fluorescence-activated-cell-sorting-of-plant-protoplasts

Fluorescence Activated Cell Sorting of Plant Protoplasts

High-resolution, cell type-specific analysis of gene expression greatly enhances understanding of developmental regulation and responses to environmental ...

New York University

&#x9709;&#x75C5; (Cf)-4 &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x756A;&#x8304;&#x8D4B;&#x4E88;&#x6297;&#x771F;&#x83CC; C.&#x9709;&#x83CC;&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684;&#x65E0;&#x6BD2; &#xFF08;Avr&#xFF09; 4 &#x7801;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x5982;&#x4F55;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x7684;&#x6240;&#x77E5;&#x751A;&#x5C11;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8868;&#x660E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8BC6;&#x522B;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x3001; &#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (MAPK) &#x548C;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (CDPK) &#x7B49;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684;&#x8BAF;&#x53F7;&#x7EC4;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x8102;&#x8D28;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4FE1;&#x4F7F;&#x78F7;&#x8102;&#x9178; (PA) &#x662F; AVR4/Cf-4 &#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x51E0;&#x5206;&#x949F;&#x5185;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8868;&#x793A;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6A21;&#x578B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x756A;&#x8304; Cf-4-&#x8010;&#x836F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x70DF;&#x8349;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x78F7;&#x8102;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86; pre-labelling &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C; &#xFF08;32)P(i) &#x548C; AVR4 &#x62CC;&#x79CD;&#x540E;&#x6311;&#x6218;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x542B;&#x91CF;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;(32) P PA&#xFF0C;&#x8FDE;&#x540C;&#x5176;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x7518;&#x6CB9;&#x4E8C;&#x916F;&#x7126;&#x78F7;&#x9178; (DGPP) &#x4E2D;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;AVR4 &#x589E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x5DF4;&#x52D2;&#x65AF;&#x5766;&#x6743;&#x529B;&#x673A;&#x6784;&#x548C; DGPP &#x5728; Cf-4(+)-&#xFF0C;&#x65F6;&#x95F4;&#x548C;&#x5242;&#x91CF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x800C;&#x975E;&#x5339;&#x914D;&#x8BF1;&#x5BFC; AVR9 &#x6CA1;&#x6709;&#x89E6;&#x53D1;&#x4EFB;&#x4F55;&#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x4E00;&#x822C;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7531;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x89E6;&#x53D1; PA &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF1A; &#x901A;&#x8FC7;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; D (PLD)&#xFF0C;&#x800C;&#x76F4;&#x63A5;&#x901A;&#x8FC7;&#x6C34;&#x89E3;&#x7ED3;&#x6784;&#x78F7;&#x8102;&#x7B49;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1; &#xFF08;PC&#xFF09; &#x751F;&#x6210;&#x5DF4;&#x52D2;&#x65AF;&#x5766;&#x6743;&#x529B;&#x673A;&#x6784;&#xFF0C;&#x6216;&#x901A;&#x8FC7; PLC&#xFF0C;&#x5B83;&#x5728;&#x751F;&#x6210;&#x7518;&#x6CB9;&#x4E8C;&#x916F; (DAG)&#xFF0C;&#x540E;&#x6765;&#x7531;&#x8FBE;&#x683C; &middot; &#x54C8;&#x6FC0;&#x9176; (DGK) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5411;&#x5DF4;&#x52D2;&#x65AF;&#x5766;&#x6743;&#x529B;&#x673A;&#x6784;&#x3002;&#x786E;&#x5B9A; AVR4 &#x8BF1;&#x5BFC; PA &#x6210;&#x56E0;&#xFF0C;&#x53EF;&#x7F16;&#x7A0B;&#x903B;&#x8F91;&#x5668;&#x4EF6;&#x7279;&#x5B9A; transphosphatidylation &#x6D4B;&#x5B9A;&#x548C;&#x5FAE;&#x5206; (32) P &#x6807;&#x7B7E;&#x534F;&#x8BAE;&#x5728;&#x88AB;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x6E05;&#x695A;&#x5730;&#x8868;&#x660E;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x5DF4;&#x52D2;&#x65AF;&#x5766;&#x6743;&#x529B;&#x673A;&#x6784;&#x4EA7;&#x751F;&#x901A;&#x8FC7;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x8FBE;&#x683C; &middot; &#x54C8;&#x3002;&#x65B0;&#x9709;&#x7D20;&#x548C; U73122&#xFF0C;PLC &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242; AVR4 &#x8BF1;&#x5BFC; PA &#x79EF;&#x7D2F;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x6697;&#x793A; DGK &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x7531;&#x4E8E; PLC &#x6D3B;&#x52A8;&#x589E;&#x52A0;&#x751F;&#x4EA7;&#x8FBE;&#x683C; &middot; &#x54C8;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BC1;&#x636E; PLC &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5DF4;&#x52D2;&#x65AF;&#x5766;&#x6743;&#x529B;&#x673A;&#x6784;&#x751F;&#x4EA7;&#x4E2D;&#x53EF;&#x4EE5;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x89E6;&#x53D1;&#x54CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982; AVR4 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x7206;&#x88C2;&#x3002;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;PLC &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6291;&#x5236;&#x6C27;&#x5316;&#x6C34;&#x7BA1;&#x7206;&#x88C2;&#x548C;&#x5DF4;&#x52D2;&#x65AF;&#x5766;&#x6743;&#x529B;&#x673A;&#x6784;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x65F6;, &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6C27;&#x5316;&#x7206;&#x88C2;&#x3002;

&#x78F7;&#x8102;&#x9178;&#x79EF;&#x7D2F;&#x662F; Cf-4/Avr4 &#x4E92;&#x52A8;&#x4E2D;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

The Cladosporium fulvum (Cf)-4 gene of tomato confers resistance to the fungus C. fulvum, expressing the corresponding avirulence (Avr)4 gene, which codes for an elicitor protein. Little is known about how such mechanisms work, but previous studies have shown that elicitor recognition activates Ca(2+) signalling and protein kinases, such as mitogen-activated protein kinase (MAPK) and calcium-dependent protein kinase (CDPK). Here, we provide evidence that a new signalling component, the lipid second messenger phosphatidic acid (PA), is produced within a few minutes of AVR4/Cf-4 interaction. Using transgenic tobacco cells expressing the tomato Cf-4-resistance gene as a model system, phospholipid signalling pathways were studied by pre-labelling the cells with (32)P(i) and assaying for the formation of lipid signals after challenge with the fungal elicitor AVR4. A dramatic rapid response was an increase in (32)P-PA, together with its metabolic product diacylglycerol pyrophosphate (DGPP). AVR4 increased the levels of PA and DGPP in a Cf-4(+)-, time- and dose-dependent manner, while the non-matching elicitor AVR9 did not trigger any response. In general, PA signalling can be triggered by two different pathways: via phospholipase D (PLD), which generates PA directly by hydrolysing structural phospholipids like phosphatidylcholine (PC), or via PLC, which generates diacylglycerol (DAG) that is subsequently phosphorylated to PA by DAG kinase (DGK). To determine the origin of the AVR4-induced PA formation, a PLD-specific transphosphatidylation assay and a differential (32)P-labelling protocol were used. The results clearly demonstrated that most PA was produced via the phosphorylation of DAG. Neomycin and U73122, inhibitors of PLC activity, inhibited AVR4-induced PA accumulation, suggesting that the increase in DGK activity was because of increased PLC activity producing DAG. Lastly, evidence is provided that PLC signalling and, in particular, PA production could play a role in triggering responses, such as the AVR4-induced oxidative burst. For example, PLC inhibitors inhibited the oxidative burst, and when PA was added to cells, an oxidative burst was induced.

Phosphatidic acid accumulation is an early response in the Cf-4/Avr4 interaction.

Le Cladosporium fulvum (Cf) -4 g&egrave;nes de tomate conf&egrave;re une r&eacute;sistance au champignon C. fulvum, exprimant l&#39;avirulence correspondant (Avr) 4 g&egrave;nes, codant pour une prot&eacute;ine &eacute;liciteur. Peu est connu sur le fonctionnement de ces m&eacute;canismes, mais des &eacute;tudes ant&eacute;rieures ont montr&eacute; que la reconnaissance de l&#39;&eacute;liciteur active heterodimeric signalisation et prot&eacute;ines kinases, telles que mitogen-activated protein kinase (MAPK) et calcium-d&eacute;pendante prot&eacute;ine kinase (CDPK). Ici, nous d&eacute;montrons qu&#39;un nouveau composant de signalisation, le lipides deuxi&egrave;me messager acide phosphatidique (PA), est produit &agrave; quelques minutes de l&#39;interaction AVR4/Cf-4. &Agrave; l&#39;aide de cellules de tabac transg&eacute;niques exprimant le g&egrave;ne de r&eacute;sistance Cf-4 tomates comme syst&egrave;me mod&egrave;le, voies de signalisation de phospholipides ont &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;s par pre-labelling les cellules (32)P(i) et dosage de la formation des signaux de lipides apr&egrave;s la confrontation avec l&#39;&eacute;liciteur fongique AVR4. Une r&eacute;ponse rapide dramatique a augment&eacute; &agrave; P (32)-PA, ainsi que le pyrophosphate de diacylglyc&eacute;rol produit m&eacute;tabolique (DGPP). AVR4 augmente les niveaux de PA et de la malnutrition dans un Cf-4(+)-, fa&ccedil;on d&eacute;pendante de la dose et du temps, tandis que l&#39;&eacute;liciteur sans correspondance AVR9 non-d&eacute;clenchement de toute r&eacute;ponse. En g&eacute;n&eacute;ral, la PA de signalisation peut &ecirc;tre d&eacute;clench&eacute; par deux voies diff&eacute;rentes : par la phospholipase D (PLD), qui g&eacute;n&egrave;re PA directement par hydrolyse des phospholipides structurelles comme la phosphatidylcholine (PC), ou par PLC, qui g&eacute;n&egrave;re le diacylglyc&eacute;rol (DAG) qui DAG kinase (DGK) est phosphoryler ult&eacute;rieurement &agrave; PA. Pour d&eacute;terminer l&#39;origine de la formation induite par les AVR4 PA, une transphosphatidylation sp&eacute;cifique au PLD dosage et un protocole diff&eacute;rentiel de P-&eacute;tiquetage (32) ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s. Les r&eacute;sultats ont clairement d&eacute;montrent que la plupart PA a &eacute;t&eacute; produit par la phosphorylation de DAG. N&eacute;omycine et U73122, inhibiteurs de l&#39;activit&eacute; PLC, inhibent l&#39;accumulation induite par les AVR4 PA, ce qui sugg&egrave;re que l&#39;augmentation de l&#39;activit&eacute; DGK &eacute;tait en raison de la recrudescence PLC production DAG. Enfin, la preuve est apport&eacute;e que le PLC et de signalisation, en particulier, production de PA pourrait jouer un r&ocirc;le dans le d&eacute;clenchement des r&eacute;ponses, comme la flamb&eacute;e oxydative induite par les AVR4. Par exemple, inhibiteurs de la PLC a inhib&eacute; l&#39;oxydation subite, et lorsque le PA a &eacute;t&eacute; ajout&eacute; aux cellules, un burst oxydatif a &eacute;t&eacute; induite.

L&#39;accumulation d&#39;acide phosphatidique est une intervention pr&eacute;coce dans l&#39;interaction Cf-4/Avr4.

Phosphatids&#xE4;ure Ansammlung ist eine fr&#xFC;he Reaktion im Cf-4/Avr4 Interaktion.

Il Cladosporium fulvum (Cf) -4 gene di pomodoro conferisce resistenza per il fungo C. fulvum, esprimendo il avirulence corrispondente (Avr) 4 gene, che codifica per una proteina di elicitori. Poco si sa circa il funzionamento di tali meccanismi, ma studi precedenti hanno mostrato che il riconoscimento di elicitori attiva Ca(2+) segnalazione e proteina chinasi, come chinasi di proteina mitogene-attivata (MAPK) e la chinasi di proteina calcio-dipendente (CDPK). Qui, noi fornire la prova che un nuovo componente segnalamento, i lipidi secondo messaggero fosfatidico acido (PA), &egrave; prodotto in pochi minuti di interazione AVR4/Cf-4. Utilizzando cellule di tabacco transgenici che esprimono il gene della Cf-4-resistenza di pomodoro come sistema di modello, segnalazione percorsi fosfolipide furono studiati da pre-labelling le cellule con (32)P(i) e dosaggio per la formazione dei lipidi segnali dopo la sfida con l&#39;elicitori fungine AVR4. Una risposta rapida drammatica &egrave; stato un aumento (32) P-PA, insieme al relativo pirofosfato di diacylglycerol prodotto metabolico (DGPP). AVR4 aumentato i livelli di PA e DGPP in un Cf-4(+)-, modo tempo - e dose-dipendente, mentre l&#39;elicitori non corrispondenti AVR9 non ha fatto innescare qualsiasi risposta. In generale, PA segnalazione pu&ograve; essere scatenato da due diversi percorsi: via fosfolipasi D (PLD), che genera PA direttamente da hydrolysing fosfolipidi strutturali come la fosfatidilcolina (PC), o tramite PLC, il quale genera diacilglicerolo (DAG) che successivamente viene fosforilato a PA da chinasi DAG (DGK). Per determinare l&#39;origine della formazione PA AVR4-indotta, un transphosphatidylation PLD-specifici sono stati utilizzati dosaggio e un differenziale protocollo P-etichettatura (32). I risultati hanno dimostrato chiaramente che la maggior parte dei PA &egrave; stato prodotto tramite la fosforilazione del DAG. Neomicina e U73122, gli inibitori dell&#39;attivit&agrave; PLC, inibito accumulo PA AVR4-indotta, suggerendo che l&#39;aumento dell&#39;attivit&agrave; DGK era a causa della maggiore attivit&agrave; PLC producendo DAG. Infine, viene fornite prove che PLC segnalazione e, in particolare, produzione di PA potrebbe svolgere un ruolo nell&#39;innescare le risposte, come ad esempio il burst ossidativo AVR4-indotta. Ad esempio, inibitori PLC inibiscono il burst ossidativo, e quando la PA &egrave; stata aggiunta alle cellule, un burst ossidativo &egrave; stata indotta.

Accumulo di acido fosfatidico &egrave; una prima risposta nell&#39;interazione Cf-4/Avr4.

&#x304B;&#x3073; (Cf)-4 &#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x975E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027; (Avr) 4 &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x771F;&#x83CC; C. fulvum &#x3078;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x3092;&#x4ED8;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A8;&#x30EA;&#x30B7;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3002;&#x5C11;&#x3057;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x3057;&#x304F;&#x307F;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30A8;&#x30EA;&#x30B7;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;MAPK&#xFF09; &#x3084;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (CDPK) &#x306A;&#x3069;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x8102;&#x8CEA; 2 &#x756A;&#x76EE;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC; &#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x9178; (PA)&#x3001;AVR4/Cf-4 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6570;&#x5206;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;&#x751F;&#x7523;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8; Cf 4 &#x8010;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x7CFB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D4C;&#x8DEF; (32)P(i) &#x3068;&#x30C1;&#x30E3;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x5F8C;&#x3092;&#x30A8;&#x30EA;&#x30B7;&#x30BF;&#x30FC; AVR4 &#x8102;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3002; &#x30BB;&#x30EB;&#x306A;&#x30D7;&#x30EC;&#x30E9;&#x30D9; &#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x30B8;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB; &#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178; (DGPP) (32) P PA &#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x975E;&#x6574;&#x5408;&#x30A8;&#x30EA;&#x30B7;&#x30BF;&#x30FC; AVR9 &#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C; AVR4 &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E; PA &#x3068; DGPP&#x3001;Cf-4(+)-&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x3068;&#x7528;&#x91CF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3002;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; PA 2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3067;&#x304D;&#x308B;: &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; D &#xFF08;PA &#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3; (PC) &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x3092;&#x76F4;&#x63A5;&#x6EB6;&#x89E3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3001;PLD&#xFF09;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F; PLC &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x304C;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C; PA &#x306B; DAG &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (DGK) &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30B8;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB; &#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; (DAG) &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AVR4 &#x8A98;&#x8D77; PA &#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3001;PLD &#x56FA;&#x6709;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x8D77;&#x6E90;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3068; P &#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x5DEE;&#x52D5; (32) &#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x304C;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069; PA DAG &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30CD;&#x30AA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073; PLC &#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; U73122 DGK &#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x304C; DAG &#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x5897;&#x52A0;&#x306E; PLC &#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506; AVR4 &#x8A98;&#x8D77; PA &#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;PLC &#x4FE1;&#x53F7;&#x3068;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x3001;PA &#x751F;&#x7523;&#x3067; AVR4 &#x8A98;&#x8D77;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3068;&#x3048;&#x3070;&#x3001;PLC &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3001;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;PA &#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3001;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x9178;&#x84C4;&#x7A4D; Cf-4/Avr4 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x521D;&#x671F;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Cladosporium fulvum (Cf)-4 &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218; &#xC5EC; &#xADE0; C. fulvum, &#xD574;&#xB2F9; avirulence (Avr) 4 &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC800;&#xD56D; elicitor &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xCF54;&#xB4DC; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;. &#xAC70;&#xC758; &#xAC19;&#xC740; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC774; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C; elicitor &#xC778;&#xC2DD; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (MAPK) &#xB4F1;&#xACFC; &#xCE7C;&#xC298; &#xC758;&#xC874;&#xD615; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (CDPK) Ca(2+) &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC2E0;&#xD638; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;, &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800; phosphatidic &#xC0B0; (PA), AVR4/Cf-4 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xBA87; &#xBD84; &#xC774;&#xB0B4;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;. &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; Cf 4 &#xC800;&#xD56D; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB2F4;&#xBC30; &#xC140;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; (32)P(i) &#xBC0F; &#xC774;&#xD6C4; &#xACFC;&#xC81C; &#xADE0; elicitor avr4&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC2DC; &#xC140; pre-labelling&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xB300;&#xC751; (32) P-PA&#xC758; &#xB300;&#xC0AC; &#xC81C;&#xD488; diacylglycerol &#xC778;&#xC0B0; (DGPP) &#xD568;&#xAED8; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; elicitor AVR9 &#xC5B4;&#xB5A4; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xBC29; &#xC544; &#xC1E0; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; AVR4 PA&#xC640; Cf-4(+)-, &#xC2DC;&#xAC04; &#xBC0F; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC758;&#xC874; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; DGPP&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xD39C; &#xC2E4;&#xBC14; &#xB2C8; &#xC544; &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xACBD;&#xB85C; &#xC758;&#xD574; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;: DAG &#xB2C8; (DGK)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; PA&#xB97C; phosphorylated &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0; diacylglycerol (DAG)&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; phospholipase D (PLD), &#xD39C; &#xC2E4;&#xBC14; &#xB2C8; &#xC544; hydrolysing phosphatidylcholine (PC)&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xAD6C;&#xC870; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB610;&#xB294; PLC&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574;. PLD &#xAD00;&#xB828; transphosphatidylation AVR4 &#xC720;&#xB3C4; &#xD30C; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xCD9C;&#xCC98;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xCC28;&#xB3D9; (32) P &#xB77C;&#xBCA8; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; PA DAG&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC81C;&#xC791; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB124;&#xC624; &#xB9C8;&#xC774; &#xC2E0; &#xBC0F; U73122 &#xC800; &#xD574;&#xC81C; PLC &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC800;&#xD574; AVR4 &#xC720;&#xB3C4; PA &#xCD95;&#xC801; DGK &#xD65C;&#xB3D9; &#xC99D;&#xAC00; &#xC0DD;&#xC0B0; DAG &#xC99D;&#xAC00; PLC &#xD65C;&#xB3D9; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC548;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC99D;&#xAC70; PLC &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F;, &#xD2B9;&#xD788;, &#xD39C; &#xC2E4;&#xBC14; &#xB2C8; &#xC544; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C; AVR4 &#xC720;&#xBC1C; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC84;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xACF5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, PLC &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC800;&#xD574; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC84;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC640; &#xD39C; &#xC2E4;&#xBC14; &#xB2C8; &#xC544; &#xC140;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xB420; &#xB54C; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC84;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC720;&#xB3C4; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;.

Phosphatidic &#xC0B0; &#xC131; &#xCD95;&#xC801; Cf-4/Avr4 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD08;&#xAE30; &#xC751;&#xB2F5; &#xC774;&#xB2E4;.

El Cladosporium fulvum (Cf) -4 gen del tomate confiere resistencia al hongo C. fulvum, expresando la avirulencia correspondiente (Avr) 4 gen, que codifica para una prote&iacute;na elicitor. Poco se sabe acerca de c&oacute;mo funcionan estos mecanismos, pero estudios anteriores han demostrado que el reconocimiento elicitor activa CA se&ntilde;alizaci&oacute;n y prote&iacute;na quinasas quinasa activada por mit&oacute;geno (MAPK) como quinasa dependiente de calcio (CDPK). Aqu&iacute; proporcionamos evidencia que un nuevo componente de la se&ntilde;alizaci&oacute;n, el l&iacute;pido segundo mensajero &aacute;cido fosfat&iacute;dico (PA), se produce a pocos minutos de interacci&oacute;n AVR4/Cf-4. Utilizando c&eacute;lulas de tabaco transg&eacute;nicas que expresan el gen de Cf-4-resistencia del tomate como sistema modelo, v&iacute;as de se&ntilde;alizaci&oacute;n de fosfol&iacute;pidos fueron estudiadas por el etiquetado de las c&eacute;lulas (32)P(i) y ensayando para la formaci&oacute;n de l&iacute;pidos se&ntilde;ales despu&eacute;s del desaf&iacute;o con el fungicida elicitor AVR4. Una dram&aacute;tica respuesta r&aacute;pida fue un aumento en P-PA (32), junto con su pirofosfato de diacilglicerol producto metab&oacute;lico (DGPP). AVR4 aument&oacute; los niveles de PA y DGPP en un Cf-4(+)-, forma y dosis dependiente del tiempo, mientras que el elicitor no coincidente AVR9 no desencadenar alg&uacute;n tipo de respuesta. En general, PA se&ntilde;alizaci&oacute;n puede ser desencadenado por dos v&iacute;as diferentes: fosfolipasa D (PLD), que genera PA directamente por tal fosfol&iacute;pidos estructurales como fosfatidilcolina (PC), o mediante PLC, que genera diacilglicerol (DAG) que posteriormente es fosforilado a PA por la quinasa de DAG (DGK). Para determinar el origen de la formaci&oacute;n de PA inducida por AVR4, un transfosfatidilaci&oacute;n del PLD espec&iacute;fico se utilizaron an&aacute;lisis y un diferencial protocolo P-etiquetado (32). Los resultados demostraron claramente que la mayor&iacute;a de PA fue producido mediante la fosforilaci&oacute;n de DAG. Neomicina y U73122, inhibidores de la actividad PLC, inhiben la acumulaci&oacute;n PA inducida por AVR4, sugiriendo que el aumento en la actividad DGK era debido a la creciente actividad PLC produciendo DAG. Por &uacute;ltimo, evidencia proviene de que el PLC se&ntilde;alizaci&oacute;n y, en particular, producci&oacute;n de PA podr&iacute;a desempe&ntilde;ar un papel en el desencadenamiento de respuestas, como el estallido oxidativo inducido por AVR4. Por ejemplo, inhibidores de PLC inhibici&oacute;n el estallido oxidativo, y cuando PA se agreg&oacute; a las c&eacute;lulas, un estallido oxidativo fue inducido.

Acumulaci&oacute;n de &aacute;cido fosfat&iacute;dico es una respuesta temprana en la interacci&oacute;n de Cf-4/Avr4.

&#x78F7;&#x8102;&#x9176; D (PLD) &#x4E00;&#x76F4;&#x5728;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5404;&#x79CD;&#x5305;&#x62EC;&#x819C;&#x9000;&#x5316;&#x3001; &#x6C34;&#x75B1;&#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6240;&#x8FF0;&#x756A;&#x8304; (&#x756A;&#x8304;) PLD &#x57FA;&#x56E0;&#x5BB6;&#x65CF;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;LePLDbeta1 &#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6CBB;&#x7597;&#x771F;&#x83CC;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5B50;&#x6728;&#x805A;&#x7CD6;&#x9176;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8C03;&#x67E5;&#x6B64;&#x53EF;&#x7F16;&#x7A0B;&#x903B;&#x8F91;&#x5668;&#x4EF6;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; RNAi &#x6784;&#x9020;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x6253;&#x5012; LePLDbeta1 &#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x756A;&#x8304;&#x60AC;&#x6D6E;&#x57F9;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5C55;&#x793A;&#x6728;&#x805A;&#x7CD6;&#x9176;&#x8BF1;&#x5BFC; PLD &#x6D3B;&#x6027;&#x663E;&#x8457;&#x4E0B;&#x964D;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56DE;&#x7B54;&#x4E86;&#x6728;&#x805A;&#x7CD6;&#x9176;&#x5904;&#x7406;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x76F8;&#x79F0;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x7206;&#x88C2;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;LePLDbeta1 &#x6C89;&#x9ED8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x60AC;&#x6D6E;&#x57F9;&#x517B;&#x53D1;&#x73B0;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x591A;&#x915A;&#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x5206;&#x6CCC;&#x8F83;&#x5C11;&#x7684; &beta;-d-&#x7CD6;&#x82F7; LeXYL2 &#x5E76;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x8461;&#x7279;&#x5B9A;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7D20;&#x6291;&#x5236;&#x86CB;&#x767D; XEGIP&#x3002;&#x4F7F;&#x7528; LePLDbeta1 &#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5171;&#x7126;&#x6FC0;&#x5149;&#x626B;&#x63CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x672C;&#x571F;&#x5316;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x672A;&#x7ECF;&#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x6E38;&#x79BB;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#xFF0C;&#x800C;&#x6728;&#x805A;&#x7CD6;&#x9176;&#x5904;&#x7406;&#x8BF1;&#x5BFC; relocalization &#x4EE5;&#x54C2;&#x7B11;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x5185;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;PLDbeta &#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x75C5;&#x539F;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x529F;&#x80FD;&#x8FDB;&#x884C;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x3002;

LePLDbeta1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x60AC;&#x6D6E;&#x57F9;&#x517B;&#x756A;&#x8304; relocalization &#x6728;&#x805A;&#x7CD6;&#x9176;&#x5904;&#x7406;&#x3002;

Phospholipase D (PLD) has been implicated in various cellular processes including membrane degradation, vesicular trafficking and signal transduction. Previously, we described a PLD gene family in tomato (Lycopersicon esculentum) and showed that expression of one of these genes, LePLDbeta1, was induced by treatment with the fungal elicitor xylanase. To further investigate the function of this PLD, a gene-specific RNAi construct was used to knock down levels of LePLDbeta1 transcript in suspension-cultured tomato cells. Silenced cells exhibited a strong decrease in xylanase-induced PLD activity and responded to xylanase treatment with a disproportionate oxidative burst. Furthermore, LePLDbeta1-silenced cell-suspension cultures were found to have increased polyphenol oxidase activity, to secrete less of the beta-d-xylosidase LeXYL2 and to secrete and express more of the xyloglucan-specific endoglucanase inhibitor protein XEGIP. Using an LePLDbeta1-green fluorescent protein (GFP) fusion protein for confocal laser scanning microscopy-mediated localization studies, untreated cells displayed a cytosolic localization, whereas treatment with xylanase induced relocalization to punctuate structures within the cytosol. Possible functions for PLDbeta in plant-pathogen interactions are discussed.

LePLDbeta1 activation and relocalization in suspension-cultured tomato cells treated with xylanase.

Phospholipase D (PLD) a &eacute;t&eacute; impliqu&eacute; dans divers processus cellulaires, y compris la d&eacute;gradation de la membrane, le trafic v&eacute;siculaire et la transduction du signal. Auparavant, nous d&eacute;crit une famille de g&egrave;nes PLD chez la tomate (Lycopersicon esculentum) et a montr&eacute; que l&#39;expression de l&#39;un de ces g&egrave;nes, LePLDbeta1, a &eacute;t&eacute; induite par le traitement avec la xylanase &eacute;liciteur fongique. Afin d&#39;&eacute;tudier la fonction de cette PLD, une construction de RNAi de g&egrave;ne-sp&eacute;cifique a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour abattre des niveaux de transcription de LePLDbeta1 dans les cellules de tomates cultiv&eacute;es en suspension. R&eacute;duits au silence des cellules expos&eacute;es &agrave; une forte diminution induite par la xylanase PLD activit&eacute; et ont r&eacute;pondu au traitement de la xylanase avec un burst oxydatif disproportionn&eacute;e. En outre, les cultures en suspension cellulaire LePLDbeta1-taire se sont av&eacute;r&eacute;es ont augment&eacute; l&#39;activit&eacute; polyph&eacute;nol oxydase, s&eacute;cr&egrave;tent moins de LeXYL2 de la b&ecirc;ta-d-xylosidase et pour s&eacute;cr&eacute;ter et exprimer plus de la prot&eacute;ine inhibitrice sp&eacute;cifique xyloglucan endoglucanase XEGIP. En utilisant une prot&eacute;ine de fusion LePLDbeta1-vert green fluorescent protein (GFP) pour confocal laser localisation m&eacute;di&eacute;e par microscopie &agrave; balayage, les cellules non trait&eacute;es affichent une localisation cytosolique, tandis que le traitement par xylanase induite de relocalisation pour ponctuer les structures dans le cytosol. Les auteurs discutent les fonctions possibles pour PLDbeta dans les interactions plante-pathog&egrave;ne.

Activation de LePLDbeta1 et de relocalisation dans des cellules cultiv&eacute;es en suspension tomates traitement avec xylanase.

Phospholipase D (PLD) hat in verschiedenen zellul&auml;re Prozesse einschlie&szlig;lich Membrane Abbau, vesikul&auml;re Menschenhandel und Signaltransduktion verwickelt. Zuvor, wir beschrieben eine PLD-gen-Familie in Tomate (Lycopersicon Esculentum) und zeigte, dass die Auspr&auml;gung eines dieser Gene, LePLDbeta1, durch Behandlung mit den pilzartigen Milbe-Xylanase verursacht wurde. Um die Funktion dieser PLD weiter zu untersuchen, wurde ein Gen-spezifischen RNAi-Konstrukt verwendet, um die Ebenen der LePLDbeta1 Abschrift in Aussetzung-kultivierte Tomate Zellen niederschlagen. Zum Schweigen gebrachten Zellen einen starken R&uuml;ckgang der PLD-Aktivit&auml;t induziert durch Xylanase ausgestellt und reagierte auf Xylanase Behandlung mit einem unverh&auml;ltnism&auml;&szlig;ig hohen oxidativen platzen. Dar&uuml;ber hinaus wurden zum Schweigen gebracht, LePLDbeta1 Zellsuspension Kulturen gefunden, Polyphenol-Oxidase Aktivit&auml;t, um weniger von der Beta-d-Xylosidase-LeXYL2 absondern und sezernieren und express mehr Xyloglucan-spezifische Endoglucanase Inhibitor Protein XEGIP gestiegen. Mit einer LePLDbeta1-gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (GFP) Schmelzverfahren Protein f&uuml;r konfokale Laser-scanning-Mikroskopie-vermittelte Lokalisierung Studien, unbehandelte Zellen angezeigt eine Cytosolisches Lokalisierung, w&auml;hrend der Behandlung mit Xylanase Relokalisierung um Strukturen innerhalb der Zytosol punctuate induziert. M&ouml;gliche Funktionen f&uuml;r PLDbeta in der Pflanze-Pathogen Interaktionen werden diskutiert.

LePLDbeta1 Aktivierung und Relokalisierung in Aussetzung-kultivierte Tomate Zellen mit Xylanase behandelt.

Fosfolipasi D (PLD) &egrave; stato implicato in diversi processi cellulari, tra cui la degradazione della membrana, il traffico vescicolare e la trasduzione del segnale. In precedenza, abbiamo descritto una famiglia genica PLD in pomodoro (Lycopersicon esculentum) e ha mostrato che espressione di uno di questi geni, LePLDbeta1, &egrave; stata indotta da un trattamento con la xilanasi elicitori fungine. Per indagare ulteriormente la funzione di questa PLD, &egrave; stato utilizzato un costrutto di RNAi gene-specific per abbattere i livelli di trascrizione LePLDbeta1 in cellule di pomodoro coltivate in sospensione. Silenziato cellule esposte un forte calo nell&#39;attivit&agrave; PLD xilanasi-indotta e ha risposto al trattamento xilanasi con un burst ossidativo sproporzionato. Inoltre, culture LePLDbeta1-tacere-sospensione di cellule sono state trovate per avere aumentata attivit&agrave; ossidasi di polifenolo, a secernere meno il LeXYL2 beta-d-xylosidase e di secernere ed esprimere pi&ugrave; della proteina inibitore specifico xyloglucan endoglucanase XEGIP. Utilizzando una proteina di fusione LePLDbeta1-green fluorescent protein (GFP) per studi di microscopia-mediata localizzazione di scansione del laser confocale, le cellule non trattate visualizzata una localizzazione citosolica, considerando che il trattamento con xilanasi indotta relocalization a punteggiare le strutture all&#39;interno del citosol. Possibili funzioni per PLDbeta delle interazioni pianta-patogeno sono discussi.

LePLDbeta1 attivazione e relocalization nelle cellule di pomodoro coltivate in sospensione trattata con xilanasi.

&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; D (PLD) &#x819C;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306A;&#x3069;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x3001;PLD &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC; (&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;) &#x3067;&#x8AAC;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;LePLDbeta1 &#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x5F0F;&#x30A8;&#x30EA;&#x30B7;&#x30BF;&#x30FC; &#x30AD;&#x30B7;&#x30E9;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3053;&#x306E; PLD &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7279;&#x5B9A; RNAi &#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8; &#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x61F8;&#x6FC1;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; LePLDbeta1 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5012;&#x3059;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x6C88;&#x9ED9;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB; &#x30AD;&#x30B7;&#x30E9;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x8A98;&#x8D77; PLD &#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x5F37;&#x3044;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3001;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E9;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E0D;&#x5747;&#x8861;&#x306A;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x7B54;&#x3048;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;LePLDbeta1 &#x6C88;&#x9ED9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306F;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;-d-&#x30AD;&#x30B7;&#x30ED;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC; LeXYL2 &#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x5206;&#x6CCC;&#x3057;&#x3001;&#x30AD;&#x30B7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x56FA;&#x6709;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; XEGIP &#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x304F;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;LePLDbeta1 &#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (GFP) &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x306E;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x5C40;&#x5728;&#x8AD6;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5185;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x3060;&#x3057;&#x5C40;&#x5728;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E9;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6CBB;&#x7642;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x304C;, &#x672A;&#x51E6;&#x7406;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x690D;&#x7269;&#x30FB;&#x75C5;&#x539F;&#x83CC;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; PLDbeta &#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

LePLDbeta1 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x5C40;&#x5728;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x61F8;&#x6FC1;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E9;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3002;

&#xB9C9; &#xC800;&#xD558;, &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xB4F1; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; Phospholipase D (PLD) &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; (Lycopersicon esculentum)&#xC5D0;&#xC11C; PLD &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAC00;&#xC871;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; LePLDbeta1&#xC758; &#xC2DD; &#xADE0; elicitor xylanase&#xC640; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; PLD&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xCD94;&#xAC00; &#xC870;&#xC0AC;&#xD560; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC11C; &#xC2A4; &#xD39C; &#xC158; &#xAD50;&#xC591; &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; &#xC140;&#xC5D0; LePLDbeta1 &#xB300; &#xBCF8;&#xC744; &#xD5C8;&#xBB3C;&#xACE0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAD00;&#xB828; RNAi &#xAD6C;&#xBB38;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC785; &#xB9C9; &#xC74C;&#xB41C; &#xC140; xylanase &#xC720;&#xB3C4; PLD &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xAC15;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD55C; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC84;&#xC2A4;&#xD2B8; xylanase &#xCE58;&#xB8CC; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Lepldbeta1&#xB97C; &#xC785; &#xB9C9; &#xC74C; &#xD734;&#xB300; &#xC815;&#xC9C0; &#xBB38;&#xD654; &#xBCA0;&#xD0C0;-d-xylosidase Lexyl2&#xC758; &#xB35C; &#xBD84; &#xBE44; &#xBD84; &#xBE44; &#xD558; &#xACE0; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; xyloglucan &#xD2B9;&#xC815; endoglucanase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; XEGIP&#xC758; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xD398;&#xB180; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. Confocal &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xC911;&#xC7AC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC5F0;&#xAD6C; LePLDbeta1-&#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP) &#xC735;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xCE58;&#xB8CC; xylanase relocalization&#xB294; cytosol &#xB0B4; &#xAD6C;&#xC870; &#xC911;&#xB2E8;&#xC744; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC140; cytosolic &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xD50C;&#xB79C;&#xD2B8; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0;&#xC11C; Pldbeta&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

LePLDbeta1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; &#xC11C; &#xC2A4; &#xD39C; &#xC158; &#xAD50;&#xC591; &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; &#xC140;&#xC5D0; relocalization xylanase &#xCC98;&#xB9AC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Fosfolipasa D (PLD) se ha implicado en varios procesos celulares como la degradaci&oacute;n de la membrana, el tr&aacute;fico vesicular y la transducci&oacute;n de la se&ntilde;al. Anteriormente, describe una familia de genes PLD en tomate (Lycopersicon esculentum) y demostr&oacute; que la expresi&oacute;n de uno de estos genes, LePLDbeta1, fue inducida por tratamiento con la xilanasa elicitor hongos. Para profundizar m&aacute;s sobre la funci&oacute;n de este PLD, una construcci&oacute;n de ARNi gene-espec&iacute;fico fue utilizada para derribar a los niveles de transcripci&oacute;n de LePLDbeta1 en c&eacute;lulas de tomate cultivada de suspensi&oacute;n. C&eacute;lulas silenciadas exhibieron una fuerte disminuci&oacute;n en la actividad PLD inducida por xilanasa y respondieron al tratamiento de xilanasa con un estallido oxidativo desproporcionado. Adem&aacute;s, las culturas de la suspensi&oacute;n de c&eacute;lulas LePLDbeta1-silenciado encontradas aumentaron la actividad de polifenol oxidasa, a menos de la beta-d-xylosidase LeXYL2 y para secretar y expresar m&aacute;s de la prote&iacute;na de inhibidor espec&iacute;fico xyloglucan permitan XEGIP. Usando una prote&iacute;na de fusi&oacute;n LePLDbeta1-verde prote&iacute;na verde fluorescente (GFP) para l&aacute;ser confocal de barrido estudios mediada por microscop&iacute;a de localizaci&oacute;n, las c&eacute;lulas no tratadas muestran una localizaci&oacute;n citos&oacute;lica, Considerando que el tratamiento con xilanasa inducida por relocalizaci&oacute;n a puntuar las estructuras en el citosol. Se discuten posibles funciones para PLDbeta en las interacciones planta-pat&oacute;geno.

Activaci&oacute;n de LePLDbeta1 y relocalizaci&oacute;n en c&eacute;lulas de tomate cultivada de suspensi&oacute;n tratados con xilanasa.

&#x5FAE;&#x7BA1;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x9700;&#x8981; alphabeta &#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x901A;&#x8FC7;&#x5FAE;&#x7BA1; &alpha; &#x548C; &beta; &#x86CB;&#x767D;&#x540E;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x4FEE;&#x9970;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x6298;&#x53E0;&#x8F85;&#x52A9;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;TFCs&#xFF09; &#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x8868;&#x5F81;&#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; TFCB (AtTFCB)&#x3002;AtTFCB &#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x5668;&#x5B98;&#x3002;AtTFCB &#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x6E38;&#x79BB;&#x3002;AtTFCB &#x8D85;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5177;&#x6709;&#x66F4;&#x5C11;&#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x4E0E;&#x63A7;&#x4EF6;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x591A;&#x6A21;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x7269;&#x7406;&#x4E0E;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684; AtTFCB alpha &#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x751F;&#x6D3B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x690D;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x4E0E; &alpha; &#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;AtTFCB &#x548C;&#x53CA;&#x5176;&#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x3002;

&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x6298;&#x53E0;&#x8F85;&#x9176; B &#x4E0E; &alpha;-&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;

Microtubule biogenesis requires alphabeta tubulin dimers that are generated from alpha and beta tubulin following post-translational modification by several tubulin folding cofactors (TFCs). Here we report the isolation and characterization of Arabidopsis TFCB (AtTFCB). AtTFCB is expressed in all organs of Arabidopsis. The subcellular localization of AtTFCB is mainly cytosolic. AtTFCB-overexpressing cells have fewer microtubules compared with the controls. Multimode fluorescence resonance energy transfer (FRET) microscopy reveals a direct physical interaction of AtTFCB with alpha tubulin in living plant cells. We conclude that AtTFCB interacts with alpha tubulin in vivo and its overexpression reduces the number of microtubules.

Arabidopsis tubulin folding cofactor B interacts with alpha-tubulin in vivo.

Biogen&egrave;se des microtubules n&eacute;cessite des dim&egrave;res de tubuline alphabeta qui sont g&eacute;n&eacute;r&eacute;s &agrave; partir de tubuline alpha et b&ecirc;ta apr&egrave;s modification post-traductionnelle de la tubuline plusieurs cofacteurs (CNTS) de pliage. Nous rapportons ici l&#39;isolement et la caract&eacute;risation de l&#39;Arabidopsis TFCB (AtTFCB). AtTFCB s&#39;exprime dans tous les organes de l&#39;Arabidopsis. La localisation subcellulaire des AtTFCB est principalement cytosolique. Cellules surexprimant-AtTFCB ont moins de microtubules compar&eacute;s aux t&eacute;moins. Microscopie en fluorescence multimode r&eacute;sonance &eacute;nerg&eacute;tique transfert (FRET) r&eacute;v&egrave;le une interaction physique directe de AtTFCB avec la tubuline alpha vie cellules v&eacute;g&eacute;tales. Nous concluons que AtTFCB interagit avec la tubuline alpha in vivo et sa surexpression r&eacute;duit le nombre de microtubules.

Tubuline Arabidopsis pliage cofacteur B interagit avec alpha-tubuline in vivo.

Microtubule Biogenese erfordert Alphabeta Tubulin Dimer die Alpha- und Beta-Tubulin nach post-translationale Modifikation durch mehrere Tubulin faltende Kofaktoren (TFCs) generiert werden. Hier berichten wir die Isolierung und Charakterisierung von Arabidopsis TFCB (AtTFCB). AtTFCB dr&uuml;ckt sich in allen Organen von Arabidopsis. Die subzellulare Lokalisation der AtTFCB ist haupts&auml;chlich Zytosolische. AtTFCB-&uuml;berexprimierenden Zellen haben weniger Mikrotubuli im Vergleich mit den Steuerelementen. Multimode Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer (FRET) Mikroskopie zeigt eine direkte physikalische Wechselwirkung von AtTFCB mit alpha-Tubulin in lebenden Pflanzenzellen. Wir schlie&szlig;en, dass AtTFCB mit alpha-Tubulin in-vivo interagiert und seine &Uuml;berexpression die Anzahl der Mikrotubuli reduziert.

Arabidopsis Tubulin faltende Adjunkte B interagiert mit Alpha-Tubulin in-vivo.

Biogenesi dei microtubuli richiede dimeri di tubulina alphabeta generati da alfa e beta tubulina seguito modifica alberino-di traduzione di tubulin diversi di cofattori (TFC). Qui riportiamo l&#39;isolamento e la caratterizzazione di Arabidopsis TFCB (AtTFCB). AtTFCB &egrave; espressa in tutti gli organi di Arabidopsis. La localizzazione subcellulare di AtTFCB &egrave; prevalentemente citosolica. Le cellule con sovraesprimono relativa AtTFCB hanno confrontati con i controlli di un minor numero di microtubuli. Microscopia a fluorescenza multimodo risonanza energy transfer (FRET) rivela una diretta interazione fisica di AtTFCB con la tubulina alfa in vita cellule di piante. Concludiamo che AtTFCB interagisce con la tubulina alfa in vivo e sua sovraespressione riduce il numero dei microtubuli.

Arabidopsis tubulina pieghevole cofattore B interagisce con la Alfa-tubulina in vivo.

&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x304B;&#x3089;&#x6B21;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x4FEE;&#x98FE; &alpha; &#x3068; &beta; &#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x5F0F;&#x306E;&#x88DC;&#x56E0;&#x5B50; (TFCs) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B; alphabeta &#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3; &#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3068;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA; TFCB (AtTFCB &#x3092;) &#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AtTFCB &#x306F;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x5668;&#x5B98;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AtTFCB &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x4E0B;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3067;&#x3059;&#x3002;AtTFCB &#x904E;&#x5270;&#x30BB;&#x30EB; &#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5; (FRET) &#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x751F;&#x6D3B;&#x3068; AtTFCB &#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x690D;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002;AtTFCB &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x88DC;&#x56E0;&#x5B50; B &#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA; &#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3; &alpha;-&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3; in vivo &#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Microtubule &#xC18D; &#xC5EC;&#xB7EC; tubulin &#xC811;&#xB294; cofactors (TFCs)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3EC;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC0C1; &#xC218;&#xC815;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC54C;&#xD30C;&#xC640; &#xBCA0;&#xD0C0; tubulin&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB418;&#xB294; alphabeta tubulin &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACE0;&#xB9BD;&#xACFC; Arabidopsis TFCB (AtTFCB)&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Attfcb&#xB294; Arabidopsis&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Attfcb&#xC758; subcellular &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB294; &#xC8FC;&#xB85C; cytosolic&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140; AtTFCB overexpressing &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC801;&#xC740; microtubules &#xC788;&#xB2E4;. &#xBA40;&#xD2F0; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; (&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;) &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC0DD;&#xD65C;&#xC5D0; &#xC54C;&#xD30C; tubulin&#xC640; Attfcb&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC140; &#xACF5;&#xC7A5;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACB0;&#xB860; &#xC54C;&#xD30C; tubulin vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; Attfcb&#xC758; overexpression microtubules &#xC218;&#xB97C; &#xC904;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Arabidopsis tubulin cofactor B &#xC811;&#xB294; &#xC54C;&#xD30C; tubulin vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Biog&eacute;nesis de microt&uacute;bulos requiere alphabeta d&iacute;meros de tubulina que se generan de alfa y beta tubulina tras la modificaci&oacute;n poste-de translaci&oacute;n por varios tubulina plegable cofactores (CCTs). Aqu&iacute; divulgamos el aislamiento y caracterizaci&oacute;n de Arabidopsis TFCB (AtTFCB). AtTFCB se expresa en todos los &oacute;rganos de Arabidopsis. La localizaci&oacute;n subcelular de AtTFCB es principalmente citos&oacute;lica. Las c&eacute;lulas AtTFCB-overexpressing tienen menos microt&uacute;bulos en comparaci&oacute;n con los controles. Microscop&iacute;a de transferencia (FRET) de energ&iacute;a de resonancia de fluorescencia multimodo revela una interacci&oacute;n f&iacute;sica directa de AtTFCB con alfa tubulina en la vida de las c&eacute;lulas de la planta. Concluimos que AtTFCB interact&uacute;a con alfa tubulina in vivo y su sobreexpresi&oacute;n reduce el n&uacute;mero de los microt&uacute;bulos.

Arabidopsis tubulina plegable cofactor B interact&uacute;a con alfa-tubulina in vivo.

&#x9AD8;&#x76D0;&#x5EA6;&#x548C;&#x5E72;&#x65F1;&#x5DF2;&#x53D7;&#x5230;&#x91CD;&#x89C6;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x4EEC;&#x4E25;&#x91CD;&#x5F71;&#x54CD;&#x5168;&#x4E16;&#x754C;&#x7684;&#x4F5C;&#x7269;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x7406;&#x89E3;&#x690D;&#x7269;&#x5BF9;&#x8FC7;&#x591A;&#x7684;&#x76D0;&#x548C;&#x8131;&#x6C34;&#x54CD;&#x5E94;&#x5C06;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x8010;&#x5E94;&#x529B;&#x4F5C;&#x7269;&#x54C1;&#x79CD;&#x7684;&#x5F00;&#x53D1;&#x3002;&#x4EE5;&#x4EBA;&#x4E3A;&#x672C;&#x7684;&#x5E94;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x538B;&#x529B;&#x548C;&#x4F17;&#x591A;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x8C0E;&#x8A00;&#x6709;&#x7275;&#x8FDE;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8BC1;&#x636E;&#x7684;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; D (PLD) &#x5728;&#x9AD8;&#x76D0;&#x5EA6;&#x548C;&#x8131;&#x6C34;&#x5382;&#x54CD;&#x5E94;&#x53C2;&#x4E0E;&#x3002;&#x756A;&#x8304; (&#x756A;&#x8304;) &#x963F;&#x5C14;&#x6CD5;&#x7C7B; PLD&#xFF0C;LePLDalpha1&#xFF0C;&#x662F;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E0A;&#x8C03;&#x548C;&#x6D3B;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x60AC;&#x6D6E;&#x57F9;&#x517B;&#x76D0;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x900F;&#x9732;&#x6B64; PLD &#x662F;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x5728;&#x76D0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x78F7;&#x8102;&#x9178;&#x751F;&#x4EA7;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5B8C;&#x5168;&#x3002;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x756A;&#x8304;&#x690D;&#x682A;&#x51CF;&#x5C11; LePLDalpha1 &#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x5E76;&#x672A;&#x900F;&#x9732;&#x6539;&#x53D8;&#x8010;&#x76D0;&#x6027;&#x3002;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; (&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;)&#xFF0C;AtPLDalpha1 &#x548C; AtPLDdelta &#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x76D0;&#x80C1;&#x8FEB;&#x4E2D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;pldalpha1 &#x548C; plddelta &#x7684;&#x5355;&#x3001; &#x53CC;&#x6572;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C55;&#x51FA;&#x9AD8;&#x76D0;&#x5EA6;&#x80C1;&#x8FEB;&#x4E0B;&#x677F;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x5EA6;&#x589E;&#x5F3A;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; PLDs &#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x8131;&#x6C34;&#x548C;&#x6572;&#x7A81;&#x53D8;&#x662F;&#x9AD8;&#x654F;&#x9AD8;&#x6E17;&#x538B;&#x529B;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x5F3A;&#x70C8;&#x6536;&#x7F29;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x3002;

&#x591A;&#x4E2A; PLDs &#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x9AD8;&#x76D0;&#x5EA6;&#x548C;&#x6C34;&#x8D64;&#x5B57;&#x690D;&#x7269;&#x8010;&#x7684;&#x3002;

High salinity and drought have received much attention because they severely affect crop production worldwide. Analysis and comprehension of the plant's response to excessive salt and dehydration will aid in the development of stress-tolerant crop varieties. Signal transduction lies at the basis of the response to these stresses, and numerous signaling pathways have been implicated. Here, we provide further evidence for the involvement of phospholipase D (PLD) in the plant's response to high salinity and dehydration. A tomato (Lycopersicon esculentum) alpha-class PLD, LePLDalpha1, is transcriptionally up-regulated and activated in cell suspension cultures treated with salt. Gene silencing revealed that this PLD is indeed involved in the salt-induced phosphatidic acid production, but not exclusively. Genetically modified tomato plants with reduced LePLDalpha1 protein levels did not reveal altered salt tolerance. In Arabidopsis (Arabidopsis thaliana), both AtPLDalpha1 and AtPLDdelta were found to be activated in response to salt stress. Moreover, pldalpha1 and plddelta single and double knock-out mutants exhibited enhanced sensitivity to high salinity stress in a plate assay. Furthermore, we show that both PLDs are activated upon dehydration and the knock-out mutants are hypersensitive to hyperosmotic stress, displaying strongly reduced growth.

Multiple PLDs required for high salinity and water deficit tolerance in plants.

La s&eacute;cheresse et la salinit&eacute; &eacute;lev&eacute;e ont re&ccedil;u beaucoup d&#39;attention car elles affectent gravement la production agricole dans le monde entier. Analyse et la compr&eacute;hension de la r&eacute;ponse de la plante &agrave; sel excessif et d&eacute;shydratation facilitera le d&eacute;veloppement de vari&eacute;t&eacute;s tol&eacute;rantes au stress. Mensonges de transduction de signal &agrave; la base de la r&eacute;ponse &agrave; ces contraintes et de nombreuses voies de signalisation ont &eacute;t&eacute; mis en cause. Ici, nous apportent une preuve suppl&eacute;mentaire de l&#39;implication de la phospholipase D (PLD) &agrave; la suite de la plante &agrave; une salinit&eacute; &eacute;lev&eacute;e et la d&eacute;shydratation. La tomate (Lycopersicon esculentum) classe alpha PLD, LePLDalpha1, est transcriptionnellement r&eacute;gul&eacute;e et activ&eacute;s dans les cultures de suspension de cellules trait&eacute;es avec du sel. Silen&ccedil;age g&eacute;nique a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que ce PLD est en effet impliqu&eacute; dans la production d&#39;acide phosphatidique induite par le sel, mais pas exclusivement. Plantes de tomates g&eacute;n&eacute;tiquement modifi&eacute;es avec des niveaux de prot&eacute;ine LePLDalpha1 r&eacute;duits ne r&eacute;v&egrave;lent pas alt&eacute;r&eacute;e tol&eacute;rance au sel. Chez Arabidopsis (Arabidopsis thaliana), les AtPLDalpha1 et les AtPLDdelta ont &eacute;t&eacute; trouv&eacute;s &ecirc;tre activ&eacute; en r&eacute;ponse &agrave; la salinit&eacute;. En outre, mutants de knock out simples et doubles en pldalpha1 et plddelta montrent une sensibilit&eacute; accrue au stress de la salinit&eacute; &eacute;lev&eacute;e dans un essai de plaque. De plus, nous montrons que les PLDs sont activ&eacute;s &agrave; la d&eacute;shydratation et les mutants de knock-out sont hypersensibles au stress hyperosmotique, affichant une croissance fortement r&eacute;duite.

PLDs multiples n&eacute;cessaires &agrave; haute tol&eacute;rance d&eacute;ficit salinit&eacute; et de l&#39;eau chez les plantes.

Hohen Salzgehalt und D&uuml;rre haben viel Aufmerksamkeit erhalten, weil sie Ernte-Produktion weltweit erheblich beeintr&auml;chtigen. Analyse und Verst&auml;ndnis der Pflanze als Reaktion auf &uuml;berm&auml;&szlig;ige Salz und Dehydrierung werden bei der Entwicklung von Stress-tolerante Kulturpflanzensorten Beihilfen. Signaltransduktion liegt an der Basis der Reaktion auf diese Spannungen und zahlreiche Signalwege haben verwickelt. Hier bieten wir weitere Beweise f&uuml;r die Beteiligung der Phospholipase D (PLD) der Pflanze als Reaktion auf hohen Salzgehalt und Austrocknung. Eine Tomate (Lycopersicon Esculentum) ist Alpha-Klasse PLD, LePLDalpha1, transcriptionally oben-geregelt und aktivierte in Zellkulturen Aussetzung mit Salz behandelt. Gene silencing ergab, dass dieser PLD in der Salz-induzierte Phosphatids&auml;ure S&auml;ureproduktion, aber nicht ausschlie&szlig;lich in der Tat beteiligt ist. Gentechnisch ver&auml;nderte Tomate-Pflanzen mit reduzierten LePLDalpha1-Protein-Ebene ergab nicht ver&auml;nderte Salz Toleranz. In Arabidopsis (Arabidopsis Thaliana) wurden AtPLDalpha1 und AtPLDdelta gefunden, als Reaktion auf Stress Salz aktiviert werden. Dar&uuml;ber hinaus stellte pldalpha1 und Plddelta Einzel- und Doppelzimmer Knock-out-Mutanten erh&ouml;hte Empfindlichkeit gegen&uuml;ber hohen Salzgehalt Spannung in einem Teller-Assay. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass sowohl PLDs nach Austrocknung aktiviert werden und die Knock-out-Mutanten &uuml;berempfindlich auf Hyperosmotic Stress sind, stark reduziertem Wachstum anzeigen.

Mehrere PLDs erforderlich f&uuml;r hohe Salzgehalt und Wasser Defizit Toleranz in Pflanzen.

Siccit&agrave; e salinit&agrave; elevata hanno ricevuto molta attenzione perch&eacute; colpiscono gravemente la produzione agricola in tutto il mondo. Analisi e comprensione della risposta della pianta a disidratazione ed eccessivo sale sar&agrave; di aiuto nello sviluppo di variet&agrave; di colture tolleranti lo stress. Segnale trasduzione si trova alla base della risposta a tali sollecitazioni e numerose vie di segnalazione &egrave; stati implicati. Qui, forniamo ulteriori prove del coinvolgimento della fosfolipasi D (PLD) nella risposta della pianta ad elevata salinit&agrave; e disidratazione. Un pomodoro (Lycopersicon esculentum) Alfa-classe PLD, LePLDalpha1, &egrave; transcriptionally up-regolato e attivato in colture di sospensione di cellule trattate con sale. Silenziamento genico ha rivelato che questa PLD &egrave; infatti coinvolto nella produzione acida fosfatidico indotta da sale, ma non esclusivamente. Piante di pomodoro geneticamente modificato con livelli ridotti di proteine LePLDalpha1 non rivelarono alterata tolleranza salata. In Arabidopsis (Arabidopsis thaliana), sia AtPLDalpha1 e AtPLDdelta sono stati trovati per essere attivato in risposta a stress di sale. Inoltre, pldalpha1 e plddelta mutanti knock-out singole e doppie esposta maggiore sensibilit&agrave; agli stress di elevata salinit&agrave; in un dosaggio di piastra. Inoltre, mostriamo che PLDs vengono attivati su disidratazione sia i mutanti knock-out sono ipersensibili allo stress iperosmotico, visualizzazione di crescita fortemente ridotta.

PLDs pi&ugrave; necessaria per tolleranza disavanzo ad alta salinit&agrave; e l&#39;acqua nelle piante.

&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x4F5C;&#x7269;&#x751F;&#x7523;&#x4E16;&#x754C;&#x4E2D;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x9AD8;&#x5869;&#x5206;&#x3068;&#x5E72;&#x3070;&#x3064;&#x306B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x6CE8;&#x610F;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x8AAD;&#x89E3;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x306A;&#x5869;&#x3001;&#x8131;&#x6C34;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x8010;&#x6027;&#x4F5C;&#x7269;&#x306E;&#x54C1;&#x7A2E;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x652F;&#x63F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F1D;&#x9054;&#x5618;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x3068;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3067;&#x306F;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; D (PLD) &#x9AD8;&#x5869;&#x5206;&#x3068;&#x8131;&#x6C34;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8; &#xFF08;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#xFF09; &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; PLD&#x3001;LePLDalpha1&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x304C;&#x8ABF;&#x6574;&#x3068;&#x5869;&#x3067;&#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x5869;&#x8A98;&#x8D77;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x9178;&#x751F;&#x7523;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x6392;&#x4ED6;&#x7684;&#x306B;&#x3053;&#x306E; PLD &#x3092;&#x78BA;&#x304B;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x690D;&#x7269;&#x6E1B;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F; LePLDalpha1 &#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8010;&#x5869;&#x6027;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30E9;&#x30D3;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30B9; (&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;) &#x3067;&#x306F;&#x3001;AtPLDalpha1 &#x3068; AtPLDdelta &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x5869;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;pldalpha1 &#x3068; plddelta &#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x3068;&#x30C0;&#x30D6;&#x30EB;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x5909;&#x7570;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x9AD8;&#x5869;&#x5206;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9; &#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x5C55;&#x793A;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;, &#x4E21;&#x65B9; Pld &#x8131;&#x6C34;&#x6642;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x5F37;&#x304F;&#x6E1B;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x8868;&#x793A;&#x9AD8;&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x904E;&#x654F;&#x306F;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8907;&#x6570;&#x306E; Pld &#x9AD8;&#x5869;&#x5206;&#x3068;&#x6C34;&#x306E;&#x8D64;&#x5B57;&#x8010;&#x6027;&#x690D;&#x7269;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x3002;

&#xB192;&#xC740; &#xC5FC; &#xBD84; &#xBC0F; &#xAC00;&#xBB44; &#xC2EC;&#xAC01; &#xC804;&#xC138;&#xACC4; &#xB18D;&#xC791;&#xBB3C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB9CE;&#xC740; &#xC8FC;&#xBAA9;&#xC744; &#xBC1B;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD55C; &#xC18C;&#xAE08;&#xACFC; &#xD0C8;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xB294; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAC15;&#xD55C; &#xC791;&#xBB3C; &#xD488;&#xC885; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC640; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xAE30;&#xBC18;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xC0AC;&#xAE30; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB192;&#xC740; &#xC5FC; &#xBD84; &#xBC0F; &#xD0C8;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0;&#xC11C; phospholipase D (PLD)&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xCD94;&#xAC00;. &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; (Lycopersicon esculentum) &#xC54C;&#xD30C; &#xC218;&#xC900;&#xC758; PLD, LePLDalpha1, transcriptionally &#xC5C5; &#xADDC;&#xC81C; &#xBC0F; &#xC18C;&#xAE08; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC140; &#xC11C; &#xC2A4; &#xD39C; &#xC158; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE68;&#xBB35;&#xC774; PLD &#xC18C;&#xAE08; &#xC720;&#xB3C4; phosphatidic acid &#xC0DD;&#xC0B0;, &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xB3C5;&#xC810;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C; &#xCC38;&#xC5EC;&#xB294; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615;&#xB41C; &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xAC10;&#xC18C; LePLDalpha1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC774; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xC18C;&#xAE08; &#xACF5;&#xCC28;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. Arabidopsis (Arabidopsis thaliana), AtPLDalpha1 &#xBC0F; AtPLDdelta &#xC18C;&#xAE08; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB420;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, pldalpha1 &#xBC0F; plddelta &#xB2E8;&#xC77C; &#xBC0F; &#xB354;&#xBE14; &#xB178;&#xD06C; &#xC544;&#xC6C3; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xAC10;&#xB3C4; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC5FC; &#xBD84; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC804;&#xC2DC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD0C8;&#xC218; &#xC2DC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xB294; Pld&#xC640; &#xB178;&#xD06C; &#xC544;&#xC6C3; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; hyperosmotic &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xB098;&#xCE58;&#xAC8C; &#xAC15;&#xD558;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC5EC;&#xB7EC; Pld &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xC5FC; &#xBD84; &#xBC0F; &#xBB3C; &#xC801;&#xC790; &#xB0B4;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;.

Sequ&iacute;a y alta salinidad han recibido mucha atenci&oacute;n debido a afectan gravemente la producci&oacute;n de cultivos en todo el mundo. An&aacute;lisis y comprensi&oacute;n de la respuesta de la planta a la sal excesiva y deshidrataci&oacute;n ayudar&aacute; en el desarrollo de variedades de cultivos tolerantes al estr&eacute;s. Mentiras de transducci&oacute;n de se&ntilde;al en la base de la respuesta a estas tensiones y numerosas v&iacute;as de se&ntilde;alizaci&oacute;n han sido implicados. Aqu&iacute;, le ofrecemos m&aacute;s evidencia de la implicaci&oacute;n de la fosfolipasa D (PLD) en la respuesta de la planta alta salinidad y deshidrataci&oacute;n. Un tomate (Lycopersicon esculentum) clase Alfa PLD, LePLDalpha1, es transcripcionalmente regulada para arriba y activado en cultivos de la suspensi&oacute;n de c&eacute;lulas tratados con sal. Silenciamiento del gen revel&oacute; que este PLD est&aacute; realmente involucrado en la producci&oacute;n de &aacute;cido fosfat&iacute;dico inducida por sal, pero no exclusivamente. Plantas de tomate transg&eacute;nicas con niveles reducidos de prote&iacute;na de LePLDalpha1 no revel&oacute; tolerancia alterada de la sal. En Arabidopsis (Arabidopsis thaliana), tanto AtPLDalpha1 como AtPLDdelta se encontraron a activarse en respuesta al estr&eacute;s salino. Por otra parte, pldalpha1 y plddelta individuales y dobles mutantes de knock-out exhibieron mayor sensibilidad al estr&eacute;s de alta salinidad en un an&aacute;lisis de la placa. Adem&aacute;s, demostramos que tanto PLDs se activan a la deshidrataci&oacute;n y los mutantes de knock-out son hipersensibles al estr&eacute;s hiperosmolares, mostrando crecimiento fuertemente reducido.

PLDs m&uacute;ltiples necesaria para alta tolerancia de d&eacute;ficit de agua y salinidad en las plantas.

&#x77AC;&#x6001;&#x57FA;&#x56E0;&#x6539;&#x9020;&#x7684;&#x690D;&#x7269;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x662F;&#x690D;&#x7269;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x7B80;&#x5355;&#x548C;&#x5FEB;&#x901F;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x540E;&#x751F;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5229;&#x7528;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x68C0;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x82E5;&#x8981;&#x67E5;&#x8BE2;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x690D;&#x7269;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x5BB6;&#x53EF;&#x53D7;&#x76CA;&#x4E8E;&#x6269;&#x5927;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x7528;&#x4E8E;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x57FA;&#x56E0;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x65B0;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5B83;&#x91C7;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x9633;&#x6027;&#x9009;&#x62E9;&#x4E0E;&#x6D41;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x6392;&#x5E8F;&#x5B8C;&#x5168;&#x9694;&#x79BB;&#x5728;&#x8F6C;&#x6362;&#x540E;&#x7684;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#x3002;&#x8BE5;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x514B;&#x670D;&#x4E86;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7F3A;&#x70B9;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x60AC;&#x6D6E;&#x6DB2;&#x5F80;&#x5F80;&#x662F;&#x5F02;&#x7C7B;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0D;&#x6210;&#x529F;&#x8F6C;&#x53D8;&#x3002;&#x6B64;&#x7F51;&#x5173;&#x517C;&#x5BB9;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5141;&#x8BB8;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x57FA;&#x56E0;&#x7535;&#x8DEF;&#x7684;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x7B5B;&#x9009;&#x3002;&#x7EA2;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7B5B;&#x9009;&#x6807;&#x8BB0;&#x5141;&#x8BB8;&#x5C06;&#x7EB3;&#x5165;&#x8054;&#x5408;&#x5229;&#x7528;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53CC;&#x91CD;&#x7684;&#x8D34;&#x6807;&#x529E;&#x6CD5;&#x5141;&#x8BB8; GFP &#x8BB0;&#x8005;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x5206;&#x6790;&#x57FA;&#x56E0;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x8F6C;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x8367;&#x5149;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x6392;&#x5E8F;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E0B;&#x6E38;&#x8003;&#x8BD5;&#x4E2D;&#x660E;&#x793A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x793A;&#x4F8B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x65B0;&#x7684;&#x7528;&#x9014;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x88AB;&#x5E94;&#x7528;&#x5230;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x5229;&#x7528;&#x7EA2;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;/GFP &#x53CC;&#x91CD;&#x8D34;&#x6807;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x7D20;&#x54CD;&#x5E94;&#x7F51;&#x7EDC;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781;&#x751F;&#x957F;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x8F93;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x901A;&#x8FC7;&#x64CD;&#x7EB5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x91CF;&#x5316;&#x5BF9;&#x751F;&#x957F;&#x7D20;&#x53CD;&#x5E94; DR5::GFP &#x8BB0;&#x8005;&#x57FA;&#x56E0;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x8F6C;&#x5F55;&#x53D8;&#x5316;&#x5177;&#x4F53;&#x8868;&#x793A;&#x6839;&#x8868;&#x76AE;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x9633;&#x6027;&#x8367;&#x5149;&#x9009;&#x62E9;&#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x4E2D;&#x5141;&#x8BB8;&#x7CBE;&#x786E;&#x3001; &#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x6DF1;&#x5165;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Transient genetic modification of plant protoplasts is a straightforward and rapid technique for the study of numerous aspects of plant biology. Recent studies in metazoan systems have utilized cell-based assays to interrogate signal transduction pathways using high-throughput methods. Plant biologists could benefit from new tools that expand the use of cell culture for large-scale analysis of gene function. We have developed a system that employs fluorescent positive selection in combination with flow cytometric analysis and fluorescence-activated cell sorting to isolate responses in the transformed protoplasts exclusively. The system overcomes the drawback that transfected protoplast suspensions are often a heterogeneous mix of cells that have and have not been successfully transformed. This Gateway-compatible system enables high-throughput screening of genetic circuitry using overexpression. The incorporation of a red fluorescent protein selection marker enables combined utilization with widely available green fluorescent protein (GFP) tools. For instance, such a dual labeling approach allows cytometric analysis of GFP reporter gene activation expressly in the transformed cells or fluorescence-activated cell sorting-mediated isolation and downstream examination of overexpression effects in a specific GFP-marked cell population. Here, as an example, novel uses of this system are applied to the study of auxin signaling, exploiting the red fluorescent protein/GFP dual labeling capability. In response to manipulation of the auxin response network through overexpression of dominant negative auxin signaling components, we quantify effects on auxin-responsive DR5::GFP reporter gene activation as well as profile genome-wide transcriptional changes specifically in cells expressing a root epidermal marker.

Positive fluorescent selection permits precise, rapid, and in-depth overexpression analysis in plant protoplasts.

Transient modification g&#xE9;n&#xE9;tique des protoplastes de plantes est une technique simple et rapide pour l&#x26;#39;&#xE9;tude de nombreux aspects de la biologie v&#xE9;g&#xE9;tale. Des &#xE9;tudes r&#xE9;centes dans les syst&#xE8;mes de m&#xE9;tazoaires ont utilis&#xE9; des cellules &#xE0; base de tests d&#x26;#39;interroger les voies de transduction de signal en utilisant des m&#xE9;thodes &#xE0; haut d&#xE9;bit. Biologistes v&#xE9;g&#xE9;taux pourraient b&#xE9;n&#xE9;ficier de nouveaux outils qui &#xE9;largissent l&#x26;#39;utilisation de la culture cellulaire pour analyse &#xE0; grande &#xE9;chelle de la fonction des g&#xE8;nes. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un syst&#xE8;me qui emploie fluorescente s&#xE9;lection positive en combinaison avec l&#x26;#39;analyse par cytom&#xE9;trie en flux et tri cellulaire activ&#xE9; par fluorescence afin d&#x26;#39;isoler les r&#xE9;ponses dans les protoplastes transform&#xE9;s exclusivement. Le syst&#xE8;me permet de surmonter l&#x26;#39;inconv&#xE9;nient que les suspensions de protoplastes transfect&#xE9;s sont souvent un m&#xE9;lange h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE8;ne de cellules qui ont et n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; transform&#xE9;es avec succ&#xE8;s. Ce syst&#xE8;me de passerelle compatible permet criblage &#xE0; haut d&#xE9;bit des circuits g&#xE9;n&#xE9;tiques utilisant la surexpression. L&#x26;#39;incorporation d&#x26;#39;un marqueur prot&#xE9;ine fluorescente rouge de s&#xE9;lection permet une utilisation combin&#xE9;e avec largement disponibles prot&#xE9;ine fluorescente verte (GFP) outils. Par exemple, une telle approche double &#xE9;tiquetage permet l&#x26;#39;analyse cytom&#xE9;trique de l&#x26;#39;activation du g&#xE8;ne rapporteur GFP express&#xE9;ment dans les cellules transform&#xE9;es ou activ&#xE9; par fluorescence cellulaire tri-m&#xE9;diation d&#x26;#39;isolement et de l&#x26;#39;examen en aval de la surexpression des effets dans une population de cellules GFP-marqu&#xE9;e sp&#xE9;cifique. Ici, comme un exemple, le roman utilise de ce syst&#xE8;me sont appliqu&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tude de l&#x26;#39;auxine de signalisation, l&#x26;#39;exploitation de la prot&#xE9;ine fluorescente rouge / GFP capacit&#xE9; de double &#xE9;tiquetage. En r&#xE9;ponse &#xE0; la manipulation du r&#xE9;seau de r&#xE9;ponse auxine par surexpression de l&#x26;#39;auxine dominant n&#xE9;gatif de signalisation composants, on quantifie les effets sur l&#x26;#39;auxine r&#xE9;agissant DR5 :: activation GFP g&#xE8;ne rapporteur ainsi que le profil au niveau du g&#xE9;nome changements de transcription sp&#xE9;cifique dans des cellules exprimant un marqueur racine &#xE9;pidermique.

S&#xE9;lection positive fluorescent Permis pr&#xE9;cis, rapide, et de l&#x26;#39;analyse en profondeur surexpression dans des protoplastes v&#xE9;g&#xE9;taux

Transiente genetische Ver&auml;nderung der Betriebsurformen ist eine einfache und schnelle Technik f&uuml;r das Studium der zahlreichen Aspekte der Pflanzenbiologie. Neuere Studien in indem Systeme haben zellbasierte Assays zum Signaltransduction Bahnen mit Hochdurchsatz-Methoden zu verh&ouml;ren genutzt. Pflanze Biologen, die von neuen Tools profitieren konnten, die die Verwendung von Zellkulturen f&uuml;r gro&szlig; angelegte Analyse der Genfunktion zu erweitern. Wir haben ein System entwickelt, das fluoreszierende positive Auswahl in Kombination mit Flow Cytometric Analyse und Fluoreszenz-aktivierte Zelle Sortieren um Antworten in der transformierten Urformen ausschlie&szlig;lich isolieren besch&auml;ftigt. Das System &uuml;berwindet den Nachteil, das transfected Urform Suspensionen sind oft eine heterogene Mischung aus Zellen, die haben und nicht erfolgreich gewandelt haben. Diese Gateway-kompatibles System erm&ouml;glicht High-Throughput-Screening der genetischen Schaltung mit &Uuml;berexpression. Die Einbeziehung einer roten fluoreszierenden Proteins Selektionsmarker erm&ouml;glicht kombiniert Auslastung mit weithin verf&uuml;gbar gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (GFP) Tools. Beispielsweise kann solchen dualen Kennzeichnung Ansatz Cytometric Analyse der GFP-Reporter Genaktivierung ausdr&uuml;cklich in transformierten Zellen oder Fluoreszenz-aktivierte Zelle Sortieren-vermittelte Isolierungs- und nachgelagerte Untersuchung der &Uuml;berexpression Effekte in einer bestimmten Zellpopulation im GFP-gepr&uuml;ft. Ausnutzung der hier, wie beispielsweise neuartige Verwendungen dieses Systems gelten f&uuml;r das Studium der Auxine zu signalisieren, das rot fluoreszierende Protein/GFP-dual-Kennzeichnung-Technik. In Reaktion auf die Manipulation von Auxin Antwort Netzwerk &uuml;ber eine &Uuml;berexpression von dominierenden negativen Auxine Signalling Komponenten quantifizieren wir Auswirkungenauf die Auxine-responsive DR5::GFP Reporter Genaktivierung sowie Profil&auml;nderungen genomweiten transkriptionelle speziell in Zellen, die einen Stamm-epidermale-Marker zum Ausdruck zu bringen.

Positive Fluoreszenz-Auswahl erm&ouml;glicht eine pr&auml;zise, schnelle und gr&uuml;ndliche &Uuml;berexpression Analyse in Betriebsurformen.

Transitoria modificazione genetica dei protoplasti vegetali &egrave; una tecnica semplice e rapida per lo studio di numerosi aspetti della biologia vegetale. Recenti studi nei metazoi sistemi hanno utilizzato cell-based assays per interrogare i vie di trasduzione del segnale mediante metodi di alto-rendimento. I biologi vegetali potrebbero beneficiare di nuovi strumenti che espandono l&#39;uso della coltura delle cellule per l&#39;analisi su larga scala di funzione del gene. Abbiamo sviluppato un sistema che impiega fluorescente selezione positiva in combinazione con analisi citofluorimetriche e fluorescenza-attivato delle cellule ordinamento per isolare esclusivamente risposte ai protoplasti trasformati. Il sistema supera lo svantaggio che transfected protoplasto sospensioni sono spesso un mix eterogeneo di cellule che hanno e non sono state trasformate con successo. Questo sistema compatibile con Gateway consente di high-throughput screening genetico circuiti tramite sovraespressione di. L&#39;incorporazione di un marcatore di selezione proteina fluorescente permette di rosso combinato utilizzo con strumenti ampiamente disponibile proteina fluorescente verde (GFP). Per esempio, un duplice approccio d&#39;etichettatura consente l&#39;analisi cytometric di reporter GFP attivazione genica espressamente in cellule trasformate o isolamento di ordinamento-mediata delle cellule di fluorescenza-attivato e a valle esame degli effetti di sovraespressione in una popolazione specifica delle cellule GFP-contrassegnato. Qui, come esempio, romanzo utilizzi di questo sistema sono applicate allo studio dell&#39;auxina di segnalazione, sfruttando la capacit&agrave; di etichettatura dual rosso proteina fluorescente/GFP. In risposta alla manipolazione della rete auxina risposta attraverso la sovraespressione di segnalazione componenti dominante negativo auxina, noi quantificare gli effetti su auxina-reattiva attivazione di gene di reporter DR5::GFP cos&igrave; come profilo genome-wide transcriptional modifiche specificamente nelle cellule che esprimono un marcatore epidermico radice.

Selezione positiva fluorescenti permette sovraespressione precisa, rapida e approfondita analisi in protoplasti vegetali.

&#x690D;&#x7269;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x6539;&#x5909;&#x306F;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7C21;&#x5358;&#x200B;&#x200B;&#x304B;&#x3064;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x624B;&#x6CD5;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x5F8C;&#x751F;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x8005;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x5229;&#x7528;&#x3092;&#x62E1;&#x5927;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x6069;&#x6075;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x72EC;&#x5360;&#x7684;&#x306B;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BB;&#x30EB;&#x30BD;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x86CD;&#x5149;&#x6B63;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x61F8;&#x6FC1;&#x6DB2;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7570;&#x7A2E;&#x6DF7;&#x5408;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x6B20;&#x70B9;&#x3092;&#x514B;&#x670D;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A4;&#x3068;&#x4E92;&#x63DB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x56DE;&#x8DEF;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8D64;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306F;&#x3001;&#x5E83;&#x304F;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;GFP&#xFF09;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x200B;&#x200B;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x4E8C;&#x91CD;&#x6A19;&#x8B58;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x660E;&#x793A;&#x7684;&#x306B;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x7D30;&#x80DE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x86CD;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BB;&#x30EB;&#x30BD;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x5A92;&#x4ECB;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;GFP&#x3067;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x691C;&#x67FB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;GFP&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x4F8B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x7528;&#x9014;&#x304C;&#x8D64;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;/ GFP&#x4E8C;&#x91CD;&#x6A19;&#x8B58;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30AA;&#x30FC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x6839;&#x306E;&#x8868;&#x76AE;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30AA;&#x30FC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x5FDC;&#x7B54;DR5&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;:: GFP&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

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&#xC2DD;&#xBB3C; protoplasts&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xCE21;&#xBA74;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xAE30;&#xC220;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Metazoan &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658; &#xD1B5;&#xB85C;&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD65C;&#xC6A9;. &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD61C;&#xD0DD;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD615;&#xAD11; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC120;&#xD0DD; &#xD750;&#xB984; cytometric &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xD65C;&#xC131; &#xC140; &#xC815;&#xB82C; &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; protoplasts&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xB3C5;&#xC810;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACA9;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD568;&#xAED8; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xD398; &#xB2E8;&#xC810; &#xADF9;&#xBCF5; &#xC6D0;&#xC0DD; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC815;&#xC9C0;&#xB294; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD658; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xC140;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xD63C;&#xD569;. &#xC774; &#xAC8C;&#xC774;&#xD2B8;&#xC6E8;&#xC774; &#xD638;&#xD658; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; overexpression&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD68C;&#xB85C;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xAC80;&#xC5F4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC120;&#xD0DD; &#xB9C8;&#xCEE4; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xBA74; &#xBE68;&#xAC04;&#xC0C9;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP) &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xACB0;&#xD569;. &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, &#xAC19;&#xC740; &#xC774;&#xC911; &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xC811;&#xADFC; GFP &#xAE30;&#xC790;&#xC758; cytometric &#xBD84;&#xC11D; &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; &#xC140; &#xB610;&#xB294; &#xD615;&#xAD11; &#xD65C;&#xC131; &#xC140; &#xC815;&#xB82C; &#xC911;&#xC7AC; &#xACA9;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC815; GFP &#xD45C;&#xC2DC; &#xC140; &#xC778;&#xAD6C; overexpression &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA85;&#xC2DC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE68;&#xAC04; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;/GFP &#xB4C0;&#xC5BC; &#xB77C;&#xBCA8; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC545;&#xC6A9; &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;,&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC18C;&#xC124; auxin &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; auxin &#xC2E0;&#xD638; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; overexpression &#xD1B5;&#xD574; auxin &#xC751;&#xB2F5; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xC870;&#xC791;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; transcriptional &#xBCC0;&#xACBD; &#xC140; &#xB8E8;&#xD2B8; &#xC0C1;&#xD53C; &#xB9C8;&#xCEE4; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xD788; auxin &#xBC18;&#xC751; DR5::GFP &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xACFC; &#xACC4;&#xB7C9;.

&#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xAD11; &#xC120;&#xD0DD; &#xACF5;&#xC7A5; protoplasts&#xC5D0; overexpression, &#xC2E0;&#xC18D;, &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xACE0; &#xAE4A;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La modificaci&#xF3;n gen&#xE9;tica transitoria de protoplastos de plantas es una t&#xE9;cnica sencilla y r&#xE1;pida para el estudio de numerosos aspectos de la biolog&#xED;a de las plantas. Estudios recientes en los sistemas de metazoos se han utilizado ensayos basados &#x200B;&#x200B;en c&#xE9;lulas para interrogar a las v&#xED;as de transducci&#xF3;n de se&#xF1;ales que utilizan m&#xE9;todos de alto rendimiento. Los bi&#xF3;logos de vegetales podr&#xED;an beneficiarse de las nuevas herramientas que ampl&#xED;an el uso de cultivo celular a gran escala de an&#xE1;lisis de la funci&#xF3;n del gen. Hemos desarrollado un sistema que emplea la selecci&#xF3;n positiva fluorescente en combinaci&#xF3;n con el an&#xE1;lisis de citometr&#xED;a de flujo y activado por fluorescencia de c&#xE9;lulas de clasificaci&#xF3;n para aislar las respuestas en los protoplastos transformados exclusivamente. El sistema supera el inconveniente de que las suspensiones de protoplastos transfectados con frecuencia son una mezcla heterog&#xE9;nea de c&#xE9;lulas que tienen y no se han transformado con &#xE9;xito. Este sistema de puerta de enlace compatible permite selecci&#xF3;n de alto rendimiento de los circuitos gen&#xE9;ticos con la sobreexpresi&#xF3;n. La incorporaci&#xF3;n de un marcador fluorescente de color rojo de selecci&#xF3;n de prote&#xED;nas permite la utilizaci&#xF3;n combinada con una amplia difusi&#xF3;n prote&#xED;na verde fluorescente (GFP) de herramientas. Por ejemplo, un enfoque de doble etiquetado permite a los an&#xE1;lisis de citometr&#xED;a de la activaci&#xF3;n del gen reportero GFP expresa en las c&#xE9;lulas transformadas o de fluorescencia de c&#xE9;lulas activadas por la clasificaci&#xF3;n mediada por el aislamiento y el examen posterior de los efectos de la sobreexpresi&#xF3;n de una poblaci&#xF3;n celular espec&#xED;fica GFP-marcada. Aqu&#xED;, como un ejemplo, nuevos usos de este sistema se aplican al estudio de la auxina se&#xF1;alizaci&#xF3;n, explotando el rojo fluorescente prote&#xED;na / GFP capacidad de etiquetado doble. En respuesta a la manipulaci&#xF3;n de la red de respuesta auxina a trav&#xE9;s de la sobreexpresi&#xF3;n de la auxina dominante negativo componentes de se&#xF1;alizaci&#xF3;n, que cuantificar los efectos de la auxina de respuesta DR5 T&#xED;tulo de la activaci&#xF3;n del gen GFP as&#xED; como el perfil en todo el genoma transcripcional cambios espec&#xED;ficamente en las c&#xE9;lulas que expresan un marcador ra&#xED;z de la epidermis.

Selecci&#xF3;n fluorescente positiva Permite preciso, r&#xE1;pido, y an&#xE1;lisis en profundidad sobre-expresi&#xF3;n en protoplastos de la planta

&#x690D;&#x7269;&#x54CD;&#x5E94;&#x901A;&#x8FC7;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x7A92;&#x606F;&#x7684;&#x8349;&#x98DF;&#x52A8;&#x7269;&#x88AD;&#x51FB;&#x4F24;&#x4EBA;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x4E00;&#x76F4;&#x5728;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; D (PLD) &#x53C2;&#x4E0E;&#x4F24;&#x4EBA;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; (&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;) AtPLDalpha1 &#x5DF2;&#x88AB;&#x63D0;&#x8BAE;&#x5728;&#x5B8C;&#x6574;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x78F7;&#x8102;&#x9178; (PA) &#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x4EA7;&#x751F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8309;&#x8389;&#x9178; &#xFF08;JA&#xFF09; &#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x524D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5E76;&#x9700;&#x4F24;&#x4EBA;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x72EC;&#x7ACB;&#xFF0C;PLD &#x6D3B;&#x52A8;&#x636E;&#x8BF4;&#x5BF9;&#x4F24;&#x4EBA;&#x81F4;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x54EA;&#x4E2A; PLD &#x9176;&#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x51E1;&#x6B64;&#x6D3B;&#x52A8;&#x53D1;&#x751F; &#xFF08;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F24;&#x8005;&#x6216;&#x975E;&#x53D7;&#x4F24;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF09; &#x548C;&#x786E;&#x5207;&#x7684;&#x540E;&#x679C;&#x662F;&#x4EC0;&#x4E48;&#x662F;&#x4E0D;&#x5168;&#x9762;&#x89E3;&#x51B3;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x4F24;&#x4EBA;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D; PLD &#x6D3B;&#x6027;&#x4EC5;&#x9650;&#x4E8E;&#x7834;&#x88C2;&#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x5143;&#x683C; (32) P (i) &#x8D34;&#x6807;&#x7B7E;&#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; pld &#x6572;&#x95E8;&#x78F7;&#x8102;&#x5206;&#x6790;&#x51FA;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x548C;&#x53EF;&#x7F16;&#x7A0B;&#x903B;&#x8F91;&#x5668;&#x4EF6;&#x6C89;&#x9ED8;&#x756A;&#x8304;&#x7EC6;&#x80DE;&#x60AC;&#x6D6E;&#x57F9;&#x517B;&#x3002;pldalpha1 &#x6572;&#x884C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x4F24;&#x4EBA;&#x81F4; PA &#x751F;&#x4EA7;&#x3001; &#x548C; pldalpha1/&#x4E09;&#x89D2;&#x6D32;&#x53CC;&#x6572;&#x7EBF;&#x5B8C;&#x5168;&#x6D88;&#x706D;&#x4E86;&#x5176;&#x4F59;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x51FA;&#x4EBA;&#x610F;&#x6599;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4F24;&#x4EBA;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3001; AtLOX2 &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C; JA &#x5408;&#x6210;&#x4E0D;&#x53D7;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6572;&#x884C;&#x4E2D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5E7C;&#x866B;&#x7684;&#x767D;&#x8774;&#x8776; (&#x83DC;&#x9752;&#x866B;) &#x589E;&#x957F;&#x540C;&#x6837;&#x7684;&#x767D;&#x83DC;&#x597D;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x548C;&#x53EF;&#x7F16;&#x7A0B;&#x903B;&#x8F91;&#x5668;&#x4EF6;&#x4E0A;&#x6572;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;

&#x91CD;&#x65B0;&#x8BC4;&#x4F30;&#x78F7;&#x8102; D &#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x4F24;&#x4EBA;&#x54CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Plants respond to wounding by means of a multitude of reactions, with the purpose of stifling herbivore assault. Phospholipase D (PLD) has previously been implicated in the wounding response. Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) AtPLDalpha1 has been proposed to be activated in intact cells, and the phosphatidic acid (PA) it produces to serve as a precursor for jasmonic acid (JA) synthesis and to be required for wounding-induced gene expression. Independently, PLD activity has been reported to have a bearing on wounding-induced MAPK activation. However, which PLD isoforms are activated, where this activity takes place (in the wounded or non-wounded cells) and what exactly the consequences are is a question that has not been comprehensively addressed. Here, we show that PLD activity during the wounding response is restricted to the ruptured cells using (32)P(i)-labelled phospholipid analyses of Arabidopsis pld knock-out mutants and PLD-silenced tomato cell-suspension cultures. pldalpha1 knock-out lines have reduced wounding-induced PA production, and the remainder is completely eliminated in a pldalpha1/delta double knock-out line. Surprisingly, wounding-induced protein kinase activation, AtLOX2 gene expression and JA biosynthesis were not affected in these knock-out lines. Moreover, larvae of the Cabbage White butterfly (Pieris rapae) grew equally well on wild-type and the pld knock-out mutants.

Reassessing the role of phospholipase D in the Arabidopsis wounding response.

Les plantes r&eacute;pondent &agrave; blessant au moyen d&#39;une multitude de r&eacute;actions, dans le but d&#39;&eacute;touffer l&#39;agression herbivore. Phospholipase D (PLD) a d&eacute;j&agrave; &eacute;t&eacute; impliqu&eacute;e dans la r&eacute;ponse de blessure. Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) AtPLDalpha1 a &eacute;t&eacute; propos&eacute; pour &ecirc;tre activ&eacute;es dans les cellules intactes, et l&#39;acide phosphatidique (PA) qu&#39;elle produit pour servir de pr&eacute;curseur pour la synth&egrave;se (JA) de l&#39;acide jasmonique et n&eacute;cessaires pour l&#39;expression des g&egrave;nes induits par blessant. Ind&eacute;pendamment, activit&eacute; PLD a &eacute;t&eacute; signal&eacute;e &agrave; avoir une incidence sur l&#39;activation de MAPK induite par blessant. Toutefois, les isoformes PLD sont activ&eacute;es, o&ugrave; cette activit&eacute; a lieu (dans les cellules bless&eacute;es ou non bless&eacute;s) et quelles sont exactement les cons&eacute;quences est une question qui n&#39;a pas &eacute;t&eacute; abord&eacute;e de fa&ccedil;on globale. Ici, nous montrons qu&#39;activit&eacute; PLD au cours de la r&eacute;ponse de blessure se limite aux ruptures cellules utilisant (32) P (i) - &eacute;tiquet&eacute; analyses de phospholipides d&#39;Arabidopsis pld knock - des mutants et des cultures de cellules en suspension tomate PLD-taire. pldalpha1 lignes de knock out ont r&eacute;duit la production de PA induite par la blessure, et le reste est compl&egrave;tement &eacute;limin&eacute; en ligne pldalpha1/delta double knock out. &Eacute;tonnamment, activation de la kinase induite par la blessure de prot&eacute;ine, expression des g&egrave;nes AtLOX2 et biosynth&egrave;se de JA ne sont pas affect&eacute;es dans ces lign&eacute;es de knock out. En outre, larves du chou blanc papillon (Pieris rapae) a grandi tout aussi bien le sauvage et le pld knock out mutants.

R&eacute;&eacute;valuer le r&ocirc;le de la phospholipase D dans la r&eacute;ponse blessant Arabidopsis.

Pflanzen reagieren auf die Verwundung durch eine Vielzahl von Reaktionen, mit dem Ziel der stickigen Pflanzenfresser-Angriff. Phospholipase D (PLD) hat zuvor in seinen verletzenden Antwort verwickelt. Arabidopsis (Arabidopsis Thaliana) AtPLDalpha1 wurde vorgeschlagen, die in intakten Zellen, aktiviert werden und der Phosphatids&auml;ure S&auml;ure (PA), produziert es als Vorl&auml;ufer f&uuml;r die Synthese der Jasmonic-S&auml;ure (JA) dienen und f&uuml;r Verwundung-induzierte Genexpression erforderlich. Unabh&auml;ngig hiervon wurde PLD Aktivit&auml;t berichtet, Auswirkungen auf gesundheitlich-induzierte MAPK Aktivierung haben. Die PLD-Isoformen werden jedoch aktiviert, wo diese Aktivit&auml;t findet statt (in den Verwundeten oder nicht verwundet Zellen) und was genau die Folgen sind, ist eine Frage, die nicht umfassend gekl&auml;rt hat. Hier zeigen wir PLD-Aktivit&auml;t w&auml;hrend der seinen verletzenden Antwort auf die geplatzten Zellen verwenden (32) P (i) - gekennzeichnet Phospholipid-Analysen von Arabidopsis Pld Knock-out - Mutanten und zum Schweigen gebracht, PLD Tomaten-Zellsuspension Kulturen beschr&auml;nkt. pldalpha1 Knock-out-Linien haben Verwundung induziert PA-Produktion reduziert, und der Rest entf&auml;llt komplett in eine Doppellinie Knock-out-pldalpha1/Delta. &Uuml;berraschenderweise waren gesundheitlich-induzierte Protein-Kinase-Aktivierung, AtLOX2 Genexpression und JA-Biosynthese nicht in diese Knock-out-Linien betroffen. Dar&uuml;ber hinaus gut Larven der Kohl wei&szlig; Schmetterling (Pieris Rapae) ebenso wuchs auf Wildtyp und die Pld Knock-out-Mutanten.

Neubewertung der Rolle der Phospholipase D in der Arabidopsis seinen verletzenden Antwort.

Le piante rispondono a ferire attraverso una moltitudine di reazioni, con lo scopo d&#39;assalto erbivoro soffocante. Fosfolipasi D (PLD) precedentemente &egrave; stato implicato nella risposta pungenti. Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) AtPLDalpha1 &egrave; stato proposto per essere attivato nelle cellule intatte, e l&#39;acido fosfatidico (PA) produce a servire come un precursore per la sintesi (JA) l&#39;Acido jasmonico e al necessario per l&#39;espressione genica indotta da ferire. In modo indipendente, attivit&agrave; PLD &egrave; stato segnalato per avere un cuscinetto sull&#39;attivazione di MAPK ferendo-indotta. Tuttavia, quale PLD isoforme sono attivati, dove questa attivit&agrave; si svolge (nelle cellule non-ferito o ferite) e che cosa sono esattamente le conseguenze &egrave; una domanda che non &egrave; stata affrontata esaurientemente. Mostriamo qui, che attivit&agrave; PLD durante la risposta ferentesi &egrave; limitato alle rottura celle utilizzando (32) P (i) - etichettati analisi fosfolipide di Arabidopsis pld knock - out mutanti e pomodoro PLD-tacere sospensione cellulare culture. pldalpha1 linee di knock-out hanno ridotto la produzione di PA ferendo-indotta, e il resto &egrave; stato completamente eliminato in una linea di pldalpha1/delta double knock-out. Attivazione della chinasi di proteina indotta da ferire, espressione del gene AtLOX2 e JA biosintesi sorprendentemente, non sono stati colpiti in queste righe di knock-out. Inoltre, le larve di cavolo bianco farfalla (Pieris rapae) &egrave; cresciuto ugualmente bene su wild-type e il pld mutanti knock-out.

Ridefinire il ruolo della fosfolipasi D nella risposta ferentesi Arabidopsis.

&#x690D;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x606F;&#x82E6;&#x3057;&#x3044;&#x8349;&#x98DF;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x653B;&#x6483;&#x3092;&#x76EE;&#x7684;&#x3068;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8CA0;&#x50B7;&#x306B;&#x7B54;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; D (PLD) &#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x4EBA;&#x304C;&#x8CA0;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;.&#x30A2;&#x30E9;&#x30D3;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30B9; (&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;) AtPLDalpha1 &#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;&#x3057;&#x3066;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x9178; (PA)&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x30B8;&#x30E3;&#x30B9;&#x30E2;&#x30F3;&#x9178; (JA) &#x5408;&#x6210;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5949;&#x4ED5;&#x3057;&#x3001;&#x8CA0;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x7528;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;PLD &#x6D3B;&#x52D5;&#x8CA0;&#x50B7;&#x306B;&#x3088;&#x308B; MAPK &#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x306F;&#x30D9;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3069;&#x306E; PLD &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3069;&#x3053; &#xFF08;&#x8CA0;&#x50B7;&#x8005;&#x3084;&#x975E;&#x8CA0;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#xFF09; &#x3053;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x304C;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x3001;&#x4E01;&#x5EA6;&#x3001;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x4F55;&#x7DCF;&#x5408;&#x7684;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x8CEA;&#x554F;&#x3067;&#x3059;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;PLD &#x6D3B;&#x52D5;&#x4E2D;&#x306B;&#x8CA0;&#x50B7;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7834;&#x88C2;&#x30BB;&#x30EB; (32) - &#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x89E3;&#x6790;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA; pld &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x6A19;&#x8B58; - P (i) &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3068; PLD &#x3092;&#x9ED9;&#x3089;&#x305B;&#x305F;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x61F8;&#x6FC1;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;pldalpha1 &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x7DDA;&#x8CA0;&#x50B7;&#x8A98;&#x8D77; PA &#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3001;&#x6B8B;&#x308A;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B; pldalpha1/&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF; &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; &#x30C0;&#x30D6;&#x30EB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x9A5A;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x8CA0;&#x50B7;&#x8A98;&#x8D77;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;AtLOX2 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;&#x30B8;&#x30E3;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x306E;&#x884C;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5E7C;&#x866B;&#x767D;&#x3044;&#x8776; (&#x30E2;&#x30F3;&#x30B7;&#x30ED;&#x30C1;&#x30E7;&#x30A6;&#xFF09; &#x3092;&#x5747;&#x7B49;&#x306B;&#x80B2;&#x3063;&#x305F;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D9;&#x30C4;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068; pld &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x3088;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; D &#x306E;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x4EBA;&#x304C;&#x8CA0;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x518D;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC2DD;&#xBB3C; &#xC228; &#xC8C4;&#xC774; &#xACE0; &#xCD08; &#xC2DD; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xD3ED;&#xD589; &#xBAA9;&#xC801;&#xACFC; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xBB34;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xBC18;&#xC751; &#xD55C;&#xB2E4;. Phospholipase D (PLD) &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC785;&#xD790; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xB2E4;. Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) Atpldalpha1&#xB97C; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC140;&#xC5D0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; phosphatidic &#xC0B0; (PA) jasmonic &#xC0B0; (JA) &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xC870;&#xB85C; &#xBD09;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xBD80;&#xC0C1; &#xC720;&#xBC1C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, PLD &#xD65C;&#xB3D9; MAPK &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBD80;&#xC0C1; &#xC720;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1;&#xC744; &#xD558;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; (&#xBD80;&#xC0C1; &#xB610;&#xB294; &#xBE44; &#xBD80;&#xC0C1; &#xC140;)&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC77C;&#xC5B4;&#xB09C; &#xACE0;&#xC740; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD574;&#xACB0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC740; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xACB0;&#xACFC;, &#xC5B4;&#xB5A4; PLD isoforms &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBD80;&#xC0C1; &#xC751;&#xB2F5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; PLD &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xD30C;&#xC5F4;&#xB41C; &#xC140;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; (32) P (i)-&#xC154; &#xC11C; Arabidopsis pld &#xB178;&#xD06C;&#xC758; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xBD84;&#xC11D;-&#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC0F; PLD &#xC785; &#xB9C9; &#xC74C; &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; &#xC140; &#xC11C; &#xC2A4; &#xD39C; &#xC158; &#xBB38;&#xD654;&#xB97C; &#xC81C;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. pldalpha1 &#xB178;&#xD06C; &#xC544;&#xC6C3; &#xB77C;&#xC778; &#xBD80;&#xC0C1; &#xC720;&#xBC1C; PA &#xC0DD;&#xC0B0; &#xAC10;&#xC18C;&#xAC00; &#xACE0; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; pldalpha1/&#xB378;&#xD0C0; &#xB354;&#xBE14; &#xB178;&#xD06C; &#xC544;&#xC6C3; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC81C;&#xAC70; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xBD80;&#xC0C1; &#xC720;&#xBC1C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, AtLOX2 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xBC0F; JA &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC774; &#xB178;&#xD06C; &#xC544;&#xC6C3; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5; &#xD558;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xBC30; &#xCD94; &#xD770; &#xB098;&#xBE44; (Pieris rapae) &#xB3D9;&#xB4F1; &#xD558; &#xAC8C; &#xC790;&#xB780; &#xC560;&#xBC8C;&#xB808; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xD558; &#xACE0;&#xB294; pld&#xC5D0; &#xB178;&#xD06C; &#xC544;&#xC6C3; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC798;.

Arabidopsis &#xBD80;&#xC0C1; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; phospholipase D&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xD3C9;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las plantas responden a heridas por medio de una multitud de reacciones, con el fin de asalto de herb&iacute;voro sofocante. Fosfolipasa D (PLD), previamente se ha implicado en la respuesta de la herida. Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) AtPLDalpha1 se ha propuesto para ser activados en las c&eacute;lulas intactas, y el &aacute;cido fosfat&iacute;dico (PA) produce para servir como precursor para la s&iacute;ntesis de jasm&oacute;nico (JA) y que se requerir&aacute;n para expresi&oacute;n g&eacute;nica inducida por heridas. Independientemente, actividad PLD se ha divulgado para incidir en la activaci&oacute;n de MAPK inducida por heridas. Sin embargo, que isoformas PLD se activan, donde esta actividad lleva a cabo (en las c&eacute;lulas heridas o no heridos) y cu&aacute;les son exactamente las consecuencias es una pregunta que no ha sido abordada de manera integral. A continuaci&oacute;n, os mostramos que actividad PLD durante la respuesta de la herida se limita a las c&eacute;lulas rotas usando (32) P (i) - etiquetados an&aacute;lisis fosfol&iacute;pido de Arabidopsis pld knock - mutantes y las culturas de c&eacute;lula-suspensi&oacute;n tomate silenciados por el PLD. l&iacute;neas de knock-out pldalpha1 han reducido hiriendo a inducida por la producci&oacute;n de PA y el resto se elimina completamente en l&iacute;nea pldalpha1/delta doble knock-out. Sorprendentemente, activaci&oacute;n de la cinasa de prote&iacute;na inducida por herir, expresi&oacute;n del gen AtLOX2 y bios&iacute;ntesis de JA no fueron afectados en estas l&iacute;neas de knock-out. Por otra parte, las larvas de la mariposa blanca (Pieris rapae) creci&oacute; igualmente de col bien de tipo salvaje y el pld mutantes de knock-out.

Bastiaan O. R. Bargmann

Center for Genomics and Systems Biology,
Department of Biology,
Center for Genomics and Systems Biology, Department of Biology

New York University

Fluorescence Activated Cell Sorting of Plant Protoplasts

Bastiaan O. R. Bargmann

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Center for Genomics and Systems Biology,Department of Biology,Center for Genomics and Systems Biology, Department of Biology

New York University

Fluorescence Activated Cell Sorting of Plant Protoplasts

Center for Genomics and Systems Biology,
Department of Biology,
Center for Genomics and Systems Biology, Department of Biology