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Probing High-density Functional Protein Microarrays to Detect Protein-protein Interactions

High-density functional protein microarrays containing ~4,200 recombinant yeast proteins are examined for kinase protein-protein interactions using an ...

Stanford University

&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x9175;&#x6BCD;&#x86CB;&#x767D; Mlp1p &#x548C; Mlp2p &#xFF08;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x86CB;&#x767D; Tpr&#xFF09; &#x662F;&#x9644;&#x52A0;&#x5230;&#x6838;&#x6838;&#x5B54;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x8138;&#x7684;&#x4E1D;&#x72B6;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x6267;&#x884C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x4E24;&#x4E2A; Mlp &#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#xFF0C;&#x8BC1;&#x660E;&#x5176;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5185;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5C06; Mlp2p &#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Spc110p&#xFF0C;Spc42p &#x548C; Spc29p&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x4E3B;&#x8F74;&#x6746;&#x673A;&#x6784; &#xFF08;SPB&#xFF09; &#x6838;&#x4FE1;&#x5C01;&#x5173;&#x8054;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E3B;&#x8F74;&#x4E3B;&#x529E;&#x65B9;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6838;&#x5FC3;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A; SPB &#x529F;&#x80FD;&#x53D7;&#x5230; mlp2 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x7F3A;&#x4E4F; Mlp2p &#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6210;&#x663E;&#x8457;&#x8F83;&#x5C11; SPBs&#x3001; &#x7D2F;&#x79EF;&#x5F02;&#x5E38; SPB &#x7EC4;&#x4EF6;&#x5305;&#x542B;&#x7ED3;&#x6784;&#x91CC;&#x9762;&#x7684;&#x6838;&#xFF0C;&#x548C;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x65F6;&#x968F;&#x673A;&#x51FA;&#x73B0;&#x6545;&#x969C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Mlp2p &#x7684;&#x635F;&#x8017;&#x662F;&#x7EFC;&#x5408;&#x81F4;&#x547D;&#x53D7;&#x635F; SPB &#x7EC4;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; Mlp2p &#x94FE;&#x63A5; SPB&#xFF0C;&#x5230;&#x5468;&#x8FB9;&#x7684; Mlp &#x5927;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x548C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8054;&#x7CFB;&#x662F;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x6709;&#x6548;&#x7EB3;&#x5165; SPB &#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;

&#x6838;&#x5B54;&#x590D;&#x5408;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;Mlp2p&#xFF0C;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E3B;&#x8F74;&#x6746;&#x673A;&#x6784;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5176;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x3002;

The two yeast proteins Mlp1p and Mlp2p (homologues of the vertebrate protein Tpr) are filamentous proteins attached to the nuclear face of nuclear pore complexes. Here we perform a proteomic analysis, which reveals that the two Mlps have strikingly different interacting partners, testifying to their different roles within the cell. We find that Mlp2p binds directly to Spc110p, Spc42p, and Spc29p, which are three core components of the spindle pole body (SPB), the nuclear envelope-associated yeast spindle organizer. We further show that SPB function is compromised in mlp2 mutants. Cells lacking Mlp2p form significantly smaller SPBs, accumulate aberrant SPB component-containing structures inside the nucleus, and have stochastic failures of cell division. In addition, depletion of Mlp2p is synthetically lethal with mutants impaired in SPB assembly. Based on these data, we propose that Mlp2p links the SPB to the peripheral Mlp assembly, and that this linkage is required for efficient incorporation of components into the SPB.

The nuclear pore complex-associated protein, Mlp2p, binds to the yeast spindle pole body and promotes its efficient assembly.

Les deux prot&#xE9;ines de levure et Mlp1p Mlp2p (homologues de l&#x26;#39;Cvr prot&#xE9;ine vert&#xE9;br&#xE9;) sont des prot&#xE9;ines filamenteux attach&#xE9;s &#xE0; la face nucl&#xE9;aire de complexes de pores nucl&#xE9;aires. Ici nous effectuons une analyse prot&#xE9;omique, qui r&#xE9;v&#xE8;le que les deux Mlps ont radicalement diff&#xE9;rentes partenaires d&#x26;#39;interaction, t&#xE9;moignant de leurs diff&#xE9;rents r&#xF4;les au sein de la cellule. Nous constatons que Mlp2p se lie directement &#xE0; Spc110p, Spc42p, et Spc29p, qui sont trois composantes essentielles du corps polaire du fuseau (SPB), la centrale nucl&#xE9;aire de l&#x26;#39;enveloppe associ&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;organisateur de broche de la levure. En outre, nous montrent que la fonction SPB est compromise dans mlp2 mutants. Des cellules d&#xE9;pourvues de forme Mlp2p significativement plus petits SPB, s&#x26;#39;accumulent aberrantes SPB composante contenant les structures &#xE0; l&#x26;#39;int&#xE9;rieur du noyau, et des &#xE9;checs stochastiques de la division cellulaire. En outre, l&#x26;#39;&#xE9;puisement des Mlp2p est synth&#xE9;tiquement l&#xE9;tale avec des mutants d&#xE9;ficients dans l&#x26;#39;assemblage SPB. Sur la base de ces donn&#xE9;es, nous proposons que des liens Mlp2p la SPB &#xE0; l&#x26;#39;assembl&#xE9;e Mlp p&#xE9;riph&#xE9;rique, et que ce lien est n&#xE9;cessaire pour une incorporation efficace de composants dans le SPB.

Le complexe de pores nucl&#xE9;aires-associated protein, Mlp2p, Li&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;Organe p&#xF4;le de levure de broche et de la promotion de son Assembl&#xE9;e efficace

Die Kernporenkomplex-assoziierten Protein, Mlp2p, bindet an die Hefe Spindel Polk&#xF6;rper und f&#xF6;rdert die effiziente Montage.

Le due proteine Mlp1p e Mlp2p del lievito (omologhi della proteina vertebrato Tpr) sono proteine filamentose attaccate al viso nucleare del poro nucleare complessi. Qui effettuiamo un&#39;analisi proteomic, che rivela che i due Mlps hanno sorprendentemente diversi partners interagenti, che testimoniano la loro diversi ruoli all&#39;interno della cellula. Troviamo che Mlp2p si lega direttamente al Spc110p, Spc42p e Spc29p, che sono tre componenti principali del corpo mandrino pole (SPB), l&#39;organizzatore del mandrino associato al nucleare busta di lievito. Mostriamo ulteriormente che la funzione di SPB &egrave; compromessa mlp2 mutanti. Cellule manca Mlp2p formano DSF significativamente pi&ugrave; piccole, si accumulano strutture aberranti di SPB contenenti componenti all&#39;interno del nucleo e hanno stocastici fallimenti della divisione cellulare. Inoltre, deplezione di Mlp2p &egrave; sinteticamente letale con mutanti alterate in Assemblea SPB. Sulla base di questi dati, proponiamo che Mlp2p collega la SPB all&#39;assembly Mlp periferico, e che questo collegamento &egrave; necessario per efficiente incorporazione dei componenti della SPB.

Il poro nucleare complesso-associated protein, Mlp2p, si lega al corpo lievito mandrino pole e promuove la sua Assemblea efficiente.

2&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;Mlp1p&#x3068;Mlp2p&#xFF08;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;TPR&#x306E;&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#xFF09;&#x304C;&#x6838;&#x819C;&#x5B54;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x6838;&#x306E;&#x9762;&#x306B;&#x53D6;&#x308A;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7CF8;&#x72B6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x8A3C;&#x8A00;&#x3057;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;MLP&#x306F;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;Mlp2p&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x6975;&#x4F53;&#xFF08;SPB&#xFF09;&#x3001;&#x6838;&#x819C;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x305F;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x4E3B;&#x50AC;&#x8005;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;Spc110p&#x3001;Spc42p&#x3001;&#x3068;Spc29p&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x305D;&#x306E;SPB&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;mlp2&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x4FB5;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002; Mlp2p&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;SPBs&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x6838;&#x5185;&#x306B;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;SPB&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x78BA;&#x7387;&#x7684;&#x969C;&#x5BB3;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Mlp2p&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x306F;SPB&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306B;&#x969C;&#x5BB3;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x7DCF;&#x5408;&#x7684;&#x306B;&#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x672B;&#x68A2;MLP&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306B;&#x305D;&#x306E;Mlp2p&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;SPB&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;SPB&#x3078;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x6838;&#x819C;&#x5B54;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;Mlp2p&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x6975;&#x4F53;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;

2 &#xD6A8; &#xBAA8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; mlp1p&#xC640; Mlp2p (&#xCC99;&#xCD94; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Tpr homologues)&#xB294; filamentous &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD575; &#xAE30; &#xACF5; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xD575; &#xC5BC;&#xAD74;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xB450; Mlps &#xC140; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC99D;&#xC5B8; &#xD558;&#xB294; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xB294; &#xBC1D;&#xD600; proteomic &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC218;&#xD589;&#xD560;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC3E;&#xC744; Mlp2p Spc110p, Spc42p, &#xBC0F; Spc29p&#xB294; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xADF9; &#xBC14;&#xB514; (SPB), &#xD6A8; &#xBAA8; &#xD575; &#xBD09;&#xD22C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xAD6C;&#xC131;&#xC758; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD575;&#xC2EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; &#xC774;&#xC0C1; SPB &#xD568;&#xC218; mlp2 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xC190;&#xC0C1; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140; Mlp2p &#xBD80;&#xC871; &#xD6E8;&#xC52C; &#xC791;&#xC740; SPBs &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xD0C8; &#xC120; SPB &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xD575; &#xB0B4; &#xCD95;&#xC801; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; &#xD655;&#xB960;&#xC801; &#xC2E4;&#xD328;. &#xB610;&#xD55C;, mlp2p&#xC758; &#xACE0;&#xAC08; SPB &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC7A5;&#xC560;&#xAC00; &#xC788;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD568;&#xAED8; &#xC885;&#xD569;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; mlp2p&#xB294; SPB &#xC8FC;&#xBCC0; Mlp &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB9C1;&#xD06C; &#xD558;&#xBA70;&#xC774; &#xB9C1;&#xD06C; &#xD544;&#xC694; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC5C6;&#xC774; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; SPB&#xC5D0; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD575; &#xAE30; &#xACF5; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, Mlp2p, &#xB204; &#xB8E9; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xADF9; &#xC2E0;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD94;&#xC9C4; &#xD558; &#xACE0;.

La levadura dos prote&#xED;nas Mlp1p y Mlp2p (hom&#xF3;logos de la prote&#xED;na Tpr vertebrado) son prote&#xED;nas filamentosas unidos a la cara nuclear de los complejos de poros nucleares. Aqu&#xED; se realiza un an&#xE1;lisis prote&#xF3;mico, que revela que los dos tienen Mlps socios que interact&#xFA;an sorprendentemente diferentes, lo que demuestra sus diferentes roles dentro de la c&#xE9;lula. Nos parece que se une directamente a Mlp2p Spc110p, Spc42p y Spc29p, que son tres componentes b&#xE1;sicos del cuerpo polo del huso (SPB), la envoltura nuclear asociada a la organizadora del husillo de levadura. Adem&#xE1;s, muestran que la funci&#xF3;n de SPB se ve comprometida en mlp2 mutantes. Las c&#xE9;lulas que carecen de forma significativamente m&#xE1;s peque&#xF1;os Mlp2p SPB, se acumulan aberrantes SPB contienen componentes de estructuras en el interior del n&#xFA;cleo, y tienen fallas estoc&#xE1;sticas de la divisi&#xF3;n celular. Adem&#xE1;s, el agotamiento de Mlp2p es sint&#xE9;tica letal con mutantes con deficiencias en el montaje SPB. Bas&#xE1;ndose en estos datos, se propone que los v&#xED;nculos Mlp2p el SPB a la asamblea Mlp perif&#xE9;rica, y que esta vinculaci&#xF3;n se requiere para la incorporaci&#xF3;n eficiente de los componentes en el SPB.

El complejo del poro nuclear asociada a la prote&#xED;na, Mlp2p, se une al Consejo de levadura polo del huso y promueve su Asamblea eficiente

&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4F30;&#x8BA1;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x7684; 30%&#xFF0C;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x63A7;&#x5236;&#x8BB8;&#x591A;&#x57FA;&#x672C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x76F4;&#x5230;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x5168;&#x7403;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x7406;&#x89E3;&#x4E00;&#x76F4;&#x6781;&#x5176;&#x6709;&#x9650; &#xFF1B;&#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9175;&#x6BCD;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x4E00;&#x534A;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x77E5;&#x9053;&#x4F53;&#x5185;&#x886C;&#x5E95;&#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6FC0;&#x9176;&#x4EE5;&#x5C11;&#x4E8E; 160 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x800C;&#x95FB;&#x540D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4F7F;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x82AF;&#x7247;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x627F;&#x8BA4;&#x7531;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x9175;&#x6BCD;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x886C;&#x5E95;&#x6750;&#x6599;&#xFF1A; &#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8D85;&#x8FC7; 4,000 &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x6D89;&#x53CA; 1,325 &#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5E95;&#x7269;&#x4EE3;&#x8868;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x886C;&#x5E95;&#x88AB;&#x627F;&#x8BA4;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#xFF0C;&#x4EC5;&#x5728;&#x5176;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#x5BB6;&#x65CF;&#x6FC0;&#x9176;&#x548C;&#x56DB;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x8BB8;&#x591A;&#x57FA;&#x677F;&#x9A7B;&#x7559;&#x5728;&#x540C;&#x4E00;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9694;&#x5BA4;&#x6216;&#x5C5E;&#x4E8E;&#x5176;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6FC0;&#x9176;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7C7B;&#x522B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8BB8;&#x591A;&#x5176;&#x4ED6;&#x4E0D;&#x8FD9;&#x6837;&#x505A;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x503C;&#x53EF;&#x80FD;&#x65B0;&#x89D2;&#x8272;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6FC0;&#x9176;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x96C6;&#x6210;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6570;&#x636E;&#x63ED;&#x793A;&#x65B0;&#x578B;&#x7BA1;&#x7406;&#x6A21;&#x5757;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7ED3;&#x679C;&#x5DF2;&#x7EC4;&#x88C5;&#x6210;&#x9175;&#x6BCD;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4EE3;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5730;&#x56FE;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x8BB8;&#x591A;&#x9175;&#x6BCD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x9014;&#x5F84;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x5C06;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x8BB8;&#x591A;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;

&#x9175;&#x6BCD;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x5168;&#x7403;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Protein phosphorylation is estimated to affect 30% of the proteome and is a major regulatory mechanism that controls many basic cellular processes. Until recently, our biochemical understanding of protein phosphorylation on a global scale has been extremely limited; only one half of the yeast kinases have known in vivo substrates and the phosphorylating kinase is known for less than 160 phosphoproteins. Here we describe, with the use of proteome chip technology, the in vitro substrates recognized by most yeast protein kinases: we identified over 4,000 phosphorylation events involving 1,325 different proteins. These substrates represent a broad spectrum of different biochemical functions and cellular roles. Distinct sets of substrates were recognized by each protein kinase, including closely related kinases of the protein kinase A family and four cyclin-dependent kinases that vary only in their cyclin subunits. Although many substrates reside in the same cellular compartment or belong to the same functional category as their phosphorylating kinase, many others do not, indicating possible new roles for several kinases. Furthermore, integration of the phosphorylation results with protein-protein interaction and transcription factor binding data revealed novel regulatory modules. Our phosphorylation results have been assembled into a first-generation phosphorylation map for yeast. Because many yeast proteins and pathways are conserved, these results will provide insights into the mechanisms and roles of protein phosphorylation in many eukaryotes.

Global analysis of protein phosphorylation in yeast.

La phosphorylation des prot&#xE9;ines est estim&#xE9; &#xE0; affecter 30% du prot&#xE9;ome et est un m&#xE9;canisme majeur de r&#xE9;gulation qui contr&#xF4;le de nombreux processus cellulaires de base. Jusqu&#x26;#39;&#xE0; tout r&#xE9;cemment, notre compr&#xE9;hension biochimique de la phosphorylation des prot&#xE9;ines &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;chelle mondiale a &#xE9;t&#xE9; extr&#xEA;mement limit&#xE9;e, mais seulement la moiti&#xE9; des kinases de levure ont connu dans les substrats in vivo et la kinase phosphorylant est connu pour moins de 160 phosphoprot&#xE9;ines. Nous d&#xE9;crivons ici, avec l&#x26;#39;utilisation de la technologie des puces prot&#xE9;ome, l&#x26;#39;in vitro des substrats reconnus par la plupart des prot&#xE9;ines kinases de levure: nous avons identifi&#xE9; plus de 4000 &#xE9;v&#xE9;nements de phosphorylation impliquant 1.325 diff&#xE9;rentes prot&#xE9;ines. Ces substrats repr&#xE9;sentent un large &#xE9;ventail de diff&#xE9;rentes fonctions biochimiques cellulaires et les r&#xF4;les. Ensembles distincts de substrats ont &#xE9;t&#xE9; reconnus par chaque prot&#xE9;ine kinase, y compris kinases &#xE9;troitement li&#xE9;s de la prot&#xE9;ine kinase A de la famille et quatre kinases cycline-d&#xE9;pendantes qui varient seulement dans leurs sous-unit&#xE9;s cycline. Bien que de nombreux substrats r&#xE9;sider dans le m&#xEA;me compartiment cellulaire ou appartiennent &#xE0; la m&#xEA;me cat&#xE9;gorie fonctionnelle que leur kinase phosphorylation, beaucoup d&#x26;#39;autres ne le font pas, indiquant possibles de nouveaux r&#xF4;les pour plusieurs kinases. En outre, l&#x26;#39;int&#xE9;gration des r&#xE9;sultats de phosphorylation avec interaction prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine et les donn&#xE9;es de facteurs de transcription de liaison a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; de nouveaux modules de r&#xE9;gulation. Nos r&#xE9;sultats de phosphorylation ont &#xE9;t&#xE9; assembl&#xE9;s en une carte phosphorylation de premi&#xE8;re g&#xE9;n&#xE9;ration pour la levure. Parce que les prot&#xE9;ines de levure de nombreux sentiers et sont conserv&#xE9;es, ces r&#xE9;sultats permettra de mieux comprendre les m&#xE9;canismes et les r&#xF4;les de la phosphorylation des prot&#xE9;ines chez les eucaryotes nombreux.

Analyse globale de la phosphorylation des prot&#xE9;ines dans la levure

Proteinphosphorylierung wird gesch&auml;tzt, dass 30 % des Proteome beeinflussen und ist ein wichtiger Regulierungsmechanismus, die viele grundlegende zellul&auml;re Prozesse steuert. Bis vor kurzem wurde unser biochemischen Verst&auml;ndnis von Proteinphosphorylierung auf globaler Ebene sehr begrenzt; nur eines haben die H&auml;lfte der Hefe-Kinasen in-vivo Substrate bekannt und das phosphorylating Kinase ist bekannt f&uuml;r weniger als 160 Phosphoproteine. Hier beschreiben wir, mit dem Einsatz von Proteom-Chip-Technologie, die in-vitro-Substrate, die von den meisten Hefe Proteinkinasen erkannt: Wir haben mehr als 4.000 Phosphorylierung Ereignisse im Zusammenhang mit 1.325 verschiedene Proteine identifiziert. Diese Substrate repr&auml;sentieren ein breites Spektrum von verschiedenen biochemischen Funktionen und zellulare Rollen. Unterschiedliche S&auml;tze von Substraten wurden von jeder Proteinkinase, einschlie&szlig;lich eng verwandten Kinasen von der Protein-Kinase A Family und vier cyclin-abh&auml;ngige Kinasen, die unterscheiden sich nur in ihre cyclin-Untereinheiten erkannt. Obwohl viele Substrate befinden sich im selben zellul&auml;ren Raum oder zu derselben, funktionalen Kategorie als ihre phosphorylating Kinase geh&ouml;ren, nicht viele andere Angabe m&ouml;gliche neue Rollen f&uuml;r verschiedene Kinasen. Dar&uuml;ber hinaus Integration der Phosphorylierung Ergebnisse mit Protein-Protein-Interaktion und Transkription Faktor Binden von Daten offenbart neue regulatorische Module. Unsere Phosphorylierung-Ergebnisse haben in der ersten Generation Phosphorylierung-Karte f&uuml;r Hefe zusammengestellt worden. Da viele Hefeproteinen und Wege erhalten sind, werden diese Ergebnisse Einblicke in die Mechanismen und die Rollen von Proteinphosphorylierung in vielen Eukaryoten liefern.

Globale Analyse von Proteinphosphorylierung in der Hefe.

Fosforilazione della proteina &egrave; un importante meccanismo di regolazione che controlla molti processi cellulari di base e si stima colpisca il 30% del proteoma. Fino a poco tempo fa, la nostra comprensione biochimica di fosforilazione della proteina su scala globale &egrave; stato estremamente limitato; solo una met&agrave; della chinasi di lievito hanno conosciuto substrati in vivo e la chinasi phosphorylating &egrave; noto per meno di 160 fosfoproteine. Qui descriviamo, con l&#39;uso della tecnologia chip proteome, i substrati in vitro, riconosciuti dalla maggior parte delle chinasi di proteina di lievito: abbiamo identificato oltre 4.000 eventi di fosforilazione che coinvolgono 1.325 proteine differenti. Questi substrati rappresentano un ampio spettro di differenti funzioni biochimiche e cellulari ruoli. Insiemi distinti di substrati sono stati riconosciuti da ogni proteina chinasi, tra cui strettamente correlate chinasi degli una famiglia di proteine chinasi e quattro chinasi ciclina-dipendente che variano solo nel loro subunit&agrave; cyclin. Sebbene molti substrati risiedono nello scompartimento cellulare stesso o appartengono alla stessa categoria funzionale come loro chinasi phosphorylating, molti altri non lo fanno, indicando possibili nuovi ruoli per diverse chinasi. Inoltre, integrazione della fosforilazione risultati con interazione proteina-proteina e trascrizione fattore vincolante dati hanno rivelato nuovi moduli normativi. I nostri risultati di fosforilazione sono stati assemblati in una mappa di fosforilazione della prima generazione per lievito. Perch&eacute; sono conservate molte proteine di lievito e percorsi, questi risultati fornir&agrave; approfondimenti i meccanismi e i ruoli di fosforilazione della proteina in molti eucarioti.

Analisi globale di fosforilazione della proteina in lievito.

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;30&#xFF05;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x307E;&#x3067;&#x3001;&#x5730;&#x7403;&#x898F;&#x6A21;&#x3067;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x7406;&#x89E3;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x9175;&#x6BCD;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x534A;&#x5206;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3067;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;160&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x9175;&#x6BCD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#xFF1A;&#x6211;&#x3005;&#x306F;1325&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;4000&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x4E8B;&#x8C61;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x307F;&#x3067;&#x7570;&#x306A;&#x308B;4&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x5404;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x304C;&#x540C;&#x3058;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B4;&#x30EA;&#x306B;&#x5C5E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; - &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x7D50;&#x5408;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3084;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3068;&#x5F79;&#x5272;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC634;&#xC758; 30%&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC608;&#xC0C1; &#xB418; &#xACE0; &#xB9CE;&#xC740; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC8FC;&#xC694; &#xADDC;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xC138;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xADDC;&#xBAA8;&#xC758; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xC774;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC81C;&#xD55C;; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCD5C;&#xADFC;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC720;&#xC77C; &#xD558; &#xAC8C; &#xD6A8; &#xBAA8; kinases &#xD558;&#xBC18;&#xAE30; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xD310; &#xC54C;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;&#xC640; phosphorylating kinase &#xBBF8;&#xB9CC; 160 phosphoproteins&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAE30;&#xC220;, &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC634; &#xCE69; &#xAE30;&#xC220; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xD310;: 1325 &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; 4000 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE30;&#xD310; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC138;&#xD2B8;&#xB294; &#xAC01; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; kinases &#xB4F1; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9C0;&#xB294; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; kinases&#xB9CC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; cyclin subunits&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB9CE;&#xC740; &#xAE30;&#xD310; &#xAC19;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; phosphorylating &#xB2C8; &#xAC19;&#xC740; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC94;&#xC8FC;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD574; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB9CE;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC740;, &#xC5EC;&#xB7EC; kinases&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xACB0;&#xACFC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xD1B5;&#xD569; &#xBC0F; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xACF5;&#xAC1C; &#xC18C;&#xC124; &#xADDC;&#xC81C; &#xBAA8;&#xB4C8;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xACB0;&#xACFC; &#xB204; &#xB8E9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 1 &#xC138;&#xB300; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC870;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB9CE;&#xC740; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xACBD;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xBC0F; &#xB9CE;&#xC740; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

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La fosforilaci&#xF3;n de prote&#xED;nas se calcula que afecta a un 30% del proteoma y es un importante mecanismo de regulaci&#xF3;n que controla muchos procesos celulares b&#xE1;sicos. Hasta hace poco tiempo, nuestra comprensi&#xF3;n bioqu&#xED;mica de la fosforilaci&#xF3;n de prote&#xED;nas en una escala global ha sido muy limitado: s&#xF3;lo la mitad de las quinasas de levadura han conocido en sustratos in vivo y la fosforilaci&#xF3;n de la quinasa es conocida por menos de 160 fosfoprote&#xED;nas. A continuaci&#xF3;n se describe, con el uso de la tecnolog&#xED;a de chip proteoma, la in vitro sustratos reconocidos por la mayor&#xED;a de las quinasas de prote&#xED;nas de levadura: se identificaron m&#xE1;s de 4.000 eventos relacionados con la fosforilaci&#xF3;n de 1.325 prote&#xED;nas diferentes. Estos sustratos representan un amplio espectro de diferentes funciones bioqu&#xED;micas y las funciones celulares. Conjuntos distintos de sustratos fueron reconocidos por cada prote&#xED;na quinasa, incluyendo quinasas estrechamente relacionadas de la prote&#xED;na quinasa de la familia A y cuatro quinasas dependientes de ciclinas, que var&#xED;an s&#xF3;lo en sus subunidades ciclina. Aunque muchos sustratos residir en el mismo compartimento celular o que pertenecen a la misma categor&#xED;a funcional como de su quinasa fosforilaci&#xF3;n, muchos otros no lo hacen, lo que indica posibles nuevos roles para varias quinasas. Adem&#xE1;s, la integraci&#xF3;n de los resultados de fosforilaci&#xF3;n con la interacci&#xF3;n prote&#xED;na-prote&#xED;na y los datos de factor de transcripci&#xF3;n de uni&#xF3;n revel&#xF3; nuevos m&#xF3;dulos de regulaci&#xF3;n. Nuestros resultados de fosforilaci&#xF3;n se han montado en un mapa fosforilaci&#xF3;n de primera generaci&#xF3;n para la levadura. Debido a que muchas prote&#xED;nas de levadura y las v&#xED;as se conservan, estos resultados proporcionar&#xE1;n informaci&#xF3;n sobre los mecanismos y las funciones de la fosforilaci&#xF3;n de prote&#xED;nas en muchos eucariotas.

An&#xE1;lisis global de la fosforilaci&#xF3;n de prote&#xED;nas en la levadura

Protein microarrays containing nearly the entire yeast proteome have been constructed. They are typically prepared by overexpression and high-throughput purification and printing onto microscope slides. The arrays can be used to screen nearly the entire proteome in an unbiased fashion and have enormous utility for a variety of applications. These include protein-protein interactions, identification of novel lipid- and nucleic acid-binding proteins, and finding targets of small molecules, protein kinases, and other modification enzymes. Protein microarrays are thus powerful tools for individual studies as well as systematic characterization of proteins and their biochemical activities and regulation.

Protein microarrays.

&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6709;&#x76F8;&#x5F53;&#x5927;&#x7684;&#x52AA;&#x529B;&#xFF0C;&#x5145;&#x5206;&#x4E86;&#x89E3;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x6240;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x4ECD;&#x7136;&#x96BE;&#x4EE5;&#x6349;&#x6478;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5168;&#x7403;&#x8C03;&#x67E5;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x9175;&#x6BCD;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5FAE;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;85 &#x6FC0;&#x9176;&#x88AB;&#x51C0;&#x5316;&#x548C;&#x7528;&#x6765;&#x63A2;&#x6D4B;&#x9175;&#x6BCD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x82AF;&#x7247;&#x3002;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E00;&#x5343;&#x4E2A;&#x4E8C;&#x5341;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E92;&#x52A8;&#xFF0C;&#x548C;&#x7EDD;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x662F;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x3002;Coimmunoprecipitation &#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E;&#x8BB8;&#x591A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4EA4;&#x4E92;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x4E0E;&#x4EE5;&#x524D;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9014;&#x5F84;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x94FE;&#x63A5;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;&#x730E;&#x6237;&#x5EA7;&#x7684; Kss1 &#x4E1D;&#x72B6;&#x901A;&#x8DEF;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x8981;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x90A3;&#x4E9B;&#x7684;&#x5E94;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x901A;&#x8DEF;&#x548C; Ccr4-&#x6CA1;&#x6709;&#x8F6C;&#x5F55;/&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7BA1;&#x7406;&#x590D;&#x6742; &#xFF1B;&#x9057;&#x4F20;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x8FD0;&#x884C;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x6210;&#x4E1D;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x603B;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6FC0;&#x9176;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x534F;&#x8C03;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7684;&#x5F88;&#x591A;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4E92;&#x8FDE;&#x7F51;&#x7EDC;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8BC1;&#x660E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x82AF;&#x7247;&#x63ED;&#x793A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7EC4;&#x672A;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;

&#x7531;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x82AF;&#x7247;&#x6807;&#x8BC6;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6FC0;&#x9176;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x63ED;&#x793A;&#x65B0;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8FDE;&#x63A5;&#x3002;

Protein kinases are key regulators of cellular processes. In spite of considerable effort, a full understanding of the pathways they participate in remains elusive. We globally investigated the proteins that interact with the majority of yeast protein kinases using protein microarrays. Eighty-five kinases were purified and used to probe yeast proteome microarrays. One-thousand-twenty-three interactions were identified, and the vast majority were novel. Coimmunoprecipitation experiments indicate that many of these interactions occurred in vivo. Many novel links of kinases to previously distinct cellular pathways were discovered. For example, the well-studied Kss1 filamentous pathway was found to bind components of diverse cellular pathways, such as those of the stress response pathway and the Ccr4-Not transcriptional/translational regulatory complex; genetic tests revealed that these different components operate in the filamentation pathway in vivo. Overall, our results indicate that kinases operate in a highly interconnected network that coordinates many activities of the proteome. Our results further demonstrate that protein microarrays uncover a diverse set of interactions not observed previously.

Diverse protein kinase interactions identified by protein microarrays reveal novel connections between cellular processes.

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;. &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xB178;&#xB825;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC138;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; microarrays&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xACFC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. 85 Kinases &#xC815;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC634; microarrays &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC740; &#xC18C;&#xC124;-1000-20-3 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. Coimmunoprecipitation &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD55C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xACBD;&#xB85C;&#xB97C; kinases&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xC18C;&#xC124; &#xB9C1;&#xD06C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC751;&#xB2F5; &#xD1B5;&#xB85C; Ccr4 &#xC544;&#xB2C8; transcriptional/&#xBCC0;&#xD658; &#xADDC;&#xC81C; &#xBCF5;&#xC7A1;; &#xB4F1; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC774;&#xC57C;&#xAE30;&#xB3C4; Kss1 filamentous &#xD1B5;&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; filamentation &#xD1B5;&#xB85C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; kinases&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC634;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC0C1;&#xD638; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB354; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; microarrays &#xBC1D;&#xD788;&#xAE30; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; microarrays &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C;.

Prot&eacute;ines kinases sont des r&eacute;gulateurs cl&eacute;s de processus cellulaires. En d&eacute;pit des efforts consid&eacute;rables, une pleine compr&eacute;hension des voies qu&#39;ils participent demeure insaisissable. Globalement, nous avons &eacute;tudi&eacute; les prot&eacute;ines qui interagissent avec la majorit&eacute; des kinases de prot&eacute;ine de levure &agrave; l&#39;aide de puces &agrave; prot&eacute;ines. Quatre-vingt-cinq kinases ont purifi&eacute; et utilis&eacute; pour sonder la levure proteome microarrays. Les interactions de mille-vingt-trois ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;es, et la grande majorit&eacute; &eacute;taient roman. Co-immunopr&eacute;cipitation exp&eacute;riences indiquent que plusieurs de ces interactions est produite in vivo. Beaucoup de liens nouveaux des kinases de voies cellulaires auparavant distinctes ont &eacute;t&eacute; d&eacute;couverts. Par exemple, la voie de filamenteuse Kss1 bien &eacute;tudi&eacute;e a &eacute;t&eacute; trouv&eacute;e pour lier les composants de diverses voies cellulaires, tels que ceux de la voie de r&eacute;action de stress et le complexe r&eacute;gulateur transcriptionnel/translationnelle Ccr4-non ; les tests g&eacute;n&eacute;tiques ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; que ces diff&eacute;rentes composantes fonctionnent dans la voie de la filamentation in vivo. Dans l&#39;ensemble, nos r&eacute;sultats indiquent que les kinases fonctionnent dans un r&eacute;seau hautement interconnect&eacute; qui coordonne les nombreuses activit&eacute;s du prot&eacute;ome. Nos r&eacute;sultats d&eacute;montrent que les puces &agrave; prot&eacute;ines d&eacute;couvrent un ensemble vari&eacute; d&#39;interactions non observ&eacute;es pr&eacute;c&eacute;demment.

Les interactions de diverses prot&eacute;ines kinase identifi&eacute;es par puces &agrave; prot&eacute;ines r&eacute;v&egrave;lent de nouvelles connexions entre les processus cellulaires.

Proteinkinasen sind wichtige Regulatoren zellul&auml;rer Prozesse. Trotz erheblicher Anstrengungen bleibt ein volles Verst&auml;ndnis der Bahnen, an denen sie beteiligt. Wir untersuchten weltweit die Proteine, die interagieren mit der Mehrheit der Hefe Proteinkinasen mit ProteinMicroarrays. F&uuml;nfundachtzig Kinasen wurden gereinigt und zur Untersuchung der Hefe Proteome Microarrays verwendet. Tausend-dreiundzwanzig Interaktionen wurden identifiziert, und die &uuml;berwiegende Mehrheit waren Roman. Coimmunoprecipitation Experimente zeigen, dass viele dieser Interaktionen in-vivo aufgetreten ist. Viele neue Links von Kinasen zuvor unterschiedliche zellul&auml;re Bildungswege wurden entdeckt. Beispielsweise wurde die gut erforscht filament&ouml;se Kss1-Pathway festgestellt, dass die Komponenten von verschiedenen zellul&auml;ren Wege, wie die Stress-Reaktion-Pathway und transkriptionelle/translational regulatorischen Komplex Ccr4-nicht binden; Gentests ergab, dass diese verschiedenen Komponenten in der Filamentation Stoffwechselweg in-vivo t&auml;tig sind. Insgesamt zeigen unsere Ergebnisse, dass Kinasen in einem stark miteinander verbundenen Netzwerk betreiben, die vielen Aktivit&auml;ten des Proteome koordiniert. Unsere Ergebnisse weiter zeigen, dass ProteinMicroarrays eine vielf&auml;ltige Reihe von Interaktionen, die zuvor nicht beobachtete aufzudecken.

Diverse Protein-Kinase-Interaktionen von ProteinMicroarrays identifiziert zeigen neuartige Verbindungen zwischen zellul&auml;rer Prozesse.

Proteina chinasi sono regolatori chiave di processi cellulari. Nonostante uno sforzo considerevole, una piena comprensione delle vie che partecipano resta sfuggente. Abbiamo valutato globalmente le proteine che interagiscono con la maggior parte della chinasi di proteina di lievito usando i microarrays della proteina. Ottantacinque chinasi sono state purificate e utilizzate per sondare il lievito proteome microarrays. Sono state identificate interazioni mille-venti-tre, e la stragrande maggioranza era romanzo. Coimmunoprecipitation esperimenti indicano che molte di queste interazioni si &egrave; verificato in vivo. Sono stati scoperti molti link romanzo della chinasi a percorsi cellulare precedentemente distinte. Ad esempio, il pathway di filamentoso Kss1 ben studiato &egrave; stato trovato per associare componenti di diversi percorsi cellulari, come quelle del percorso di risposta dello stress e del complesso normativo transcriptional/traslazionale Ccr4, non; i test genetici hanno rivelato che questi diversi componenti operano nel percorso filamentation in vivo. Nel complesso, i nostri risultati indicano che le chinasi operano in una rete altamente interconnessa che coordina le molteplici attivit&agrave; del proteoma. Ulteriormente i nostri risultati dimostrano che i microarrays della proteina scoprire una diversificata serie di interazioni non osservato in precedenza.

Interazioni di chinasi di proteina diversi identificate da microarrays della proteina rivelano nuove connessioni tra i processi cellulari.

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Prote&iacute;nas quinasas son reguladores claves de procesos celulares. A pesar de un esfuerzo considerable, una comprensi&oacute;n completa de las v&iacute;as que participan en sigue siendo elusiva. Investigamos a nivel mundial las prote&iacute;nas que interaccionan con la mayor&iacute;a de kinases de prote&iacute;na de levadura utilizando microarrays de prote&iacute;nas. Quinasas de ochenta y cinco eran purificadas y sonda levadura proteoma microarrays. Interacciones de 1 mil-veintitr&eacute;s fueron identificadas, y la mayor&iacute;a fueron novela. Coimmunoprecipitation experimentos indican que muchas de estas interacciones se han producido in vivo. Se descubrieron muchos nuevos enlaces de quinasas previamente distintas v&iacute;as celulares. Por ejemplo, la v&iacute;a filamentosa estudiada de Kss1 fue encontrada para atar componentes de diversas v&iacute;as celulares, como los de la v&iacute;a de la respuesta de estr&eacute;s y el complejo regulador transcripcional/traslacional Ccr4, no; pruebas gen&eacute;ticas revelaron que estos diferentes componentes operan en la v&iacute;a de la filamentaci&oacute;n en vivo. En general, nuestros resultados indican que las quinasas operan en una red altamente interconectada que coordina muchas actividades del proteoma. Nuestros resultados a&uacute;n m&aacute;s demuestran que los microarrays de prote&iacute;nas descubrir un conjunto diverso de las interacciones no observadas previamente.

Interacciones de la quinasa de diversas prote&iacute;nas identificadas por microarrays de prote&iacute;nas revelan nuevas conexiones entre procesos celulares.

Joseph Fasolo

Department of Genetics

Stanford University

Probing High-density Functional Protein Microarrays to Detect Protein-protein Interactions

Joseph Fasolo

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Stanford University

Probing High-density Functional Protein Microarrays to Detect Protein-protein Interactions

Department of Genetics