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Cell Electrofusion Visualized with Fluorescence Microscopy

Cell electrofusion is a safe, non-viral and non-chemical method that can be used for preparing hybrid cells for human therapy. Electrofusion involves ...

University of Ljubljana

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&#x6279;&#x91CF;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x4EBA;-&#x9F20; heterohybridoma &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x878D;&#x5408;&#x7684;&#x4F18;&#x5316;&#x3002;

Cell electrofusion is a phenomenon that occurs, when cells are in close contact and exposed to short high-voltage electric pulses. The consequence of exposure to pulses is transient and nonselective permeabilization of cell membranes. Cell electrofusion and permeabilization depend on the values of electric field parameters including amplitude, duration and number of electric pulses and direction of the electric field. In our study, we first investigated the influence of the direction of the electric field on cell fusion in two cell lines. In both cell lines, applications of pulses in two directions perpendicular to each other were the most successful. Cell electrofusion was finally used for production of human-mouse heterohybridoma cells with modified Koehler and Milstein hybridoma technology, which was not done previously. The results, obtained by cell electrofusion, are comparable to usually used polyethylene glycol mediated fusion on the same type of cells.

Optimization of bulk cell electrofusion in vitro for production of human-mouse heterohybridoma cells.

&#xC9;lectrofusion cellulaire est un ph&#xE9;nom&#xE8;ne qui se produit, lorsque les cellules sont en contact &#xE9;troit et expos&#xE9; &#xE0; de courtes impulsions &#xE0; haute tension &#xE9;lectriques. La cons&#xE9;quence de l&#x26;#39;exposition aux impulsions est perm&#xE9;abilisation transitoire et non s&#xE9;lectif des membranes cellulaires. &#xC9;lectrofusion cellule et perm&#xE9;abilisation d&#xE9;pendent des valeurs de param&#xE8;tres du champ &#xE9;lectrique dont l&#x26;#39;amplitude, dur&#xE9;e et le nombre d&#x26;#39;impulsions &#xE9;lectriques et &#xE0; l&#x26;#39;orientation du champ &#xE9;lectrique. Dans notre &#xE9;tude, nous avons d&#x26;#39;abord &#xE9;tudi&#xE9; l&#x26;#39;influence de la direction du champ &#xE9;lectrique sur la fusion cellulaire dans deux lign&#xE9;es cellulaires. Dans les deux lignes de cellules, les applications d&#x26;#39;impulsions dans deux directions perpendiculaires les unes aux autres sont les plus efficace. &#xC9;lectrofusion cellulaire a finalement &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;e pour la production de cellules h&#xE9;t&#xE9;rohybridome humaine &#xE0; la souris avec modification Koehler et Milstein technique de l&#x26;#39;hybridome, qui n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; fait auparavant. Les r&#xE9;sultats obtenus par &#xE9;lectrofusion cellule, sont comparables &#xE0; la fusion du poly&#xE9;thyl&#xE8;ne glycol &#xE0; m&#xE9;diation habituellement utilis&#xE9; sur le m&#xEA;me type de cellules.

Optimisation des &#xE9;lectrofusion cellulaire in vitro en vrac pour la production de cellules humaines h&#xE9;t&#xE9;rohybridome-souris

Zelle Elektroschweiss ist ein Ph&auml;nomen, das auftritt, wenn Zellen sich in engem Kontakt und kurze Hochspannungs-elektrische Impulse ausgesetzt. Die Folge der Exposition auf Impulse ist verg&auml;nglich und unselektiv Permeabilization der Zellmembranen. Zelle Elektroschweiss und Permeabilization h&auml;ngen die Werte der elektrischen Feldparameter wie Amplitude, Dauer und Anzahl der elektrischen Impulsen und Richtung des elektrischen Feldes. In unserer Studie untersuchten wir zun&auml;chst den Einfluss der Richtung des elektrischen Feldes auf Zellfusion in beiden Zelllinien. In beiden Zelllinien wurden Anwendungen von Impulsen in zwei senkrecht zueinander stehenden Richtungen die erfolgreichste. Zelle Elektroschweiss wurde schlie&szlig;lich zur Herstellung von Mensch-Maus-Heterohybridoma Zellen mit ver&auml;nderter K&ouml;hler und Milstein Hybridom-Technik, verwendet, die nicht zuvor getan wurde. Von Zelle Heizwendelschwei&szlig;en, erzielten Ergebnisse sind vergleichbar mit in der Regel verwendete Polyethylenglykol vermittelte Fusion auf die gleiche Art von Zellen.

Optimierung der Gro&szlig;teil Zelle Elektroschweiss zur Herstellung von Mensch-Maus-Heterohybridoma Zellen in vitro.

Cella elettrofusione &egrave; un fenomeno che si verifica quando le cellule sono in stretto contatto ed esposti a brevi impulsi elettrici ad alta tensione. La conseguenza dell&#39;esposizione a impulsi &egrave; transitoria e non selettivi permeabilization delle membrane cellulari. Cella Elettrosaldabile e permeabilization dipendono i valori dei parametri di campo elettrico tra cui ampiezza, durata e numero di impulsi elettrici e la direzione del campo elettrico. Nel nostro studio, abbiamo studiato in primo luogo l&#39;influenza della direzione del campo elettrico sulla fusione cellulare in due linee cellulari. In entrambe le linee cellulari, applicazioni di impulsi in due direzioni perpendicolari tra loro erano il maggior successo. Cella elettrofusione infine &egrave; stato utilizzato per la produzione di cellule umane-mouse heterohybridoma con modificata Koehler e Milstein ibridoma tecnologia, che non &egrave; stato fatto in precedenza. I risultati, ottenuti da cellule elettrofusione, sono paragonabili al solito usato polietilenglicole mediata fusione sullo stesso tipo di cellule.

Ottimizzazione della massa cellulare Elettrosaldabile in vitro per la produzione di cellule umane-mouse heterohybridoma.

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&#x30D2;&#x30C8; - &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;Heterohybridoma&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x3092;in vitro&#x3067;&#x30D0;&#x30EB;&#x30AF;&#x7D30;&#x80DE;&#x96FB;&#x6C17;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;

&#xC140; electrofusion&#xC740; &#xC140; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC811;&#xCD09;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB54C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xBA70; &#xC9E7;&#xC740; &#xACE0;&#xC804;&#xC555; &#xC804;&#xAE30; &#xD384;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xD604;&#xC0C1;&#xC774; &#xB2E4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD384;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; permeabilization &#xC774;&#xB2E4;. &#xC140; electrofusion &#xBC0F; permeabilization &#xC9C4;&#xD3ED;, &#xAE30;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC804;&#xAE30;&#xC7A5;&#xC758; &#xBC29;&#xD5A5;&#xACFC; &#xC804;&#xAE30; &#xD384;&#xC2A4;&#xC758; &#xC218;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC804;&#xAE30; &#xBD84;&#xC57C; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; &#xAC12;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBA3C;&#xC800; &#xB450; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xD4E8;&#xC804;&#xC5D0; &#xC804;&#xAE30;&#xC7A5;&#xC758; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;. &#xB450; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC11C;&#xB85C; &#xC9C1;&#xAC01;&#xC744; &#xC774;&#xB8E8;&#xB294; &#xB450; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xD384;&#xC2A4;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC131;&#xACF5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC140; electrofusion &#xB4DC;&#xB514;&#xC5B4; &#xC218;&#xC815; &#xCFB0;&#xB7EC;&#xC640; Milstein hybridoma &#xAE30;&#xC220;, &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC778;&#xAC04; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; heterohybridoma &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC140; electrofusion&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5BB;&#xC740; &#xACB0;&#xACFC; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xB300; &#xB4F1; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xD3F4; &#xB9AC; &#xC5D0;&#xD2F8;&#xB80C; &#xAE00;&#xB9AC;&#xCF5C; &#xD4E8;&#xC804;.

&#xB300;&#xB7C9; &#xC140; electrofusion &#xC778;&#xAC04; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; heterohybridoma &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xCCB4; &#xC678;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;.

Electrofusi&#xF3;n de c&#xE9;lulas es un fen&#xF3;meno que se produce, cuando las c&#xE9;lulas est&#xE1;n en contacto estrecho y expuesto a cortos pulsos de alta tensi&#xF3;n el&#xE9;ctrica. La consecuencia de la exposici&#xF3;n a pulsos es permeabilizaci&#xF3;n transitoria y no selectiva de las membranas celulares. Electrofusi&#xF3;n de la c&#xE9;lula y la permeabilizaci&#xF3;n depender&#xE1; de los valores de los par&#xE1;metros del campo el&#xE9;ctrico, incluyendo amplitud, duraci&#xF3;n y n&#xFA;mero de impulsos el&#xE9;ctricos y la direcci&#xF3;n del campo el&#xE9;ctrico. En nuestro estudio, primero investig&#xF3; la influencia de la direcci&#xF3;n del campo el&#xE9;ctrico en la fusi&#xF3;n celular en dos l&#xED;neas celulares. En ambas l&#xED;neas celulares, las aplicaciones de pulsos en dos direcciones perpendiculares entre s&#xED; fueron los m&#xE1;s exitosos. Electrofusi&#xF3;n de la c&#xE9;lula se utiliz&#xF3; finalmente para la producci&#xF3;n de c&#xE9;lulas humanas y de rat&#xF3;n heterohibridoma con modificaci&#xF3;n de Koehler y Milstein la tecnolog&#xED;a del hibridoma, que no se hizo anteriormente. Los resultados, obtenidos por electrofusi&#xF3;n celular, son comparables a la fusi&#xF3;n utiliza generalmente de polietileno glicol mediada en el mismo tipo de c&#xE9;lulas.

Optimizaci&#xF3;n de electrofusi&#xF3;n celular masiva in vitro para la producci&#xF3;n de c&#xE9;lulas de rat&#xF3;n-humano heterohibridoma

&#x9AD8;&#x6548;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x7684;&#x8EAB;&#x4F53;&#x63A5;&#x89E6;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x878D;&#x5408;&#xFF0C;&#x6B64;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x79F0;&#x4E3A;&#x7535;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x5B83;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x4F4E;&#x6E17;&#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x524D;&#x7684;&#x7535;&#x8109;&#x51B2;&#x5E94;&#x7528;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7535;&#x878D;&#x5408;&#x6548;&#x7387;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x9996;&#x5148;&#xFF0C;&#x7535;&#x573A;&#x7684;&#x632F;&#x5E45;&#x662F;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684; spectrofluorometrically&#xFF0C;&#x8DB3;&#x591F;&#x4F4E;&#x6E17;&#x7F13;&#x51B2;&#x533A;&#x4E2D;&#x7684;&#x900F; B16 F1 &#x548C; CHO &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x5728;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7684;&#x7535;&#x878D;&#x5408;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x53D6;&#x5F97;&#x4E86; 14 + /-4%&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x7EC6;&#x80DE; B16 F1 &#x548C; 6 + /-1%&#x4E3A;&#x7956;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7535;&#x878D;&#x5408;&#x6548;&#x7387;&#xFF0C;&#x7531;&#x53CC;&#x67D3;&#x8272;&#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x76F8;&#x82E5;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x5DF2;&#x53D1;&#x8868;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x5B83;&#x8FD8;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8BE5;&#x6210;&#x529F;&#x7684;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x5E76;&#x4E0D;&#x4E00;&#x5B9A;&#x4FDD;&#x8BC1;&#x9AD8;&#x7535;&#x878D;&#x5408;&#x6548;&#x7387;&#x7531;&#x751F;&#x7269;&#x56E0;&#x7D20;&#x9020;&#x6210;&#x7535;&#x878D;&#x5408;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x6D89;&#x53CA;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x5EF6;&#x957F;&#x7535;&#x878D;&#x5408;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x6539;&#x5584;&#x6574;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x6D3B;&#x540E;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x6280;&#x672F;&#x5728;&#x4F4E;&#x6E17;&#x7F13;&#x51B2;&#xFF0C;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#x5BF9;&#x4E8E; B16 F1 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4EFD;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8D21;&#x732E;&#x662F;&#x81EA;&#x53D1;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x63A5;&#x89E6;&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x9075;&#x5B88;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x7B80;&#x5355;&#x4FEE;&#x6539;&#x7684;&#x8BF4;&#x660E;&#xFF0C;&#x800C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4FDD;&#x7559;&#x5176;&#x7403;&#x9762;&#x5F62;&#x72B6;&#x3002;

&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x878D;&#x5408;&#xFF1A; &#x7535;&#x573A;&#x632F;&#x5E45;&#x548C;&#x4F4E;&#x6E17;&#x6CBB;&#x7597;&#x5C0F;&#x9F20;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624; (B16-F1) &#x53CA;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2; (CHO) &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4F18;&#x5316;&#x3002;

Efficient electroporation of cells in physical contact induces cell fusion, and this process is known as electrofusion. It has been shown that appropriate hypotonic treatment of cells before the application of electric pulses can cause a significant increase in electrofusion efficiency. First, the amplitudes of the electric field were determined spectrofluorometrically, where sufficient permeabilization in hypotonic buffer occurred for B16-F1 and CHO cells. In further electrofusion experiments 14 +/- 4% of fused cells for B16-F1 and 6 +/- 1% for CHO was achieved. These electrofusion efficiencies, determined by double staining and fluorescence microcopy, are comparable to those of other published studies. It was also confirmed that successful electroporation does not necessarily guarantee high electrofusion efficiency due to biological factors involved in the electrofusion process. Furthermore, not only the extension of electrofusion but also cell survival depends on the cell line used. Further studies are needed to improve overall cell survival after electroporation in hypotonic buffer, which was significantly reduced, especially for B16-F1 cells. Another contribution of this report is the description of a simple modification of the adherence method for formation of spontaneous cell contact, while cells preserve their spherical shape.

Cell-cell electrofusion: optimization of electric field amplitude and hypotonic treatment for mouse melanoma (B16-F1) and Chinese Hamster ovary (CHO) cells.

&#xC9;lectroporation efficace des cellules en contact physique induit la fusion cellulaire, et ce processus est connu sous le nom &#xE9;lectrofusion. Il a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; que le traitement appropri&#xE9; hypotonique des cellules avant l&#x26;#39;application d&#x26;#39;impulsions &#xE9;lectriques peuvent causer une augmentation sensible de l&#x26;#39;efficacit&#xE9; &#xE9;lectrofusion. Premi&#xE8;re, les amplitudes du champ &#xE9;lectrique ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;es spectrofluorometrically, o&#xF9; perm&#xE9;abilisation suffisante dans un tampon hypotonique a eu lieu pour des cellules B16-F1 et CHO. Dans les exp&#xE9;riences d&#x26;#39;autres &#xE9;lectrosoudables 14 + / - 4% des cellules fusionn&#xE9;es pour B16-F1 et 6 + / - 1% pour les CHO a &#xE9;t&#xE9; atteint. Ces gains d&#x26;#39;efficacit&#xE9; &#xE9;lectrosoudables, d&#xE9;termin&#xE9;s par la double coloration et microscopie de fluorescence, sont comparables &#xE0; ceux d&#x26;#39;autres &#xE9;tudes publi&#xE9;es. Il a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9; que l&#x26;#39;&#xE9;lectroporation r&#xE9;ussie ne garantit pas n&#xE9;cessairement l&#x26;#39;efficacit&#xE9; &#xE9;lectrofusion &#xE9;lev&#xE9; en raison de facteurs biologiques impliqu&#xE9;s dans le processus &#xE9;lectrofusion. En outre, non seulement l&#x26;#39;extension de &#xE9;lectrofusion, mais aussi la survie des cellules d&#xE9;pend de la lign&#xE9;e cellulaire utilis&#xE9;e. D&#x26;#39;autres &#xE9;tudes sont n&#xE9;cessaires pour am&#xE9;liorer la survie des cellules globale apr&#xE8;s l&#x26;#39;&#xE9;lectroporation dans un tampon hypotonique, qui a &#xE9;t&#xE9; consid&#xE9;rablement r&#xE9;duit, en particulier pour les cellules B16-F1. Une autre contribution de ce rapport est la description d&#x26;#39;une simple modification de la m&#xE9;thode pour la formation de l&#x26;#39;adh&#xE9;sion de contact cellulaire spontan&#xE9;e, tandis que les cellules conservent leur forme sph&#xE9;rique.

Cellule-cellule &#xE9;lectrosoudables: Optimisation de l&#x26;#39;amplitude du champ &#xE9;lectrique et un traitement hypotonique pour m&#xE9;lanome de souris (B16-F1) et ovaire de hamster chinois (cellules CHO)

Effiziente Elektroporation von Zellen in K&ouml;rperkontakt induziert Zellfusion, und dieser Prozess ist bekannt als Elektroschweiss. Es hat sich gezeigt, dass entsprechende hypotone Behandlung der Zellen bevor die Anwendung von elektrischen Impulsen ein deutliches Elektroschweiss-Effizienz verursachen kann. Erstens waren die Amplituden des elektrischen Feldes zielstrebig Spectrofluorometrically, wo aufgetreten ist ausreichend Permeabilization in hypotone Puffer f&uuml;r B16-F1 und CHO-Zellen. Im weiteren Elektroschweiss-Experimente wurden 14 +/-4 % der verschmolzenen Zellen f&uuml;r B16-F1 und 6 &plusmn; 1 % f&uuml;r CHO erzielt. Diese Elektroschweiss-Effizienz, die durch doppelte F&auml;rbe- und Fluoreszenz-Microcopy, bestimmt sind vergleichbar mit denen von anderen ver&ouml;ffentlichten Studien. Es wurde auch best&auml;tigt, dass dieses erfolgreiche Electroporation unbedingt hohe Elektroschweiss-Effizienz durch biologische Faktoren Elektroschweiss-Prozess beteiligt &uuml;bernimmt keine Garantie. Dar&uuml;ber hinaus ist nicht nur die Erweiterung der Elektroschweiss sondern auch Zelle &Uuml;berleben h&auml;ngt von der Zelllinie verwendet. Weitere Studien sind erforderlich, um die Zelle Gesamt&uuml;berleben nach Electroporation in hypotone Puffer zu verbessern, die deutlich, vor allem f&uuml;r B16-F1-Zellen reduziert wurde. Ein weiterer Beitrag dieses Berichts ist die Beschreibung der eine einfache &Auml;nderung der Einhaltung Methode zur Bildung von spontanen Zelle Kontakt, w&auml;hrend Zellen ihre Kugelform erhalten.

Zell-Zell-Elektroschweiss: Optimierung des elektrischen Feldes Amplitude und hypotone Behandlung f&uuml;r Maus Melanom (B16-F1) und chinesischen Hamsterzellen Eierstock (CHO).

Elettroporazione efficace delle cellule in contatto fisico induce la fusione delle cellule, e questo processo &egrave; noto come elettrofusione. &Egrave; stato dimostrato che appropriato trattamento ipotonico delle cellule prima che l&#39;applicazione di impulsi elettrici pu&ograve; causare un aumento significativo dell&#39;efficienza elettrofusione. In primo luogo, le ampiezze del campo elettrico sono stati determinati spectrofluorometrically, dove si &egrave; verificato sufficiente permeabilization buffer ipotonico per B16-F1 e cellule CHO. In ulteriori esperimenti di elettrofusione 14 + /-4% delle cellule fuse per B16-F1 e 6 + /-1% per CHO &egrave; stato raggiunto. Queste efficienze elettrofusione, determinate dalla doppia colorazione e fluorescenza microcopy, sono paragonabili a quelli di altri studi pubblicati. &Egrave; stato inoltre confermato che successo elettroporazione non garantisce necessariamente elettrofusione ad alta efficienza a causa di fattori biologici coinvolti nel processo di elettrofusione. Inoltre, non solo l&#39;estensione dell&#39;Elettrosaldabile, ma anche la sopravvivenza delle cellule dipende dalla linea cellulare utilizzata. Ulteriori studi sono necessari per migliorare la sopravvivenza cellulare dopo elettroporazione nel buffer ipotonico, che &egrave; stato significativamente ridotto, soprattutto per le cellule B16-F1. Un altro contributo di questa relazione &egrave; la descrizione di una semplice modifica del metodo di aderenza per formazione di contatto spontanea delle cellule, mentre le cellule conservano la loro forma sferica.

Cellula-cellula elettrosaldabili: ottimizzazione dell&#39;ampiezza di campo elettrico e trattamento ipotonico per mouse melanoma (B16-F1) e le cellule di criceto cinese (CHO) dell&#39;ovaio.

&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306B;&#x63A5;&#x89E6;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x878D;&#x5408;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x878D;&#x5408;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x5370;&#x52A0;&#x524D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x4F4E;&#x5F35;&#x51E6;&#x7406;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x878D;&#x5408;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305A;&#x3001;&#x96FB;&#x5834;&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x306F;&#x4F4E;&#x5F35;&#x7DE9;&#x885D;&#x6DB2;&#x3067;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306F;&#x3001;B16-F1&#x304A;&#x3088;&#x3073;CHO&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x306F;&#x3001;spectrofluorometrically&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x96FB;&#x6C17;&#x878D;&#x5408;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;14 + /  -  4 B16-F1&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#xFF05;&#x3068;6 + /  -  CHO&#x306E;1&#xFF05;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E8C;&#x91CD;&#x67D3;&#x8272;&#x3057;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x7E2E;&#x5C0F;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x878D;&#x5408;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x767A;&#x8868;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x305F;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x5FC5;&#x305A;&#x3057;&#x3082;&#x96FB;&#x6C17;&#x878D;&#x5408;&#x904E;&#x7A0B;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x8981;&#x56E0;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x9AD8;&#x3044;&#x96FB;&#x6C17;&#x878D;&#x5408;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x4FDD;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x5B50;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;B16-F1&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x4F4E;&#x5F35;&#x7DE9;&#x885D;&#x6DB2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5F8C;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x7403;&#x72B6;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x3082;&#x3046;&#x4E00;&#x3064;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x89E6;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x63A5;&#x7740;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x7C21;&#x5358;&#x306A;&#x4FEE;&#x6B63;&#x306E;&#x8AAC;&#x660E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x878D;&#x5408;&#xFF1A;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30FC;&#x30DE;&#x306E;&#x96FB;&#x754C;&#x632F;&#x5E45;&#x3068;&#x4F4E;&#x5F35;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#xFF08;B16-F1&#xFF09;&#x53CA;&#x3073;&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;&#xFF08;CHO&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;

&#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; electroporation &#xC2E0;&#xCCB4; &#xC811;&#xCD09;&#xC5D0; &#xC140;&#xC758; &#xC140; &#xD4E8;&#xC804;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xACFC;&#xC815; electrofusion &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xAE30; &#xD384;&#xC2A4;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; electrofusion &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC804;&#xC5D0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xACE0;&#xC628; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC918; &#xC654;&#xB2E4;. &#xCCAB;&#xC9F8;, &#xC804;&#xAE30;&#xC7A5;&#xC758; &#xC9C4;&#xD3ED; &#xACE0;&#xC628; &#xBC84;&#xD37C;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; permeabilization B16-F1 &#xBC0F; &#xC870; &#xC140;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC704;&#xCE58; &#xACB0;&#xC815;&#xB41C; spectrofluorometrically &#xD588;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; electrofusion &#xC2E4;&#xD5D8; 14 &plusmn; B16-f 1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC735;&#xD569;&#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; 4% &#xBC0F; &plusmn; &#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 1 %6 &#xB2EC;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC911; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC774; &#xC9C0; &#xACE0; &#xD615;&#xAD11; microcopy&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815;&#xC774; electrofusion &#xD6A8;&#xC728;&#xC131; &#xB2E4;&#xB978; &#xAC8C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xADF8; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; electroporation &#xBCF4;&#xC99D; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC18;&#xB4DC;&#xC2DC; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC694;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xB192;&#xC740; electrofusion &#xD6A8;&#xC728;&#xC131; electrofusion &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, electrofusion &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874;&#xC758; &#xD655;&#xC7A5; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. B16-F1 &#xC140;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xD788; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; &#xACE0;&#xC628; &#xBC84;&#xD37C;&#xC5D0;&#xC11C; electroporation &#xD6C4; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCD94;&#xAC00; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xAC00; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC758; &#xB610; &#xB2E4;&#xB978; &#xACF5;&#xD5CC; &#xC140; &#xAD6C;&#xD615; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC778; &#xC140; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC900;&#xC218; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC218;&#xC815; &#xC124;&#xBA85;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC140; electrofusion: &#xC804;&#xAE30;&#xC7A5;&#xC758; &#xC9C4;&#xD3ED; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; (B16-F1)&#xACFC; &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C; (&#xC870;) &#xC140;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACE0;&#xC628; &#xCC98;&#xB9AC;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;.

Electroporaci&#xF3;n eficiente de las c&#xE9;lulas en contacto f&#xED;sico induce la fusi&#xF3;n de c&#xE9;lulas, y este proceso se conoce como electrofusi&#xF3;n. Se ha demostrado que el tratamiento apropiado hipot&#xF3;nico de las c&#xE9;lulas antes de la aplicaci&#xF3;n de impulsos el&#xE9;ctricos pueden causar un aumento significativo de la eficiencia de electrofusi&#xF3;n. En primer lugar, las amplitudes del campo el&#xE9;ctrico se determinaron spectrofluorometrically, donde la permeabilizaci&#xF3;n suficiente en tamp&#xF3;n hipot&#xF3;nico producido por las c&#xE9;lulas B16-F1 y CHO. En experimentos adicionales de electrofusi&#xF3;n 14 + / - 4% de c&#xE9;lulas fusionadas para B16-F1 y 6 + / - 1% para CHO se logr&#xF3;. Estas eficiencias de electrofusi&#xF3;n, determinados por la doble tinci&#xF3;n y microscopia de fluorescencia, son comparables a los de otros estudios publicados. Tambi&#xE9;n se confirm&#xF3; que la electroporaci&#xF3;n &#xE9;xito no garantiza necesariamente la eficiencia de electrofusi&#xF3;n de alta debido a factores biol&#xF3;gicos que intervienen en el proceso de electrofusi&#xF3;n. Adem&#xE1;s, no s&#xF3;lo la extensi&#xF3;n de electrofusi&#xF3;n, sino tambi&#xE9;n la supervivencia celular depende de la l&#xED;nea celular utilizada. Se necesitan m&#xE1;s estudios para mejorar la supervivencia general de la c&#xE9;lula despu&#xE9;s de la electroporaci&#xF3;n en tamp&#xF3;n hipot&#xF3;nico, que se redujo significativamente, en especial para B16-F1 c&#xE9;lulas. Otra contribuci&#xF3;n de este informe es la descripci&#xF3;n de una simple modificaci&#xF3;n del m&#xE9;todo de adhesi&#xF3;n para la formaci&#xF3;n de contactos c&#xE9;lula espont&#xE1;nea, mientras que las c&#xE9;lulas preservar su forma esf&#xE9;rica.

C&#xE9;lula-c&#xE9;lula electrosoldables: Optimizaci&#xF3;n de la amplitud del campo el&#xE9;ctrico y el tratamiento hipot&#xF3;nico de melanoma de rat&#xF3;n (B16-F1) y de ovario de h&#xE1;mster chino (CHO)

Katja Trontelj

Faculty of Electrical Engineering

University of Ljubljana

Cell Electrofusion Visualized with Fluorescence Microscopy