige Fusion und hemifusion als Alternative Ergebnisse zu f&#xF6;rdern.

Utilizzando un dosaggio di fusione delle cellule, mostriamo qui che oltre alla completa fusione insidie anche promuovono hemifusion come un risultato alternativo. Circa il 65% degli eventi ha portato a fusione piena e il restante 35% in hemifusion; di questi, circa due terzi erano permanenti e circa un terzo erano reversibili. Prevediamo che questo equilibrio relativamente stretto tra i risultati poteva essere ribaltato dal legame delle proteine regolatrici di insidie, permettendo di regolamento fisiologica dinamica tra fusione completa e reversibili bacio-e-esecuzione-come gli eventi.

Insidie possono promuovere la completa fusione e hemifusion come esiti alternativi.

&#x30BB;&#x30EB;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x878D;&#x5408;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x3082;&#x5225;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066; hemifusion &#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D04; 65 &#xFF05; &#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x878D;&#x5408;&#x3068;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E; 35 &#xFF05; hemifusion &#x306E;&#x7D50;&#x679C;;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D04; 3 &#x5206;&#x306E; 2 &#x6C38;&#x4E45;&#x3001;&#x7D04;&#x4E09;&#x5206;&#x306E;&#x4E00;&#x304C;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6210;&#x679C;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x8FD1;&#x304F;&#x306E;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3001;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x306B;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B8C;&#x5168;&#x878D;&#x5408;&#x3068;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306A;&#x30AD;&#x30B9;-&#x5B9F;&#x884C;&#x69D8;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x9593;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x53EF;&#x80FD;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x30BD;&#x30FC;&#x5FC5;&#x8981;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x878D;&#x5408;&#x3068; hemifusion &#x4EE3;&#x66FF;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6607;&#x683C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Snares&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC735;&#xD569; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC140; &#xD4E8;&#xC804; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB300;&#xCCB4; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; hemifusion &#xD64D;&#xBCF4;. &#xC644;&#xC804; &#xD4E8;&#xC804; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xC57D; 65% &#xB2F9;&#xD558;&#xACE0; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; 35 %hemifusion; &#xADF8; &#xC911;, &#xC57D; 3 &#xBD84; 2 &#xC601;&#xAD6C; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xC57D; 3 &#xBD84;&#xC758; 1&#xC740; &#xB418;&#xB3CC;&#xB9B4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xACB0;&#xACFC; &#xB4E4;&#xC774; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xADE0;&#xD615; &#xC218; &#xBC00;&#xACE0; SNAREs, &#xADDC;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC644;&#xC804; &#xD4E8;&#xC804; &#xBC0F; &#xAC00;&#xC5ED; &#xD0A4;&#xC2A4;&#xC640; &#xC2E4;&#xD589; &#xAC19;&#xC740; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xAC04;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5C8;&#xC6A9;&#xC744; &#xC608;&#xCE21;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;.

SNAREs &#xB300;&#xCCB4; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC735;&#xD569;, hemifusion&#xB97C; &#xD64D;&#xBCF4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Usando un an&aacute;lisis de fusi&oacute;n de la c&eacute;lula, mostramos aqu&iacute; adem&aacute;s de fusi&oacute;n completa trampas tambi&eacute;n promueven la hemifusion como resultado alternativo. Aproximadamente el 65% de eventos dio lugar a la fusi&oacute;n completa y el restante 35% en hemifusion; de ellos, aproximadamente dos tercios eran permanentes y aproximadamente un tercio eran reversibles. Predecimos que este equilibrio relativamente estrecha entre los resultados podr&iacute;a ser inclinado por la Uni&oacute;n de prote&iacute;nas reguladoras a las trampas, permitiendo regulaci&oacute;n fisiol&oacute;gica din&aacute;mica entre la fusi&oacute;n completa y eventos de beso-y-correr-como reversibles.

Trampas pueden promover la fusi&oacute;n completa y hemifusion como resultados alternativos.

&#x5B89;&#x57F9;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7528;&#x4E8E;&#x7814;&#x7A76;&#x80DE;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x548C;&#x6FC0;&#x7D20;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x5728;&#x6765;&#x81EA;&#x6C27;&#x5316;&#x7684;&#x5355;&#x80FA;&#x7C7B;&#x5206;&#x5B50;&#x91CA;&#x653E;&#x671F;&#x95F4;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x5206;&#x6CCC;&#x56CA;&#x6CE1;&#x878D;&#x5408;&#x7684;&#x5B89;&#x57F9;&#x5CF0;&#x503C;&#x7684;&#x5F62;&#x72B6;&#x5206;&#x6790;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x6709;&#x5173;&#x5206;&#x5B50;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x5B89;&#x57F9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5904;&#x7406;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x6982;&#x8FF0;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; (i) &#x5B89;&#x57F9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x91C7;&#x96C6;&#x548C;&#x7B5B;&#x9009;&#xFF0C;(ii) &#x7684;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5E76;&#x786E;&#x5B9A;&#x7A57;&#x5F62;&#x72B6;&#x7279;&#x5F81;&#x548C; (&#x4E09;) &#x6570;&#x636E;&#x5904;&#x7406;&#x548C;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x68C0;&#x8BA8;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x4E3A;&#x6267;&#x884C;&#x5B89;&#x57F9;&#x5F55;&#x5236;&#x7684;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x89E3;&#x91CA;&#x7ED3;&#x679C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5F62;&#x72B6;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x91CA;&#x653E;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5B9E;&#x52A1;&#x6307;&#x5F15;&#x3002;

&#x8BB0;&#x5F55;&#x7684;&#x5B89;&#x57F9;&#x7684;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Amperometry is widely used to study exocytosis of neurotransmitters and hormones in various cell types. Analysis of the shape of the amperometric spikes that originate from the oxidation of monoamine molecules released during the fusion of individual secretory vesicles provides information about molecular steps involved in stimulation-dependent transmitter release. Here we present an overview of the methodology of amperometric signal processing, including (i) amperometric signal acquisition and filtering, (ii) detection of exocytotic events and determining spike shape characteristics, and (iii) data manipulation and statistical analysis. The purpose of this review is to provide practical guidelines for performing amperometric recordings of exocytotic activity and interpreting the results based on shape characteristics of individual release events.

Analysis of exocytotic events recorded by amperometry.

Amp&eacute;rom&eacute;trie est largement utilis&eacute; pour &eacute;tudier l&#39;exocytose de neurotransmetteurs et hormones dans divers types de cellules. Analyse de la forme des pointes amp&eacute;rom&eacute;trique qui proviennent de l&#39;oxydation des mol&eacute;cules de monoamine lib&eacute;r&eacute;es lors de la fusion de v&eacute;sicules s&eacute;cr&eacute;trices individuels fournit des informations sur les &eacute;tapes mol&eacute;culaires impliqu&eacute;s dans la lib&eacute;ration des transmetteurs de stimulation-d&eacute;pendante. Nous pr&eacute;sentons ici un aper&ccedil;u de la m&eacute;thode de traitement du signal amp&eacute;rom&eacute;trique, y compris amp&eacute;rom&eacute;trique (i) acquisition de signaux et de filtrage, (ii) la d&eacute;tection des &eacute;v&eacute;nements exocytotique et de d&eacute;terminer spike caract&eacute;ristiques de forme et de manipulation de donn&eacute;es (iii) et de l&#39;analyse statistique. Cet examen vise &agrave; fournir des orientations pratiques pour ex&eacute;cuter amp&eacute;rom&eacute;trique enregistrements d&#39;activit&eacute; exocytotique et interpr&eacute;ter les r&eacute;sultats bas&eacute;s sur les caract&eacute;ristiques de la forme d&#39;&eacute;v&eacute;nements de lib&eacute;ration individuelle.

Analyse des &eacute;v&eacute;nements exocytotique enregistr&eacute;es par amp&eacute;rom&eacute;trie.

Die Analyse der Exozytoseereignisse durch Amperometrie aufgezeichnet.

Amperometria &egrave; ampiamente utilizzato per studiare esocitosi di neurotrasmettitori e ormoni in vari tipi di cellule. Analisi della forma delle spighe amperometrico che provengono dall&#39;ossidazione di molecole di monoamine rilasciato durante la fusione di vescicole secretorie individuale fornisce informazioni sui passaggi molecolari coinvolti nel rilascio di stimolazione-dipendente dal trasmettitore. Qui vi presentiamo una panoramica della metodologia di elaborazione del segnale amperometrico, compresa l&#39;acquisizione del segnale amperometrico (i) e di filtraggio, (ii) rilevazione degli eventi questo e determinazione spike caratteristiche di forma e manipolazione (iii) dei dati e analisi statistica. Lo scopo di questa revisione &egrave; quello di fornire linee guida pratiche per eseguire registrazioni amperometrico di attivit&agrave; questo e nell&#39;interpretazione dei risultati in base alle caratteristiche di forma del rilascio di singoli eventi.

Analisi di questo eventi registrati da amperometria.

&#x3057;&#x305F;&#x96FB;&#x6D41;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x306F;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x3068;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x7A2E;&#x3005; &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x5E83;&#x304F;&#x7528;&#x3044;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x500B;&#x5225;&#x5206;&#x6CCC;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x4E2D;&#x306B;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9; &#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x7531;&#x6765;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30DA;&#x30ED; &#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x5206;&#x6790;&#x523A;&#x6FC0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x30A2;&#x30F3;&#x30DA;&#x30ED; &#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x306E;&#x6982;&#x8981;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3001;&#x5F62;&#x72B6;&#x7279;&#x6027;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; &#xFF08;iii&#xFF09; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3068;&#x7D71;&#x8A08;&#x89E3;&#x6790; (i) &#x30A2;&#x30F3;&#x30DA;&#x30ED; &#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x96C6;&#x9332;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF; &#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#xFF08;ii&#xFF09; &#x5206;&#x6CCC;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3068;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3092;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x6CCC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30DA;&#x30ED; &#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x9332;&#x97F3;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x3001;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9; &#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x89E3;&#x91C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B9F;&#x7528;&#x7684;&#x306A;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x3057;&#x305F;&#x96FB;&#x6D41;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A18;&#x9332;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3002;

Amperometry &#xACF5;&#xBD80; exocytosis &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xACFC; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC140; &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xBCC4; &#xBD84; vesicles &#xC735;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xD45C; &#xBAA8;&#xB178; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB418;&#xB294; amperometric &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C; &#xB3C4;&#xD615; &#xBD84;&#xC11D; &#xC790;&#xADF9; &#xC885;&#xC18D; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBD84;&#xC790; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD604;&#xC7AC; amperometric &#xC2E0;&#xD638; &#xCC98;&#xB9AC;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC758; &#xAC1C;&#xC694;, &#xD3EC;&#xD568; (i) amperometric &#xC2E0;&#xD638; &#xC218;&#xC9D1; &#xBC0F; &#xD544;&#xD130;&#xB9C1; (ii) exocytotic &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C; &#xBC0F; &#xACB0;&#xC815; &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C; &#xB3C4;&#xD615; &#xD2B9;&#xC131;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; (iii) &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC870;&#xC791; &#xBC0F; &#xD1B5;&#xACC4; &#xBD84;&#xC11D;. &#xC774; &#xAC80;&#xD1A0;&#xC758; &#xBAA9;&#xC801;&#xC740; amperometric &#xB179;&#xC74C; exocytotic &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC218;&#xD589; &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xC170;&#xC774;&#xD504; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD574;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E4;&#xC6A9;&#xC801;&#xC778; &#xC9C0;&#xCE68;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Amperometry&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAE30;&#xB85D; &#xB41C; exocytotic &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Amperometr&iacute;a es ampliamente utilizado para estudiar la exocitosis de neurotransmisores y hormonas en diversos tipos celulares. An&aacute;lisis de la forma de los picos de amperom&eacute;trico que proceden de la oxidaci&oacute;n de mol&eacute;culas de monoamina liberadas durante la fusi&oacute;n de ves&iacute;culas secretoras individuales proporciona informaci&oacute;n sobre pasos moleculares involucrados en la liberaci&oacute;n de transmisor de estimulaci&oacute;n dependiente. Aqu&iacute; presentamos un Resumen de la metodolog&iacute;a de procesamiento de se&ntilde;ales amperom&eacute;trico, incluyendo la adquisici&oacute;n de la se&ntilde;al del sensor inductivo (i) y filtrado, (ii) la detecci&oacute;n de eventos exocit&oacute;ticas y determinaci&oacute;n del punto las caracter&iacute;sticas de la forma y manipulaci&oacute;n de datos (iii) y an&aacute;lisis estad&iacute;stico. El prop&oacute;sito de esta revisi&oacute;n es proporcionar directrices pr&aacute;cticas para realizar grabaciones amperom&eacute;trico de actividad exocit&oacute;tico e interpretaci&oacute;n de los resultados basados en las caracter&iacute;sticas de la forma de eventos de lanzamiento individual.

An&aacute;lisis de exocit&oacute;ticas eventos registrados por Amperometr&iacute;a.

&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x7A33;&#x6001;&#x5931;&#x8C03;&#x548C;&#x53D1;&#x5C04;&#x5668;&#x7684;&#x6E38;&#x79BB;&#x7EA7;&#x522B;&#x63D0;&#x5347;&#x6709;&#x4EBA;&#x5EFA;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5728;&#x5E15;&#x91D1;&#x68EE;&#x75C5;&#x4E2D;&#x7684;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x8106;&#x5F31;&#x6027;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A; &alpha;-synuclein &#x6216;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (WT) &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E2D;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6027;&#x5E15;&#x91D1;&#x68EE;&#x75C5;&#x7684;&#x5F62;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86; &alpha;-synuclein &#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x7A33;&#x6001;&#x4E4B;&#x95F4;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x79BB;&#x53BB; A30P &alpha;-synuclein &#x663E;&#x793A;&#x5927;&#x5927;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x589E;&#x52A0;&#x6E38;&#x79BB;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x6C34;&#x5E73;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4FEE;&#x8865;&#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x3001; &#x800C;&#x8D85;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE; WT &#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x90A3;&#x4E9B;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6572;&#x52A8;&#x7269;&#x6CA1;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x63A7;&#x4EF6;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#xFF0C;L &#x5DE6;&#x65CB;&#x6CBB;&#x7597; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0; A30P &#x6216; A53T &#x76F8;&#x6BD4;&#x90A3;&#x4E9B;&#x8868;&#x793A; WT &alpha;-synuclein&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5DE6;&#x65CB;&#x591A;&#x5DF4;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#x540E;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4F4E;&#x6E38;&#x79BB;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x6C34;&#x5E73;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x663E;&#x8457;&#x6291;&#x5236;&#x7531;&#x4EFB;&#x4E00;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4E5F;&#x8F83;&#x9AD8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0;&#x5B75;&#x5316;&#x7684; WT&#x3001; A30P &#x6216; A53T &alpha;-synuclein &#x4F4E; micromolar &#x6D53;&#x5EA6;&#x6291;&#x5236; ATP &#x4F9D;&#x8D56;&#x7EF4;&#x4FEE;&#x7684; pH &#x68AF;&#x5EA6;&#x4E2D;&#x5B64;&#x7ACB;&#x55DC;&#x94EC;&#x56CA;&#x6CE1;&#x548C; WT &#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x663E;&#x8457;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8D28;&#x5B50;&#x6F0F;&#x4E0D;&#x5F88;&#x6709;&#x6548;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684; &alpha;-synuclein &#x6270;&#x4E71;&#x4E86;&#x6C34;&#x75B1;&#x7684; ph &#x503C;&#x548C;&#x80DE;&#x6D46;&#x90BB;&#x82EF;&#x4E8C;&#x915A;&#x7684;&#x7269;&#x79CD;&#xFF0C;&#x5728;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x6C34;&#x5E73;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x52A0;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6253;&#x5F00;&#x89E6;&#x53D1;&#x5668;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6C27;&#x81EA;&#x7531;&#x57FA;&#x7684;&#x635F;&#x5BB3;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x591A;&#x4E2A;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x8D1F;&#x8D23;&#x6E38;&#x79BB;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x7A33;&#x6001;&#x7684;&#x6270;&#x52A8;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x6709;&#x5173;&#x5982;&#x4F55; &alpha;-synuclein &#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x6325;&#x5176;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x7834;&#x574F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;

&Alpha;-synuclein &#x8FC7;&#x8868;&#x8FBE;&#x589E;&#x52A0;&#x6E38;&#x79BB;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;

Dysregulation of dopamine homeostasis and elevation of the cytosolic level of the transmitter have been suggested to underlie the vulnerability of catecholaminergic neurons in Parkinson's disease. Because several known mutations in alpha-synuclein or overexpression of the wild-type (WT) protein causes familial forms of Parkinson's disease, we investigated possible links between alpha-synuclein pathogenesis and dopamine homeostasis. Chromaffin cells isolated from transgenic mice that overexpress A30P alpha-synuclein displayed significantly increased cytosolic catecholamine levels as measured by intracellular patch electrochemistry, whereas cells overexpressing the WT protein and those from knock-out animals were not different from controls. Likewise, catechol concentrations were higher in L-DOPA-treated PC12 cells overexpressing A30P or A53T compared with those expressing WT alpha-synuclein, although the ability of cells to maintain a low cytosolic dopamine level after L-DOPA challenge was markedly inhibited by either protein. We also found that incubation with low-micromolar concentrations of WT, A30P, or A53T alpha-synuclein inhibited ATP-dependent maintenance of pH gradients in isolated chromaffin vesicles and that the WT protein was significantly less potent in inducing the proton leakage. In summary, we demonstrate that overexpression of different types of alpha-synuclein disrupts vesicular pH and leads to a marked increase in the levels of cytosolic catechol species, an effect that may in turn trigger cellular oxyradical damage. Although multiple molecular mechanisms may be responsible for the perturbation of cytosolic catecholamine homeostasis, this study provides critical evidence about how alpha-synuclein might exert its cytotoxicity and selectively damage catecholaminergic cells.

Alpha-synuclein overexpression increases cytosolic catecholamine concentration.

Le d&eacute;r&egrave;glement de l&#39;hom&eacute;ostasie de la dopamine et l&#39;&eacute;l&eacute;vation du niveau cytosolique de l&#39;&eacute;metteur ont &eacute;t&eacute; sugg&eacute;r&eacute;s &agrave; la base de la vuln&eacute;rabilit&eacute; des neurones cat&eacute;cholaminergiques dans la maladie de Parkinson. Car plusieurs mutations connues en alpha-synucl&eacute;ine ou la surexpression de la prot&eacute;ine de type sauvage (WT) provoque des formes familiales de la maladie de Parkinson, nous avons &eacute;tudi&eacute; des liens possibles entre la pathogen&egrave;se de l&#39;alpha-synucl&eacute;ine et l&#39;hom&eacute;ostasie de la dopamine. Cellules chromaffines isol&eacute;es de souris transg&eacute;niques qui surexpriment A30P alpha-synucl&eacute;ine affiche nettement augment&eacute; les niveaux de cat&eacute;cholamines cytosolique mesur&eacute;e par &eacute;lectrochimie patch intracellulaire, alors que les cellules surexprimant la prot&eacute;ine WT et ceux de knock-out animaux n&#39;&eacute;tait pas diff&eacute;rents des t&eacute;moins. De m&ecirc;me, les concentrations de cat&eacute;chol &eacute;taient plus &eacute;lev&eacute;es dans les cellules PC12 trait&eacute;s par L-DOPA L sur-exprimant A30P ou A53T compar&eacute;es avec celles exprimant WT alpha-synucl&eacute;ine, bien que la capacit&eacute; des cellules &agrave; maintenir un niveau de dopamine cytosolique faible apr&egrave;s le d&eacute;fi de la L-DOPA est fortement inhib&eacute;e par une prot&eacute;ine. Nous avons &eacute;galement constat&eacute; que l&#39;incubation avec des concentrations micromolaires-basses de WT, A30P ou A53T alpha-synucl&eacute;ine inhib&eacute;e entretien ATP-d&eacute;pendante des gradients de pH dans des v&eacute;sicules chromaffines isol&eacute;es et que la prot&eacute;ine WT est beaucoup moins puissante en provoquant la fuite de protons. En r&eacute;sum&eacute;, nous d&eacute;montrons que la surexpression de diff&eacute;rents types d&#39;alpha-synucl&eacute;ine perturbe pH v&eacute;siculaire et conduit &agrave; une augmentation marqu&eacute;e dans les niveaux des esp&egrave;ces cytosolique cat&eacute;chol, un effet qui peut en tourne d&eacute;clencheur cellulaire oxyradicaux dommages. Bien que plusieurs m&eacute;canismes mol&eacute;culaires peuvent &ecirc;tre responsables de la perturbation de l&#39;hom&eacute;ostasie des cat&eacute;cholamines cytosolique, cette &eacute;tude fournit des preuves critiques sur alpha-synucl&eacute;ine pourrait exercer sa cytotoxicit&eacute; et endommager s&eacute;lectivement les cellules cat&eacute;cholaminergiques.

Surexpression de l&#39;alpha-synucl&eacute;ine augmente la concentration des cat&eacute;cholamines cytosolique.

Dysregulation der Dopamin-Hom&ouml;ostase und Erh&ouml;hung der zellul&auml;ren Ebene des Senders haben wurden vorgeschlagen, um die Verwundbarkeit der Catecholaminergic Neuronen bei Parkinson-Krankheit zugrunde liegen. Da mehrere bekannte Mutationen in Alpha-Synuclein oder eine &Uuml;berexpression des Wildtyp (WT) Proteins bewirkt famili&auml;re Formen der Parkinson-Krankheit, untersuchten wir m&ouml;gliche Verbindungen zwischen Alpha-Synuclein-Pathogenese und Dopamin-Hom&ouml;ostase. Chromaffin Zellen isoliert von transgenen M&auml;usen, die A30P Alpha-Synuclein deutlich angezeigt &uuml;berexprimiert h&ouml;here Zytosolischer Katecholamine intrazellul&auml;ren Patch Elektrochemie gemessen, w&auml;hrend Zellen &uuml;berexprimierenden das WT-Protein und die von Knock-out-Tiere waren nicht anders als Steuerelemente. Ebenso waren Brenzcatechin Konzentrationen h&ouml;her L-DOPA behandelten PC12-Zellen, die overexpressing A30P oder A53T mit jenen Ausdr&uuml;cken WT Alpha-Synuclein, verglichen, obwohl die F&auml;higkeit der Zellen, die eine niedrige Zytosolische Dopamin nach DOPA Challenge aufrechtzuerhalten durch entweder Protein deutlich gehemmt wurde. Wir fanden auch, dass Inkubation mit niedrig-micromolar Konzentrationen von WT, A30P oder A53T Alpha-Synuclein ATP-abh&auml;ngige Wartung pH-Gradienten in isolierten chromaffin Vesicles gehemmt und das WT-Protein wesentlich weniger potenten in induzierende Proton Leckage war. Zusammenfassend l&auml;sst sich sagen zeigen wir, dass eine &Uuml;berexpression von verschiedenen Arten von Alpha-Synuclein vesikul&auml;ren pH-Wert st&ouml;rt und f&uuml;hrt zu einem deutlichen Anstieg der Ebenen Zytosolische Brenzcatechin Arten, ein Effekt, der im Mai verwandeln Ausl&ouml;ser zellul&auml;ren Oxyradical Schaden. Obwohl mehrere Molekulare Mechanismen f&uuml;r die St&ouml;rung der Hom&ouml;ostase Zytosolischer Katecholamine verantwortlich sein k&ouml;nnen, bietet diese Studie kritische Beweise dar&uuml;ber, wie Alpha-Synuclein aus&uuml;ben, die Zytotoxizit&auml;t und selektiv Catecholaminergic Zellen besch&auml;digen k&ouml;nnte.

Alpha-Synuclein &Uuml;berexpression erh&ouml;ht Zytosolischer Katecholamine Konzentration.

Disregolazione dell&#39;omeostasi della dopamina e l&#39;elevazione del livello citosolico del trasmettitore sono stati suggeriti per sottendono la vulnerabilit&agrave; dei neuroni catecholaminergic nel morbo di Parkinson. Perch&eacute; diverse mutazioni conosciute in alfa-sinucleina o iperespressione della proteina wild-type (WT) provoca forme familiari del morbo di Parkinson, abbiamo studiato i possibili legami tra alfa-sinucleina patogenesi e l&#39;omeostasi della dopamina. Cellule cromaffini isolate da topi transgenici che iperesprimono A30P alfa-sinucleina visualizzato significativamente aumentati livelli di catecolamina citosolica come misurato da elettrochimica patch intracellulare, considerando che le cellule con sovraesprimono relativa proteina WT e quelli da knock-out gli animali non erano diversi dai controlli. Similarmente, catecolo concentrazioni erano superiori in cellule PC12 trattati con L-DOPA all A30P o A53T rispetto a quelli che esprimono WT alfa-sinucleina, sebbene la capacit&agrave; delle cellule di mantenere un livello di dopamina citosolico basso dopo la sfida di l-dopa era marcatamente inibita da una proteina. Abbiamo anche trovato che incubazione con concentrazioni micromolar bassa di WT, A30P o A53T alfa-sinucleina inibito manutenzione ATP-dipendente di gradienti di pH in vescicole cromaffini isolate e che la proteina WT era significativamente meno potente nell&#39;indurre la perdita del protone. In sintesi, ci dimostrano che sconvolge la sovraespressione di diversi tipi di alfa-sinucleina pH vescicolare e porta ad un marcato aumento dei livelli di specie citosolico catecolo, un effetto che pu&ograve; nel girare a danni cellulari oxyradical trigger. Anche se molteplici meccanismi molecolari possono essere responsabili della perturbazione dell&#39;omeostasi delle catecolamine citosolico, questo studio fornisce la prova critica circa come la alfa-sinucleina potrebbe esercitare la sua citotossicit&agrave; e danneggiare selettivamente le cellule catecholaminergic.

Sovraespressione di alfa-sinucleina aumenta la concentrazione citosolica delle catecolamine.

&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x4E0D;&#x5168;&#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x6A19;&#x9AD8;&#x306F;&#x3001;&#x8106;&#x5F31;&#x6027;&#x30D1;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30BD;&#x30F3;&#x75C5;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D1;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30BD;&#x30F3;&#x75C5;&#x306E;&#x89AA;&#x65CF;&#x547C;&#x79F0; &alpha; &#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; &#xFF08;WT&#xFF09; &#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; &alpha;-&#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x3068;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;A30P &alpha;-&#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x30CE;&#x30B6;&#x30F3; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x5897;&#x52A0;&#x3001;WT &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304B;&#x3089;&#x904E;&#x5270;&#x7D30;&#x80DE;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x52D5;&#x7269;&#x306F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6; L-DOPA &#x30C1;&#x30E3;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x5F8C;&#x4F4E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x904E;&#x5270;&#x306E; A30P &#x307E;&#x305F;&#x306F; A53T &#x3068; &alpha; &#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3; WT &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x6BD4;&#x8F03; L DOPA &#x6271;&#x308F; PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9AD8;&#x3044;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; WT&#x3001;A30P&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F; A53T &alpha;-&#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x4F4E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3068; pH &#x52FE;&#x914D;&#x5206;&#x96E2;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E; ATP &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x7DAD;&#x6301;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3068; WT &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x6F0F;&#x308C;&#x3060;&#x3063;&#x305F;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6C34;&#x75B1;&#x6027; pH &alpha;-&#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4E71;&#x3059;&#x3057;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC; &#x30BB;&#x30EB;&#x30E9;&#x30FC; oxyradical &#x640D;&#x50B7;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x7A2E;&#x3067;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x8457;&#x3057;&#x3044;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0; &#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F; &alpha;-&#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3057;&#x3001;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x542B;&#x6709;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&Alpha;-&#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; Dysregulation &#xBC0F; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30;&#xC758; cytosolic &#xC218;&#xC900; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xD30C; &#xD0A8; &#xC2A8; &#xBCD1;&#xC5D0;&#xC11C; catecholaminergic &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xCDE8;&#xC57D;&#xC810;&#xC744; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC54C;&#xD30C;-synuclein &#xB610;&#xB294; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; (WT) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; overexpression&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD30C; &#xD0A8; &#xC2A8; &#xBCD1;&#xC758; &#xAC00;&#xC871; &#xD615;&#xD0DC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC54C;&#xD30C; synuclein pathogenesis &#xBC0F; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD06C;&#xAC8C; &#xD45C;&#xC2DC; A30P &#xC54C;&#xD30C; synuclein overexpress &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xAC00; cytosolic &#xCE74; &#xD14C; &#xCF5C; &#xC544;&#xBBFC; &#xC218;&#xC900; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD328;&#xCE58; &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C;, &#xBC18;&#xBA74; &#xC140; overexpressing WT &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xADF8; &#xB178;&#xD06C; &#xC544;&#xC6C3; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C;, catechol &#xB18D;&#xB3C4; &#xB192;&#xC740; L DOPA &#xCDE8;&#xAE09; PC12 &#xC138;&#xD3EC; L-DOPA &#xB3C4;&#xC804; &#xD6C4; &#xB0AE;&#xC740; cytosolic &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC140;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825; &#xC911; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC800;&#xD574;&#xB294; &#xBE44;&#xB85D; overexpressing A30P &#xB610;&#xB294; A53T WT &#xC54C;&#xD30C;-synuclein, &#xD45C;&#xD604; &#xADF8;&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; WT, A30P, &#xB610;&#xB294; A53T &#xC54C;&#xD30C;-synuclein&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; micromolar &#xB18D;&#xB3C4;&#xC640; &#xBD80; &#xD654; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC18C;&#xD3EC;&#xC5D0; pH &#xAE30;&#xC6B8;&#xAE30;&#xC758; ATP &#xC885;&#xC18D; &#xC720;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC800;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; WT &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A4; &#xB204;&#xC124; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB35C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, &#xC54C;&#xD30C;-synuclein&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC885;&#xB958;&#xC758; overexpression &#xBC29;&#xD574; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; pH &#xBC0F; cytosolic catechol &#xC885;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC99D;&#xAC00;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C; &#xC124;&#xC815; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; &#xC138;&#xD3EC; oxyradical &#xC190;&#xC0C1; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; cytosolic &#xCE74; &#xD14C; &#xCF5C; &#xC544;&#xBBFC; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131;&#xC758; &#xC12D; &#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC774; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC29;&#xBC95; &#xC54C;&#xD30C; synuclein&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131;&#xC744; &#xBC1C;&#xD718; &#xD558; &#xACE0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; catecholaminergic &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC190;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC54C;&#xD30C; synuclein overexpression cytosolic &#xCE74; &#xD14C; &#xCF5C; &#xC544;&#xBBFC; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00;.

Desregulaci&oacute;n de la homeostasis de la dopamina y la elevaci&oacute;n del nivel del citosol del transmisor se han sugerido que subyacen a la vulnerabilidad de las neuronas catecolamin&eacute;rgicos en la enfermedad de Parkinson. Debido a que varias mutaciones conocidas en alfa-sinucle&iacute;na o sobreexpresi&oacute;n de la prote&iacute;na de tipo salvaje (WT) provoca formas familiares de la enfermedad de Parkinson, investigamos posibles v&iacute;nculos entre la patogenesia de la alfa-sinucle&iacute;na y la homeostasis de la dopamina. C&eacute;lulas cromafines aisladas de ratones transg&eacute;nicos que sobreexpresan A30P alfa-sinucle&iacute;na muestra significativamente incrementado los niveles de catecolamina citos&oacute;lica medida por electroqu&iacute;mica parche intracelular, mientras que las c&eacute;lulas overexpressing la prote&iacute;na WT y los de knock-out animales no difer&iacute;an de los controles. Asimismo, catecol concentraciones fueron m&aacute;s altas en c&eacute;lulas PC12 tratados con L-DOPA sobreexpresando A30P o A53T en comparaci&oacute;n con las que expresan WT alfa-sinucle&iacute;na, aunque la capacidad de las c&eacute;lulas para mantener un nivel de dopamina citos&oacute;lica baja despu&eacute;s del desaf&iacute;o de la l-dopa marcado fue inhibida por cualquier prote&iacute;na. Tambi&eacute;n encontramos que incubaci&oacute;n con concentraciones bajas-micromolar de alfa-sinucle&iacute;na WT, A30P o A53T hab&iacute;a inhibido mantenimiento dependiente de ATP de gradientes de pH en ves&iacute;culas cromafines aislados y que la prote&iacute;na de peso fue significativamente menos potente en la inducci&oacute;n de la salida de protones. En Resumen, demostramos que la sobreexpresi&oacute;n de diferentes tipos de alfa-sinucle&iacute;na interrumpe pH vesicular y conduce a un marcado aumento en los niveles de especies citos&oacute;lica catecol, un efecto que puede girar a la activaci&oacute;n celular oxyradical da&ntilde;o. Aunque m&uacute;ltiples mecanismos moleculares pueden ser responsables de la perturbaci&oacute;n de la homeostasis de la catecolamina citos&oacute;lica, este estudio proporciona evidencia cr&iacute;tica sobre c&oacute;mo alfa-sinucle&iacute;na podr&iacute;a ejercer su citotoxicidad y da&ntilde;ar selectivamente las c&eacute;lulas catecolamin&eacute;rgicos.

Sobreexpresi&oacute;n de alfa-sinucle&iacute;na aumenta la concentraci&oacute;n citos&oacute;lica de la catecolamina.

&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x7684; &alpha;-synuclein (&alpha;-syn) &#x6709;&#x7275;&#x8FDE;&#x7684;&#x5E15;&#x91D1;&#x68EE;&#x75C5; (PD) &#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&alpha;-syn &#x53EF;&#x4EE5;&#x964D;&#x7EA7;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F34;&#x4FA3;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x566C; (CMA)&#xFF0C;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x6E38;&#x79BB;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684; &alpha;-syn &#x963B;&#x6B62;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x6613;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x635F;&#x5BB3;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x81EA;&#x5DF1;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5176;&#x4ED6; CMA &#x886C;&#x5E95;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x867D;&#x7136; &alpha;-syn &#x81F4;&#x75C5;&#x7A81;&#x53D8;&#x5F88;&#x5C11;&#x89C1;&#xFF0C;&alpha;-syn &#x7ECF;&#x8FC7;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x7684;&#x4FEE;&#x6539;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x5C31;&#x662F;&#x5176;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684;&#x6E38;&#x79BB;&#x5728;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684; PD.&#x4F7F;&#x7528;&#x9F20;&#x6807;&#x8179;&#x4FA7;&#x5185;&#x4FA7;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6587;&#x5316;&#x805A;&#x5408;&#x3001; SH SY5Y &#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x6587;&#x5316;&#x548C;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x4FEE;&#x6539;&#x7684; &alpha;-syn &#x635F;&#x5BB3;&#x7531; CMA &#x6B64;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x5176;&#x4ED6;&#x57FA;&#x8D28;&#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x4FEE;&#x6539;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA; &alpha;-syn&#xFF0C;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x53EA;&#x5DEE;&#x9000;&#x5316;&#x7684; CMA&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x9014;&#x5F84;&#x963B;&#x6B62;&#x5176;&#x4ED6;&#x57FA;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x3002;&#x968F;&#x7740; CMA &#x5835;&#x585E;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6613;&#x53D7;&#x538B;&#x529B;&#x6E90;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x6291;&#x5236;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x81EA;&#x566C;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x4EE5;&#x89E3;&#x91CA; PD &#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x80FD;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x53D8;&#x6027;&#x3002;

&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x4FEE;&#x6539; &alpha;-synuclein &#x5757;&#x4F34;&#x4FA3;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x81EA;&#x566C;&#x3002;

Altered degradation of alpha-synuclein (alpha-syn) has been implicated in the pathogenesis of Parkinson disease (PD). We have shown that alpha-syn can be degraded via chaperone-mediated autophagy (CMA), a selective lysosomal mechanism for degradation of cytosolic proteins. Pathogenic mutants of alpha-syn block lysosomal translocation, impairing their own degradation along with that of other CMA substrates. While pathogenic alpha-syn mutations are rare, alpha-syn undergoes posttranslational modifications, which may underlie its accumulation in cytosolic aggregates in most forms of PD. Using mouse ventral medial neuron cultures, SH-SY5Y cells in culture, and isolated mouse lysosomes, we have found that most of these posttranslational modifications of alpha-syn impair degradation of this protein by CMA but do not affect degradation of other substrates. Dopamine-modified alpha-syn, however, is not only poorly degraded by CMA but also blocks degradation of other substrates by this pathway. As blockage of CMA increases cellular vulnerability to stressors, we propose that dopamine-induced autophagic inhibition could explain the selective degeneration of PD dopaminergic neurons.

Dopamine-modified alpha-synuclein blocks chaperone-mediated autophagy.

D&eacute;gradation alt&eacute;r&eacute;e de l&#39;alpha-synucl&eacute;ine (alpha-syn) a &eacute;t&eacute; impliqu&eacute;e dans la pathog&eacute;nie de la maladie de Parkinson (MP). Nous avons montr&eacute; que syn-alpha peut &ecirc;tre d&eacute;grad&eacute;e par autophagie induite par l&#39;escorte (CMA), un m&eacute;canisme s&eacute;lectif lysosomal dans la d&eacute;gradation des prot&eacute;ines cytosoliques. Mutants pathog&egrave;nes d&#39;alpha-syn bloquent translocation lysosomale, portant atteinte &agrave; leur propre d&eacute;gradation ainsi que celle d&#39;autres substrats de CMA. Alors que les mutations pathog&egrave;nes alpha-syn sont rares, alpha-syn subit des modifications post-traductionnelles, ce qui pourraient expliquer son accumulation dans les agr&eacute;gats cytosoliques dans la plupart des formes de cultures de neurones m&eacute;diane ventrale pour le souris PD. Using, cellules SH-SY5Y dans la culture et les lysosomes isol&eacute;s de souris, nous avons constat&eacute; que la plupart de ces modifications post-traductionnelles d&#39;alpha-syn alt&eacute;rer la d&eacute;gradation de cette prot&eacute;ine par CMA mais n&#39;affecte pas la d&eacute;gradation d&#39;autres substrats. Dopamine-modification alpha-syn, cependant, n&#39;est pas seulement mal amoindrie par CMA mais bloque &eacute;galement la d&eacute;gradation d&#39;autres substrats par cette voie. Blocage de LMC augmente cellulaire vuln&eacute;rabilit&eacute; aux facteurs de stress, nous proposons que l&#39;inhibition autophagie induite par la dopamine pouvait expliquer la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence s&eacute;lective des neurones dopaminergiques de PD.

Dopamine-modification alpha-synucl&eacute;ine bloque autophagy chaperone-n&eacute;goci&eacute;.

Ver&auml;nderte Abbau von Alpha-Synuclein (Alpha-Syn) hat bei der Entstehung der Parkinson-Krankheit (PD) verwickelt. Wir haben gezeigt, dass die Alpha-Syn &uuml;ber Chaperon-vermittelte Autophagy (CMA), einen selektiven lysosomale Mechanismus zur Verschlechterung der cytosolic Proteinen beeintr&auml;chtigt werden kann. Pathogene Mutanten von Alpha-Syn blockieren lysosomale Translokation, eigene Abbau zusammen mit anderen Substraten CMA zu beeintr&auml;chtigen. W&auml;hrend pathogene Alpha-Syn-Mutationen sind selten, Alpha-Syn erf&auml;hrt posttranslationale Modifikationen, seine Anh&auml;ufung in Zytosolische Aggregate in den meisten Formen der PD Using Maus ventralen medialen Neuron Kulturen, SH-SY5Y Zellen in Kultur und isoliert Maus Lysosomen zugrunde liegen k&ouml;nnen, wir haben festgestellt, dass die meisten dieser posttranslationale Modifikationen von Alpha-Syn Abbau dieses Proteins von CMA beeintr&auml;chtigen aber haben keinen Einfluss auf die Verschlechterung der anderen Substraten. Dopamin-modifizierte Alpha-Syn, ist nicht nur schlecht vom CMA abgebaut aber auch Bl&ouml;cke Verschlechterung der andere Substrate sich diese Option. Mit zunehmender Verstopfung von CMA zellul&auml;re Anf&auml;lligkeit gegen&uuml;ber Stressoren schlagen wir Dopamin-induzierte autophagic Hemmung die selektive Degeneration der dopaminergen Neuronen PD erkl&auml;ren konnte.

Dopamin-modifizierte Alpha-Synuclein blockiert Chaperon-vermittelte Autophagy in Verbindung.

Alterata degradazione della alfa-sinucleina (alfa-syn) &egrave; stato implicato nella patogenesi della malattia di Parkinson (MdP). Abbiamo dimostrato che syn-alfa pu&ograve; essere degradata via autophagy chaperone-mediata (CMA), un meccanismo lisosomiale selettivo per la degradazione delle proteine citosoliche. Patogeni mutanti di alfa-syn bloccano traslocazione lisosomiale, indebolendo la loro degradazione insieme a quella di altri substrati di CMA. Mentre le mutazioni patogene alfa-syn sono rare, alfa-syn subisce modifiche di posttranslational, che possono essere alla base di suo accumulo in aggregati citosolici nella maggior parte delle forme di culture di neurone mediale ventrale del mouse utilizzando PD, SH-SY5Y cellule in coltura e lisosomi isolato mouse, abbiamo trovato che la maggior parte di queste modifiche di posttranslational di alfa-syn compromettere la degradazione di questa proteina di CMA ma non influiscono sul degrado di altri substrati. Dopamina-modificato alfa-syn, tuttavia, non &egrave; solo scarsamente degradata da CMA ma anche blocchi di degradazione di altri substrati di questo percorso. Come blocco di CMA aumenta la vulnerabilit&agrave; cellulare a fattori di stress, proponiamo che indotta da dopamina autophagic inibizione potrebbe spiegare la degenerazione selettiva dei neuroni dopaminergici PD.

Dopamina-modificato alfa-sinucleina blocca autophagy chaperone-mediata.

&Alpha;-&#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3; (&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; syn) &#x306E;&#x5909;&#x8CEA;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30BD;&#x30F3;&#x75C5; (PD) &#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; syn &#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B8;&#x30FC; &#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F; &#xFF08;CMA&#xFF09; &#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30BE;&#x30FC;&#x30E0; &#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; syn &#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x682A;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30BE;&#x30FC;&#x30E0;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x304C;&#x81EA;&#x5206;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x4ED6;&#x306E; CMA &#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; syn &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x307E;&#x308C;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; syn &#x3078;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x8A0E;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8179;&#x5185;&#x5074;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3067;&#x3001;&#x6587;&#x5316;&#x3068;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E; SH SY5Y &#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x6027;&#x304C;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x4FEE;&#x98FE;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x4FEE;&#x98FE;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; syn &#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306F;&#x3053;&#x306E; CMA &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x304C;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x306B;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x5909;&#x66F4;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;-syn&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5358;&#x306B;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206; CMA &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x52A3;&#x5316;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x306B;&#x3082;&#x3053;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CMA &#x306E;&#x9589;&#x585E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8106;&#x5F31;&#x6027;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x306B;&#x3064;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3; autophagic &#x6291;&#x5236; PD &#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x5909;&#x6027;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.

&Alpha;-&#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x5909;&#x66F4;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B8;&#x30FC;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC54C;&#xD30C; synuclein (&#xC54C;&#xD30C;-syn)&#xC758; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xC800;&#xD558; &#xD30C; &#xD0A8; &#xC2A8; &#xBCD1; (PD)&#xC758; &#xBCD1; &#xC778;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC54C;&#xD30C; syn &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC911;&#xC7AC; autophagy (CMA), cytosolic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; lysosomal &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC800;&#xD558; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC54C;&#xD30C; syn&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCC28;&#xB2E8; lysosomal &#xC804; &#xB2E4;&#xB978; CMA &#xAE30;&#xD310; &#xD568;&#xAED8; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xBC29;&#xD574;. &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xC54C;&#xD30C; syn &#xBCC0;&#xC774; &#xB4DC;&#xBB38; &#xBC18;&#xBA74;, &#xC54C;&#xD30C; syn &#xACAA; &#xC2B5; PD. &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBCF5; &#xBD80; &#xB0B4;&#xCE21; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBB38;&#xD654;&#xAD8C;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; cytosolic &#xC9D1;&#xACC4;, &#xBB38;&#xD654;&#xC640; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC5D0;&#xC11C; SH SY5Y &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB204;&#xC801; &#xB41C; &#xADF8; &#xAE30;&#xCD08;&#xAC00; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; posttranslational &#xC218;&#xC815;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC54C;&#xD30C; syn&#xC758; posttranslational &#xC218;&#xC815;&#xC774; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; CMA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xC545;&#xC601;&#xD5A5; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; syn-&#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC218;&#xC815; &#xC54C;&#xD30C;,, &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; CMA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD0C0;&#xB77D; &#xD558;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB610;&#xD55C;&#xC774; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC758;&#xD574; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8;. CMA&#xC758; &#xB9C9;&#xD78C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xCDE8;&#xC57D;&#xC810; &#xC99D;&#xAC00; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC720;&#xB3C4; autophagic &#xC800;&#xD574; PD dopaminergic &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xD1F4;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC218;&#xC815; &#xC54C;&#xD30C; synuclein &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC911;&#xC7AC; autophagy&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Degradaci&oacute;n alterada de la alfa-sinucle&iacute;na (alfa-syn) se ha implicado en la patogenia de la enfermedad de Parkinson (EP). Hemos demostrado que alfa-syn puede ser degradado por autofagia mediada por acompa&ntilde;ante (CMA), un mecanismo lysosomal selectiva para la degradaci&oacute;n de prote&iacute;nas citos&oacute;licas. Pat&oacute;genos mutantes de alfa-syn bloquean desplazamiento lisosomal, deteriorando su propia degradaci&oacute;n junto con la de otros sustratos de CMA. Mientras que las mutaciones pat&oacute;genas alfa-syn son raras, alfa-syn sufre modificaciones postraduccionales, que pueden ser la base de su acumulaci&oacute;n en citos&oacute;licas agregados en la mayor&iacute;a de las formas de culturas de ventral medial neurona PD. uso rat&oacute;n, las c&eacute;lulas SH-SY5Y en cultura y lisosomas rat&oacute;n aislados, hemos encontrado que la mayor&iacute;a de estas modificaciones postraduccionales de alfa-syn deterioran la degradaci&oacute;n de esta prote&iacute;na por CMA pero no afectan la degradaci&oacute;n de otros substratos. Alfa dopamina-modificado-syn, sin embargo, no s&oacute;lo mal es degradada por CMA pero tambi&eacute;n bloquea la degradaci&oacute;n de otros sustratos por esta v&iacute;a. Como bloqueo de CMA celular vulnerable a factores de estr&eacute;s, proponemos que la inhibici&oacute;n de autofagia inducida por la dopamina podr&iacute;a explicar la degeneraci&oacute;n selectiva de las neuronas dopamin&eacute;rgicas de PD.

Alfa-sinucle&iacute;na modificado dopamina bloquea autofagia mediada por acompa&ntilde;ante.

&#x5728;&#x6765;&#x81EA;&#x6C27;&#x5316;&#x7684;&#x5355;&#x80FA;&#x7C7B;&#x5206;&#x5B50;&#x91CA;&#x653E;&#x671F;&#x95F4;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x5206;&#x6CCC;&#x56CA;&#x6CE1;&#x878D;&#x5408;&#x7684;&#x5B89;&#x57F9;&#x5CF0;&#x503C;&#x7684;&#x5F62;&#x72B6;&#x5206;&#x6790;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5206;&#x5B50;&#x6B65;&#x9AA4;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x5B9D;&#x8D35;&#x6570;&#x636E;&#x3002;&#x5B89;&#x57F9;&#x7684;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x5141;&#x8BB8;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x5355;&#x80FA;&#x7C7B;&#x53D1;&#x5E03;&#x4ECE;&#x5355;&#x4E2A;&#x6C34;&#x6CE1;&#xFF0C;&#x8BA9;&#x4FE1;&#x606F;&#x6709;&#x5173;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x53D8;&#x9001;&#x5668;&#x7A33;&#x6001; &#xFF08;&#x5408;&#x6210;&#x3001; &#x964D;&#x89E3;&#x3001; &#x518D;&#x6444;&#x53D6;&#x7B49;&#xFF09; &#x548C;&#x91CA;&#x653E;&#x6982;&#x7387; &#xFF08;&#x56CA;&#x6CE1;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x548C;&#x878D;&#x5408;&#x673A;&#x68B0;&#x5230; Ca(+2)) &#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5B89;&#x57F9;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x5141;&#x8BB8;&#x5B9E;&#x65F6;&#x91CA;&#x653E;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x5355;&#x80FA;&#x7C7B;&#x80DE;&#x5410;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7535;&#x8111;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x91CD;&#x70B9;&#x662F;&#x8D4B;&#x4E88;&#x7A57;&#x53C2;&#x6570;&#x4E0A;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x53D6;&#x6837;&#x7387;&#x3001; &#x4FE1;&#x53F7;&#x5230;&#x566A;&#x97F3;&#x6C34;&#x5E73;&#x3001; &#x7A57;&#x5DE5;&#x671F;&#x3001; &#x5F55;&#x5236;&#x7684;&#x4E00;&#x8D2F;&#x51B3;&#x5FC3;&#x7684;&#x4F8B;&#x7A0B;&#x5B89;&#x57F9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x548C;&#x5468;&#x56F4;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x7B97;&#x6CD5;&#x3002;

&#x8BB0;&#x5F55;&#x7684;&#x5B89;&#x57F9;&#x7684;&#x5355;&#x56CA;&#x6CE1;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Analysis of the shape of the amperometric spikes that originate from the oxidation of monoamine molecules released during the fusion of individual secretory vesicles provides valuable data about molecular steps involved in stimulation-dependent transmitter release. The sensitivity of amperometry permits the detection of the monoamines released from individual vesicles, giving information about intracellular transmitter homeostasis (synthesis, degradation, reuptake, etc.) and about the release probability (vesicle availability and sensitivity of fusion machinery to Ca(+2)). Furthermore, temporal resolution of amperometry allows for the observation of the real-time kinetics of monoamine release during exocytosis. Here, we provide algorithms for computerized analysis of the amperometric signal with emphasis on routines that confer consistent determination of spike parameters on recordings with different sampling rates, signal-to-noise levels, spike durations, and surrounding signal.

Analysis of single-vesicle exocytotic events recorded by amperometry.

Analyse de la forme des pointes amp&eacute;rom&eacute;trique qui proviennent de l&#39;oxydation des mol&eacute;cules de monoamine lib&eacute;r&eacute;es lors de la fusion de v&eacute;sicules s&eacute;cr&eacute;trices individuels fournit des donn&eacute;es pr&eacute;cieuses sur les &eacute;tapes mol&eacute;culaires impliqu&eacute;s dans la lib&eacute;ration des transmetteurs de stimulation-d&eacute;pendante. La sensibilit&eacute; de l&#39;amp&eacute;rom&eacute;trie permet la d&eacute;tection des monoamines lib&eacute;r&eacute; de v&eacute;sicules individuels, donnant des informations sur l&#39;hom&eacute;ostasie intracellulaire &eacute;metteur (synth&egrave;se, d&eacute;gradation, recaptage, etc.) et sur la probabilit&eacute; de sortie (disponibilit&eacute; de la v&eacute;sicule et sensibilit&eacute; des machines de fusion &agrave; Ca(+2)). Par ailleurs, la r&eacute;solution temporelle de l&#39;amp&eacute;rom&eacute;trie permet l&#39;observation de la cin&eacute;tique en temps r&eacute;el de monoamine lib&eacute;ration au cours de l&#39;exocytose. Ici, nous fournissons des algorithmes pour analyse informatis&eacute;e du signal amp&eacute;rom&eacute;trique en mettant l&#39;accent sur les routines qui conf&egrave;rent une coh&eacute;rente d&eacute;termination des param&egrave;tres de pointe sur les enregistrements avec diff&eacute;rentes fr&eacute;quences d&#39;&eacute;chantillonnage &eacute;lev&eacute;es, des niveaux de signal-bruit, dur&eacute;es de spike et signal environnante.

Analyse des &eacute;v&eacute;nements exocytotique single-v&eacute;sicule, enregistr&eacute; par amp&eacute;rom&eacute;trie.

Analyse der Form der amperometrisch-Spikes, die stammen aus der Oxidation der Monoamin-Molek&uuml;le w&auml;hrend der Fusion der einzelnen sekretorischen Vesikeln freigesetzt liefert wertvolle Daten &uuml;ber molekulare Schritte zur Anregung-abh&auml;ngige Sender Version. Die Empfindlichkeit des Amperometry erm&ouml;glicht das Erkennen von der Monoamine ver&ouml;ffentlicht von einzelnen Bl&auml;schen, geben Informationen &uuml;ber intrazellul&auml;re Sender Hom&ouml;ostase (Synthese, Abbau, Reuptake usw.) und die Freigabe-Wahrscheinlichkeit (Vesikel Verf&uuml;gbarkeit und Empfindlichkeit des Fusion-Maschinen zu Ca(+2)). Dar&uuml;ber hinaus kann zeitlicher Aufl&ouml;sung der Amperometry f&uuml;r die Beobachtung in Echtzeit Kinetics Monoamin-Version w&auml;hrend der Exozytose. Hier bieten wir Algorithmen f&uuml;r computergest&uuml;tzte Analyse der amperometrisch Signal mit Schwerpunkt auf Routinen, die konsistente Ermittlung Spitze Parameter bei Aufnahmen mit unterschiedlichen Abtastraten, Signal-Rausch-Ebenen, Spike-Dauer zu verleihen, und umliegenden Signal.

Analyse von Einzel-Vesikel exocytotic Ereignisse von Amperometry aufgenommen.

Analisi della forma delle spighe amperometrico che provengono dall&#39;ossidazione di molecole di monoamine rilasciato durante la fusione di vescicole secretorie individuale forniscono preziosi dati sui passaggi molecolari coinvolti nel rilascio di stimolazione-dipendente dal trasmettitore. La sensibilit&agrave; di amperometria permette la rilevazione delle monoamine rilasciato da vescicole singole, dando informazioni su omeostasi intracellulare trasmettitore (sintesi, degradazione, reuptake, ecc.) e la probabilit&agrave; di rilascio (vescicola disponibilit&agrave; e sensibilit&agrave; di macchinari di fusione di Ca(+2)). Inoltre, risoluzione temporale di amperometria permette l&#39;osservazione di cinetica in tempo reale delle monoamine rilascio durante esocitosi. Qui, forniamo gli algoritmi per l&#39;analisi computerizzata del segnale amperometrico con enfasi sulle routine che conferiscono coerente determinazione dei parametri di picco su registrazioni con frequenze di campionamento differenti, livelli di segnale-rumore, spike durate e segnale circostante.

Analisi degli eventi di questo singolo-vescicola registrata da amperometria.

&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x500B;&#x5225;&#x5206;&#x6CCC;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x4E2D;&#x306B;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9; &#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x7531;&#x6765;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30DA;&#x30ED; &#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x72B6;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x624B;&#x9806;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x96FB;&#x6D41;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x653E;&#x51FA;&#x78BA;&#x7387; (&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3068;&#x878D;&#x5408;&#x6A5F;&#x68B0; Ca(+2)) &#x3078;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3002; &#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30BF;&#x6052;&#x5E38;&#x6027; &#xFF08;&#x5408;&#x6210;&#x3001;&#x5206;&#x89E3;&#x3001;&#x518D;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x7B49;&#xFF09; &#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9; &#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x96FB;&#x6D41;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306E;&#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x6642;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF; &#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30EC;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3001;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3068;&#x30CE;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3001;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x671F;&#x9593;&#x306B;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3092;&#x5354;&#x8B70;&#x3059;&#x308B;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x91CD;&#x70B9;&#x3092;&#x7F6E;&#x3044;&#x3066;&#x30A2;&#x30F3;&#x30DA;&#x30ED; &#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3068;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x89E3;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x96FB;&#x6D41;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A18;&#x9332;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x5C0F;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x3002;

&#xAC1C;&#xBCC4; &#xBD84; vesicles &#xC735;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xD45C; &#xBAA8;&#xB178; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB418;&#xB294; amperometric &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C; &#xB3C4;&#xD615; &#xBD84;&#xC11D; &#xC790;&#xADF9; &#xC885;&#xC18D; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBD84;&#xC790; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Amperometry&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xBC1C;&#xD45C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC18C;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD655;&#xB960; (&#xC18C;&#xD3EC; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131; &#xBC0F; Ca(+2)) &#xD558;&#xB294; &#xD4E8;&#xC804; &#xAE30;&#xACC4;&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; (&#xD569;&#xC131;, &#xC800;&#xD558;, &#xC7AC;&#xD761;&#xC218;, &#xB4F1;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; monoamines&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;. &#xB610;&#xD55C;, amperometry&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; exocytosis &#xC911; &#xBAA8;&#xB178; &#xC790;&#xB8CC;&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0D8;&#xD50C;&#xB9C1; &#xC18D;&#xB3C4;, &#xC2E0;&#xD638; &#xB300; &#xC7A1;&#xC74C; &#xB808;&#xBCA8;, &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C; &#xAE30;&#xAC04; &#xB179;&#xC74C;&#xC5D0; &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xC758; &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; &#xBD80;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xB8E8;&#xD2F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xC870;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; amperometric &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC2E0;&#xD638; &#xCEF4;&#xD4E8;&#xD130; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Amperometry&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAE30;&#xB85D; &#xB41C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAE30; exocytotic &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;.

An&aacute;lisis de la forma de los picos de amperom&eacute;trico que proceden de la oxidaci&oacute;n de mol&eacute;culas de monoamina liberadas durante la fusi&oacute;n de ves&iacute;culas secretoras individuales proporciona datos valiosos sobre pasos moleculares involucrados en la liberaci&oacute;n de transmisor de estimulaci&oacute;n dependiente. La sensibilidad de Amperometr&iacute;a permite la detecci&oacute;n de las monoaminas liberado de ves&iacute;culas individuales, dando informaci&oacute;n sobre homeostasis intracelular del transmisor (s&iacute;ntesis, degradaci&oacute;n, recaptaci&oacute;n, etc.) y sobre la probabilidad de liberaci&oacute;n (disponibilidad de ves&iacute;cula y sensibilidad de la maquinaria de la fusi&oacute;n a Ca(+2)). Adem&aacute;s, la resoluci&oacute;n temporal de Amperometr&iacute;a permite la observaci&oacute;n de la cin&eacute;tica en tiempo real de la liberaci&oacute;n de monoamina durante la exocitosis. Presentamos algoritmos para el an&aacute;lisis computarizado de la se&ntilde;al amperom&eacute;trico con &eacute;nfasis en las rutinas que confieren la constante determinaci&oacute;n de los par&aacute;metros de la espiga en grabaciones con velocidades de muestreo diferentes, niveles de se&ntilde;al a ruido, duraci&oacute;n de la espiga y alrededores.

An&aacute;lisis de la solo-ves&iacute;cula exocit&oacute;ticas eventos registrados por Amperometr&iacute;a.

&#x6025;&#x6027;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x5B89;&#x975E;&#x4ED6;&#x660E; (AMPHs) &#x6298;&#x53E0;&#x5206;&#x6CCC;&#x56CA;&#x6CE1; pH &#x68AF;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x589E;&#x52A0;&#x6E38;&#x79BB;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x878D;&#x5408;&#x6D3B;&#x52A8;&#x671F;&#x95F4;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x91CA;&#x653E;&#x91CF;&#x5B50;&#x5927;&#x5C0F;&#x3002;AMPH &#x548C;&#x7532;&#x57FA;&#x5B89;&#x975E;&#x4ED6;&#x660E; (&#x7532;&#x57FA;)&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5C06;&#x4FDD;&#x7559;&#x5728;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x5728;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x5185;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x5149;&#x5B66;&#x548C;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x63A2;&#x9488;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x5BF9;&#x5206;&#x6CCC;&#x56CA;&#x6CE1; pH &#x548C;&#x5B89;&#x57F9;&#x548C;&#x80DE;&#x5185;&#x4FEE;&#x8865;&#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x89C2;&#x5BDF; neurosecretion &#x548C;&#x6E38;&#x79BB;&#x7684;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x5BF9;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x5927;&#x9F20;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x957F;&#x671F; METH &#x66B4;&#x9732;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x4E0E;&#x6025;&#x6027; METH &#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x63A5;&#x89E6; 10 microM &#x548C;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5728; 6-48 h &#x4E3A;&#x836F;&#x7269;&#x4EA7;&#x751F;&#x5206;&#x6CCC;&#x56CA;&#x6CE1;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x53CD;&#x5F39; hyperacidification&#x3002;5-10 MicroM &#x5404;&#x7EA7;&#x957F;&#x671F;&#x7684; METH &#x589E;&#x52A0;&#x91CF;&#x5B50;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x548C;&#x6062;&#x590D;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5F88;&#x9AD8;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x7EE7;&#x7EED;&#x751F;&#x4EA7;&#x53CD;&#x5F39; hyperacidification (&gt; 100 microM&#xFF09; &#x6C34;&#x5E73;&#x4E0D;&#x589E;&#x52A0;&#x91CF;&#x5B50;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x3002;&#x5206;&#x6CCC;&#x56CA;&#x6CE1;&#x53CD;&#x5F39; hyperacidification &#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x6700;&#x4F73;&#x53CD;&#x5E94;&#x5728;&#x5927;&#x7EA6;&#x6444;&#x6C0F; 37 &#x5EA6;&#x7684;&#x6E29;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x672A;&#x88AB;&#x62E6;&#x622A;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6291;&#x5236;&#x560C;&#x5464;&#xFF0C;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x662F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x8865;&#x507F;&#x6027;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x66B4;&#x9732;&#x4E0E; membranophilic &#x5F31;&#x78B1;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; AMPHs&#x3001; &#x54CC;&#x918B;&#x7532;&#x916F;&#x3001; &#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x3001; &#x6C28;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x63A5;&#x89E6;&#xFF0C;AMPHs &#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x5F31;&#x78B1;&#x53EF;&#x4EE5;&#x52A0;&#x5F3A;&#xFF0C;&#x800C;&#x8017;&#x5C3D;&#xFF0C;&#x6C34;&#x6CE1;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x901A;&#x8FC7;&#x8865;&#x507F;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x56CA;&#x6CE1;&#x9178;&#x5316;&#x3002;

&#x5206;&#x6CCC;&#x56CA;&#x6CE1;&#x53CD;&#x5F39; hyperacidification &#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x56E0;&#x66B4;&#x9732;&#x5728;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x7532;&#x57FA;&#x5B89;&#x975E;&#x4ED6;&#x660E;&#x7684;&#x91CF;&#x5B50;&#x5927;&#x5C0F;&#x3002;

Acute exposure to amphetamines (AMPHs) collapses secretory vesicle pH gradients, which increases cytosolic catecholamine levels while decreasing the quantal size of catecholamine release during fusion events. AMPH and methamphetamine (METH), however, are retained in tissues over long durations. We used optical and electron microscopic probes to measure the effects of long-term METH exposure on secretory vesicle pH, and amperometry and intracellular patch electrochemistry to observe the effects on neurosecretion and cytosolic catecholamines in cultured rat chromaffin cells. In contrast to acute METH effects, exposure to the drug for 6-48 h at 10 microM and higher concentrations produced a concentration-dependent rebound hyperacidification of secretory vesicles. At 5-10 microM levels, prolonged METH increased the quantal size and reinstated exocytotic catecholamine release, although very high (> 100 microM) levels of the drug, while continuing to produce rebound hyperacidification, did not increase quantal size. Secretory vesicle rebound hyperacidification was temperature dependent with optimal response at approximately 37 degrees C, was not blocked by the transcription inhibitor, puromycin, and appears to be a general compensatory response to prolonged exposure with membranophilic weak bases, including AMPHs, methylphenidate, cocaine, and ammonia. Thus, under some conditions of prolonged exposure, AMPHs and other weak bases can enhance, rather than deplete, the vesicular release of catecholamines via a compensatory response resulting in vesicle acidification.

Secretory vesicle rebound hyperacidification and increased quantal size resulting from prolonged methamphetamine exposure.

L&#39;exposition aigu&euml; aux amph&eacute;tamines (AMPHs) s&#39;effondre des gradients de pH v&eacute;sicules s&eacute;cr&eacute;trices, qui augmente le taux de cat&eacute;cholamines cytosolique tout en diminuant la taille quantique de la lib&eacute;ration de cat&eacute;cholamines lors des &eacute;v&eacute;nements de fusion. AMPH et m&eacute;thamph&eacute;tamine (METH), cependant, sont conserv&eacute;s dans les tissus au fil de longues dur&eacute;es. Nous avons utilis&eacute; optique et &eacute;lectronique microscopique des sondes pour mesurer les effets de l&#39;exposition &agrave; long terme de METH sur pH de v&eacute;sicules s&eacute;cr&eacute;trices et amp&eacute;rom&eacute;trie et &eacute;lectrochimie patch intracellulaire d&#39;observer les effets sur les neuros&eacute;cr&eacute;tions et cat&eacute;cholamines cytosoliques dans cultiv&eacute;es de rats des cellules chromaffines. Contrairement aux effets aigus de METH, une exposition au m&eacute;dicament pendant 6 &agrave; 48 heures &agrave; 10 microM et des concentrations plus &eacute;lev&eacute;es produit une hyperacidification rebond de concentration-d&eacute;pendante des v&eacute;sicules s&eacute;cr&eacute;trices. &Agrave; 5-10 niveaux de microM, METH prolong&eacute;e a augment&eacute; la taille quantique et r&eacute;tabli la lib&eacute;ration de cat&eacute;cholamines exocytotique, bien que tr&egrave;s &eacute;lev&eacute; (100 &gt; microM) niveaux de la drogue, tout en continuant &agrave; produire l&#39;hyperacidification rebond, n&#39;a pas augment&eacute; de taille quantique. V&eacute;sicules s&eacute;cr&eacute;trices rebond hyperacidification &eacute;tait d&eacute;pendante avec une r&eacute;ponse optimale &agrave; environ 37 degr&eacute;s C de la temp&eacute;rature, n&#39;a pas &eacute;t&eacute; bloqu&eacute;e par l&#39;inhibiteur de la transcription, la puromycine et semble &ecirc;tre une r&eacute;action compensatoire g&eacute;n&eacute;rale &agrave; une exposition prolong&eacute;e avec les bases faibles membranophilic, dont AMPHs, m&eacute;thylph&eacute;nidate, la coca&iuml;ne et l&#39;ammoniac. Ainsi, dans certaines conditions d&#39;exposition prolong&eacute;e, AMPHs et autres bases faibles peuvent am&eacute;liorer, plut&ocirc;t qu&#39;appauvrissent, la lib&eacute;ration v&eacute;siculaire des cat&eacute;cholamines via une r&eacute;action compensatoire r&eacute;sultant de l&#39;acidification de la v&eacute;sicule.

V&eacute;sicules s&eacute;cr&eacute;trices rebond hyperacidification et augmentait la taille quantique r&eacute;sultant d&#39;une exposition prolong&eacute;e de la m&eacute;thamph&eacute;tamine.

Akute Gef&auml;hrdung durch Amphetamine (AMPHs) reduziert sekretorischen Vesikel pH-Wert Farbverl&auml;ufe, die erh&ouml;ht Zytosolischer Katecholamine w&auml;hrend die quantal Gr&ouml;&szlig;e der Katecholamin-Freisetzung bei Fusion Events zu verringern. Ladeeffekt und Methamphetamin (METH), werden jedoch im Gewebe &uuml;ber langer Dauer beibehalten. Wir haben optische und Elektron mikroskopische Sonden zur Messung der Auswirkungen einer langfristigen METH auf sekretorischen Vesikel pH, und Amperometry und intrazellul&auml;ren Patch Elektrochemie, die Auswirkungen auf Neurosecretion und Zytosolischer Katecholamine in kultivierten Ratte chromaffin Zellen zu beobachten. Im Gegensatz zu Akutwirkungen METH produziert Gef&auml;hrdung durch die Droge f&uuml;r 6-48 h bei 10 MicroM und h&ouml;heren Konzentrationen eine Konzentration abh&auml;ngige R&uuml;ckprall-Hyperacidification von sekretorischen Vesikeln. Auf 5-10 MicroM Ebenen, anhaltende METH quantal vergr&ouml;&szlig;ert und wieder exocytotic Katecholamin-Version eingesetzt, obwohl sehr hoch (&gt; 100 MicroM) Ebenen des Medikaments, Erholung Hyperacidification, produzieren weiterhin nicht quantal Gr&ouml;&szlig;e zu erh&ouml;hen. Sekretorischen Vesikel Erholung Hyperacidification temperaturabh&auml;ngig optimale Resonanz bei ca. 37 Grad C war, wurde nicht von der Transkription-Inhibitor blockiert Puromycin, und scheint eine allgemeine kompensatorische Reaktion auf l&auml;ngerer Exposition mit Membranophilic schwache Basen, einschlie&szlig;lich AMPHs, Methylphenidat, Kokain und Ammoniak. Also unter bestimmten Bedingungen einer l&auml;ngeren Einwirkung, k&ouml;nnen AMPHs und andere schwachen Basen verbessern, anstatt zum Abbau, der vesikul&auml;ren Freisetzung von Katecholaminen &uuml;ber eine kompensatorische Antwort Vesikel Versauerung f&uuml;hrt.

Sekretorischen Vesikel Zugstufe Hyperacidification und erh&ouml;hte quantal Gr&ouml;&szlig;e aufgrund l&auml;ngerer Methamphetamin.

L&#39;esposizione acuta alle anfetamine (AMPHs) crolla gradienti di pH vescicola secretoria, che aumenta i livelli di catecolamine citosolico diminuendo la dimensione quantal di catecolamina release durante gli eventi di fusione. AMPH e metanfetamine (METH), tuttavia, vengono mantenuti nei tessuti sopra lunghe durate. Abbiamo usato ottiche ed elettrone microscopiche sonde per misurare gli effetti dell&#39;esposizione a lungo termine di metanfetamina sul pH vescicola secretoria e amperometria ed elettrochimica intracellulare patch per osservare gli effetti su neurosecretion e catecolamine citosolici di ratto coltivata cellule cromaffini. In contrasto con gli effetti acuti di METH, l&#39;esposizione al farmaco per 6-48 ore a 10 microM e pi&ugrave; alte concentrazioni prodotte un hyperacidification di concentrazione-dipendente rimbalzo delle vescicole secretorie. A livelli di 5-10 microM, METH prolungato aumentato le dimensioni quantal e reintegrato il rilascio delle catecolamine questo, anche se molto alta (&amp;gt; 100 microM) livelli di droga, pur continuando a produrre hyperacidification di rimbalzo, non ha fatto aumentare le dimensioni quantal. Vescicola secretoria rimbalzo hyperacidification era dipendente con risposta ottimale a circa 37 gradi C di temperatura, non &egrave; stato bloccato dall&#39;inibitore di trascrizione, con puromicina e sembra essere una risposta compensatoria generale per l&#39;esposizione prolungata con basi deboli membranophilic, compreso AMPHs, metilfenidato, cocaina e ammoniaca. Cos&igrave;, in alcune condizioni di esposizione prolungata, AMPHs e altre basi deboli possono migliorare, piuttosto che esaurire, il rilascio vescicolare di catecolamine attraverso una risposta compensatoria con conseguente acidificazione della vescicola.

Vescicola secretoria rimbalzo hyperacidification e quantal dimensione derivante dall&#39;esposizione prolungata la metanfetamina &egrave; aumentato.

&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3; (AMPHs) &#x6025;&#x6027;&#x66B4;&#x9732;&#x878D;&#x5408;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x4E2D;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x7D20;&#x91CF;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x5206;&#x6CCC;&#x5C0F;&#x80DE; pH &#x52FE;&#x914D;&#x3092;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;AMPH &#x3068;&#x30E1;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3; &#xFF08;&#x30E1;&#x30BF;&#xFF09; &#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x9577;&#x671F;&#x9593;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x4FDD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5149;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x5206;&#x6CCC;&#x5C0F;&#x80DE; pH &#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x96FB;&#x6D41;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x3068;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x60F9;&#x304B;&#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30BE;&#x30EB; &#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66; METH &#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x66B4;&#x9732;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6025;&#x6027;&#x306E;&#x899A;&#x9192;&#x52B9;&#x679C;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30EA;&#x30D0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9; hyperacidification &#x5206;&#x6CCC;&#x5C0F;&#x80DE; 6-48 h 10 microM &#x3068;&#x9AD8;&#x3044;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x85AC;&#x5264;&#x3078;&#x306E;&#x9732;&#x51FA;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;5-10 MicroM &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x9577;&#x5F15;&#x304F; METH &#x7D20;&#x91CF;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3092;&#x5897;&#x5927;&#x3057;&#x3001;&#x5FA9;&#x6D3B;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x304C; &#xFF08;&#x76EE; 100 microM) &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x30EA;&#x30D0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9; hyperacidification &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7D99;&#x7D9A;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x9EBB;&#x85AC;&#x306F;&#x7D20;&#x91CF;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5206;&#x6CCC;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30EA;&#x30D0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9; hyperacidification &#x306E;&#x6E29;&#x5EA6;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x7D04; 37 &#x5EA6; C &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3067;&#x59A8;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x3078;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x66B4;&#x9732;&#x3068; membranophilic &#x5F31;&#x5869;&#x57FA;&#x3001;AMPHs&#x3001;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB; &#x30C7;&#x30FC;&#x30C8;&#x3001;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A2;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x4EE3;&#x511F;&#x7684;&#x306A;&#x5FDC;&#x7B54;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x9577;&#x6642;&#x9593;&#x9732;&#x51FA;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;AMPHs &#x3068;&#x5F31;&#x5869;&#x57FA;&#x306E;&#x4ED6;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3001;&#x306A;&#x304F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x9178;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x4F34;&#x3046;&#x88DC;&#x511F;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x7834;&#x58CA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5206;&#x6CCC;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306F; hyperacidification &#x3092;&#x30EA;&#x30D0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x3001;&#x9577;&#x5F15;&#x304F;&#x30E1;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x66B4;&#x9732;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x7D20;&#x91CF;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3092;&#x5897;&#x5927;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC554;&#xD398;&#xD0C0;&#xBBFC; (AMPHs)&#xC5D0; &#xAE09;&#xC131; &#xB178;&#xCD9C; &#xD4E8;&#xC804; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xC911; &#xCE74; &#xD14C; &#xCF5C; &#xC544;&#xBBFC; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; quantal &#xD06C;&#xAE30;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; cytosolic &#xCE74; &#xD14C; &#xCF5C; &#xC544;&#xBBFC; &#xC218;&#xC900; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xBD84; &#xAE30; pH &#xAE30;&#xC6B8;&#xAE30;&#xB97C; &#xCD95;&#xC18C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; AMPH &#xBC0F; &#xC554;&#xD398;&#xD0C0;&#xBBFC; (&#xD544;&#xB85C; &#xD3F0;), &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE34; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAD11;&#xD559; &#xBC0F; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBD84; &#xAE30; &#xC0B0;&#xB3C4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; amperometry &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD328;&#xCE58; &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559; &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; &#xC950;&#xC5D0; neurosecretion &#xBC0F; cytosolic &#xD574;&#xC8FC;&#xC5B4; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xC5D0; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04; &#xB9C8;&#xC57D; &#xB178;&#xCD9C;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;. &#xAE09;&#xC131; &#xB9C8;&#xC57D; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB2EC;&#xB9AC; 10 Microm&#xACFC; &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; 6-48 h&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xBD84; vesicles&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xC874; &#xB9AC;&#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; hyperacidification &#xC0DD;&#xC0B0;. 5-10 MicroM &#xC218;&#xC900; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; &#xB9C8;&#xC57D; quantal &#xD06C;&#xAE30;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB192;&#xC740; exocytotic &#xCE74; &#xD14C; &#xCF5C; &#xC544;&#xBBFC; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC9C1; (&amp;gt; 100 microM) &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xBC18; &#xB4F1; hyperacidification&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC57D; quantal &#xD06C;&#xAE30;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xBD84; &#xAE30; &#xBC18; &#xB4F1; hyperacidification &#xC628;&#xB3C4; &#xC57D; 37&#xB3C4; C&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xC751;&#xB2F5; &#xC885;&#xC18D;, &#xC804;&#xC0AC; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB9C9;&#xD788;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; puromycin, membranophilic &#xC57D;&#xD55C; &#xAE30;&#xC9C0;, AMPHs, methylphenidate, &#xCF54;&#xCE74;&#xC778;, &#xC554;&#xBAA8;&#xB2C8;&#xC544; &#xB4F1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; &#xB178;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBCF4;&#xC0C1; &#xC751;&#xB2F5; &#xB4EF;&#xD558;&#xB2E4; &#xACE0;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC7A5;&#xC2DC;&#xAC04;&#xB41C; &#xB178;&#xCD9C;&#xC758; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; Amphs&#xC640; &#xB2E4;&#xB978; &#xC57D;&#xD55C; &#xAE30;&#xC9C0; &#xD5A5;&#xC0C1;, &#xB300;&#xC2E0; &#xC218; &#xACE0;&#xAC08;, &#xAE30;&#xC758; &#xC0B0;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xBCF4;&#xC0C1; &#xC751;&#xB2F5; &#xD1B5;&#xD574; &#xD574;&#xC8FC;&#xC5B4; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xCD9C;&#xC2DC;.

&#xBD84; &#xAE30; hyperacidification &#xBC18; &#xB4F1; &#xD558; &#xACE0; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; &#xBA54; &#xB2F4; &#xD398;&#xD0C0; &#xBBFC; &#xB178;&#xCD9C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; quantal &#xD06C;&#xAE30; &#xC99D;&#xAC00;.

La exposici&oacute;n aguda a las anfetaminas (AMPHs) derrumba gradientes de pH de ves&iacute;culas secretoras, que aumenta los niveles de catecolaminas citos&oacute;lica disminuyendo el tama&ntilde;o cu&aacute;ntico de liberaci&oacute;n de catecolaminas durante eventos de fusi&oacute;n. AMPH y metanfetamina (METH), sin embargo, se conservan en los tejidos m&aacute;s larga duraci&oacute;n. Utilizamos &oacute;ptico y microscopio electr&oacute;nico sondas para medir los efectos de la exposici&oacute;n a largo plazo de la metanfetamina sobre el pH de la ves&iacute;cula secretora y Amperometr&iacute;a y electroqu&iacute;mica de parche intracelular para observar los efectos sobre la neurosecretion y catecolaminas citos&oacute;licas en rata cultivada c&eacute;lulas cromafines. En contraste con los efectos agudos de la metanfetamina, exposici&oacute;n a la droga durante 6-48 h a 10 microM y concentraciones m&aacute;s altas produce un hyperacidification rebote dependiente de la concentraci&oacute;n de ves&iacute;culas secretoras. Nivel 5-10 microM, metanfetamina prolongado aument&oacute; el tama&ntilde;o cu&aacute;ntico y reintegrados liberaci&oacute;n de catecolaminas exocit&oacute;tico, aunque muy alta (&gt; 100 microM) los niveles de la droga, sin dejar de producir hyperacidification de rebote, no incrementaron su tama&ntilde;o cu&aacute;ntico. Ves&iacute;culas secretoras rebote hyperacidification era dependiente con una respuesta &oacute;ptima a aproximadamente 37 grados C de temperatura, no estaba bloqueado por el inhibidor de la transcripci&oacute;n, la puromicina y parece ser una respuesta compensatoria general a la exposici&oacute;n prolongada con bases d&eacute;biles membranophilic, incluyendo AMPHs, metilfenidato, coca&iacute;na y amon&iacute;aco. As&iacute;, bajo ciertas condiciones de exposici&oacute;n prolongada, AMPHs y otras bases d&eacute;biles pueden mejorar, en lugar de agotar, la liberaci&oacute;n vesicular de catecolaminas mediante una respuesta compensatoria, dando por resultado la acidificaci&oacute;n de la ves&iacute;cula.

Ves&iacute;culas secretoras rebotan hyperacidification y mayor tama&ntilde;o cu&aacute;ntico resultantes de la exposici&oacute;n prolongada de la metanfetamina.

&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x795E;&#x7ECF;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4EBA;&#x53E3;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x5E15;&#x91D1;&#x68EE;&#x75C5; (PD) &#x662F; synucleinopathy (SN) &#x9ED1;&#x8D28;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x80FD;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4F18;&#x60E0;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#xFF0C;&#x800C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8179;&#x4FA7;&#x88AB;&#x76D6;&#x533A; &#xFF08;VTA&#xFF09; &#x90FD;&#x4E0D;&#x80FD;&#x5E78;&#x514D;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x80DE;&#x5185;&#x4FEE;&#x8865;&#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x76F4;&#x63A5;&#x6D4B;&#x91CF;&#x6E38;&#x79BB;&#x7684;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA; (&#x8111;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x7684; DA(cyt))&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x8BA4;&#x63D0;&#x5347;&#x7684; DA(cyt) &#x548C;&#x5176;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x662F;&#x795E;&#x7ECF;&#x6BD2;&#x6027;&#x548C;&#x9057;&#x4F20;&#x53CA;&#x836F;&#x7406;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5E72;&#x9884;&#x63AA;&#x65BD;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11; DA(cyt) &#x63D0;&#x4F9B;&#x795E;&#x7ECF;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5DE6;&#x65CB;&#x591A;&#x5DF4;&#x589E;&#x52A0; DA(cyt) SN &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5230; 2 &#x5230; 3 &#x500D;&#x6C34;&#x5E73;&#x9AD8;&#x4E8E; VTA &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x4E8C;&#x6C22;&#x5421;&#x5576;&#x7C7B;&#x654F;&#x611F; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x66F4;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x7684; SN &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5BFC;&#x81F4; L &#x5DE6;&#x65CB;&#x591A;&#x5DF4;&#x8BF1;&#x53D1;&#x795E;&#x7ECF;&#x6BD2;&#x6027;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;DA(cyt) &#x6CA1;&#x6709;&#x88AB;&#x7BE1;&#x6539;&#x7684; &alpha;-synuclein &#x5220;&#x9664;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x7F3A;&#x4E4F; &alpha;-synuclein &#x7684;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x80FD;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6297; L &#x5DE6;&#x65CB;&#x591A;&#x5DF4;&#x8BF1;&#x53D1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;Ca2 +&#x3001; DA(cyt) &#x4E0E; &alpha;-synuclein &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x4F9D;&#x636E; PD&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x591A;&#x4E2A;&#x6CBB;&#x7597;&#x76EE;&#x6807; SN &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x3002;

&#x6E38;&#x79BB;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x3001; &#x9499;&#x548C; &alpha;-synuclein &#x539F;&#x56E0;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x9ED1;&#x8D28;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;

The basis for selective death of specific neuronal populations in neurodegenerative diseases remains unclear. Parkinson's disease (PD) is a synucleinopathy characterized by a preferential loss of dopaminergic neurons in the substantia nigra (SN), whereas neurons of the ventral tegmental area (VTA) are spared. Using intracellular patch electrochemistry to directly measure cytosolic dopamine (DA(cyt)) in cultured midbrain neurons, we confirm that elevated DA(cyt) and its metabolites are neurotoxic and that genetic and pharmacological interventions that decrease DA(cyt) provide neuroprotection. L-DOPA increased DA(cyt) in SN neurons to levels 2- to 3-fold higher than in VTA neurons, a response dependent on dihydropyridine-sensitive Ca2+ channels, resulting in greater susceptibility of SN neurons to L-DOPA-induced neurotoxicity. DA(cyt) was not altered by alpha-synuclein deletion, although dopaminergic neurons lacking alpha-synuclein were resistant to L-DOPA-induced cell death. Thus, an interaction between Ca2+, DA(cyt), and alpha-synuclein may underlie the susceptibility of SN neurons in PD, suggesting multiple therapeutic targets.

Interplay between cytosolic dopamine, calcium, and alpha-synuclein causes selective death of substantia nigra neurons.

On ne sait pas le fondement de la mort s&eacute;lective des populations neuronales sp&eacute;cifiques dans les maladies neurod&eacute;g&eacute;n&eacute;ratives. Maladie de Parkinson (MP) est une synucleinopathy caract&eacute;ris&eacute;e par une perte pr&eacute;f&eacute;rentielle des neurones dopaminergiques dans la substantia nigra (SN), tandis que les neurones de l&#39;aire tegmentale ventrale (VTA) sont &eacute;pargn&eacute;s. &Agrave; l&#39;aide d&#39;&eacute;lectrochimie patch intracellulaire de mesurer directement la dopamine cytosolique (DA(cyt)) dans des neurones cultiv&eacute;s m&eacute;senc&eacute;phale, nous confirmons que DA(cyt) &eacute;lev&eacute;e et ses m&eacute;tabolites sont neurotoxiques et que les interventions g&eacute;n&eacute;tiques et pharmacologiques qui diminuent les DA(cyt) fournissent la neuroprotection. L-DOPA a augment&eacute; de DA(cyt) dans les neurones de SN aux niveaux 2 &agrave; 3 fois plus &eacute;lev&eacute; que dans les neurones de l&#39;IDV, une r&eacute;ponse d&eacute;pend des canaux Ca2 + sensibles aux dihydropyridines, r&eacute;sultant en une plus grande susceptibilit&eacute; des neurones SN &agrave; la neurotoxicit&eacute; induite par L-L-DOPA. DA(CYT) n&#39;a pas &eacute;t&eacute; modifi&eacute;e par la suppression de l&#39;alpha-synucl&eacute;ine, bien que les neurones dopaminergiques manque d&#39;alpha-synucl&eacute;ine r&eacute;sistaient &agrave; la mort cellulaire induite par L-L-DOPA. Ainsi, une interaction entre le Ca2 +, DA(cyt) et alpha-synucl&eacute;ine pourrait expliquer la sensibilit&eacute; des neurones de SN dans PD, sugg&eacute;rant de multiples cibles th&eacute;rapeutiques.

Corr&eacute;lation entre la dopamine cytosolique, calcium et alpha-synucl&eacute;ine cause la mort s&eacute;lective des neurones de la substantia nigra.

Die Grundlage f&uuml;r die selektive Tod von spezifischen neuronalen Populationen in Neurodegenerative Krankheiten bleibt unklar. Parkinson-Krankheit (PD) ist ein Synucleinopathy zeichnet sich durch eine bevorzugte Verlust der dopaminergen Neuronen in der Substantia Nigra (SN), w&auml;hrend die Neuronen des ventralen Haubengebiet (VTA) erspart werden. Mit intrazellul&auml;ren Patch Elektrochemie Zytosolische Dopamin direkt messen (DA(cyt)) in kultivierten Mittelhirn Nervenzellen, wir best&auml;tigen, dass erh&ouml;hte DA(cyt) und seine Metaboliten neurotoxische sind und genetische und pharmakologische Interventionen, die DA(cyt) verringern Nervenschutz bieten. DOPA erh&ouml;hte DA(cyt) im SN Neuronen Ebenen 2 und 3 8-fach h&ouml;her als im VTA Neuronen, eine Antwort auf Dihydropyridin-Sensitive Ca2 + Kan&auml;le, was erh&ouml;hte Anf&auml;lligkeit von SN-Neuronen auf L-DOPA-induzierte Neurotoxizit&auml;t angewiesen. Da(cyt) wurde von Alpha-Synuclein l&ouml;schen, nicht ge&auml;ndert, obwohl dopaminergen Neuronen fehlt Alpha-Synuclein zu L-DOPA-induzierte Zelltod resistent waren. Somit kann eine Interaktion zwischen Ca2 +, DA(cyt) und Alpha-Synuclein die Empf&auml;nglichkeit von SN Neuronen in PD, schl&auml;gt mehrere therapeutische Ziele zugrunde liegen.

Interplay zwischen Zytosolischer Dopamin, Kalzium und Alpha-Synuclein Ursachen selektive Tod von Neuronen der Substantia Nigra.

La base per la morte selettiva di specifiche popolazioni neuronali in malattie neurodegenerative rimane poco chiara. Malattia di Parkinson (MdP) &egrave; un synucleinopathy caratterizzato da una perdita preferenziale di Neuroni dopaminergici nella substantia nigra (SN), mentre i neuroni dell&#39;area tegmentale ventrale (VTA) sono risparmiati. Utilizzando elettrochimica intracellulare patch per misurare direttamente la dopamina citosolica (DA(cyt)) in neuroni coltivati mesencefalo, confermiamo che DA(cyt) elevati e dei suoi metaboliti sono neurotossici e che gli interventi genetici e farmacologici che diminuiscono DA(cyt) forniscano neuroprotezione. L-dopa aumentato DA(cyt) in neuroni SN a livelli 2 - a 3 volte superiore nei neuroni VTA, una risposta dipendente su canali Ca2 + diidropiridinico-sensibili, con conseguente maggiore suscettibilit&agrave; dei neuroni SN di neurotossicit&agrave; indotta L-DOPA. DA(CYT) non &egrave; stata alterata da alfa-sinucleina eliminazione, nonostante i neuroni dopaminergici privo di alfa-sinucleina erano resistenti alla morte cellulare indotta L-DOPA. Cos&igrave;, un&#39;interazione tra Ca2 +, DA(cyt) e alfa-sinucleina pu&ograve; essere alla base della suscettibilit&agrave; dei neuroni SN nel PD, suggerendo pi&ugrave; bersagli terapeutici.

Interplay tra citosolica dopamina, calcio e alfa-sinucleina cause morte selettiva dei neuroni della substantia nigra.

&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x6B7B;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8179;&#x5074;&#x88AB;&#x84CB;&#x91CE; (VTA) &#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x514D;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x30D1;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30BD;&#x30F3;&#x75C5; (PD) (SN) &#x306E;&#x4E2D;&#x8133;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x512A;&#x9047;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B; synucleinopathy &#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x3092;&#x76F4;&#x63A5;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; (DA(cyt)) &#x57F9;&#x990A;&#x4E2D;&#x8133;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x6607;&#x683C;&#x3057;&#x305F; DA(cyt) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7523;&#x7269;&#x304C;&#x795E;&#x7D4C;&#x6BD2;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3068; DA(cyt) &#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x4ECB;&#x5165;&#x304C;&#x795E;&#x7D4C;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;L-DOPA &#x306E; DA(cyt) SN &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; 2-3 &#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0; VTA &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x5FDC;&#x7B54; SN &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x611F;&#x53D7;&#x6027; L DOPA &#x8A98;&#x767A;&#x795E;&#x7D4C;&#x6BD2;&#x6027;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x611F;&#x53D7;&#x6027; ca 2 + &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x9AD8;&#x3044;&#x3002;&Alpha;-&#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3; L DOPA &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x306B;&#x62B5;&#x6297;&#x529B;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C; DA(cyt) &alpha;-&#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;ca 2 +&#x3001;DA(cyt) &#x3068; &alpha;-&#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E0A;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x793A;&#x5506; PD &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; SN &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068; &alpha;-&#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x9ED2;&#x8CEA;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x6B7B;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD2B9;&#xC815; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC778;&#xAD6C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xC900;&#xC774; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD30C; &#xD0A8; &#xC2A8; &#xBCD1; (PD) &#xBCF5; &#xBD80; tegmental &#xC601;&#xC5ED; (VTA)&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xAD6C;&#xD574; &#xC900; &#xBC18;&#xBA74; synucleinopathy &#xC6B0;&#xB300; dopaminergic &#xC2E0;&#xACBD; substantia nigra (SN)&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD328;&#xCE58; &#xC804;&#xAE30;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; cytosolic &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC;&#xC744; &#xC9C1;&#xC811; &#xCE21;&#xC815; (&#xAD50;&#xC591;&#xB41C; midbrain &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; DA(cyt)), &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD655;&#xC778; &#xB192;&#xC740; da(cyt)&#xACFC; &#xADF8; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C;&#xC740; &#xC2E0;&#xACBD; DA(cyt) &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC0F; &#xC57D;&#xBB3C; &#xAC1C;&#xC785; neuroprotection &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. L-DOPA&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; DA(cyt) &#xB808;&#xBCA8; 2-&#xC5D0; 3 &#xBC30;&#xB97C; SN &#xB274;&#xB7F0; VTA &#xB274;&#xB7F0;, &#xC751;&#xB2F5; L DOPA &#xC720;&#xB3C4; neurotoxicity SN &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xD070; &#xBBFC;&#xAC10;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; dihydropyridine &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; Ca2 + &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB192;&#xC740;. DA(cyt) dopaminergic &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xC54C;&#xD30C;-synuclein L DOPA &#xC720;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D; &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC54C;&#xD30C; synuclein &#xC0AD;&#xC81C; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Ca2 +, DA(cyt), &#xBC0F; &#xC54C;&#xD30C;-synuclein &#xC0AC;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC774; PD, &#xC5EC;&#xB7EC; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; SN &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBBFC;&#xAC10;&#xC131;&#xC744; &#xAE30;&#xCD08; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Interplay cytosolic &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC;, &#xCE7C;&#xC298;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC54C;&#xD30C; synuclein &#xC6D0;&#xC778; substantia nigra &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC8FD;&#xC74C; &#xC0AC;&#xC774;.

La base para la muerte selectiva de poblaciones neuronales espec&iacute;ficas en enfermedades neurodegenerativas sigue siendo confusa. Enfermedad de Parkinson (EP) es una sinucleinopat&iacute;a caracterizada por una p&eacute;rdida preferente de las neuronas dopamin&eacute;rgicas en la sustancia negra (SN), mientras que se conservan las neuronas del &aacute;rea tegmental ventral (VTA). Usando electroqu&iacute;mica parche intracelular para medir directamente la dopamina citos&oacute;lica (DA(cyt)) en las neuronas cultivadas del midbrain, confirmamos que DA(cyt) elevada y sus metabolitos son neurot&oacute;xicos y que las intervenciones farmacol&oacute;gicas y gen&eacute;ticas que disminuyen DA(cyt) proporcionan neuroprotecci&oacute;n. L-dopa aumentado DA(cyt) en las neuronas del SN a niveles de 2 a 3 veces mayor que en neuronas VTA, una respuesta dependiente de canales Ca2 + dihydropyridine-sensible, resultando en una mayor susceptibilidad de las neuronas del SN a la neurotoxicidad inducida por L-DOPA. DA(CyT) no fue alterada por la eliminaci&oacute;n de la alfa-sinucle&iacute;na, aunque las neuronas dopamin&eacute;rgicas que carece de alfa-sinucle&iacute;na eran resistentes a la muerte celular inducida por L-DOPA. Por lo tanto, una interacci&oacute;n entre el Ca2 +, DA(cyt) y alfa-sinucle&iacute;na puede subyacer a la susceptibilidad de las neuronas del SN en la EP, sugiriendo m&uacute;ltiples dianas terap&eacute;uticas.

Interacci&oacute;n entre dopamina citos&oacute;lica, calcio y alfa-sinucle&iacute;na causas muerte selectiva de las neuronas de la sustancia negra.

&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4F20;&#x8F93;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x878D;&#x5408;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x89C2;&#x5BDF;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x5438;&#x6536;&#x548C;&#x91CA;&#x653E;&#x4ECE;&#x5355;&#x4E2A;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x76F4;&#x63A5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E3A;&#x57FA;&#x677F;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5355;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x8367;&#x5149;&#x5047;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x7EB9;&#x72B6;&#x4F53;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x53D6;&#x5F97;&#x82E5;&#x5E72;&#x610F;&#x89C1;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x91CA;&#x653E;&#x6BCF;&#x523A;&#x6FC0;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x7A81;&#x89E6;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x7684;&#x5206;&#x6570;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x523A;&#x6FC0;&#x9891;&#x7387;&#x3002;&#x52A8;&#x529B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&quot;&#x4FDD;&#x7559;&quot;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x4EBA;&#x53E3;&#x662F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x89C2;&#x5BDF;&#x4E0D;&#x5230;&#x3002;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x9891;&#x7387;&#x7684;&#x975E;&#x5747;&#x8D28;&#x6027;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x7801;&#x5934;&#x900F;&#x9732;&#x8FD9;&#x662F;&#x90E8;&#x5206;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E; D2 &#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x9891;&#x7387;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x9009;&#x62E9;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x8367;&#x5149;&#x5047;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x91CA;&#x653E;&#x4ECE;&#x5355;&#x4E2A;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x3002;

The nervous system transmits signals between neurons via neurotransmitter release during synaptic vesicle fusion. In order to observe neurotransmitter uptake and release from individual presynaptic terminals directly, we designed fluorescent false neurotransmitters as substrates for the synaptic vesicle monoamine transporter. Using these probes to image dopamine release in the striatum, we made several observations pertinent to synaptic plasticity. We found that the fraction of synaptic vesicles releasing neurotransmitter per stimulus was dependent on the stimulus frequency. A kinetically distinct "reserve" synaptic vesicle population was not observed under these experimental conditions. A frequency-dependent heterogeneity of presynaptic terminals was revealed that was dependent in part on D2 dopamine receptors, indicating a mechanism for frequency-dependent coding of presynaptic selection.

Fluorescent false neurotransmitters visualize dopamine release from individual presynaptic terminals.

Le syst&#xE8;me nerveux transmet des signaux entre les neurones via la lib&#xE9;ration de neurotransmetteurs lors de la fusion des v&#xE9;sicules synaptiques. Afin d&#x26;#39;observer l&#x26;#39;absorption et la lib&#xE9;ration de neurotransmetteurs individuels terminaisons pr&#xE9;synaptiques directement, nous avons con&#xE7;u fluorescentes faux neurotransmetteurs comme substrats pour le transporteur de la v&#xE9;sicule synaptique monoamine. L&#x26;#39;utilisation de ces sondes pour la lib&#xE9;ration de dopamine dans le striatum l&#x26;#39;image, nous avons fait plusieurs observations pertinentes &#xE0; la plasticit&#xE9; synaptique. Nous avons constat&#xE9; que la fraction de v&#xE9;sicules synaptiques lib&#xE9;rant des neurotransmetteurs par stimulus &#xE9;tait d&#xE9;pendante de la fr&#xE9;quence du stimulus. Un cin&#xE9;tiquement distinctes &#xAB;r&#xE9;serve&#xBB; de la population des v&#xE9;sicules synaptiques n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9; dans ces conditions exp&#xE9;rimentales. Une h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE9;n&#xE9;it&#xE9; d&#xE9;pend de la fr&#xE9;quence des terminaisons pr&#xE9;synaptiques a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que d&#xE9;pendait en partie sur les r&#xE9;cepteurs dopaminergiques D2, indiquant un m&#xE9;canisme de codage d&#xE9;pendant de la fr&#xE9;quence de s&#xE9;lection pr&#xE9;synaptique.

Fluorescentes faux neurotransmetteurs Visualisez la lib&#xE9;ration de dopamine &#xE0; partir individuels terminaisons pr&#xE9;synaptiques

Das Nervensystem &uuml;bertr&auml;gt Signale zwischen Neuronen &uuml;ber Neurotransmitter-Freisetzung w&auml;hrend synaptische Vesikel Verschmelzung. Um Neurotransmitter Aufnahme zu beobachten und Pressemitteilung vom einzelnen pr&auml;synaptischen Klemmen direkt, gestalteten wir fluoreszierende falsche Neurotransmitter als Substrate f&uuml;r die synaptische Vesikel Monoamin-Transporter. Verwenden diese Pr&uuml;fpunkte auf Bild-Dopamin-Release im Striatum, haben wir mehrere Beobachtungen, die synaptische Plastizit&auml;t. Wir fanden, dass der Anteil der synaptische Vesikel, die Freigabe Neurotransmitter pro Impuls die Impuls-Frequenz abh&auml;ngig war. Kinetisch unterschiedliche &quot;Reservieren&quot; synaptische Vesikel Einwohner wurde unter diesen Versuchsbedingungen nicht beobachtet. Eine frequenzabh&auml;ngige Heterogenit&auml;t der pr&auml;synaptischen Terminals wurde aufgedeckt, dass D2-Dopamin-Rezeptoren, angibt, einen Mechanismus f&uuml;r die frequenzabh&auml;ngige Kodierung der pr&auml;synaptischen Auswahl teilweise abh&auml;ngig war.

Fluoreszierende falsche Neurotransmitter Dopamin-Freisetzung aus einzelnen pr&auml;synaptischen Klemmen zu visualisieren.

Il sistema nervoso trasmette segnali tra neuroni tramite rilascio di neurotrasmettitore durante la fusione della vescicola sinaptica. Al fine di osservare assorbimento del neurotrasmettitore e rilasciare direttamente dai singoli terminali presinaptiche, abbiamo progettato fluorescenti falsi neurotrasmettitori come substrati per il trasportatore di monoamine Vescicola sinaptica. Usando queste sonde a immagine rilascio di dopamina nello striato, abbiamo fatto diverse osservazioni pertinenti a sinaptico plasticit&agrave;. Abbiamo trovato che la frazione di vescicole sinaptiche rilasciando il neurotrasmettitore per stimolo era dipende la frequenza di stimolo. Una popolazione di Vescicola sinaptica cineticamente distinti &quot;riserva&quot; non &egrave; stata osservata in queste condizioni sperimentali. Un&#39;eterogeneit&agrave; dipendente dalla frequenza dei terminali presinaptiche &egrave; stata rivelata che era dipendente in parte su ricevitori della dopamina D2, che indica un meccanismo per la codifica di frequenza-dipendente della selezione presinaptica.

Fluorescenti falsi neurotrasmettitori visualizzare rilascio di dopamina dai singoli terminali presinaptiche.

&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x9001;&#x4FE1;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x76F4;&#x63A5;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x7D42;&#x672B;&#x304B;&#x3089;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3068;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x86CD;&#x5149;&#x507D;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7DDA;&#x6761;&#x4F53;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x523A;&#x6FC0;&#x3054;&#x3068;&#x306B;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x3092;&#x653E;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x306F;&#x523A;&#x6FC0;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B; &#x26;quot;&#x4E88;&#x7D04;&#x26;quot;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x7D42;&#x672B;&#x306E;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x4E0D;&#x5747;&#x4E00;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306E;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;D2&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#x86CD;&#x5149;&#x507D;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x7D42;&#x672B;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;

&#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xD4E8;&#xC804; &#xC911; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC804;&#xC1A1;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C1;&#xC811; &#xAC1C;&#xBCC4; presynaptic &#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD9C;&#xC2DC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xBAA8;&#xB178; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xD310;&#xC73C;&#xB85C; &#xD615;&#xAD11; &#xC798;&#xBABB; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAD00;&#xCE21; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC5D0;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5EC;&#xAC00;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xC790;&#xADF9; &#xB2F9; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC758; &#xBD84;&#xC218;&#xB294; &#xC790;&#xADF9; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC9C0; &#xBCC4;&#xAC1C; &quot;&#xC608;&#xC57D;&quot; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Presynaptic &#xB2E8;&#xB9D0;&#xAE30;&#xC758; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xC885;&#xC18D; &#xC774;&#xC885; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xC885;&#xC18D; presynaptic &#xC120;&#xD0DD;&#xC758; &#xCF54;&#xB529;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; D2 &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC758;&#xC874; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xD600;&#xC84C;&#xB2E4;.

&#xD615;&#xAD11; &#xC798;&#xBABB; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xBC29;&#xCD9C; &#xAC1C;&#xBCC4; presynaptic &#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;.

El sistema nervioso transmite se&#xF1;ales entre las neuronas a trav&#xE9;s de la liberaci&#xF3;n de neurotransmisores durante la fusi&#xF3;n de ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas. Con el fin de observar la captaci&#xF3;n de neurotransmisores y liberaci&#xF3;n de terminales presin&#xE1;pticas individuales directamente, hemos dise&#xF1;ado fluorescentes falsos neurotransmisores como sustratos para el transportador de la ves&#xED;cula sin&#xE1;ptica monoamina. El uso de estas sondas a la liberaci&#xF3;n de la imagen de la dopamina en el estriado, que hizo varias observaciones pertinentes a la plasticidad sin&#xE1;ptica. Hemos encontrado que la fracci&#xF3;n de ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas liberaci&#xF3;n de neurotransmisores por est&#xED;mulo era dependiente de la frecuencia del est&#xED;mulo. Una cin&#xE9;tica distinta &#x26;quot;reserva&#x26;quot; de la poblaci&#xF3;n de ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas no se observ&#xF3; en estas condiciones experimentales. Una heterogeneidad dependiente de la frecuencia de los terminales presin&#xE1;pticos se revel&#xF3; que era dependiente en parte de los receptores de dopamina D2, lo que indica un mecanismo para dependientes de la frecuencia de codificaci&#xF3;n de selecci&#xF3;n presin&#xE1;ptica.

Eugene V. Mosharov

Departments of Neurology

Columbia University

Dopamine Release at Individual Presynaptic Terminals Visualized with FFNs

Eugene V. Mosharov

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Departments of Neurology

Columbia University

Dopamine Release at Individual Presynaptic Terminals Visualized with FFNs

Departments of Neurology