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Imaging Mismatch Repair and Cellular Responses to DNA Damage in <em>Bacillus subtilis</em>

Both prokaryotes and eukaryotes respond to DNA damage through a complex set of physiological changes. Alterations in gene expression, the redistribution ...

University of Michigan-Ann Arbor

Post-integration &#x6606;&#x866B;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x5C06;&#x51B3;&#x5B9A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x3001; &#x9677;&#x5370;&#xFF0C;&#x5F3A;&#x5316;&#x5242;&#x548C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9057;&#x4F20;&#x4F20;&#x52A8;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x6606;&#x866B;&#x7684;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x8981;&#x6C42;&#x7387;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F6C;&#x4E0B;&#x8F6C;&#x7684;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x56E0;&#x5B50;&#x5143;&#x7D20;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x68C0;&#x67E5;&#x80DA;&#x82BD;&#x7EBF;&#x548C;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9690;&#x73B0;&#x4E0B; Mos1 &#x8F6C;&#x975E;&#x81EA;&#x6CBB;&#x5143;&#x7D20;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5; post-integration Mos1 &#x6C34;&#x624B;&#x5143;&#x7D20;&#x5728;&#x57C3;&#x53CA;&#x4F0A;&#x868A;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x80DA;&#x82BD;&#x7EBF;&#x79FB;&#x4F4D;&#x5F88;&#x5C11;&#x6709;&#x4EBA;&#x5076;&#x5C14;&#x53D1;&#x73B0;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9690;&#x73B0;&#x3002;&#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x884C;&#x80DA;&#x82BD;&#x6362;&#x4F4D;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7B5B;&#x9009; 14,000 &#x540E;&#x4EE3;&#x540E;&#x88AB;&#x5BFB;&#x56DE;&#x3002;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x79FB;&#x4F4D;&#x7684;&#x5EFA;&#x8BAE; Mos1 &#x8FD0;&#x52A8;&#x53D1;&#x751F;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684; S &#x671F;&#x548C;&#x540E;&#x671F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; Mos1 &#x5C06;&#x5728; Ae &#x4E2D;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x5411;&#x91CF;&#x3002;&#x4F46;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x9700;&#x8981;&#x5F88;&#x9AD8;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684;&#x77E2;&#x91CF;&#x7A33;&#x5B9A;&#x800C;&#x4E14;&#x5C06;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x9650;&#x5236;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528;&#x9057;&#x4F20;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x3001; &#x5F3A;&#x5316;&#x5242;&#x7684;&#x9677;&#x9631;&#x6216;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x6807;&#x7B7E;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7269;&#x79CD;&#x7684;&#x5EFA;&#x8BBE;&#x4E2D;&#x3002;

Post-integration Mos1 &#x6C34;&#x624B;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x57C3;&#x53CA;&#x4F0A;&#x868A;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;

The post-integration behavior of insect gene vectors will determine the types of applications for which they can be used. Transposon mutagenesis, enhancer trapping, and the use of transposable elements as genetic drive systems in insects requires transposable elements with high rates of remobilization in the presence of transposase. We investigated the post-integration behavior of the Mos1 mariner element in transgenic Aedes aegypti by examining both germ-line and somatic transpositions of a non-autonomous element in the presence of Mos1 transposase. Somatic transpositions were occasionally detected while germ-line transposition was only rarely observed. Only a single germ-line transposition event was recovered after screening 14,000 progeny. The observed patterns of transposition suggest that Mos1 movement takes place between the S phase and anaphase. The data reported here indicate that Mos1 will be a useful vector in Ae. aegypti for applications requiring a very high degree of vector stability but will have limited use in the construction of genetic drive, enhancer trap, or transposon tagging systems in this species.

Post-integration behavior of a Mos1 mariner gene vector in Aedes aegypti.

Le comportement de recouvrement de vecteurs de g&egrave;ne insectes d&eacute;terminent les types d&#39;applications pour lesquelles ils peuvent &ecirc;tre utilis&eacute;s. Par transposon, exhausteur de pi&eacute;geage et l&#39;utilisation des &eacute;l&eacute;ments transposables comme syst&egrave;mes g&eacute;n&eacute;tiques chez les insectes exige des &eacute;l&eacute;ments transposables &agrave; des taux &eacute;lev&eacute;s de remobilisation en pr&eacute;sence de la transposase. Nous avons &eacute;tudi&eacute; le comportement de recouvrement de l&#39;&eacute;l&eacute;ment mariner Mos1 transg&eacute;nique Aedes aegypti en examinant la lign&eacute;e germinale et somatiques transpositions d&#39;un &eacute;l&eacute;ment non autonome en pr&eacute;sence de la transposase Mos1. Transpositions somatiques ont &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;es parfois alors que la transposition de la lign&eacute;e germinale a &eacute;t&eacute; que rarement observ&eacute;e. Seulement un &eacute;v&eacute;nement de transposition germinales unique a &eacute;t&eacute; r&eacute;cup&eacute;r&eacute; apr&egrave;s d&eacute;pistage 14 000 descendants. Les tendances observ&eacute;es de transposition sugg&egrave;rent que le mouvement Mos1 a lieu entre la phase S et l&#39;anaphase. Les donn&eacute;es pr&eacute;sent&eacute;es ici indiquent que Mos1 sera un vecteur utile chez Ae. aegypti pour les applications n&eacute;cessitant un tr&egrave;s haut degr&eacute; de stabilit&eacute; de vecteur mais ont limit&eacute; l&#39;utilisation dans la construction de la g&eacute;n&eacute;tique de la route, pi&egrave;ge d&#39;enhancer ou transposon, syst&egrave;mes de marquage chez cette esp&egrave;ce.

Comportement de recouvrement d&#39;un vecteur de g&egrave;ne de mariner Mos1 chez Aedes aegypti.

Post-Integration Verhalten eines MOS1 Mariner Genvektor in Aedes aegypti.

Il comportamento post-integration di vettori del gene dell&#39;insetto determina i tipi di applicazioni che possono essere utilizzati. Mutagenesi transposon, potenziatore della cattura e l&#39;utilizzo di elementi trasponibili come sistemi di unit&agrave; genetica negli insetti richiede elementi trasponibili con alti tassi di remobilization in presenza di ha. Abbiamo studiato il comportamento post-integration dell&#39;elemento Mos1 mariner in transgenici Aedes aegypti esaminando sia germinali e somatiche trasposizioni di un elemento non autonomo in presenza di Mos1 ha. Trasposizioni somatici sono stati rilevati occasionalmente mentre trasposizione germinale solo raramente &egrave; stata osservata. Solo un evento di recepimento singolo germe-linea &egrave; stato recuperato dopo 14.000 progenie di screening. I modelli osservati di trasposizione suggeriscono che Mos1 movimento avviene tra la fase S e l&#39;anafase. I dati qui riportati indicano che Mos1 sar&agrave; un utile vettore in Ae. aegypti per applicazioni che richiedono un elevato grado di stabilit&agrave; vettoriale ma sar&agrave; limitato l&#39;uso nella costruzione di unit&agrave; genetica, trappola enhancer o transposon tagging sistemi in questa specie.

Comportamento post-Integration di un vettore di gene Mos1 mariner in Aedes aegypti.

&#x6606;&#x866B;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30C7;&#x30A4;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D5;&#x30FC;&#x30BA;&#x6319;&#x52D5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Faecalis&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC; &#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8FD1;&#x7E01;&#x6606;&#x866B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x99C6;&#x52D5;&#x7CFB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30AF;&#x30B9; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30B6;&#x30FC;&#x30BC;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x751F;&#x6B96;&#x7CFB;&#x5217;&#x3068;&#x975E;&#x81EA;&#x5F8B;&#x8981;&#x7D20; Mos1 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30B6;&#x30FC;&#x30BC;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EE2;&#x79FB;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; Mos1 &#x30DE;&#x30EA;&#x30CA;&#x30FC;&#x8981;&#x7D20;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x7523;&#x30CD;&#x30C3;&#x30BF;&#x30A4;&#x30B7;&#x30DE;&#x30AB;&#x306E;&#x30C7;&#x30A4;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D5;&#x30FC;&#x30BA;&#x6319;&#x52D5;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306F;&#x751F;&#x6B96;&#x7CFB;&#x5217;&#x306E;&#x8EE2;&#x4F4D;&#x306F;&#x3081;&#x3063;&#x305F;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E2D;&#x306B;&#x6642;&#x6298;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x306E;&#x307F;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x751F;&#x6B96;&#x7CFB;&#x5217;&#x306E;&#x8EE2;&#x4F4D;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;14,000 &#x5B50;&#x5B6B;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8EE2;&#x4F4D;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3; Mos1 &#x904B;&#x52D5;&#x304C; S &#x6BB5;&#x968E;&#x3068;&#x5F8C;&#x671F;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x8D77;&#x3053;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F; Mos1 &#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; Ae &#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CD;&#x30C3;&#x30BF;&#x30A4;&#x30B7;&#x30DE;&#x30AB; &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x304C;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x5236;&#x9650;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC; &#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x7A2E;&#x306E;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x3051;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x306E;&#x5EFA;&#x8A2D;&#x3002;

&#x30CD;&#x30C3;&#x30BF;&#x30A4;&#x30B7;&#x30DE;&#x30AB; Mos1 &#x30DE;&#x30EA;&#x30CA;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30C7;&#x30A4;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D5;&#x30FC;&#x30BA;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3002;

&#xACE4;&#xCDA9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xAC8C;&#xC2DC;&#xBB3C; &#xB3D9;&#xC791; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC885;&#xB958;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Transposon mutagenesis, &#xD2B8;&#xB798;&#xD551;, &#xC99D;&#xAC15; &#xBC0F; &#xACE4;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xC720;&#xC804; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; transposable &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9; remobilization transposase&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC18D;&#xB3C4; transposable &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC138;&#xADE0; &#xC120; &#xBC0F; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; transpositions Mos1 transposase&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;-&#xC790;&#xC728;&#xC801; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; Aedes aegypti Mos1 &#xB9C8;&#xB9AC;&#xB108; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xAC8C;&#xC2DC;&#xBB3C; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; transpositions &#xC138;&#xADE0; &#xC120; &#xC804;&#xC704;&#xB97C; &#xAC70;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0; &#xB54C;&#xB54C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9CC; &#xB2E8;&#xC120; &#xC138;&#xADE0; &#xC804;&#xC704; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; 14000 &#xC790;&#xC190;&#xC744; &#xC0C1;&#xC601; &#xD55C; &#xD6C4; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC704;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xD328;&#xD134; Mos1 &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC740; S &#xB2E8;&#xACC4;&#xC640; anaphase &#xC0AC;&#xC774; &#xC77C;&#xC5B4;&#xB09C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB370;&#xC774;&#xD130; Mos1 Ae&#xC5D0; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBCA1;&#xD130; &#xB41C;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. aegypti &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBCA1;&#xD130; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB192;&#xC740; &#xD559;&#xC704;&#xB97C; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xC560;&#xD50C;&#xB9AC;&#xCF00;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC81C;&#xD55C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC804; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB098; &#xC99D;&#xAC15; &#xD2B8;&#xB7A9;,&#xC774; &#xC885;&#xC5D0; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xD0DC;&#xADF8;&#xB97C; &#xCD94;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; transposon&#xC758; &#xAC74;&#xC124;&#xC5D0;&#xC11C;.

Aedes aegypti&#xC5D0;&#xC11C; Mos1 &#xB9C8;&#xB9AC;&#xB108; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xAC8C;&#xC2DC;&#xBB3C; &#xB3D9;&#xC791;.

El comportamiento Memorandum de vectores insectos gene determinar&aacute; los tipos de aplicaciones que pueden ser utilizados. Mutag&eacute;nesis del Transposon, atrapando el reforzador y el uso de elementos transponibles como sistemas de impulsi&oacute;n gen&eacute;ticos en insectos requiere elementos transponibles con altas tasas de removilizaci&oacute;n en presencia de la transposasa. Investigamos el comportamiento Memorandum del elemento Mos1 mariner en transg&eacute;nico Aedes aegypti examinando tanto l&iacute;nea germinal y som&aacute;ticos transposiciones de un elemento no aut&oacute;nomo en presencia de Mos1 transposasa. Transposiciones som&aacute;ticas en ocasiones fueron detectados mientras que solamente raramente se observ&oacute; la transposici&oacute;n de la l&iacute;nea germinal. S&oacute;lo un evento de transposici&oacute;n de l&iacute;nea germinal solo se recuper&oacute; despu&eacute;s de la proyecci&oacute;n de 14.000 progenie. Los patrones observados de transposici&oacute;n sugieren que Mos1 movimiento ocurre entre la fase S y la anafase. Los datos aqu&iacute; consignados indican que Mos1 ser&aacute; un vector &uacute;til en Ae. aegypti para aplicaciones que requieren un alto grado de estabilidad de vector pero han limitado uso en la construcci&oacute;n de la unidad de gen&eacute;tica, trampa de reforzador o transposon sistemas de etiquetado en esta especie.

Comportamiento Memorandum de un vector de gene Mos1 mariner en Aedes aegypti.

&#x57FA;&#x56E0;&#x6539;&#x53D8;&#x75BE;&#x75C5;&#x77E2;&#x91CF;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6606;&#x866B;&#x5229;&#x7528;&#x91CD;&#x7EC4; DNA &#x6280;&#x672F;&#x6B63;&#x5728;&#x8003;&#x8651;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6839;&#x9664;&#x52AA;&#x529B;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x5E94;&#x7B54;&#x7684;&#x868A;&#x5B50;&#x65F6;&#x7A7A;&#x7279;&#x522B;&#x50CF;&#x96BE;&#x6CBB;&#x6027;&#x8868;&#x578B;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6297;&#x83CC;&#x80BD;&#x7684;&#x6297;&#x83CC;&#x80BD;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x7B49;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6280;&#x672F;&#x8FD9;&#x6837;&#x4E2D;&#x56FD;&#x7535;&#x5B50;&#x5546;&#x52A1;&#x534F;&#x4F1A;&#x6709;&#x4EBA;&#x5F00;&#x59CB; 24 &#x5C0F;&#x65F6;&#x540E;&#x4E2D;&#x80A0;&#x8840;&#x9910;&#x540E;&#x521B;&#x5EFA;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x6297;&#x83CC;&#x80BD; A &#xFF08;&#x4E2D;&#x56FD;&#x7535;&#x5B50;&#x5546;&#x52A1;&#x534F;&#x4F1A;) &#x5728;&#x5188;&#x6BD4;&#x4E9A;&#x759F;&#x868A;&#x72EC;&#x7279;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x868A;&#x5188;&#x6BD4;&#x4E9A;&#x4E24;&#x72EC;&#x7ACB;&#x884C;&#x662F;&#x4F7F;&#x7528; piggyBac &#x57FA;&#x56E0;&#x8F7D;&#x4F53;&#x868A;&#x5188;&#x6BD4;&#x4E9A;&#x4E2D;&#x56FD;&#x7535;&#x5B50;&#x5546;&#x52A1;&#x534F;&#x4F1A; cDNA &#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x767D;&#x7EB9;&#x4F0A;&#x868A;&#x57C3;&#x53CA;&#x7FA7;&#x80BD;&#x9176;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0B;&#x521B;&#x5EFA;&#x7684;&#x3002;&#x4F2F;&#x6C0F;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x868A;&#x5B50;&#x76F8;&#x6BD4; nontransgenic &#x868A;&#x5B50;&#x866B;&#x5375;&#x56CA;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; 60%&#x3002;&#x64CD;&#x7EB5;&#x7684;&#x868A;&#x5B50;&#x7684;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5BF9;&#x5176;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x673A;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x4EA7;&#x751F;&#x8D1F;&#x9762;&#x5F71;&#x54CD;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3002;

&#x5728;&#x5188;&#x6BD4;&#x4E9A;&#x759F;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x759F;&#x75BE;&#x75C5;&#x5A92;&#x868A;&#x868A;&#x7684;&#x6297;&#x83CC;&#x80BD;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5F02;&#x4F4D;&#x8868;&#x8FBE; (&#x53CC;&#x7FC5;&#x76EE;&#xFF1A; &#x868A;&#x79D1;)&#xFF1A; &#x5BF9;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Genetically altering the disease vector status of insects using recombinant DNA technologies is being considered as an alternative to eradication efforts. Manipulating the endogenous immune response of mosquitoes such as the temporal and special expression of antimicrobial peptides like cecropin may result in a refractory phenotype. Using transgenic technology a unique pattern of expression of cecropin A (cecA) in Anopheles gambiae was created such that cecA was expressed beginning 24 h after a blood meal in the posterior midgut. Two independent lines of transgenic An. gambiae were created using a piggyBac gene vector containing the An. gambiae cecA cDNA under the regulatory control of the Aedes aegypti carboxypeptidase promoter. Infection with Plasmodium berghei resulted in a 60% reduction in the number of oocysts in transgenic mosquitoes compared with nontransgenic mosquitoes. Manipulating the innate immune system of mosquitoes can negatively affect their capacity to serve as hosts for the development of disease-causing microbes.

Ectopic expression of a cecropin transgene in the human malaria vector mosquito Anopheles gambiae (Diptera: Culicidae): effects on susceptibility to Plasmodium.

G&eacute;n&eacute;tiquement modifiant le statut de vecteur de la maladie d&#39;insectes &agrave; l&#39;aide de technologies de recombinaison de l&#39;ADN est consid&eacute;r&eacute; comme une alternative aux efforts d&#39;&eacute;radication. Manipulation de la r&eacute;ponse immunitaire endog&egrave;ne des moustiques comme l&#39;expression temporelle et sp&eacute;ciale des peptides antimicrobiens comme c&eacute;cropine peut entra&icirc;ner un ph&eacute;notype r&eacute;fractaire. &Agrave; l&#39;aide de la technologie transg&eacute;nique forme unique d&#39;expression de c&eacute;cropine A (cecA) en Anopheles gambiae apparue telle que la cecA a &eacute;t&eacute; exprim&eacute;e en commen&ccedil;ant 24 heures apr&egrave;s un repas de sang dans l&#39;intestin post&eacute;rieur. Deux lignes de transg&eacute;nique Anopheles gambiae ind&eacute;pendantes ont &eacute;t&eacute; cr&eacute;&eacute;s &agrave; l&#39;aide d&#39;un vecteur de g&egrave;ne de piggyBac contenant l&#39;Anopheles gambiae cecA ADNc sous le contr&ocirc;le r&eacute;glementaire du promoteur carboxypeptidase Aedes aegypti. Infection &agrave; Plasmodium berghei a entra&icirc;n&eacute; une r&eacute;duction de 60 % du nombre d&#39;oocystes dans les moustiques transg&eacute;niques par rapport aux moustiques non transg&eacute;niques. Manipuler le syst&egrave;me immunitaire inn&eacute; des moustiques peut nuire &agrave; leur capacit&eacute; de servir les h&ocirc;tes pour le d&eacute;veloppement de pathog&egrave;nes microbes.

L&#39;expression ectopique d&#39;un transg&egrave;ne c&eacute;cropine dans le paludisme humain vecteur moustique Anopheles gambiae (Diptera : Culicidae): effets sur la susceptibilit&eacute; de Plasmodium.

Ektopische Expression einer Cecropin Transgen in der menschlichen Malaria Vektor Anopheles gambiae (Diptera: Culicidae): Auswirkungen auf die Anf&#xE4;lligkeit f&#xFC;r Plasmodium.

Geneticamente alterare lo status di vettore di malattia degli insetti utilizzando le tecnologie del DNA ricombinante &egrave; considerato come un&#39;alternativa agli sforzi di eradicazione. Manipolare la risposta immunitaria endogena delle zanzare come l&#39;espressione temporale e speciale di peptidi antimicrobici come cecropin pu&ograve; causare un fenotipo refrattario. Utilizzando la tecnologia transgenica un modello unico di espressione di cecropin A (cecA) in Anopheles gambiae &egrave; stato creato tale che la cecA &egrave; stata espressa all&#39;inizio 24 ore dopo un pasto di sangue nell&#39;intestino posteriore. Due linee indipendenti di gambiae e transgenici sono stati creati utilizzando un vettore di gene piggyBac che contiene il cDNA di cecA gambiae e sotto il controllo normativo del promotore Aedes aegypti carbossipeptidasi. Infezione da Plasmodium berghei ha determinato una riduzione del 60% del numero delle oocisti nelle zanzare transgeniche confrontate con le zanzare nontransgenic. Manipolare il sistema immunitario innato di zanzare possono influenzare negativamente la capacit&agrave; di fungere da host per lo sviluppo della malattia-causanti i microbi.

Espressione ectopica di un transgene cecropin nella malaria umana vettore zanzara Anopheles gambiae (Diptera: Culicidae): effetti sulla suscettibilit&agrave; di Plasmodium.

&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; DNA &#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6606;&#x866B;&#x306E;&#x75C5;&#x6C17;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; &#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30BF;&#x30B9;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x64B2;&#x6EC5;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8003;&#x616E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x868A;&#x30BB;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D4;&#x30F3;&#x306F;&#x96E3;&#x6CBB;&#x6027;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6297;&#x83CC;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x3067;&#x7279;&#x5225;&#x306A;&#x8868;&#x73FE;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Cecum &#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x5F62;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x5F8C;&#x90E8;&#x4E2D;&#x8178;&#x3067;&#x8840;&#x6DB2;&#x98DF;&#x4E8B;&#x5F8C; 24 &#x6642;&#x9593;&#x304B;&#x3089;&#x59CB;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5F0F;&#x30BB;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D4;&#x30F3; A &#x306E; &#xFF08;&#x30BB;&#x30AB;&#xFF09; &#x30CF;&#x30DE;&#x30C0;&#x30E9;&#x30AB; &#x30AC;&#x30F3;&#x30D3;&#x30A8;&#x30CF;&#x30DE;&#x30C0;&#x30E9;&#x30AB;&#x3067;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x304C;&#x4F5C;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;2 &#x3064;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x884C;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; An. &#x30AC;&#x30F3;&#x30D3;&#x30A8;&#x30CF;&#x30DE;&#x30C0;&#x30E9;&#x30AB; An. &#x30AC;&#x30F3;&#x30D3;&#x30A8;&#x30CF;&#x30DE;&#x30C0;&#x30E9;&#x30AB; cecum &#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x5F62; cDNA &#x30E4;&#x30D6;&#x30AB; &#x30CD;&#x30C3;&#x30BF;&#x30A4;&#x30B7;&#x30DE;&#x30AB; &#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x4E0A;&#x306E;&#x7BA1;&#x7406;&#x4E0B;&#x3092;&#x542B;&#x3080; piggyBac &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x4F5C;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30E4;&#x611F;&#x67D3;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8; &#x30D2;&#x30C8;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AE;&#x30AA;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x868A;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x868A;&#x306E;&#x6570;&#x306E; 60% &#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x868A;&#x306E;&#x751F;&#x6765;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3082;&#x60AA;&#x5F71;&#x97FF;&#x75C5;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3002;

&#x3072;&#x3068;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2; &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x868A;&#x30A2;&#x30CE;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EC;&#x30B9; &#x30AC;&#x30F3;&#x30D3;&#x30A8;&#x30CF;&#x30DE;&#x30C0;&#x30E9;&#x30AB;&#x3067;&#x30BB;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D4;&#x30F3; transgene &#x306E;&#x7570;&#x6240;&#x6027;&#x767A;&#x73FE; (&#x53CC;&#x7FC5;&#x76EE;: &#x30AB;&#x79D1;): &#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x3002;

&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; DNA &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACE4;&#xCDA9;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xBCA1;&#xD130; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBCC0;&#xACBD; &#xBC15;&#xBA78; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xB300; &#xC548;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. Cecropin &#xB0B4; &#xD654; &#xD615;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC19;&#xC740; &#xD56D;&#xADE0; &#xC131; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC218; &#xC2DD; &#xB4F1; &#xBAA8;&#xAE30;&#xC758; &#xC0DD; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xC870;&#xC791;. &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xD328;&#xD134;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; cecropin A (cecA) Anopheles gambiae&#xC5D0;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; cecA &#xD6C4;&#xBD80; midgut&#xC5D0; &#xD608;&#xC561; &#xC2DD;&#xC0AC; &#xD6C4; 24 h&#xBD80;&#xD130; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB7F0; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5B4;&#xC84C;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; an. jae gambiae&#xC758; 2 &#xAC1C;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xB77C;&#xC778; Aedes aegypti carboxypeptidase &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xD1B5;&#xC81C; an. jae gambiae cecA Cdna&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; piggyBac &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5B4;&#xC84C;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC10;&#xC5FC; Plasmodium berghei nontransgenic &#xBAA8;&#xAE30;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xBAA8;&#xAE30;&#xC5D0; oocysts &#xC218; 60% &#xAC10;&#xC18C; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xBAA8;&#xAE30;&#xC758; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xCCB4;&#xACC4;&#xB97C; &#xC870;&#xC791; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC720;&#xBC1C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825; &#xC800;&#xD558; &#xC218; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xBCA1;&#xD130; &#xBAA8;&#xAE30; Anopheles gambiae&#xC5D0; cecropin transgene&#xC758; &#xC18C;&#xC131; &#xC2DD; (Diptera: Culicidae): Plasmodium &#xBBFC;&#xAC10;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;.

Alterar gen&eacute;ticamente el estado de vector de la enfermedad de insectos utilizando tecnolog&iacute;as de ADN recombinante se est&aacute; considerando como una alternativa a los esfuerzos de erradicaci&oacute;n. Manipulaci&oacute;n de la respuesta inmune end&oacute;gena de mosquitos como la expresi&oacute;n temporal y especial de p&eacute;ptidos antimicrobianos como cecropina puede resultar en un fenotipo refractario. Utilizando la tecnolog&iacute;a transg&eacute;nica un patr&oacute;n &uacute;nico de expresi&oacute;n de la cecropina A (cecA) en Anopheles gambiae se cre&oacute; tal que cecA se expres&oacute; comenzando 24 h despu&eacute;s de una comida de sangre en el intestino medio posterior. Dos l&iacute;neas independientes de transg&eacute;nico gambiae y fueron creadas usando un vector de gene piggyBac que contiene el cDNA de cecA gambiae y bajo el control reglamentario del promotor Carboxipeptidasa Aedes aegypti. Infecci&oacute;n con Plasmodium berghei result&oacute; en una reducci&oacute;n del 60% en el n&uacute;mero de ooquistes en mosquitos transg&eacute;nicos en comparaci&oacute;n con los mosquitos nontransgenic. Manipular el sistema inmunitario innato de mosquitos puede afectar negativamente su capacidad para servir de anfitriones para el desarrollo de pat&oacute;genos microbios.

La expresi&oacute;n ect&oacute;pica de un transgen de cecropina en el paludismo humano vector mosquito Anopheles gambiae (Diptera: Culicidae): efectos sobre la susceptibilidad a Plasmodium.

6S RNA sigma70 RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x4F9D;&#x8D56; sigma70 &#x7684;&#x5BA3;&#x4F20;&#x5458;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ED6;&#x4EBA;&#x9003;&#x907F;&#x751A;&#x81F3;&#x671F;&#x95F4;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x673A;&#x5236;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7531; RNA &#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x65F6;&#x7684;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x6838;&#x5FC3;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5143;&#x7D20;&#x786E;&#x5B9A;&#x6B64;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; &#xFF1B;&#x5F31;&#x4E0B;&#x8DCC;&#x767E;&#x5206;&#x4E4B;&#x4E09;&#x5341;&#x4E94;&#x5143;&#x7D20;&#x5141;&#x8BB8;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x662F; 6S RNA &#x654F;&#x611F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6269;&#x5C55;-10 &#x5143;&#x540C;&#x6837;&#x51B3;&#x5B9A;&#x9664; 6S RNA &#x6291;&#x5236;&#x65F6;&#x5171;&#x8BC6;-35 &#x5143;&#x7D20;&#x662F;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x4E00;&#x8D77;&#x9884;&#x6D4B;&#x6570;&#x4EE5;&#x767E;&#x8BA1;&#x7684;&#x6620;&#x5C04;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D7;&#x5230; 6S RNA &#x6291;&#x5236;&#x5728;&#x5E73;&#x7A33;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x6790;&#x8BC1;&#x5B9E; 6S RNA &#x4F9D;&#x8D56;&#x4E0B;&#x8C03;&#x4ECE; 68%&#x9884;&#x6D4B;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5BF9;&#x5E94;&#x4E8E;&#x5305;&#x542B;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6709; 49%&#x7684;&#x6620;&#x5C04;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x548C;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x5728;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5168;&#x7403;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x5EFA;&#x7ACB; 6S RNA&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x8868;&#x660E;&#x533A;&#x57DF; 4.2 sigma70 6S RNA &#x7684; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4E2D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x542F;&#x52A8; &#xFF1B; &#x533A;&#x57DF; 4.2 &#x7ED1;&#x5B9A;-35 &#x5143;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E00;&#x4E2A; 6S RNA &#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x8282;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED3;&#x5408;&#x533A; 4.2 sigma70 &#x7684;&#x7ADE;&#x4E89;&#x3002;

6S RNA &#x8C03;&#x8282;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x662F;&#x7531;&#x6838;&#x5FC3;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C; sigma70 4.2 &#x533A;&#x57DF;&#x7ADE;&#x4E89;&#x51B3;&#x5B9A;&#x7684;&#x3002;

6S RNA binds sigma70-RNA polymerase and downregulates transcription at many sigma70-dependent promoters, but others escape regulation even during stationary phase when the majority of the transcription machinery is bound by the RNA. We report that core promoter elements determine this promoter specificity; a weak -35 element allows a promoter to be 6S RNA sensitive, and an extended -10 element similarly determines 6S RNA inhibition except when a consensus -35 element is present. These two features together predicted that hundreds of mapped Escherichia coli promoters might be subject to 6S RNA dampening in stationary phase. Microarray analysis confirmed 6S RNA-dependent downregulation of expression from 68% of the predicted genes, which corresponds to 49% of the expressed genes containing mapped E. coli promoters and establishes 6S RNA as a global regulator in stationary phase. We also demonstrate a critical role for region 4.2 of sigma70 in RNA polymerase interactions with 6S RNA. Region 4.2 binds the -35 element during transcription initiation; therefore we propose one mechanism for 6S RNA regulation of transcription is through competition for binding region 4.2 of sigma70.

Promoter specificity for 6S RNA regulation of transcription is determined by core promoter sequences and competition for region 4.2 of sigma70.

6 S RNA lie sigma70-ARN polym&eacute;rase et transcription primaire &agrave; nombreux promoteurs sigma70-d&eacute;pendante, mais d&#39;autres &eacute;chappent m&ecirc;me pendant la phase stationnaire, quand la majorit&eacute; de la machinerie transcriptionnelle est li&eacute;e par l&#39;ARN. Les auteurs rapportent que les principaux &eacute;l&eacute;ments du promoteur d&eacute;terminent cette sp&eacute;cificit&eacute; du promoteur ; un &eacute;l&eacute;ment de-35 faible permet &agrave; un promoteur d&#39;&ecirc;tre sensible &agrave; 6 s RNA, et un &eacute;l&eacute;ment-10 &eacute;tendu d&eacute;termine de m&ecirc;me inhibition RNA 6 s sauf lorsqu&#39;un &eacute;l&eacute;ment de consensus -35 est pr&eacute;sent. Ensemble, ces deux caract&eacute;ristiques pr&eacute;dit que des centaines de mapp&eacute; promoteurs de Escherichia coli pourraient faire l&#39;objet de 6 s RNA amortissant en phase stationnaire. Microarray analysis confirm&eacute; 6 s downregulation d&#39;ARN-d&eacute;pendante de l&#39;expression de 68 % des g&egrave;nes pr&eacute;dits, ce qui correspond &agrave; 49 % des g&egrave;nes exprim&eacute;s contenant mapp&eacute; promoteurs d&#39;e. coli et &eacute;tablit 6 s RNA comme un r&eacute;gulateur global en phase stationnaire. Nous d&eacute;montrons &eacute;galement un r&ocirc;le essentiel pour la r&eacute;gion 4.2 de sigma70 dans les interactions de l&#39;ARN polym&eacute;rase ARN 6 s. R&eacute;gion 4.2 lie l&#39;&eacute;l&eacute;ment-35 au cours de l&#39;initiation de la transcription ; C&#39;est pourquoi nous proposons un m&eacute;canisme de r&eacute;gulation RNA 6 s de la transcription se fait par concours pour la r&eacute;gion de liaison 4.2 de sigma70.

Sp&eacute;cificit&eacute; du promoteur pour r&eacute;gulation RNA 6 s de la transcription est d&eacute;termin&eacute;e par les s&eacute;quences promotrices de noyau et de la concurrence pour la r&eacute;gion 4.2 de sigma70.

6S RNA bindet sigma70-RNA-Polymerase und Downregulates Transkription bei vielen sigma70-abh&auml;ngigen Promotoren, aber andere entkommen Verordnung auch w&auml;hrend der station&auml;ren Phase, wenn die Mehrheit der Maschine Transkription durch die RNA gebunden ist. Wir berichten, dass Projekttr&auml;ger Kernelemente dieses Projekttr&auml;ger Spezifit&auml;t bestimmen; eine schwache-35-Element k&ouml;nnen F&ouml;rderer 6S RNA empfindlich zu sein, und ein erweitertes-10-Element bestimmt ebenso 6S RNA Hemmung mit Ausnahme, wenn ein Konsens-35-Element vorhanden ist. Diese beiden Funktionen voraus zusammen, dass Hunderte von zugeordneten Escherichia-coli-Promotoren 6S RNA-D&auml;mpfung in der station&auml;ren Phase unterliegen k&ouml;nnte. Microarray-Analyse best&auml;tigt 6S RNS-abh&auml;ngige Heraufregulation des Ausdrucks von 68 % der vorhergesagten Gene, das entspricht 49 % der exprimierten Gene mit E. Coli Promotoren zugeordnet und 6S RNA als globaler Regulator in station&auml;re Phase. Wir zeigen auch eine entscheidende Rolle f&uuml;r die Region 4.2 sigma70 RNS-Polymerase Interaktionen mit 6S RNA. Region 4.2 bindet das-35-Element w&auml;hrend der Transkription Einleitung; Daher schlagen wir vor, dass ein Mechanismus f&uuml;r 6S RNA Regulierung der Transkription durch Wettbewerb f&uuml;r Bindung Region 4.2 des sigma70 sind.

Projekttr&auml;ger Spezifit&auml;t f&uuml;r 6S RNA Regulierung der Transkription wird durch Kern Projekttr&auml;ger Sequenzen und Wettbewerb f&uuml;r Region 4.2 des sigma70 bestimmt.

6S RNA si lega sigma70-RNA polimerasi e sottoregola trascrizione presso molti promotori sigma70-dipendente, ma altri fuga regolamento anche durante la fase stazionaria quando la maggior parte del macchinario della trascrizione &egrave; associata da RNA. Segnaliamo che il nucleo promotore elementi determinano questa specificit&agrave; del promotore; un elemento debole-35 permette un promotore essere 6S RNA sensibile e prolungato-10 elemento Analogamente determina inibizione RNA 6S tranne quando &egrave; presente un elemento di consenso -35. Queste due caratteristiche insieme predisse che centinaia di mappato promotori di Escherichia coli potrebbe essere soggetto a 6S RNA di bagnatura in fase stazionaria. Analisi di microarray confermato 6S RNA-dipendente downregulation di espressione dal 68% dei geni predetti, che corrisponde al 49% dei geni espressi contenente mappato promotori di e. coli e stabilisce 6S RNA come un regolatore globale in fase stazionaria. Abbiamo anche dimostrare un ruolo critico per regione 4.2 sigma70 nelle interazioni RNA polimerasi con 6S RNA. Regione 4.2 associa l&#39;elemento-35 durante l&#39;iniziazione della trascrizione; Proponiamo pertanto un meccanismo per la regolazione di 6S RNA di trascrizione &egrave; attraverso il concorso di idee per regione associazione 4.2 sigma70.

Specificit&agrave; del promotore di 6S regolamento del RNA di trascrizione &egrave; determinato dal nucleo promotore sequenze e concorso di idee per regione 4.2 sigma70.

6 S RNA sigma70 RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x306F;&#x8EE2;&#x5199;&#x591A;&#x304F;&#x306E; sigma70 &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; RNA &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x6642;&#x3067;&#x3082;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x30A8;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30D7;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x8981;&#x7D20;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3059;&#x308B;;&#x5F31;&#x3044;-35 &#x8981;&#x7D20; 6 s RNA &#x304C;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x304D;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30B9;-35 &#x8981;&#x7D20;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x62E1;&#x5F35;-10 &#x8981;&#x7D20;&#x306F;&#x540C;&#x69D8;&#x306B; 6 s RNA &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x9664;&#x304F;&#x6C7A;&#x307E;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 2 &#x3064;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x4F55;&#x767E;&#x3082;&#x306E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x3067;&#x306E; RNA 6 s &#x3092;&#x6E7F;&#x3057;&#x6C34;&#x4E88;&#x544A;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;6 s RNA &#x4F9D;&#x5B58;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 49 &#xFF05; &#x306B;&#x76F8;&#x5F53;&#x3059;&#x308B;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x304B;&#x3089; 68 &#xFF05; &#x306E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30DE;&#x30C3;&#x30D7; 6 s RNA &#x306F;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB; &#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x3067;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x5730;&#x57DF; 4.2 sigma70 6 s RNA &#x304C; RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5730;&#x57DF; 4.2-35 &#x8981;&#x7D20;&#x8EE2;&#x5199;&#x958B;&#x59CB;&#x6642;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067; 6 s RNA &#x8EE2;&#x5199;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E; 1 &#x3064; sigma70 &#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x9818;&#x57DF; 4.2 &#x306E;&#x7AF6;&#x6280;&#x4F1A;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x3067;&#x3059;.

6 S RNA &#x8EE2;&#x5199;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30A2; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x914D;&#x5217;&#x3068; sigma70 &#x306E;&#x5730;&#x57DF; 4.2 &#x306E;&#x7AF6;&#x4E89;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

6S RNA &#xB9CE;&#xC740; sigma70 &#xC885;&#xC18D; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; sigma70 RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBC0F; downregulates &#xC804;&#xC0AC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E4;&#xB978; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xAE30;&#xACC4; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; RNA&#xB97C; &#xC900;&#xC218;&#xD560; &#xB54C; &#xACE0;&#xC815; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB3C4; &#xD0C8;&#xCD9C;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD575;&#xC2EC; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC694;&#xC18C; &#xACB0;&#xC815;&#xC774; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;; &#xC57D;&#xD55C;-35 &#xC694;&#xC18C; &#xC218; &#xC218; 6S RNA, &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xBC0F; &#xD569;&#xC758;-35 &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xC788;&#xC73C;&#xBA74; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C;-10 &#xC694;&#xC18C; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; 6S RNA &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xC81C;&#xC678; &#xD558; &#xACE0; &#xACB0;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB450; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC740; &#xD568;&#xAED8; &#xC218;&#xBC31; &#xAC1C;&#xC758; &#xB9E4;&#xD551;&#xB41C; Escherichia&#xC758; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; 6S RNA &#xCD95; &#xACE0;&#xC815; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1B;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC608;&#xCE21; &#xD588;&#xB2E4;. Microarray &#xBD84;&#xC11D; &#xD655;&#xC778; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xB9E4;&#xD551;&#xB41C; 6S RNA &#xC885;&#xC18D; downregulation &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 49%&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xC608;&#xCE21; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 68%&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DD;&#xC758; &#xACE0;&#xC815; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB85C; 6S RNA&#xC744; &#xC124;&#xC815;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; 4.2 sigma70 6S RNA&#xC640; RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xC5ED; 4.2 &#xC804;&#xC0AC; &#xAC1C;&#xC2DC;; &#xC911;-35 &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; 6S RNA &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; sigma70&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED; 4.2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC81C;&#xC548; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; 6S RNA &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD575;&#xC2EC; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBC0F; sigma70&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED; 4.2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

6S RNA ATA sigma70-ARN polimerasa y la transcripci&oacute;n de algo en muchos promotores de sigma70-dependiente, pero otros escapan Reglamento incluso durante la fase estacionaria, cuando la mayor&iacute;a de la maquinaria de transcripci&oacute;n est&aacute; limitada por el RNA. Divulgamos que n&uacute;cleo promotor elementos determinan la especificidad de este promotor; un elemento d&eacute;bil de-35 permite un promotor que 6S RNA sensible, y un elemento extendido de-10 asimismo determina inhibici&oacute;n de RNA de 6S excepto cuando existe un elemento de consenso -35. Estas dos caracter&iacute;sticas juntos predijeron que cientos de asignadas promotores de Escherichia coli podr&iacute;an ser objeto de 6S RNA humedecimiento en fase estacionaria. An&aacute;lisis de microarrays confirman 6S downregulation del RNA-dependiente de la expresi&oacute;n del 68% de los genes predichos, que corresponde al 49% de los genes expresados con trazado promotores de e. coli y 6S RNA establece como un regulador global en fase estacionaria. Tambi&eacute;n demostramos un papel cr&iacute;tico para la regi&oacute;n 4.2 de sigma70 en las interacciones de la ARN polimerasa con ARN 6S. Regi&oacute;n 4.2 une el elemento-35 durante la iniciaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n; por lo tanto, proponemos un mecanismo de regulaci&oacute;n de RNA de 6S de la transcripci&oacute;n es a trav&eacute;s de la competencia para la regi&oacute;n de enlace 4.2 de sigma70.

Especificidad del promotor para regulaci&oacute;n de RNA de 6S de la transcripci&oacute;n se determina por n&uacute;cleo promotor secuencias y competencia para la regi&oacute;n 4.2 de sigma70.

6S RNA &#x662F;&#x5C0F;&#x975E;&#x7F16;&#x7801; RNA &#x4E0E;&#x897F;&#x683C;&#x739B; 70 RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x5F55;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x5BA3;&#x4F20;&#x5458;&#x671F;&#x95F4;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x4F55;&#x65F6;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x897F;&#x683C;&#x739B; 70 RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#xFF0C;6S RNA &#x4ECE;&#x4E8B;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x897F;&#x683C;&#x739B; 70 RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x76F8;&#x4F3C;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50; RNA &#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6A21;&#x677F; RNA &#x5408;&#x6210;&#x7684; DNA &#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x5DF2;&#x63D0;&#x51FA; 6S RNA &#x6A21;&#x4EFF;&#x6784;&#x8C61;&#x7684; DNA &#x5728;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x4E0E; 6S &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x63A5;&#x89E6; RNA &#x6216; DNA &#x53EF;&#x80FD;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x8BE5;&#x5730;&#x533A; 4.2 &#x7684; sigma(70) &#x662F; 6S RNA &#x4E0E; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B9A;&#x4E49;&#x6DB5;&#x76D6;&#x6574;&#x4E2A;&#x5730;&#x533A; 4.2&#xFF0C;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x4FA7;&#x91CD;&#x4E8E;&#x6B64;&#x87BA;&#x65CB;&#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x533A;&#x57DF;&#x7684; DNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E0E;&#x87BA;&#x65CB;&#x8F6C;&#x87BA;&#x65CB;&#x56FE;&#x6848;&#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x87BA;&#x65CB;&#x6B8B;&#x7559;&#x5E26;&#x6B63;&#x7535;&#x8377;&#x6269;&#x5927;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8868;&#x9762;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x533A;&#x57DF; 4.2 &#x8D1F;&#x7535;&#x8377;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x524A;&#x5F31;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; 6S RNA&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E76;&#x4E0D;&#x540C;&#x6837;&#x5F71;&#x54CD; DNA &#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E3A;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50; DNA &#x548C; 6S RNA &#x4E0A;&#x7684; sigma(70) &#x5730;&#x533A; 4.2 &#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x70B9;&#x91CD;&#x53E0;&#x4F46;&#x4E0D;&#x540C;&#x3001; &#x63D0;&#x9AD8;&#x6838;&#x5FC3;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5143;&#x7D20;&#x5982;&#x4F55;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5B9A;&#x4E49;&#x5BF9; 6S RNA &#x8C03;&#x63A7;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x5BA3;&#x4F20;&#x5458;&#x7684;&#x6709;&#x8DA3;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;

6S RNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Esigma(70) &#x8981;&#x6C42; sigma(70) &#x5730;&#x533A; 4.2 &#x7684;&#x6B63;&#x7535;&#x8377;&#x7684;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x3002;

6S RNA is a small, non-coding RNA that interacts with sigma(70)-RNA polymerase and downregulates transcription at many promoters during stationary phase. When bound to sigma(70)-RNA polymerase, 6S RNA is engaged in the active site of sigma(70)-RNA polymerase in a manner similar enough to promoter DNA that the RNA can serve as a template for RNA synthesis. It has been proposed that 6S RNA mimics the conformation of DNA during transcription initiation, suggesting contacts between RNA polymerase and 6S RNA or DNA may be similar. Here we demonstrate that region 4.2 of sigma(70) is critical for the interaction between 6S RNA and RNA polymerase. We define an expanded binding surface that encompasses positively charged residues throughout the recognition helix of the helix-turn-helix motif in region 4.2, in contrast to DNA binding that is largely focused on the N-terminal region of this helix. Furthermore, negatively charged residues in region 4.2 weaken binding to 6S RNA but do not similarly affect DNA binding. We propose that the binding sites for promoter DNA and 6S RNA on region 4.2 of sigma(70) are overlapping but distinct, raising interesting possibilities for how core promoter elements contribute to defining promoters that are sensitive to 6S RNA regulation.

6S RNA binding to Esigma(70) requires a positively charged surface of sigma(70) region 4.2.

6 S RNA est un petit ARN qui interagit avec le sigma 70-RNA polym&eacute;rase entra&icirc;ne transcription et &agrave; nombreux promoteurs au cours de la phase stationnaire non codantes. Lorsqu&#39;elle est li&eacute;e &agrave; la sigma 70-ARN polym&eacute;rase, 6 s RNA est engag&eacute; dans le site actif de sigma 70-ARN polym&eacute;rase d&#39;une mani&egrave;re assez similaire au promoteur ADN et l&#39;ARN pouvant servir de mod&egrave;le pour la synth&egrave;se d&#39;ARN. Il a &eacute;t&eacute; propos&eacute; que 6 s RNA imite la conformation de l&#39;ADN au cours de l&#39;initiation de la transcription, sugg&eacute;rant des contacts entre 6 s et de l&#39;ARN polym&eacute;rase ARN ou ADN peut-&ecirc;tre &ecirc;tre similaire. Nous d&eacute;montrons que cette r&eacute;gion 4.2 du sigma(70) est critique pour l&#39;interaction entre l&#39;ARN 6 s et de l&#39;ARN polym&eacute;rase. Nous d&eacute;finissons une surface de liaison &eacute;largie qui englobe r&eacute;sidus tout au long de la spirale de la reconnaissance du motif h&eacute;lice-tour-h&eacute;lice en r&eacute;gion 4.2, contrairement &agrave; la liaison de l&#39;ADN qui est essentiellement ax&eacute;e sur la r&eacute;gion N-terminale de cette h&eacute;lice positivement charg&eacute;s. En outre, des r&eacute;sidus charg&eacute;s n&eacute;gativement en r&eacute;gion 4.2 affaiblissent la liaison &agrave; l&#39;ARN 6 s mais n&#39;affectent pas de la m&ecirc;me fa&ccedil;on l&#39;attache d&#39;ADN. Nous proposons que les sites de liaison ARN ADN et 6 s de promoteur sur la r&eacute;gion 4.2 de sigma(70) sont chevauchent mais distinctes, sensibilisation des possibilit&eacute;s int&eacute;ressantes pour comment &eacute;l&eacute;ments promoteurs de base contribuent &agrave; d&eacute;finir les promoteurs qui sont sensibles au r&egrave;glement RNA 6 s.

6 S ARN contraignantes &agrave; Esigma(70) n&eacute;cessite une surface charg&eacute;e positivement de la r&eacute;gion de sigma(70) 4.2.

6S RNA ist ein kleines, non-coding RNA, die mit Sigma 70-RNA-Polymerase und Downregulates Transkription auf viele Projekttr&auml;ger w&auml;hrend der station&auml;ren Phase interagiert. Bei Bindung an Sigma-70-RNA-Polymerase, 6S, die RNA der aktiven Site von Sigma 70-RNS-Polymerase in gewissem Sinne &auml;hnlich genug, um F&ouml;rderer DNA beteiligt ist, die als Vorlage f&uuml;r RNA Synthese die RNA dienen kann. Es wurde vorgeschlagen, dass 6S RNA die Konformation der DNA w&auml;hrend der Transkription Einleitung imitiert, was auf Kontakte zwischen RNS-Polymerase und 6S RNA oder DNA kann &auml;hnlich sein. Hier zeigen wir, dass diese Region 4.2 von sigma(70) f&uuml;r die Interaktion zwischen 6S RNA und RNA-Polymerase von entscheidender Bedeutung ist. Wir definieren eine erweiterte Bindung-Oberfl&auml;che, die umfasst, positiv aufgeladen R&uuml;ckst&auml;nde in der Helix Anerkennung des Helix-Turn-Helix-Motivs Region 4.2, im Gegensatz zu DNA-Bindung, die gr&ouml;&szlig;tenteils auf der N-terminalen Region diese Helix ausgerichtet ist. Dar&uuml;ber hinaus negativ geladenen R&uuml;ckst&auml;nde Region 4.2 Bindung an 6S RNA zu schw&auml;chen aber &auml;hnlich wirken sich nicht DNA-Bindung. Wir schlagen die Bindungsstellen f&uuml;r Projekttr&auml;ger DNA und 6S RNA auf Region 4.2 sigma(70) &uuml;berlappende sind, jedoch unterschiedliche, hebt interessante M&ouml;glichkeiten wie Projekttr&auml;ger Kernelemente zu definieren Promotoren, die empfindlich auf 6S RNA Verordnung beitragen.

6S RNA binden an Esigma(70) erfordert eine positiv geladene Oberfl&auml;che der sigma(70) Region 4.2.

6S RNA &egrave; un piccolo, non codificanti RNA che interagisce con il sigma (70)-polimerasi del RNA e trascrizione sottoregola presso molti promotori durante la fase stazionaria. Quando associato a sigma (70) - RNA polimerasi, 6S RNA &egrave; impegnato nel sito attivo di sigma (70) - RNA polimerasi in maniera abbastanza simile al promotore del DNA che il RNA pu&ograve; servire come modello per la sintesi di RNA. &Egrave; stato proposto che 6S RNA imita la conformazione del DNA durante l&#39;iniziazione della trascrizione, suggerendo contatti tra RNA polimerasi e 6S RNA o DNA possa essere simile. Qui dimostriamo che 4.2 regione di sigma(70) &egrave; critico per l&#39;interazione tra 6S RNA e RNA polimerasi. Definiamo una superficie estesa associazione che comprende caricati positivamente residui durante l&#39;elica di riconoscimento del motivo elica-giro-elica nella regione 4.2, in contrasto con il grippaggio del DNA che &egrave; principalmente focalizzato sulla regione N-terminale di questa elica. Inoltre, residui di caricate negativa nella regione 4.2 indeboliscono associazione a 6S RNA ma non allo stesso modo influiscono sul legame del DNA. Proponiamo che i siti di legame per promotore DNA e 6S RNA sulla regione 4.2 di sigma(70) sono sovrapposti ma distinti, sollevando interessanti possibilit&agrave; per come elementi promotore core contribuiscono a definire promotori che sono sensibili al regolamento RNA 6S.

6S RNA binding a Esigma(70) richiede una superficie di caricata positivamente della regione sigma(70) 4.2.

6 S RNA &#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x3001;&#x975E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30B0;&#x30DE; &#xFF08;70&#xFF09; &#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B; RNA-RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x306F;&#x8EE2;&#x5199;&#x3002;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE; (70) - RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;RNA &#x30B7;&#x30B0;&#x30DE; (70) &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x5F93;&#x4E8B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; 6 s - &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x308B; RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; DNA&#x3001;RNA &#x304C; RNA &#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3002;6 S RNA &#x8EE2;&#x5199;&#x958B;&#x59CB;&#x6642;&#x306E; DNA &#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068; 6 s &#x9593;&#x306E;&#x9023;&#x7D61;&#x5148;&#x3092;&#x793A;&#x5506; RNA &#x307E;&#x305F;&#x306F; DNA &#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F; sigma(70) &#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x306E; 4.2 &#x306F; 6 s RNA&#x3001;RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x8377;&#x96FB;&#x6B8B;&#x57FA;&#x8A8D;&#x8B58;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5730;&#x57DF; 4.2, &#x4E3B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3066;&#x3044;&#x308B; DNA &#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;-&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x3092;&#x5305;&#x542B;&#x3001;&#x62E1;&#x5F35;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x8868;&#x9762;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5730;&#x57DF; 4.2 &#x8CA0;&#x8377;&#x96FB;&#x6B8B;&#x57FA; 6 s RNA &#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x5F31;&#x3081;&#x308B;&#x304C;&#x540C;&#x69D8;&#x306B; DNA &#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x9818;&#x57DF; 4.2 sigma(70) &#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; DNA &#x3068; 6 s RNA &#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306F; 6 s RNA &#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x8981;&#x7D20;&#x3092;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3092;&#x500B;&#x5225;&#x306E;&#x8ABF;&#x9054;&#x306E;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x91CD;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

6 S RNA &#x7D50;&#x5408; Esigma(70) &#x306B; sigma(70) &#x5730;&#x57DF; 4.2 &#x306E;&#x6B63;&#x8377;&#x96FB;&#x8868;&#x9762;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

6S RNA &#xBE44; &#xCF54;&#xB529; RNA &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; (70)-RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC640; downregulates &#xC804;&#xC0AC; &#xB9CE;&#xC740; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xC815; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xC740;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; (70)-RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;, 6S &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; DNA RNA RNA &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xCDA9;&#xBD84;&#xD788; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; (70)-RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC885;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; RNA&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xACBD;&#xC6B0;. 6S RNA &#xC804;&#xC0AC; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xC911; DNA&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBAA8;&#xBC29;&#xD55C; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC640; 6S &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; RNA &#xB610;&#xB294; DNA &#xC720;&#xC0AC; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; sigma(70)&#xC758; &#xD574;&#xB2F9; &#xC9C0;&#xC5ED; 4.2&#xC740; 6S RNA&#xC640; RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC11C;&#xD53C;&#xC2A4; &#xC815;&#xC758; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC5ED; 4.2, &#xD06C;&#xAC8C;&#xC774; &#xB098;&#xC120; N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD98; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xB098;&#xC120; &#xCC28;&#xB840; &#xB098;&#xC120; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC758; &#xC778;&#xC2DD; &#xB098;&#xC120; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xCCAD;&#xAD6C;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC9C0;&#xC5ED; 4.2 &#xBD80;&#xC815; &#xCCAD;&#xAD6C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 6S RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC57D;&#xD558;&#xAC8C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Sigma(70)&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED; 4.2&#xC5D0; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; DNA&#xC640; 6S RNA&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD575;&#xC2EC; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC694;&#xC18C; 6S RNA &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xC815;&#xC758;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC591;&#xC721; &#xD765;&#xBBF8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xACB9;&#xCE58;&#xBA70; &#xC81C;&#xC548; &#xD55C;&#xB2E4;.

6S RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; Esigma(70) sigma(70) &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; 4.2 &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCDA9;&#xC804;&#xB41C; &#xD45C;&#xBA74;&#xC774; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

6S RNA es un peque&ntilde;o, no codificante del RNA que interact&uacute;a con el sigma 70-RNA polimerasa y regula la transcripci&oacute;n en muchos promotores durante la fase estacionaria. Cuando est&eacute;n Unidas al sigma 70-ARN polimerasa, 6S RNA participa en el sitio activo de la polimerasa de sigma 70-RNA de una manera bastante similar al promotor de ADN que el RNA puede servir como una plantilla para la s&iacute;ntesis de ARN. Se ha propuesto que el RNA 6S imita la conformaci&oacute;n del ADN durante la iniciaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n, sugiriendo contactos entre la ARN polimerasa y 6S ARN o ADN puede ser similar. Aqu&iacute; demostramos que esa regi&oacute;n 4.2 de sigma(70) es fundamental para la interacci&oacute;n entre 6S ARN y ARN polimerasa. Definimos una superficie ampliada Uni&oacute;n que abarca residuos a lo largo de la h&eacute;lice de reconocimiento del motivo h&eacute;lice-giro-h&eacute;lice en regi&oacute;n 4.2, en contraste con la Uni&oacute;n de ADN que se centra principalmente en la regi&oacute;n N-terminal de esta h&eacute;lice positivamente cargados. Adem&aacute;s, residuos cargados negativamente en regi&oacute;n 4.2 debilitan la Uni&oacute;n a RNA 6S pero igualmente no afecta DNA obligatorio. Proponemos que los sitios de Uni&oacute;n para el promotor ARN ADN y 6S en regi&oacute;n 4.2 de sigma(70) se solapan pero distintas, criando posibilidades interesantes de c&oacute;mo n&uacute;cleo promotor elementos contribuyen a la definici&oacute;n de promotores que son sensibles a la regulaci&oacute;n de RNA 6S.

Uni&oacute;n del RNA de 6S a Esigma(70) requiere una superficie de carga positiva de sigma(70) regi&oacute;n 4.2.

Beta &#x5939;&#x662F;&#x6ED1;&#x52A8;&#x5939;&#x845B; DNA &#x5408;&#x6210;&#x6240;&#x9700;&#x57FA;&#x672C;&#x590D;&#x5236;&#x3002;Beta &#x5939;&#x4E5F;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5176;&#x4ED6;&#x65B9;&#x9762;&#x7684; DNA &#x4EE3;&#x8C22;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; DNA &#x9519;&#x914D;&#x4FEE;&#x590D; (MMR)&#x3002;&#x67AF;&#x8349;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC; dnaN5 &#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x4E00;&#x79CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684; beta &#x5939;&#x542B; G73R &#x66FF;&#x4EE3;&#x3002;DnaN5 &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6E29;&#x5EA6;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x5728; 49 &#x5EA6; C&#x3001; DNA &#x590D;&#x5236;&#x800C;&#x589E;&#x957F;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5B55;&#x4EA7;&#x5987;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x5728;&#x7EB5;&#x5BB9;&#x6E29;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x7F3A;&#x9677;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x9891;&#x7387;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9009;&#x62E9;&#x4E86;&#x4E3A;&#x6551;&#x51FA;&#x6D3B;&#x529B;&#x5728; 49 &#x5EA6; C&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5206;&#x79BB; DNA &#x590D;&#x5236;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684; dnaN5 &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4ECE; MMR &#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B64;&#x7ACB;&#x8FD8;&#x539F;&#x5728; nonpermissive &#x6E29;&#x5EA6;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x7EE7;&#x7EED;&#x7EF4;&#x6301;&#x5728;&#x7A81;&#x53D8;&#x9891;&#x7387;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x7684; dnaN5 &#x4E09;&#x4E2A;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A; dnaN &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801; G73R &#x66FF;&#x6362;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E09;&#x4E2A;&#x65B0;&#x9519;&#x4E49;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x9519;&#x4E49;&#x7A81;&#x53D8;&#x662F; S22P&#x3001; S181G&#x3001; E346K&#x3002;&#x5176;&#x4E2D;&#xFF0C;S181G &#x548C; E346K &#x4F4D;&#x4E8E;&#x758F;&#x6C34;&#x816D;&#x88C2;&#x7684; beta &#x7248;&#x5939;&#xFF0C;&#x88AB;&#x5360;&#x9886;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A; beta &#x5939;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5171;&#x540C;&#x7AD9;&#x70B9;&#x9644;&#x8FD1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A; dnaN &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x9891;&#x7387;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x5B55;&#x4EA7;&#x5987;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; S181G &#x548C; E346K &#x5141;&#x8BB8;&#x5728;&#x6E29;&#x5EA6;&#x5347;&#x9AD8;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x9891;&#x7387;&#x65F6;&#x5206;&#x5F00; G73R&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x67AF;&#x8349; beta &#x5939;&#x5177;&#x4F53;&#x6B8B;&#x7559;&#x53D8;&#x5316;&#x5206;&#x9694; beta &#x94B3;&#x4ECE;&#x5176;&#x5B55;&#x4EA7;&#x5987;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; DNA &#x590D;&#x5236;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#x67AF;&#x8349; beta &#x5939;&#x5728;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x5176;&#x89D2;&#x8272;&#x4E0D;&#x5339;&#x914D;&#x4ECE; DNA &#x590D;&#x5236;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4FEE;&#x590D;&#x3002;

The beta clamp is an essential replication sliding clamp required for processive DNA synthesis. The beta clamp is also critical for several additional aspects of DNA metabolism, including DNA mismatch repair (MMR). The dnaN5 allele of Bacillus subtilis encodes a mutant form of beta clamp containing the G73R substitution. Cells with the dnaN5 allele are temperature sensitive for growth due to a defect in DNA replication at 49 degrees C, and they show an increase in mutation frequency caused by a partial defect in MMR at permissive temperatures. We selected for intragenic suppressors of dnaN5 that rescued viability at 49 degrees C to determine if the DNA replication defect could be separated from the MMR defect. We isolated three intragenic suppressors of dnaN5 that restored growth at the nonpermissive temperature while maintaining an increase in mutation frequency. All three dnaN alleles encoded the G73R substitution along with one of three novel missense mutations. The missense mutations isolated were S22P, S181G, and E346K. Of these, S181G and E346K are located near the hydrophobic cleft of the beta clamp, a common site occupied by proteins that bind the beta clamp. Using several methods, we show that the increase in mutation frequency resulting from each dnaN allele is linked to a defect in MMR. Moreover, we found that S181G and E346K allowed growth at elevated temperatures and did not have an appreciable effect on mutation frequency when separated from G73R. Thus, we found that specific residue changes in the B. subtilis beta clamp separate the role of the beta clamp in DNA replication from its role in MMR.

Mutations in the Bacillus subtilis beta clamp that separate its roles in DNA replication from mismatch repair.

La pince b&#xEA;ta est une pince de r&#xE9;plication essentielle coulissant n&#xE9;cessaire &#xE0; la synth&#xE8;se d&#x26;#39;ADN processive. La pince beta est &#xE9;galement critique pour plusieurs autres aspects de m&#xE9;tabolisme de l&#x26;#39;ADN, y compris de r&#xE9;paration des m&#xE9;sappariements d&#x26;#39;ADN (MMR). L&#x26;#39;all&#xE8;le dnaN5 de Bacillus subtilis code pour une forme mutante de la pince b&#xEA;ta contenant la substitution G73R. Cellules avec l&#x26;#39;all&#xE8;le dnaN5 sont sensibles &#xE0; la temp&#xE9;rature de la croissance due &#xE0; un d&#xE9;faut de r&#xE9;plication de l&#x26;#39;ADN &#xE0; 49 degr&#xE9;s C, et ils montrent une augmentation de la fr&#xE9;quence de mutation caus&#xE9; par un d&#xE9;faut partiel de ROR &#xE0; des temp&#xE9;ratures permissives. Nous avons s&#xE9;lectionn&#xE9; pour des suppresseurs intrag&#xE9;niques de dnaN5 qui a sauv&#xE9; la viabilit&#xE9; &#xE0; 49 degr&#xE9;s C afin de d&#xE9;terminer si le d&#xE9;faut r&#xE9;plication de l&#x26;#39;ADN peuvent &#xEA;tre s&#xE9;par&#xE9;s du d&#xE9;faut MMR. Nous avons isol&#xE9; trois suppresseurs intrag&#xE9;niques de dnaN5 qui ont r&#xE9;tabli la croissance &#xE0; la temp&#xE9;rature non permissive, tout en maintenant une augmentation de la fr&#xE9;quence de mutation. Tous les trois all&#xE8;les DNAN cod&#xE9; la substitution G73R avec l&#x26;#39;une des trois mutations faux-sens nouveaux. Les mutations faux-sens ont &#xE9;t&#xE9; isol&#xE9;s S22P, S181G, et E346K. De ceux-ci, S181G et E346K sont situ&#xE9;s &#xE0; proximit&#xE9; de la fente hydrophobe de la pince b&#xEA;ta, un site occup&#xE9; par commune prot&#xE9;ines qui se lient la pince b&#xEA;ta. Utilisation de plusieurs m&#xE9;thodes, nous montrons que l&#x26;#39;augmentation de la fr&#xE9;quence de mutation r&#xE9;sultant de chaque all&#xE8;le DNAN est li&#xE9;e &#xE0; un d&#xE9;faut de ROR. En outre, nous avons constat&#xE9; que S181G et E346K permis une croissance &#xE0; des temp&#xE9;ratures &#xE9;lev&#xE9;es et n&#x26;#39;ont pas eu un effet appr&#xE9;ciable sur la fr&#xE9;quence de mutation lorsqu&#x26;#39;il est s&#xE9;par&#xE9; de G73R. Ainsi, nous avons trouv&#xE9; que les changements de r&#xE9;sidus sp&#xE9;cifiques dans la version b&#xEA;ta de B. subtilis pince s&#xE9;parer le r&#xF4;le de la pince b&#xEA;ta r&#xE9;plication de l&#x26;#39;ADN de son r&#xF4;le dans le ROR.

Des mutations dans la pince Beta Bacillus subtilis qui s&#xE9;parent ses r&#xF4;les dans la r&#xE9;plication d&#x26;#39;ADN &#xE0; partir de Mismatch Repair

Die Beta-Klemme ist eine wesentliche Replikation Gleitklemme f&uuml;r prozessualen DNA-Synthese ben&ouml;tigt. Die Beta-Klemme ist auch wichtig f&uuml;r einige zus&auml;tzliche Aspekte der DNA-Stoffwechsel, einschlie&szlig;lich DNA-Mismatch-Reparatur (MMR). Die dnaN5-Allel von Bacillus Subtilis codiert eine mutierte Form des Beta-Schelle, enth&auml;lt die G73R-Substitution. Zellen mit der dnaN5-Allel sind temperaturempfindlich f&uuml;r Wachstum durch einen Defekt in der DNA-Replikation bei 49 Grad C, und sie zeigen eine Erh&ouml;hung in Mutation Frequenz durch einen teilweise defekt in MMR bei permissive Temperaturen verursacht. Wir ausgew&auml;hlt f&uuml;r intragenic D&auml;mpfer der dnaN5, die Lebensf&auml;higkeit bei 49 Grad C zu bestimmen, ob der DNA-Replikation Fehler getrennt werden k&ouml;nnte gerettet aus der MMR-defekt. Wir isoliert drei intragenic D&auml;mpfer der dnaN5, das Wachstum der nonpermissive Temperatur und gleichzeitig eine Erh&ouml;hung der Mutation Frequenz wiederhergestellt. Alle drei DnaN Allele codiert die G73R Substitution zusammen mit einem der drei neuartige Missense-Mutationen. Die Missense-Mutationen, die isoliert wurden, S22P, S181G und E346K. Von diesen befinden sich S181G und E346K in der N&auml;he der hydrophoben Hasenscharte der Beta-Klammer, einem gemeinsamen Standort von Proteinen, die die Beta-Klammer binden besetzt. Mit verschiedenen Methoden, zeigen wir, dass der Anstieg der Mutation Frequenz jedes Allel DnaN infolge eines Mangels in MMR verkn&uuml;pft ist. Dar&uuml;ber hinaus fanden wir, dass S181G und E346K Wachstum bei erh&ouml;hten Temperaturen erlaubt und haben keine sp&uuml;rbare Auswirkung auf Mutation Frequenz von G73R getrennt. So fanden wir, dass bestimmte R&uuml;ckst&auml;nde &Auml;nderungen in der B. Subtilis-Beta-Klemme die Rolle der Beta-Klammer in der DNA-Replikation von ihrer Rolle in MMR trennen.

Mutationen in der Bacillus Subtilis Beta Klemme, die seine Rolle in der DNA-Replikation von Konflikt trennen reparieren.

La pinza beta &egrave; un&#39;essenziale replica morsetto di bloccaggio necessaria per la sintesi del DNA processive. Il morsetto beta &egrave; anche fondamentale per diversi aspetti aggiuntivi del metabolismo del DNA, compreso DNA mismatch repair (MMR). L&#39;allele dnaN5 di Bacillus subtilis codifica una forma mutante della pinza beta contenente la sostituzione G73R. Le cellule con l&#39;allele dnaN5 sono termosensibili per la crescita a causa di un difetto nella replicazione del DNA a 49 gradi C, e mostrano un aumento nella frequenza di mutazione causata da un difetto parziale di MMR a temperature permissive. Abbiamo selezionato per intragenic soppressori di dnaN5 che salv&ograve; vitalit&agrave; a 49 gradi C per determinare se il difetto di replica del DNA potrebbe essere separato dal difetto MMR. Abbiamo isolato tre intragenic soppressori di dnaN5 che ha restaurato la crescita alla temperatura di nonpermissive pur mantenendo un aumento nella frequenza di mutazione. Tutti i tre alleli dnaN codificato la sostituzione G73R insieme a uno dei tre mutazioni missenso romanzo. Le mutazioni missenso isolate sono stati S22P, S181G ed E346K. Di questi, S181G ed E346K si trovano vicino la schisi idrofoba del morsetto beta, un comune sito occupato da proteine che legano il morsetto di beta. Utilizzando diversi metodi, ci mostra che l&#39;aumento della frequenza di mutazione derivanti da ciascun allele dnaN &egrave; legata a un difetto nel MMR. Inoltre, abbiamo trovato che S181G ed E346K ha permesso la crescita a temperature elevate e non hanno un effetto rilevante sulla frequenza di mutazione quando separati da G73R. Cos&igrave;, abbiamo scoperto che i cambiamenti specifici residui nel morsetto b. subtilis beta separano il ruolo del morsetto beta nella replicazione del DNA dal suo ruolo nel MMR.

Mutazioni nel morsetto Bacillus subtilis beta che separano i suoi ruoli nella replicazione del DNA da mismatch repair.

&#x3B2;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30C3;&#x30B7;&#x30D6;&#x306E;DNA&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x8907;&#x88FD;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x3067;&#x3059;&#x3002; &#x3B2;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;DNA&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x4FEE;&#x5FA9;&#xFF08;MMR&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3080;DNA&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x306E;dnaN5&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;G73R&#x7F6E;&#x63DB;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3B2;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x578B;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; dnaN5&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;49&#x2103;&#x3067;&#x306E;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6E29;&#x5EA6;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x8A31;&#x5BB9;&#x6E29;&#x5EA6;&#x3067;MMR&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306A;&#x6B20;&#x9665;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x983B;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x6B20;&#x9665;&#x304C;MMR&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x5224;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;49&#x5EA6;C&#x3067;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x3092;&#x6551;&#x51FA;dnaN5&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5185;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x983B;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x975E;&#x8A31;&#x5BB9;&#x6E29;&#x5EA6;&#x3067;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;dnaN5&#x306E;3&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5185;&#x30B5;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3092;&#x5358;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;dnaN&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;3&#x3064;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x306E;&#x30DF;&#x30B9;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;G73R&#x7F6E;&#x63DB;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9694;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DF;&#x30B9;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;S22P&#x3001;S181G&#x3001;&#x3068;E346K&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x3001;S181G&#x3068;E346K&#x306F;&#x3001;&#x3B2;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x88C2;&#x3001;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x3001;&#x3B2;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5360;&#x6709;&#x3055;&#x308C;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x5404;dnaN&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x5909;&#x7570;&#x983B;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;MMR&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;S181G&#x3068;E346K&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x6E29;&#x3067;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x8A31;&#x3055;G73R&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x5909;&#x7570;&#x983B;&#x5EA6;&#x306B;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x3001;MMR&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x304B;&#x3089;&#x3001;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x3B2;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x306E;&#x3B2;&#x5185;&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x5909;&#x7570;

&#xBCA0;&#xD0C0; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; processive DNA &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xB529; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; DNA &#xB300;&#xC0AC;, DNA &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; &#xBCF5;&#xAD6C; (MMR) &#xB4F1;&#xC758; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xCD94;&#xAC00;&#xC801;&#xC778; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC774;&#xAE30;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; subtilis dnaN5 &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; G73R &#xB300;&#xCCB4; &#xD3EC;&#xD568; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. DnaN5 &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xC628;&#xB3C4; 49&#xB3C4; C&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xACB0;&#xD568; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC628;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; MMR&#xC758; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xD568;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBE48;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; DNA &#xBCF5;&#xC81C; &#xACB0;&#xD568; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; 49&#xB3C4; C&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xAD6C;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; Dnan5&#xC758; intragenic &#xC9C4;&#xC555;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC5D0;&#xC11C; MMR &#xACB0;&#xD568;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACE0;&#xB9BD; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBE48;&#xB3C4;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; nonpermissive &#xC628;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; Dnan5&#xC758; &#xC138; intragenic &#xC9C4;&#xC555;. &#xBAA8;&#xB4E0; 3 &#xAC1C;&#xC758; dnaN &#xB300;&#xB9BD; &#xD558;&#xB098; &#xC138; &#xC18C;&#xC124; missense &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD568;&#xAED8; G73R &#xB300;&#xCCB4;&#xAC00; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACE0;&#xB9BD; &#xB41C; missense &#xBCC0;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4; S22P, S181G, &#xBC0F; E346K. &#xC774;&#xB4E4; &#xC911;, S181G &#xBC0F; e346k&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504;, &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC810;&#xB839;&#xC758; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xBD84;&#xC5F4; &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAC01; dnaN &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBE48;&#xB3C4;&#xAC00; &#xC99D;&#xAC00; MMR&#xC758; &#xACB0;&#xD568;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; S181G &#xBC0F; E346K &#xB192;&#xC740; &#xC628;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xBC0F; g73r&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB420; &#xB54C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD2B9;&#xC815; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBCC0;&#xD654; B. subtilis &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504;&#xC5D0; MMR&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBD88;&#xC77C;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; subtilis &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La pinza beta es una abrazadera de replicaci&#xF3;n esencial deslizante requerido para la s&#xED;ntesis de ADN procesiva. La pinza beta es tambi&#xE9;n un factor cr&#xED;tico para varios otros aspectos del metabolismo del ADN, incluyendo la reparaci&#xF3;n del ADN mismatch (MMR). El alelo dnaN5 de Bacillus subtilis codifica una forma mutante de la pinza beta que contiene la sustituci&#xF3;n G73R. Las c&#xE9;lulas con el alelo dnaN5 son sensibles a la temperatura para el crecimiento debido a un defecto en la replicaci&#xF3;n del ADN en 49 grados C, y muestran un aumento en la frecuencia de mutaci&#xF3;n causada por un defecto parcial en MMR a temperaturas permisivas. Se han seleccionado de los supresores de intragenic dnaN5 que rescataron viabilidad a 49 grados C para determinar si el defecto de replicaci&#xF3;n del ADN podr&#xED;a ser separado del defecto MMR. Se aislaron tres supresores intrag&#xE9;nicos de dnaN5 que restauraron el crecimiento a la temperatura no permisiva manteniendo al mismo tiempo un aumento en la frecuencia de mutaci&#xF3;n. Los tres alelos DNAn codificada la sustituci&#xF3;n G73R, junto con una de las tres nuevas mutaciones missense. Las mutaciones sin sentido aislados fueron S22P, S181G, y E346K. De &#xE9;stos, S181G y E346K est&#xE1;n situados cerca de la hendidura hidr&#xF3;foba de la pinza beta, un sitio com&#xFA;n ocupado por prote&#xED;nas que se unen la pinza beta. Usando varios m&#xE9;todos, nos muestran que el incremento en la frecuencia de mutaci&#xF3;n que resulta de cada alelo DNAn est&#xE1; vinculada a un defecto en MMR. Por otra parte, encontramos que S181G E346K y permiti&#xF3; el crecimiento a temperaturas elevadas y no tienen un efecto apreciable en la frecuencia de mutaci&#xF3;n cuando se separa de G73R. Por lo tanto, hemos encontrado que los cambios de residuos espec&#xED;ficos en la beta de B. subtilis abrazadera separar el papel de la pinza beta en la replicaci&#xF3;n del ADN de su papel en MMR.

Las mutaciones en la pinza de Bacillus subtilis que Beta separar sus funciones en la replicaci&#xF3;n del ADN de reparaci&#xF3;n de genes

DNA &#x9519;&#x914D;&#x4FEE;&#x590D;&#x7EA0;&#x6B63;&#x9003;&#x8131;&#x4E86;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x6821;&#x5BF9;&#x3001; &#x589E;&#x52A0;&#x590D;&#x5236;&#x4FDD;&#x771F; 100-&#x5230; 1000 &#x500D;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5230;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6709;&#x673A;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x9519;&#x8BEF;&#x3002;&#x9521;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x592E;&#x5728;&#x9519;&#x914D;&#x4FEE;&#x590D;&#x901A;&#x8FC7;&#x534F;&#x8C03;&#x591A;&#x4E2A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x540E;&#x7531; MutS &#x4E0D;&#x5339;&#x914D;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x53BB;&#x9664;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x67AF;&#x8349;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#x9521;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x7684;&#x6838;&#x9178;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x57DF;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x4E8C;&#x805A;&#x548C;&#x76D1;&#x7BA1;&#x5B50;&#x57DF;&#x7531;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x5B88;&#x6052;&#x6838;&#x9178;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x87BA;&#x65CB;&#x6746;&#x8FDE;&#x63A5;&#x3002;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x56FE;&#x6848;&#x62C9;&#x6746;&#x5468;&#x56F4;&#x7FA4;&#x96C6;&#x548C;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E00;&#x4E2A; Zn(2+) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x662F;&#x9521;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x51FD;&#x6570;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x63A8;&#x51FA;&#x4E86;&#x529F;&#x80FD;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x610F;&#x5916;&#x987A;&#x624B;&#x7275;&#x7F8A;&#x7684;&#x65B0;&#x590D;&#x5236;&#x7684; DNA&#xFF0C;&#x5E76;&#x5141;&#x8BB8;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x8BAE;&#x63CF;&#x8FF0;&#x5982;&#x4F55;&#x4E0E; MutS &#x548C; processivity &#x5939;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BB8;&#x53EF;&#x6838;&#x9178;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x9521;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x8FD8;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x89D2;&#x8272;&#x7684;&#x9521;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4E2D;&#x9519;&#x914D;&#x4FEE;&#x590D;&#x5206;&#x5B50;&#x6846;&#x67B6;&#x3002;

&#x9521;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x7684;&#x6838;&#x9178;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x57DF;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF1A; &#x65E0;&#x724C;&#x524A;&#x51CF;&#x3002;

DNA mismatch repair corrects errors that have escaped polymerase proofreading, increasing replication fidelity 100- to 1000-fold in organisms ranging from bacteria to humans. The MutL protein plays a central role in mismatch repair by coordinating multiple protein-protein interactions that signal strand removal upon mismatch recognition by MutS. Here we report the crystal structure of the endonuclease domain of Bacillus subtilis MutL. The structure is organized in dimerization and regulatory subdomains connected by a helical lever spanning the conserved endonuclease motif. Additional conserved motifs cluster around the lever and define a Zn(2+)-binding site that is critical for MutL function in vivo. The structure unveils a powerful inhibitory mechanism to prevent undesired nicking of newly replicated DNA and allows us to propose a model describing how the interaction with MutS and the processivity clamp could license the endonuclease activity of MutL. The structure also provides a molecular framework to propose and test additional roles of MutL in mismatch repair.

Structure of the endonuclease domain of MutL: unlicensed to cut.

De r&#xE9;paration des m&#xE9;sappariements d&#x26;#39;ADN corrige les erreurs qui ont &#xE9;chapp&#xE9; &#xE0; la relecture polym&#xE9;rase, l&#x26;#39;augmentation de la r&#xE9;plication fid&#xE9;lit&#xE9; 100 - &#xE0; 1000 fois dans les organismes allant des bact&#xE9;ries aux humains. La prot&#xE9;ine MutL joue un r&#xF4;le central dans la r&#xE9;paration des m&#xE9;sappariements en coordonnant de multiples interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine que l&#x26;#39;enl&#xE8;vement de brin signal lors de la reconnaissance par MutS d&#xE9;calage. Nous rapportons ici la structure cristalline du domaine endonucl&#xE9;ase de Bacillus subtilis MutL. La structure est organis&#xE9;e en dim&#xE9;risation et les sous-domaines de r&#xE9;gulation reli&#xE9;s par un levier h&#xE9;lico&#xEF;dale s&#x26;#39;&#xE9;tendant le motif endonucl&#xE9;ase conserv&#xE9;e. Suppl&#xE9;mentaires du cluster conserv&#xE9; motifs autour du levier de Zn et de d&#xE9;finir une (2 +) site de liaison qui est essentiel pour la fonction MutL in vivo. La structure d&#xE9;voile un puissant m&#xE9;canisme inhibiteur pour emp&#xEA;cher entaille ind&#xE9;sirable de l&#x26;#39;ADN nouvellement r&#xE9;pliqu&#xE9; et nous permet de proposer un mod&#xE8;le d&#xE9;crivant comment l&#x26;#39;interaction avec MutS et la pince de processivit&#xE9; pourrait autoriser l&#x26;#39;activit&#xE9; d&#x26;#39;endonucl&#xE9;ase de MutL. La structure offre aussi une structure mol&#xE9;culaire de proposer et de tester des r&#xF4;les suppl&#xE9;mentaires de MutL en r&#xE9;paration des m&#xE9;sappariements.

Structure du domaine endonucl&#xE9;ase de MutL: Unlicensed &#xE0; D&#xE9;couper

DNA-Mismatch-Reparatur korrigiert Fehler, die Polymerase Korrekturlesen, Erh&ouml;hung der Replikation Treue 100 - bis 1000 - 8-fach in Organismen, die von Bakterien bis hin zu Menschen entgangen sind. Das MutL-Protein spielt eine zentrale Rolle in Fehlanpassung Reparatur durch Koordination mehrerer Protein-Protein-Interaktionen, die Strang-Entfernung bei Nicht&uuml;bereinstimmung Anerkennung durch MutS zu signalisieren. Hier berichten wir &uuml;ber die Kristallstruktur der Endonuklease Dom&auml;ne von Bacillus Subtilis MutL. Die Struktur gliedert sich in die Dimerisierung und regulatorischen Subdomains, verbunden mit einem spiralf&ouml;rmigen Hebel &uuml;ber das konservierten Endonuklease-Motiv. Zus&auml;tzliche konservierte Motive cluster-rund um den Hebel und definieren eine Zn(2+)-Bindungsstelle f&uuml;r in-vivo-MutL Funktion entscheidend ist. Die Struktur stellt einen leistungsf&auml;higen hemmenden Mechanismus zur Vermeidung unerw&uuml;nschter nicking neu replizierten DNA und erm&ouml;glicht es uns, ein Modell zur Beschreibung, wie die Interaktion mit MutS und der Processivity-Klemme die Endonuklease-Aktivit&auml;t des MutL lizenzieren konnte vorschlagen. Die Struktur bietet auch einen molekularen Rahmen vorzuschlagen und zus&auml;tzliche Rollen des MutL Fehlanpassung Reparatur zu testen.

Struktur der Endonuklease Dom&auml;ne des MutL: unlizenziert zu schneiden.

Riparazione del DNA mismatch corregge gli errori che sono sfuggiti polimerasi di correzione di bozze, aumentando la fedelt&agrave; replica 100 - a 1000 volte in organismi che vanno dai batteri agli esseri umani. La proteina MutL svolge un ruolo centrale nella riparazione del disadattamento coordinando molteplici interazioni proteina-proteina che segnale strand rimozione su riconoscimento di mancata corrispondenza di MutS. Qui riportiamo la struttura cristallina del dominio endonucleasi di Bacillus subtilis MutL. La struttura &egrave; organizzata in dimerizzazione e sottodomini normativi collegati tramite una leva elicoidale che abbracciano il motivo dell&#39;endonucleasi conservata. Ulteriori motivi conservati cluster intorno la leva e definiscono un sito di legame Zn(2+) che &egrave; critico per la funzione MutL in vivo. La struttura presenta un potente meccanismo inibitorio per evitare di intaccare indesiderato del DNA appena replicato e ci permette di proporre un modello che descrive come l&#39;interazione con MutS e il morsetto processivity potrebbe concedere in licenza l&#39;attivit&agrave; endonucleasi di MutL. La struttura fornisce anche un quadro molecolare per proporre e verificare ulteriori ruoli di MutL nella riparazione del disadattamento.

Struttura del dominio endonucleasi di MutL: senza licenza per tagliare.

&#x7D30;&#x83CC;&#x304B;&#x3089;&#x30D2;&#x30C8;&#x306B;&#x81F3;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x306E;1000&#x500D;&#x306B; -  DNA&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x5FE0;&#x5B9F;&#x5EA6;100&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x8131;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x30A8;&#x30E9;&#x30FC;&#x3092;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; MutL&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; - &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;MutS&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x8A8D;&#x8B58;&#x6642;&#x306B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x9396;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;MutL&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x30B9;&#x30D1;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30EB;&#x30EC;&#x30D0;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30EC;&#x30D0;&#x30FC;&#x5468;&#x308A;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;MutL&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;Zn&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x8907;&#x88FD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;DNA&#x306E;&#x671B;&#x307E;&#x3057;&#x304F;&#x306A;&#x3044;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x6291;&#x5236;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x767A;&#x8868;&#x3057;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;MutS&#x3068;&#x80FD;&#x529B;&#xFF08;processivity&#xFF09;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;MutL&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306B;MutL&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x3001;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

MutL&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#xFF1A;&#x30AB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;

DNA &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD6A8;&#xC18C; &#xAD50;&#xC815;, &#xBCF5;&#xC81C; &#xCDA9;&#xC2E4;&#xB3C4; 100-&#xB97C; 1000 &#xBC30; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xAC04;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAE30;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC99D;&#xAC00; &#xD0C8;&#xCD9C; &#xC624;&#xB958; &#xC218;&#xC815;. MutL &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; MutS &#xD558; &#xC5EC; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC778;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAC00;&#xB2E5; &#xC81C;&#xAC70; &#xC2E0;&#xD638; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC870;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; &#xC218;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC559; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; subtilis MutL endonuclease &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;. &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; dimerization &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; endonuclease &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCE5C; &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCEEC; &#xB808;&#xBC84;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xD558;&#xC704; &#xD558;&#xB294; &#xADDC;&#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB808;&#xBC84; &#xC8FC;&#xC704; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC640; vivo&#xC5D0;&#xC11C; MutL &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; Zn(2+) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC815;&#xC758; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD6C;&#xC870; &#xC0C8;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; DNA&#xC758; &#xC6D0;&#xCE58; &#xC54A;&#xB294; nicking &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xBC1C;&#xD45C; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; MutS &#xBC0F; processivity &#xD074;&#xB7A8;&#xD504;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; MutL endonuclease &#xD65C;&#xB3D9; &#xB77C;&#xC774;&#xC13C;&#xC2A4; &#xC218;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC790; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558; &#xACE0; &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; Mutl&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Mutl&#xC758; endonuclease &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;: &#xC798;&#xB77C; &#xBB34;&#xBA74;&#xD5C8;.

La reparaci&#xF3;n del ADN no coincide corrige los errores que se han escapado de la polimerasa correcci&#xF3;n, el aumento de la replicaci&#xF3;n de la fidelidad 100 - 1000 veces en los organismos que van desde las bacterias hasta los seres humanos. La prote&#xED;na MutL juega un papel central en la reparaci&#xF3;n de genes mediante la coordinaci&#xF3;n de m&#xFA;ltiples interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na que la eliminaci&#xF3;n de la se&#xF1;al de cadena a partir del reconocimiento por la falta de coincidencia MutS. Aqu&#xED; se presenta la estructura cristalina del dominio endonucleasa de Bacillus subtilis MutL. La estructura est&#xE1; organizada en la dimerizaci&#xF3;n y subdominios reguladoras conectadas por una palanca helicoidal que abarca el motivo endonucleasa conservada. Adicionales del cl&#xFA;ster motivos conservados alrededor de la palanca y definir un Zn (2 +)-sitio de uni&#xF3;n que es fundamental para la funci&#xF3;n MutL in vivo. La estructura presenta un poderoso mecanismo de inhibici&#xF3;n para evitar muescas no deseado de ADN reci&#xE9;n replicado y nos permite proponer un modelo que describe c&#xF3;mo la interacci&#xF3;n con MutS y la abrazadera procesividad podr&#xED;a autorizar la actividad endonucleasa de MutL. La estructura tambi&#xE9;n proporciona un marco molecular para proponer y probar las funciones adicionales de MutL en la reparaci&#xF3;n de genes.

Estructura de la endonucleasa de dominio de MutL: sin licencia para cortar

&#x9519;&#x914D;&#x4FEE;&#x590D; (MMR) &#x7EA0;&#x6B63; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x590D;&#x5236;&#x671F;&#x95F4;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x9519;&#x8BEF;&#x3002;MMR &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7EF4;&#x62A4;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#xFF0C;&#x5176;&#x635F;&#x5931;&#x589E;&#x52A0;&#x7A81;&#x53D8;&#x7387;&#x51E0;&#x4E2A;&#x51E0;&#x767E;&#x500D;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x660E;&#x4E0D;&#x5339;&#x914D;&#x8BC6;&#x522B;&#x86CB;&#x767D; MutS &#x548C;&#x590D;&#x5236; processivity &#x5939;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x5B55;&#x4EA7;&#x5987;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x5728;&#x67AF;&#x8349;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#x3002;&#x4E3A;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x4E86;&#x89E3;&#x5982;&#x4F55;&#x5C06; MMR &#x8026;&#x5408;&#x5230; DNA &#x590D;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x878D;&#x5408;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x7684;&#x5B55;&#x4EA7;&#x5987;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x548C; DNA &#x590D;&#x5236;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x540E;&#x589E;&#x52A0; DNA &#x590D;&#x5236;&#x9519;&#x8BEF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x57FA;&#x672C; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; DnaE GFP &#x7076;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E4B;&#x540E;&#x4E0D;&#x5339;&#x914D;&#x5C06;&#x7EB3;&#x5165;&#x548C;&#x635F;&#x5931; DnaE GFP &#x7076;&#x9700;&#x8981; MutS&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; MutS &#x548C;&#x9521;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x7ED1;&#x5B9A; DnaE &#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; DnaE &#x518D;&#x52A0;&#x4E0A;&#x4FEE;&#x590D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9; DnaE GFP &#x7076;&#x51CF;&#x5C11;&#x4F53;&#x5185;&#x663E;&#x793A; DnaE GFP &#x75AB;&#x6E90;&#x5730;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x6270;&#x52A8;&#x5230; DNA &#x590D;&#x5236;&#x7684; DNA &#x5408;&#x6210; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x72EC;&#x7ACB;&#x62D8;&#x6355;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; MutS &#x76F4;&#x63A5;&#x63A5;&#x89E6;&#x7684; DNA &#x590D;&#x5236;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4; DnaE MMR &#x671F;&#x95F4;&#x5728;&#x590D;&#x5236;&#x53C9;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x548C;&#x4EB2;&#x5BC6; MMR &#x4E0E;&#x4F53;&#x5185;&#x590D;&#x5236;&#x7684; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x590D;&#x5408;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8FDE;&#x63A5;&#x3002;

&#x9519;&#x914D;&#x4FEE;&#x590D;&#x539F;&#x56E0;&#x57FA;&#x672C; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x590D;&#x5236;&#x53C9;&#x4ECE;&#x52A8;&#x6001;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;

Mismatch repair (MMR) corrects DNA polymerase errors occurring during genome replication. MMR is critical for genome maintenance, and its loss increases mutation rates several hundred fold. Recent work has shown that the interaction between the mismatch recognition protein MutS and the replication processivity clamp is important for MMR in Bacillus subtilis. To further understand how MMR is coupled to DNA replication, we examined the subcellular localization of MMR and DNA replication proteins fused to green fluorescent protein (GFP) in live cells, following an increase in DNA replication errors. We demonstrate that foci of the essential DNA polymerase DnaE-GFP decrease following mismatch incorporation and that loss of DnaE-GFP foci requires MutS. Furthermore, we show that MutS and MutL bind DnaE in vitro, suggesting that DnaE is coupled to repair. We also found that DnaE-GFP foci decrease in vivo following a DNA damage-independent arrest of DNA synthesis showing that loss of DnaE-GFP foci is caused by perturbations to DNA replication. We propose that MutS directly contacts the DNA replication machinery, causing a dynamic change in the organization of DnaE at the replication fork during MMR. Our results establish a striking and intimate connection between MMR and the replicating DNA polymerase complex in vivo.

Mismatch repair causes the dynamic release of an essential DNA polymerase from the replication fork.

De r&#xE9;paration des m&#xE9;sappariements (MMR) corrige les erreurs de l&#x26;#39;ADN polym&#xE9;rase qui se produisent pendant la r&#xE9;plication du g&#xE9;nome. MMR est essentiel pour l&#x26;#39;entretien du g&#xE9;nome, et sa perte augmente les taux de mutation plusieurs centaines de fois. Des travaux r&#xE9;cents ont montr&#xE9; que l&#x26;#39;interaction entre MutS inad&#xE9;quation des prot&#xE9;ines de reconnaissance et la pince de processivit&#xE9; de r&#xE9;plication est important pour le ROR chez Bacillus subtilis. Pour mieux comprendre comment le ROR est coupl&#xE9; &#xE0; la r&#xE9;plication d&#x26;#39;ADN, nous avons examin&#xE9; la localisation subcellulaire des prot&#xE9;ines de r&#xE9;plication MMR et l&#x26;#39;ADN fusionn&#xE9; la prot&#xE9;ine fluorescente verte (GFP) dans des cellules vivantes, suite &#xE0; une augmentation des erreurs de r&#xE9;plication d&#x26;#39;ADN. Nous d&#xE9;montrons que les foyers de l&#x26;#39;ADN polym&#xE9;rase incorporation essentielle DnaE-GFP diminution inad&#xE9;quation &#xE0; la suite et que la perte de DnaE-GFP foyers exige MutS. En outre, nous montrons que MutS et MutL bind DnaE in vitro, ce qui sugg&#xE8;re que DnaE est coupl&#xE9; &#xE0; r&#xE9;parer. Nous avons &#xE9;galement constat&#xE9; que DnaE-GFP diminution des foyers in vivo suite &#xE0; une dommages de l&#x26;#39;ADN-ind&#xE9;pendante arr&#xEA;t de la synth&#xE8;se d&#x26;#39;ADN montrant que la perte de DnaE-GFP foyers est caus&#xE9;e par des perturbations &#xE0; r&#xE9;plication de l&#x26;#39;ADN. Nous proposons que MutS directement en contact avec de la machinerie r&#xE9;plication de l&#x26;#39;ADN, provoquant un changement dynamique dans l&#x26;#39;organisation de DnaE &#xE0; la fourche de r&#xE9;plication au cours ROR. Nos r&#xE9;sultats &#xE9;tablissent un lien frappant et intime entre le ROR et le complexe r&#xE9;plication de l&#x26;#39;ADN polym&#xE9;rase in vivo.

Mismatch Repair provoque la lib&#xE9;ration dynamique d&#x26;#39;une ADN polym&#xE9;rase essentielle de la fourche de r&#xE9;plication

Fehlanpassung Reparatur (MMR) korrigiert St&ouml;rungen der DNA-Polymerase, die w&auml;hrend der Morphologie. MMR ist kritisch f&uuml;r Genom-Wartung, und seinen Verlust steigert die Mutation Raten mehrere hundert Falten. Die j&uuml;ngsten Arbeiten hat gezeigt, dass die Interaktion zwischen das Missverh&auml;ltnis Anerkennung Protein MutS und der Replikation Processivity Klemme wichtig f&uuml;r MMR in Bacillus Subtilis. Um noch besser zu verstehen, wie MMR DNA Reproduktion gekoppelt ist, haben wir die subzellulare Lokalisation der MMR und DNA Replikation-Proteine, die verschmolzen zu gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (GFP) in lebenden Zellen, nach eine Zunahme der St&ouml;rungen der DNA-Replikation. Wir zeigen, dass die Brennpunkte der wesentliche DNA-Polymerase DnaE-GFP nach Missverh&auml;ltnis Aufnahme verringern und Verlust von DnaE-GFP-Foki MutS erfordert. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass MutS und MutL DnaE in vitro darauf hindeutet binden, dass DnaE gekoppelt ist, um zu reparieren. Wir fanden auch, dass DnaE-GFP-Herde-Abnahme in-vivo nach einer DNA Sch&auml;den-unabh&auml;ngige Festnahme der DNA-Synthese, die zeigen, dass Verlust der DnaE-GFP-Foki Perturbationen DNA Replikation zur&uuml;ckzuf&uuml;hren ist. Wir schlagen MutS den DNA-Replikation-Maschinen, direkt Kontakte verursacht eine dynamische Ver&auml;nderung in der Organisation der DnaE an der Wiederholunggabel w&auml;hrend der MMR. Unsere Ergebnisse legen eine markante und intime Verbindung zwischen MMR und der replizierende DNA Polymerase-Komplex, der in-vivo.

Unpassender Reparatur Ursachen der dynamischen Ver&ouml;ffentlichung eine wesentliche DNA-Polymerase von der Wiederholunggabel.

Mismatch repair (MMR) corregge gli errori della polimerasi del DNA che si verificano durante la replicazione del genoma. MMR &egrave; fondamentale per il mantenimento del genoma, e la perdita aumenta i tassi di mutazione piega parecchie centinaia. Lavoro recente ha dimostrato che l&#39;interazione tra la proteina di riconoscimento mismatch MutS e il replica processivity morsetto &egrave; importante per MMR in Bacillus subtilis. Per capire ulteriormente come MMR &egrave; accoppiata alla replicazione del DNA, abbiamo esaminato la localizzazione subcellulare delle proteine replica MMR e DNA fuso a proteina fluorescente verde (GFP) in cellule vive, seguito di un aumento di errori di replicazione del DNA. Dimostriamo che fuochi della polimerasi del DNA essenziale DnaE-GFP diminuiscono a seguito di mancata corrispondenza incorporazione e che la perdita di foci DnaE-GFP richiede MutS. Inoltre, mostriamo che MutS e MutL legano DnaE in vitro, suggerendo che DnaE &egrave; accoppiato per riparare. Abbiamo anche trovato che diminuzione di foci DnaE-GFP in vivo dopo un arresto indipendente dal danno del DNA della sintesi del DNA che mostrano che la perdita di foci DnaE-GFP &egrave; causata da perturbazioni di replicazione del DNA. Proponiamo che i MutS contatti direttamente il macchinario di replicazione del DNA, causando un cambiamento dinamico nell&#39;organizzazione del DnaE presso la forcella di replicazione durante MMR. I nostri risultati stabilire un suggestivo e intima connessione tra MMR e il complesso di replicazione del DNA polimerasi in vivo.

Mancata corrispondenza di riparazione cause il rilascio dinamico di una polimerasi del DNA essenziale dalla forcella replica.

&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x4FEE;&#x5FA9;&#xFF08;MMR&#xFF09;&#x306F;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x4E2D;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;DNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30A8;&#x30E9;&#x30FC;&#x3092;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; MMR&#x306F;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x7DAD;&#x6301;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x3001;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x7387;&#x3092;&#x6570;&#x767E;&#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x8A8D;&#x8B58;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;MutS&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x3001;&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;MMR&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;MMR&#x306F;&#x3001;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x30A8;&#x30E9;&#x30FC;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;GFP&#xFF09;&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x3057;&#x305F;MMR&#x3068;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;DNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;DnaE-GFP&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x5F8C;&#x306B;&#x4E0D;&#x4E00;&#x81F4;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3068;DnaE-GFP&#x75C5;&#x5DE3;&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306E;&#x7126;&#x70B9;&#x306F;&#x306E;MutS&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;MutS&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vitro&#x3067;&#x306E;MutL&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;DnaE&#x306F;&#x3001;DnaE&#x3092;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;DnaE-GFP&#x75C5;&#x5DE3;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x304C;DnaE-GFP&#x75C5;&#x5DE3;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x793A;&#x3059;DNA&#x5408;&#x6210;&#x306E;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x505C;&#x6B62;&#x304C;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x306B;&#x6442;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;MMR&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x8907;&#x88FD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;DnaE&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x5185;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x3001;DNA&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;MutS&#x305D;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;MMR&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;DNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5370;&#x8C61;&#x7684;&#x3067;&#x89AA;&#x5BC6;&#x306A;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x8907;&#x88FD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AF;&#x304B;&#x3089;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;DNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;

&#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; &#xC218;&#xB9AC; (MMR) &#xAC8C;&#xB188; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC624;&#xB958;&#xB97C; &#xC218;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. MMR&#xC740; &#xAC8C;&#xB188; &#xC720;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBC0F; &#xC190;&#xC2E4;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC694;&#xAE08; &#xBA87; &#xBC31; &#xBC30;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xC791;&#xD488; &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; &#xC778;&#xC2DD; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; MutS &#xBCF5;&#xC81C; processivity &#xD074;&#xB7A8;&#xD504;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; subtilis&#xC5D0; MMR&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. MMR&#xC758; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xACB0;&#xD569; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xB354; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; DNA &#xBCF5;&#xC81C; &#xC624;&#xB958; &#xC99D;&#xAC00; &#xB530;&#xB77C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP)&#xB97C; &#xC735;&#xD569; &#xD558;&#xB294; MMR&#xACFC; DNA &#xBCF5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; subcellular &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xAC80;&#xC0AC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; DnaE GFP foci &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; &#xC815; &#xAD00;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAC10;&#xC18C; DnaE GFP foci&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; MutS &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; MutS MutL &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xBC0F; &#xCCB4; &#xC678;, DnaE DnaE &#xBCF5;&#xAD6C;&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC81C;&#xC548; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xADF8; DnaE GFP foci &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; DnaE GFP foci&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xBB3C;&#xACB0; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; DNA &#xD569;&#xC131;&#xC758; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xCCB4;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; MutS &#xC9C1;&#xC811; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; DNA &#xBCF5;&#xC81C; &#xAE30;&#xACC4; MMR &#xB3D9;&#xC548; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD3EC;&#xD06C;&#xC5D0; Dnae&#xC758; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xBA70; &#xCE5C;&#xBC00; &#xD558; &#xAC8C; MMR&#xC640; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBCF5;&#xC81C; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xB97C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBCF5;&#xC81C; &#xD3EC;&#xD06C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC790;&#xB8CC;&#xB97C; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xC6D0;&#xC778;&#xC5D0; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Reparaci&#xF3;n de apareamientos err&#xF3;neos (MMR) corrige errores en el ADN polimerasa que se producen durante la replicaci&#xF3;n del genoma. MMR es cr&#xED;tico para el mantenimiento del genoma, y &#x200B;&#x200B;su p&#xE9;rdida aumenta las tasas de mutaci&#xF3;n varios cientos de veces. Trabajos recientes han demostrado que la interacci&#xF3;n entre las prote&#xED;nas MutS desajuste reconocimiento y la abrazadera de replicaci&#xF3;n procesividad es importante para MMR en Bacillus subtilis. Para entender mejor como MMR se acopla a la replicaci&#xF3;n del ADN, se analiz&#xF3; la localizaci&#xF3;n subcelular de las prote&#xED;nas de replicaci&#xF3;n del ADN y la MMR fusionados a la prote&#xED;na verde fluorescente (GFP) en c&#xE9;lulas vivas, a ra&#xED;z de un aumento en los errores de replicaci&#xF3;n del ADN. Se demuestra que los focos de la polimerasa del ADN esencial dnaE-GFP incorporaci&#xF3;n desajuste disminuci&#xF3;n de seguir y que la p&#xE9;rdida de dnaE-GFP focos requiere MutS. Por otra parte, nos muestran que MutS y MutL unen dnaE in vitro, lo que sugiere que dnaE se acopla a la reparaci&#xF3;n. Tambi&#xE9;n se encontr&#xF3; que dnaE-GFP disminuci&#xF3;n de focos en vivo despu&#xE9;s de un da&#xF1;o en el DNA independiente de detenci&#xF3;n de la s&#xED;ntesis de ADN que muestra que la p&#xE9;rdida de dnaE-GFP focos es causada por perturbaciones en la replicaci&#xF3;n del ADN. Proponemos que MutS en contacto directo con la maquinaria de replicaci&#xF3;n del ADN, causando un cambio din&#xE1;mico en la organizaci&#xF3;n de dnaE en el tenedor de replicaci&#xF3;n durante la MMR. Nuestros resultados establecen una conexi&#xF3;n sorprendente e &#xED;ntimo entre la triple v&#xED;rica y el complejo de la polimerasa del ADN de replicaci&#xF3;n in vivo.

Andrew D. Klocko

Department of Molecular,
Cellular,
and Developmental Biology,
Department of Molecular, Cellular, and Developmental Biology

University of Michigan-Ann Arbor

Imaging Mismatch Repair and Cellular Responses to DNA Damage in Bacillus subtilis

Andrew D. Klocko

Department of Molecular,Cellular,and Developmental Biology,Department of Molecular, Cellular, and Developmental Biology

University of Michigan-Ann Arbor

Imaging Mismatch Repair and Cellular Responses to DNA Damage in Bacillus subtilis

Department of Molecular,
Cellular,
and Developmental Biology,
Department of Molecular, Cellular, and Developmental Biology