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Microfabricated Post-Array-Detectors (mPADs): an Approach to Isolate Mechanical Forces

In this video, we will present our approach to measure cellular traction forces using a microfabricated array of posts.  Traction forces are generated ...

University of Pennsylvania 

&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x52A0;&#x538B;&#x7D20;&#x589E;&#x52A0;&#x5185;&#x9AD3;&#x96C6;&#x5408;&#x7BA1; (&#x9178;&#x78B1;) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x8D29;&#x8FD0;&#x5230;&#x6839;&#x5C16;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D;-2 &#x548C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53CD;&#x5E94;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x52A8;&#x5458;&#x548C;&#x9499;&#x8C03;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5904;&#x7406;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6C34;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x53CD;&#x5E94;&#x90E8;&#x5206;&#x4ECB;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x975E;&#x808C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; II &#x7684;&#x9499;&#x9499;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8F7B;&#x94FE;&#x6FC0;&#x9176; (MLCK) &#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x4E0E;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x8868;&#x660E; MLCK&#x3001; &#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x89C4;&#x7BA1;&#x8F7B;&#x94FE; (MLC) &#x548C; 2A &#x548C; 2B &#x7684;&#x5927;&#x9F20;&#x5185;&#x9AD3;&#x96C6;&#x5408;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x975E;&#x808C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x91CD;&#x94FE;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x53CC;&#x5411;&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3;&#x548C;&#x57FA;&#x8D28;&#x8F85;&#x52A9;&#x6FC0;&#x5149;&#x89E3;&#x5438;&#x7535;&#x79BB;&#x98DE;&#x884C;&#x65F6;&#x95F4;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E24;&#x79CD;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x7684;&#x521A;&#x679C;&#x89E3;&#x653E;&#x8FD0;&#x52A8;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8FD8;&#x4EE5;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E0E;&#x975E;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5F62;&#x5F0F;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x653E;&#x5C04;&#x81EA;&#x663E;&#x5F71;&#x7684;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x51DD;&#x80F6;&#x5185;&#x9AD3;&#x8D28; 32 P &#x5B75;&#x5316;&#x8868;&#x660E;&#x589E;&#x52A0; 32 P &#x6807;&#x8BB0;&#x7684; V2 &#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242; [D-Arg8-Cys1 deamino] &#x9488;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x5782;&#x4F53;&#x540E;&#x53F6;&#x7D20; &#xFF08;&#x52A0;&#x538B;&#x7D20;&#xFF09;&#x3002;MLC &#x78F7;&#x9178;&#x5316; &#xFF08;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E0E;&#x53CD;-&#x78F7;-MLC &#x6297;&#x4F53;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#xFF09; &#x7684;&#x9178;&#x78B1;&#x60AC;&#x6D6E;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x8BFE;&#x7A0B;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x65E9;&#x5728; 30 &#x53EF;&#x4EE5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x589E;&#x52A0;&#x52A0;&#x538B;&#x66B4;&#x9732;&#x540E;&#x7684; s&#x3002;MLCK &#x6BEB;&#x5347; 7 &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x963B;&#x6B62;&#x52A0;&#x538B;&#x7D20;&#x8BF1;&#x5BFC; MLC &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x5927;&#x5E45;&#x51CF;&#x5C11; [Arg8] &#x52A0;&#x538B;&#x7D20; (AVP)-&#x523A;&#x6FC0;&#x6C34;&#x6E17;&#x900F;&#x3002;AVP &#x8BF1;&#x5BFC; MLC &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x662F;&#x4E0E;&#x91CD;&#x6392;&#x7684;&#x5185;&#x9AD3;&#x96C6;&#x5408;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x539F;&#x4EE3;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E1D; (Alexa &#x6C1F; 568-phalloidin&#xFF09; &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x7531; MLCK MLC &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x8868;&#x793A; AVP &#x6FC0;&#x6D3B;&#x9499;/&#x9499;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5185;&#x9AD3;&#x96C6;&#x5408;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x70B9;&#x4E0B;&#x6E38;&#x5F71;&#x54CD;&#x975E;&#x808C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x4E8C;&#x52A0;&#x538B;&#x6C34;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x8C03;&#x8282;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x4E8C;&#x3001; &#x975E;&#x808C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8F7B;&#x94FE;&#x6FC0;&#x9176;&#x662F;&#x52A0;&#x538B;&#x7D20;&#x5728;&#x80BE;&#x96C6;&#x5408;&#x7BA1;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E0B;&#x6E38;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

We have previously demonstrated that vasopressin increases the water permeability of the inner medullary collecting duct (IMCD) by inducing trafficking of aquaporin-2 to the apical plasma membrane and that this response is dependent on intracellular calcium mobilization and calmodulin activation. Here, we address the hypothesis that this water permeability response is mediated in part through activation of the calcium/calmodulin-dependent myosin light chain kinase (MLCK) and regulation of non-muscle myosin II. Immunoblotting and immunocytochemistry demonstrated the presence of MLCK, the myosin regulatory light chain (MLC), and the IIA and IIB isoforms of the non-muscle myosin heavy chain in rat IMCD cells. Two-dimensional electrophoresis and matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry identified two isoforms of MLC, both of which also exist in phosphorylated and non-phosphorylated forms. 32P incubation of the inner medulla followed by autoradiography of two-dimensional gels demonstrated increased 32P labeling of both isoforms in response to the V2 receptor agonist [deamino-Cys1,D-Arg8]vasopressin (DDAVP). Time course studies of MLC phosphorylation in IMCD suspensions (using immunoblotting with anti-phospho-MLC antibodies) showed that the increase in phosphorylation could be detected as early as 30 s after exposure to vasopressin. The MLCK inhibitor ML-7 blocked the DDAVP-induced MLC phosphorylation and substantially reduced [Arg8]vasopressin (AVP)-stimulated water permeability. AVP-induced MLC phosphorylation was associated with a rearrangement of actin filaments (Alexa Fluor 568-phalloidin) in primary cultures of IMCD cells. These results demonstrate that MLC phosphorylation by MLCK represents a downstream effect of AVP-activated calcium/calmodulin signaling in IMCD cells and point to a role for non-muscle myosin II in regulation of water permeability by vasopressin.

Non-muscle myosin II and myosin light chain kinase are downstream targets for vasopressin signaling in the renal collecting duct.

Nous avons d&eacute;montr&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment que la vasopressine augmente la perm&eacute;abilit&eacute; de l&#39;eau de l&#39;int&eacute;rieur m&eacute;dullaire collecte de gaine (CCMI) en induisant la traite de l&#39;aquaporin-2 &agrave; la membrane plasmatique apicale et que cette r&eacute;action d&eacute;pend de l&#39;activation de la calmoduline et la mobilisation de calcium intracellulaire. Ici, nous abordons l&#39;hypoth&egrave;se que cette r&eacute;ponse de perm&eacute;abilit&eacute; de l&#39;eau est m&eacute;di&eacute;e en partie par le biais de l&#39;activation de la kinase des cha&icirc;nes l&eacute;g&egrave;res calcium/calmoduline-d&eacute;pendante de la myosine (MLCK) et r&egrave;glement de non musculaires la myosine II. Immunobuvardage et immunocytochimie ont d&eacute;montr&eacute; la pr&eacute;sence de la MLCK, la cha&icirc;ne l&eacute;g&egrave;re r&eacute;gulatrice de la myosine (MLC) et l&#39;IIA et IIB isoformes de la cha&icirc;ne lourde de la myosine non musculaire dans les cellules de rats CCMI. &Eacute;lectrophor&egrave;se bidimensionnelle et laser assist&eacute;e par matrice d&eacute;sorption ionisation spectrom&eacute;trie de masse &agrave; temps de vol identifi&eacute;e deux isoformes du MLC, qui existent aussi dans les formes phosphoryl&eacute;es et non-phosphoryl&eacute;s. Incubation 32P de la m&eacute;dullaire suivie par autoradiographie des gels bidimensionnels a d&eacute;montr&eacute; une augmentation 32P &eacute;tiquetage des deux isoformes en r&eacute;ponse &agrave; l&#39;agoniste des r&eacute;cepteurs V2 [d&eacute;samino-Cys1, D-Arg8] vasopressine (DDAVP). &Eacute;tudes cours temps de phosphorylation de la MLC dans les suspensions IMCD (&agrave; l&#39;aide d&#39;immunotransfert avec des anticorps anti-phospho-MLC) ont montr&eacute; que l&#39;augmentation de la phosphorylation pu d&eacute;tecter aussi t&ocirc;t que 30 s apr&egrave;s l&#39;exposition &agrave; la vasopressine. L&#39;inhibiteur de la MLCK ML-7 a bloqu&eacute; la phosphorylation de la MLC induite de DDAVP et consid&eacute;rablement r&eacute;duit [Arg8] vasopressine (AVP)-stimul&eacute;e par la perm&eacute;abilit&eacute; &agrave; l&#39;eau. La phosphorylation des CLM induite par l&#39;AVP a &eacute;t&eacute; associ&eacute;e &agrave; un r&eacute;arrangement des filaments d&#39;actine (Alexa Fluor 568-phallo&iuml;dine) dans des cultures primaires de cellules de la CCMI. Ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent que la phosphorylation des CLM par KCLM repr&eacute;sente un effet activ&eacute;s par l&#39;AVP calcium/calmoduline dans les cellules de la CCMI et point de signalisation en aval &agrave; un r&ocirc;le &agrave; jouer non musculaires la myosine II dans la r&eacute;gulation de la perm&eacute;abilit&eacute; &agrave; l&#39;eau par la vasopressine.

Non-muscle la myosine II et la kinase des cha&icirc;nes l&eacute;g&egrave;res de myosine sont des cibles en aval pour la vasopressine signalisation dans le tube collecteur r&eacute;nal.

Non-Myosin II und Myosin-Leichtketten-Kinase sind Downstream-Targets f&#xFC;r die Vasopressin-Signalisierung im renalen Sammelrohr.

Abbiamo precedentemente dimostrato che vasopressina aumenta la permeabilit&agrave; all&#39;acqua della parte interna midollare raccolta del condotto (IMCD) inducendo il traffico di acquaporina-2 per la membrana plasmatica apicale e che questa risposta dipende dalla attivazione di mobilitazione e calmodulina intracellulare calcio. Qui, ci rivolgiamo l&#39;ipotesi che questa risposta di permeabilit&agrave; all&#39;acqua &egrave; mediata in parte attraverso l&#39;attivazione della chinasi di catena leggera di calcio/calmodulina-dipendente della miosina (MLCK) e regolamento della miosina non-muscolare II. Immunoblotting e immunocitochimica hanno dimostrato la presenza di isoforme di IIA e IIB della catena pesante della miosina non-muscolare in cellule di topo IMCD MLCK e catena leggera regolamentare di miosina (MLC). L&#39;elettroforesi bidimensionale e matrix-assisted laser desorbimento ionizzazione in spettrometria di massa a tempo di volo identificata due isoforme di MLC, che esiste anche nella forma fosforilata e non fosforilato. Incubazione P 32 del midollo interno seguito da autoradiografia dei gel bidimensionali dimostrato maggiore 32 P etichettatura delle due isoforme in risposta per l&#39;agonista del recettore V2 [deamino-Cys1, D-Arg8] vasopressina (DDAVP). Studi corso tempo di fosforilazione MLC in sospensioni IMCD (mediante immunoblotting con anticorpi anti-fosfo-MLC) hanno mostrato che l&#39;aumento della fosforilazione potrebbe essere rilevato pi&ugrave; presto 30 s dopo l&#39;esposizione alla vasopressina. L&#39;inibitore MLCK ML-7 bloccato la fosforilazione indotta DDAVP MLC e sostanzialmente ridotta [Arg8] vasopressina (AVP)-stimolata la permeabilit&agrave; all&#39;acqua. Fosforilazione di MLC AVP-indotta &egrave; stata associata con un riarrangiamento dei filamenti di actina (Alexa Fluor 568-phalloidin) in colture primarie di cellule IMCD. Questi risultati dimostrano che la fosforilazione di MLC da MLCK rappresenta un effetto a valle di calcio/calmodulina AVP-attivato in cellule IMCD e punto di segnalazione a un ruolo per la non-muscolare miosina II nella regolazione della permeabilit&agrave; all&#39;acqua di vasopressina.

Non-muscolare miosina II e chinasi della catena leggera della miosina sono i bersagli a valle per la vasopressina segnalazione nel dotto raccolta renale.

&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x305D;&#x306E;&#x30D0;&#x30BD;&#x30D7;&#x30EC;&#x30B7;&#x30F3;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x53CE;&#x96C6;&#x30C0;&#x30AF;&#x30C8;&#x306F; (&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;) &#x30A2;&#x30AF;&#x30A2;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;-2 &#x9802;&#x90E8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x54E1;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x6C34;&#x306E;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x6C34;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;/&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8EFD;&#x9396;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (&#x8EFD;) &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x975E;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; II &#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x6CD5;&#x306E;&#x8A66;&#x307F;&#x3068;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8EFD;&#x3001;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x8EFD;&#x9396; (MLC) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x975E;&#x7B4B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x91CD;&#x9396;&#x306E; IIA&#x3001;IIB &#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x306E;&#x3082;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30FB;&#x975E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3067;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5316;&#x98DB;&#x884C;&#x6642;&#x9593;&#x578B;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8B58;&#x5225; gad65 MLC &#x306F; 2&#x6B21;&#x5143;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x652F;&#x63F4;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x8131;&#x96E2;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2&#x6B21;&#x5143;&#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B8;&#x30AA;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x5185;&#x5074;&#x5EF6;&#x9AC4;&#x306E; 32 P &#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x5897;&#x52A0; 32 P &#x304C; V2 &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8; [D Arg8 deamino Cys1] &#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D0;&#x30BD;&#x30D7;&#x30EC;&#x30B7;&#x30F3; (DDAVP)&#x3002;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x7814;&#x7A76; (&#x6297;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; MLC &#x6297;&#x4F53;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;) &#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x61F8;&#x6FC1;&#x6DB2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; MLC &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3067;&#x304D;&#x308B; 30 &#x65E9;&#x3051;&#x308C;&#x3070; s &#x30D0;&#x30BD;&#x30D7;&#x30EC;&#x30B7;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x3002;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8EFD;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; ML 7 DDAVP &#x8A98;&#x8D77; MLC &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6E1B;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F; [Arg8] &#x30D0;&#x30BE;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B7;&#x30F3; (AVP) &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;-&#x6C34;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306B;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AVP MLC &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7E4A;&#x7DAD; (Alexa &#x30D5;&#x30EB;&#x30A2;&#x30FC; 568 &#x982D;&#x9802;) &#x306E;&#x8EE2;&#x4F4D;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;MLC &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8EFD; AVP &#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;/&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30C7;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x975E;&#x7B4B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; II &#x30D0;&#x30BD;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6C34;&#x306E;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#x975E;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; II &#x3068;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8EFD;&#x9396;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x814E;&#x96C6;&#x5408;&#x7BA1;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D0;&#x30BD;&#x30D7;&#x30EC;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC18C; &#xD504;&#xB808; &#xC2E0; &#xC548;&#xCABD; &#xD600;&#xB05D; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; aquaporin-2&#xC758; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558; &#xC5EC; (IMCD)&#xC744; &#xB355;&#xD2B8; &#xC218;&#xC9D1; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0;&#xC774; &#xC751;&#xB2F5; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xB3D9;&#xC6D0;&#xACFC; calmodulin &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xACE8; &#xC218;&#xC758; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00; &#xC99D;&#xBA85; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xC751;&#xB2F5; &#xCE7C;&#xC298;/calmodulin &#xC885;&#xC18D; myosin &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (MLCK)&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; &#xBE44; &#xADFC;&#xC721; myosin II&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC7AC; &#xAC00;&#xC124; &#xC8FC;&#xC18C;. Immunoblotting &#xBC0F; immunocytochemistry MLCK, myosin &#xADDC;&#xC81C; &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778; (MLC), &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBE44; &#xADFC;&#xC721; myosin &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; &#xCCB4;&#xC778; &#xC950; IMCD &#xC140;&#xC758; IIA &#xBC0F; IIB isoforms&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; &#xBC0F; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xC870; &#xB808;&#xC774;&#xC800; desorption &#xC774;&#xC628;&#xD654; &#xBE44;&#xD589; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xB450; isoforms MLC&#xC758; &#xB610;&#xD55C; phosphorylated &#xBC0F; &#xBE44; phosphorylated &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. 32 P &#xBD80; &#xD654; &#xB4A4; 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC824;&#xC758; autoradiography &#xD558; &#xC5EC; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBAA8; &#xC218;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; 32 P &#xB77C;&#xBCA8; &#xB450; isoforms V2 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; [deamino-Cys1, D-Arg8]&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xBC14;&#xC18C; &#xD504;&#xB808; &#xC2E0; (DDAVP). IMCD &#xC815;&#xC9C0; (&#xC548;&#xD2F0; &#xC778; MLC &#xD56D; &#xCCB4; immunoblotting &#xC0AC;&#xC6A9;)&#xC5D0;&#xC11C; MLC &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACFC;&#xC815; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC99D;&#xAC00; 30 &#xC77C;&#xCC0D; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; &#xBC14;&#xC18C; &#xD504;&#xB808; &#xC2E0;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xD6C4; s. MLCK &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; ML-7 &#xCC28;&#xB2E8; DDAVP&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; MLC &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC640; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; [Arg8] &#xBC14;&#xC18C; &#xD504;&#xB808; &#xC2E0; (AVP)-&#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC744; &#xC790;&#xADF9;. MLC &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; AVP &#xC720;&#xB3C4; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; IMCD &#xC140;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; (&#xC54C; &#xB809; &#xC0AC; &#xD615; &#xC11D; 568-phalloidin)&#xC758; &#xC7AC;&#xBC30;&#xCE58;&#xC640; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; MLCK&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; MLC AVP &#xD65C;&#xC131; &#xCE7C;&#xC298;/calmodulin IMCD &#xC140; &#xBC0F; &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC785;&#xC99D; &#xBE44; &#xADFC;&#xC721; myosin II &#xBC14;&#xC18C; &#xD504;&#xB808; &#xC2E0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBE44; &#xADFC;&#xC721; myosin II&#xC640; myosin &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778; &#xD0A4; &#xBC14;&#xC18C; &#xD504;&#xB808; &#xC2E0; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC218;&#xC9D1; &#xB355;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Hemos demostrado previamente que vasopresina aumenta la permeabilidad de agua de interior medular recogida del conducto (IMCD) induciendo trata de Acuaporina-2 a la membrana plasm&aacute;tica apical y que esta respuesta depende de la activaci&oacute;n de movilizaci&oacute;n y calmodulina calcio intracelular. Aqu&iacute;, nos dirigimos a la hip&oacute;tesis de que esta respuesta de permeabilidad de agua est&aacute; mediada en parte a trav&eacute;s de la activaci&oacute;n de la quinasa de cadena ligera de miosina dependiente de Calcio/calmodulina (MLCK) y regulaci&oacute;n de la miosina no muscular II. Immunoblotting e immunocytochemistry demostraron la presencia de MLCK, el regulador miosina (MLC) y las isoformas IIA y IIB de la cadena pesada de la miosina no muscular en c&eacute;lulas de rata IMCD. Electroforesis bidimensional y l&aacute;ser asistida por matriz desorci&oacute;n ionizaci&oacute;n espectrometr&iacute;a de masas de tiempo de vuelo identificada dos isoformas de MLC, que tambi&eacute;n existen en formas fosforiladas y no fosforilada. Incubaci&oacute;n de 32 P de la m&eacute;dula interna seguida por autorradiograf&iacute;a de geles bidimensionales demostr&oacute; mayor 32P etiquetado de ambas isoformas ante el agonista del receptor V2 [deamino-Cys1, D-arg7arg8] vasopresina (DDAVP). Tiempo curso estudios de fosforilaci&oacute;n de MLC en suspensiones IMCD (mediante immunoblotting con anticuerpos anti-phospho-MLC) demostraron que el aumento en la fosforilaci&oacute;n podr&iacute;a ser detectado tan pronto como 30 s despu&eacute;s de la exposici&oacute;n a la vasopresina. El inhibidor MLCK ML-7 bloquea la fosforilaci&oacute;n de MLC DDAVP-inducida y sustancialmente reducido [arg7arg8] vasopresina (AVP)-estimula la permeabilidad de agua. Fosforilaci&oacute;n de MLC AVP-inducida se asoci&oacute; con un cambio de filamentos de actina (Alexa Fluor 568-Faloidina) en cultivos primarios de c&eacute;lulas IMCD. Estos resultados demuestran que la fosforilaci&oacute;n de la MLC por MLCK representa un efecto aguas abajo de AVP-activado Calcio/calmodulina se&ntilde;alizaci&oacute;n en c&eacute;lulas IMCD y punto a un papel para no-m&uacute;sculo miosina II en regulaci&oacute;n de la permeabilidad de la vasopresina.

No-m&uacute;sculo miosina II y la quinasa de cadena ligera de miosina son blancos abajo para vasopresina se&ntilde;alizaci&oacute;n en el conducto que recoge renal.

&#x5728;&#x8FFD;&#x6C42;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x53CA;&#x5176;&#x57FA;&#x7840;&#x5E95;&#x7269;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x751F;&#x547D;&#x79D1;&#x5B66;&#x5F00;&#x59CB;&#x7EB3;&#x5165;&#x5FAE;&#x548C;&#x7EB3;&#x7C73;&#x6280;&#x672F;&#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x6765;&#x63A2;&#x6D4B;&#x548C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5DE5;&#x5177;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x9884;&#x793A;&#x7740;&#x65E0;&#x5C3D;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x662F;&#x4EBA;&#x4F53;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x57FA;&#x7840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5176;&#x5468;&#x56F4;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x5173;&#x7CFB;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x8BA8;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x548C;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5982;&#x4F55;&#x54CD;&#x5E94;&#x5728;&#x5176;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x4E86;&#x60AC;&#x800C;&#x672A;&#x51B3;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x53EF;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x9610;&#x660E;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x548C;&#x652F;&#x914D;&#x5176;&#x7269;&#x7406;&#x652F;&#x67B6;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x529B;&#x91CF;&#x52A0;&#x4EE5;&#x89E3;&#x51B3;&#x3002;

&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7EB3;&#x7C73;&#x6280;&#x672F;&#x3002;

In the pursuit to understand the interaction between cells and their underlying substrates, the life sciences are beginning to incorporate micro- and nanotechnology-based tools to probe and measure cells. The development of these tools portends endless possibilities for new insights into the fundamental relationships between cells and their surrounding microenvironment that underlie the physiology of human tissue. Here, we review techniques and tools that have been used to study how a cell responds to the physical factors in its environment. We also discuss unanswered questions that could be addressed by these approaches to better elucidate the molecular processes and mechanical forces that dominate the interactions between cells and their physical scaffolds.

Nanotechnology for cell-substrate interactions.

Dans la poursuite de comprendre l&#x26;#39;interaction entre les cellules et leurs substrats sous-jacents, les sciences de la vie commencent &#xE0; int&#xE9;grer des outils de micro-et nanotechnologies &#xE0; base de cellules de la sonde et la mesure. Le d&#xE9;veloppement de ces outils laisse pr&#xE9;sager des possibilit&#xE9;s infinies pour de nouveaux aper&#xE7;us sur les relations fondamentales entre les cellules et leur microenvironnement entourant qui sous-tendent la physiologie des tissus humains. Ici, nous passons en revue les techniques et les outils qui ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;es pour &#xE9;tudier comment une cellule r&#xE9;pond &#xE0; des facteurs physiques de son environnement. Nous discutons aussi de questions sans r&#xE9;ponse qui pourraient &#xEA;tre abord&#xE9;s par ces approches afin de mieux &#xE9;lucider les m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires et les forces m&#xE9;caniques qui dominent les interactions entre les cellules et leurs &#xE9;chafaudages physiques.

La nanotechnologie pour les cellules-substrat Interactions

In der Verfolgung, die Interaktion zwischen Zellen und deren zugrunde liegenden Substrate zu verstehen beginnen die Biowissenschaften, Mikro- und Nanotechnologie-basierte Tools zum pr&uuml;fen und Messen von Zellen zu integrieren. Die Entwicklung dieser Werkzeuge ma&szlig;voll unendlich viele M&ouml;glichkeiten f&uuml;r neue Einblicke in die grundlegenden Beziehungen zwischen Zellen und ihrer Umgebung Untersuchungsverfahren, die die Physiologie des menschlichen Gewebes zugrunde liegen. Hier &uuml;berpr&uuml;fen wir Techniken und Tools, die Opferzahlen zu studieren, wie eine Zelle auf physikalischen Faktoren in seiner Umgebung reagiert. Wir diskutieren auch offene Fragen, die behandelt werden k&ouml;nnen, durch diese Ans&auml;tze f&uuml;r besser zu erhellen, die molekularen Prozesse und mechanische Kr&auml;fte, die die Interaktionen zwischen Zellen und ihrer physischen Scaffolds dominieren.

Nanotechnologie f&uuml;r Zelle-Substrat Interaktionen.

Nel perseguimento di capire l&#39;interazione tra le cellule e i loro substrati sottostanti, le scienze della vita stanno cominciando ad incorporare strumenti basati su micro e nanotecnologie per sonda e misurare le cellule. Lo sviluppo di questi strumenti preannuncia infinite possibilit&agrave; per nuove intuizioni le relazioni fondamentali tra le cellule e loro microambiente circostante che sottendono la fisiologia dei tessuti umani. Qui, si rassegna di tecniche e strumenti che sono stati usati per studiare come una cellula risponde ai fattori fisici nel suo ambiente. Discutiamo anche di domande senza risposta che potrebbero essere affrontate da questi approcci per meglio chiarire i processi molecolari e forze meccaniche che dominano le interazioni tra cellule e il loro fisici ponteggi.

Nanotecnologia per le interazioni cellula-substrato.

&#x8FFD;&#x6C42;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x57FA;&#x677F;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x751F;&#x547D;&#x79D1;&#x5B66;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3068;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30CA;&#x30CE;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CE;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x3080;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x59CB;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7121;&#x9650;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x524D;&#x5146;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x305D;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x5185;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x8981;&#x56E0;&#x306B;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x3068;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x5206;&#x5B50;&#x904E;&#x7A0B;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x8DB3;&#x5834;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x529B;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;&#x672A;&#x56DE;&#x7B54;&#x306E;&#x8CEA;&#x554F;&#x3092;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE; - &#x57FA;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30CA;&#x30CE;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CE;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;

&#xC140;&#xACFC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xAE30;&#xD310; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xCD94;&#xAD6C;, &#xC0DD;&#xBA85; &#xACFC;&#xD559; &#xD1B5;&#xD569; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xBC0F; &#xB098;&#xB178;&#xAE30;&#xC220; &#xAE30;&#xBC18; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD558; &#xACE0; &#xC140;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xC2DC;&#xC791; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; portends &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559; &#xAE30;&#xBC18;&#xC774; &#xB418;&#xB294; &#xC140;&#xACFC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC8FC;&#xBCC0; microenvironment &#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xAD00;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBB34;&#xD55C; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC80;&#xD1A0; &#xAE30;&#xC220; &#xBC0F; &#xC140; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC694;&#xC778;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xB3C4;&#xAD6C;. &#xB610;&#xD55C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC811;&#xADFC; &#xB354; &#xBA85;&#xB8CC; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD84;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC640; &#xC140;&#xACFC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC2E4;&#xC81C; &#xAC74;&#xC124; &#xAE30;&#xACC4; &#xC784;&#xB300; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC9C0;&#xBC30; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xD798;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD574;&#xACB0; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBB38;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574;&#xC11C; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBD05;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD734;&#xB300;&#xD3F0; &#xAE30;&#xD310; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB098;&#xB178;&#xAE30;&#xC220;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En la b&#xFA;squeda para entender la interacci&#xF3;n entre las c&#xE9;lulas y sus sustratos subyacentes, las ciencias de la vida est&#xE1;n empezando a incorporar herramientas de micro-y basada en la nanotecnolog&#xED;a a las c&#xE9;lulas de la sonda y la medida. El desarrollo de estas herramientas augura un sinf&#xED;n de posibilidades para nuevas ideas sobre las relaciones fundamentales entre las c&#xE9;lulas y su microambiente que rodea que son la base de la fisiolog&#xED;a de los tejidos humanos. Aqu&#xED;, se revisan las t&#xE9;cnicas y herramientas que se han utilizado para estudiar c&#xF3;mo una c&#xE9;lula responde a los factores f&#xED;sicos en su entorno. Tambi&#xE9;n se discuten las preguntas sin respuesta que podr&#xED;an ser abordadas por estos m&#xE9;todos para dilucidar mejor los procesos moleculares y las fuerzas mec&#xE1;nicas que dominan las interacciones entre las c&#xE9;lulas y sus andamios f&#xED;sicas.

Nanotecnolog&#xED;a para las interacciones c&#xE9;lula-sustrato

&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2; (&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF09; &#x8840;&#x6E05;&#x578B; 2 &#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x8863;&#x58F3;&#x4E00;&#x76F4;&#x5728;&#x53C2;&#x4E0E;&#x809D;&#x810F;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x8840;&#x53CB;&#x75C5; B.&#x4EBA;&#x7C7B;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x82E5;&#x8981;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8C03;&#x67E5;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6BD2;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E4B;&#x540E;&#x5411;&#x91CF;&#x808C;&#x5185;&#x6CE8;&#x5C04;&#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x975E;&#x4EBA;&#x7075;&#x957F;&#x7C7B;&#x52A8;&#x7269;&#x8BA1;&#x7B97;&#x5BF9;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2; capsids &#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x6709;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E; AAV2 &#x548C; variant &#x7C7B;&#x578B;&#x548C;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53; capsids &#x88AB;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x3002;&#x4ECE;&#x5176;&#x4ED6;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2; clades AAV8 &#x5982;&#x5411;&#x91CF; &#xFF08;&#x6CE8;&#x91CA; 3&#xFF09;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7279;&#x5B9A;&#x8863;&#x58F3;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x4EE3;&#x6742;&#x4EA4;&#x79CD; AAV2 AAV8 &#x548C;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x521B;&#x9020;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6620;&#x5C04;&#x57DF;&#x6307;&#x793A; RXXR &#x6BCD;&#x9898;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684; VP3&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x793A;&#xFF0C;&#x8D4B;&#x4E88;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4E59;&#x9170;&#x809D;&#x7D20;&#x786B;&#x9178;&#x591A;&#x7CD6; (&#x4E59;&#x9170;) &#x75C5;&#x6BD2;&#x4F53;&#x3002;&#x81EA;&#x7136;&#x548C;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x53D8;&#x79CD;&#x7684;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x663E;&#x793A;&#x6210;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (Dc) &#x548C;&#x8863;&#x58F3;&#x7279;&#x5B9A; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x809D;&#x7D20;&#x7ED3;&#x5408;&#x3001; &#x5438;&#x6536;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x3002;&#x809D;&#x7D20;&#x4E2D;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; CD8(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x6709;&#x7528;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x548C;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x5B89;&#x5168;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x7684;&#x73B0;&#x6709;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

&#x809D;&#x7D20;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6307;&#x793A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2; 2 &#x578B;&#x8863;&#x58F3;&#x3002;

Activation of T cells to the capsid of adeno-associated virus (AAV) serotype 2 vectors has been implicated in liver toxicity in a recent human gene therapy trial of hemophilia B. To further investigate this kind of toxicity, we evaluated T-cell responses to AAV capsids after intramuscular injection of vectors into mice and nonhuman primates. High levels of T cells specific to capsids of vectors based on AAV2 and a phylogenetically related AAV variant were detected. Vectors from other AAV clades such as AAV8 (ref. 3), however, did not lead to activation of capsid-specific T cells. Through the generation of AAV2-AAV8 hybrids and the creation of site-directed mutations, we mapped the domain that directs the activation of T cells to the RXXR motif on VP3, which was previously shown to confer binding of the virion to heparan sulfate proteoglycan (HSPG). Evaluation of natural and engineered AAV variants showed direct correlations between heparin binding, uptake into human dendritic cells (DCs) and activation of capsid-specific T cells. The role of heparin binding in the activation of CD8(+) T cells may be useful in modulating the immunogenicity of antigens and improving the safety profile of existing AAV vectors for gene therapy.

Heparin binding directs activation of T cells against adeno-associated virus serotype 2 capsid.

L&#x26;#39;activation des cellules T &#xE0; la capside du virus ad&#xE9;no-associ&#xE9; (AAV) de s&#xE9;rotype 2 vecteurs a &#xE9;t&#xE9; impliqu&#xE9;e dans la toxicit&#xE9; h&#xE9;patique dans un essai r&#xE9;cent g&#xE8;ne humain th&#xE9;rapeutique de l&#x26;#39;h&#xE9;mophilie B. Pour approfondir ce genre de toxicit&#xE9;, nous avons &#xE9;valu&#xE9; les r&#xE9;ponses des cellules T-&#xE0; capsides AAV apr&#xE8;s l&#x26;#39;injection intramusculaire de vecteurs &#xE0; des souris et des primates non humains. Des niveaux &#xE9;lev&#xE9;s de cellules T sp&#xE9;cifiques de capsides de vecteurs bas&#xE9;s sur AAV2 et une variante apparent&#xE9; phylog&#xE9;n&#xE9;tiquement AAV ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9;s. Vecteurs de clades AAV autres comme AAV8 (r&#xE9;f. 3), cependant, n&#x26;#39;a pas conduit &#xE0; l&#x26;#39;activation des cellules T sp&#xE9;cifiques de capside. Gr&#xE2;ce &#xE0; la g&#xE9;n&#xE9;ration de AAV2-AAV8 hybrides et la cr&#xE9;ation de sites mutations dirig&#xE9;es, nous avons cartographi&#xE9; le domaine qui dirige l&#x26;#39;activation des cellules T au motif RXXR sur VP3, qui a &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment montr&#xE9; pour conf&#xE9;rer liaison du virion &#xE0; l&#x26;#39;h&#xE9;parane sulfate prot&#xE9;oglycanes ( HSPG). Evaluation des variantes AAV naturelles et artificielles ont montr&#xE9; des corr&#xE9;lations directes entre liaison &#xE0; l&#x26;#39;h&#xE9;parine, l&#x26;#39;absorption dans les cellules dendritiques humaines (DCs) et l&#x26;#39;activation des cellules T sp&#xE9;cifiques de capside. Le r&#xF4;le de liaison &#xE0; l&#x26;#39;h&#xE9;parine dans l&#x26;#39;activation des CD8 (+) des cellules T peut &#xEA;tre utile dans la modulation de l&#x26;#39;immunog&#xE9;nicit&#xE9; des antig&#xE8;nes et d&#x26;#39;am&#xE9;liorer le profil d&#x26;#39;innocuit&#xE9; des vecteurs AAV existants pour la th&#xE9;rapie g&#xE9;nique.

Liaison &#xE0; l&#x26;#39;h&#xE9;parine Diriger activation des lymphocytes T contre les virus ad&#xE9;no-associ&#xE9; s&#xE9;rotype 2 capside

Aktivierung der T-Zellen um das Kapsid Adeno-assoziierte Virus (AAV) Serotyp 2 Vektoren hat verwickelt war in Lebertoxizit&auml;t in einer neuen menschlichen gen-Therapie-Studie der H&auml;mophilie B. Um diese Art von Toxizit&auml;t weiter zu untersuchen, werteten wir T-Zell-Antworten zu AAV Capsids nach intramuskul&auml;rer Injektion von Vektoren in M&auml;usen und nicht-menschlichen Primaten. Hohes Ma&szlig; an T-Zellen spezifisch f&uuml;r Capsids von Vektoren, die auf der Grundlage von AAV2 und eine phylogenetisch Verwandte AAV-Variante gefunden. Vektoren von anderen AAV Kladen wie AAV8 (Ref. 3), jedoch f&uuml;hrten nicht zur Aktivierung von Kapsid-spezifische T-Zellen. Durch die Generierung von AAV2-AAV8-Hybriden und die Schaffung von Site-verwiesene Mutationen zugeordnet wir die Dom&auml;ne, die die Aktivierung von T-Zellen auf das RXXR-Motiv auf VP3, die zuvor gezeigt wurde leitet, Bindung von Virion zu Heparan Sulfat Proteoglycans (HSPG) zu &uuml;bertragen. Bewertung des nat&uuml;rlichen und technischen AAV-Varianten zeigte direkte Korrelationen zwischen Heparin-Binding, Aufnahme in menschlichen dendritischen Zellen (DCs) und Aktivierung von Kapsid-spezifische T-Zellen. Die Rolle der Heparin-Bindung in der Aktivierung der CD8(+) T-Zellen n&uuml;tzlich bei der Modulierung der Immunogenit&auml;t von Antigenen und Verbesserung das Sicherheitsprofil von vorhandenen AAV-Vektoren f&uuml;r die Gentherapie.

Heparin-Bindung weist Aktivierung der T-Zellen gegen Adeno-assoziierte Virus Serotyp 2 Kapsid.

Attivazione delle cellule T per le proteine del capside di vettori di virus adeno-associati (AAV) sierotipo 2 &egrave; stato implicato nella tossicit&agrave; del fegato in un recente trial di terapia di gene umano di emofilia B. Per indagare ulteriormente questo tipo di tossicit&agrave;, abbiamo valutato le risposte delle cellule T a capsidi AAV dopo iniezione intramuscolare di vettori in topi e primati. Sono stati rilevati alti livelli di cellule T specifiche per capsidi di vettori basati su AAV2 e una variante AAV filogeneticamente correlata. Vettori da altri cladi AAV come AAV8 (Rif. 3), tuttavia, non ha portato all&#39;attivazione di cellule T specifiche del capside. Attraverso la generazione di ibridi AAV2-AAV8 e la creazione di mutazioni sito-diretto, abbiamo mappato il dominio che indirizza l&#39;attivazione delle cellule T per il motivo RXXR su VP3, che precedentemente &egrave; stato indicato a conferire il legame del virione di eparan solfato proteoglicano (HSPG). Valutazione delle varianti AAV naturali e ingegneria ha mostrato dirette correlazioni tra associazione eparina, assorbimento nelle cellule dendritiche (DCs) e l&#39;attivazione di cellule T specifiche del capside. Il ruolo dell&#39;associazione di eparina nell&#39;attivazione delle cellule T cellule pu&ograve; essere utile in modulando l&#39;immunogenicit&agrave; degli antigeni e miglioramento del profilo di sicurezza esistenti vettori di AAV per la terapia genica.

Associazione eparina indirizza l&#39;attivazione delle cellule T contro il capside del sierotipo 2 virus adeno-associati.

&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x968F;&#x4F34;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;AAV&#xFF09;&#x8840;&#x6E05;&#x578B;2&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x3078;&#x306E;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x7A2E;&#x306E;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8840;&#x53CB;&#x75C5;B&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x809D;&#x6BD2;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x30D2;&#x30C8;&#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x970A;&#x9577;&#x985E;&#x3078;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x5185;&#x6CE8;&#x5C04;&#x5F8C;&#x306E;AAV&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x3002; AAV2&#x3068;&#x7CFB;&#x7D71;&#x767A;&#x751F;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x305F;AAV&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x306B;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;AAV8&#xFF08;&#x6587;&#x732E;3&#xFF09;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;AAV&#x30AF;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x304B;&#x3089;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x7279;&#x7570;&#x7684;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x306F;&#x81F3;&#x3089;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; AAV2-AAV8&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;&#x3068;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x5275;&#x9020;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x30D8;&#x30D1;&#x30E9;&#x30F3;&#x786B;&#x9178;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30B0;&#x30EA;&#x30AB;&#x30F3;&#xFF08;&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;VP3&#x306B;RXXR&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;HSPG&#xFF09;&#x3002;&#x81EA;&#x7136;&#x3068;&#x4EBA;&#x5DE5;AAV&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306F;&#x3001;&#x30D8;&#x30D1;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;DC&#xFF09;&#x3078;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3068;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x7279;&#x7570;&#x7684;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x95A2;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; CD8&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D8;&#x30D1;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;AAV&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5B89;&#x5168;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D8;&#x30D1;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x968F;&#x4F34;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8840;&#x6E05;2&#x578B;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x6307;&#x793A;

Adeno &#xC81C;&#xD734;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (AAV) serotype 2 &#xBCA1;&#xD130; capsid&#xC5D0; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; 2. &#xD608;&#xC6B0;&#xBCD1;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xAC04; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4; &#xB3C5;&#xC131;&#xC758;&#xC774; &#xC885;&#xB958;&#xB97C; &#xCD94;&#xAC00; &#xC870;&#xC0AC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC0F; nonhuman &#xC601;&#xC7A5;&#xB958;&#xC5D0; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xADFC;&#xC721; &#xC8FC;&#xC0AC; &#xD6C4; AAV capsids T&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. T &#xC140; capsids AAV2 &#xBC0F; phylogenetically &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; AAV &#xBCC0;&#xC885;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; AAV8 &#xB4F1; &#xB2E4;&#xB978; AAV clades&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCA1;&#xD130; (&#xCC38;&#xACE0; 3) capsid &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xB9AC;&#xB4DC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. AAV2 AAV8 &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xC0DD;&#xC131;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC10;&#xB3C5; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xCC3D;&#xC870;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; virion heparan &#xD669;&#xC0B0; proteoglycan (HSPG)&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD80;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC92C;&#xB358; vp3&#xC5D0; RXXR &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB9E4;&#xD551;. &#xC790;&#xC5F0;&#xACFC; &#xC870;&#xC791; AAV &#xBCC0;&#xC885;&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00; &#xC778;&#xAC04; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DCs)&#xACFC; capsid &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB85C; &#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;, &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. CD8(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xD56D; &#xC6D0; immunogenicity &#xBCC0;&#xC870; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xC874; AAV &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xC548;&#xC804;&#xC131; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC720;&#xC6A9; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; serotype 2 capsid adeno &#xC81C;&#xD734;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300;&#xD558;&#xC5EC; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC2DC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La activaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T para la c&#xE1;psida del virus adeno-asociado (AAV) serotipo 2 vectores ha sido implicado en la toxicidad hep&#xE1;tica en un reciente ensayo en humanos terapia g&#xE9;nica de la hemofilia B. Para investigar m&#xE1;s a este tipo de toxicidad, se evaluaron respuestas de c&#xE9;lulas T a AAV c&#xE1;psides despu&#xE9;s de la inyecci&#xF3;n intramuscular de los vectores en ratones y primates no humanos. Los altos niveles de c&#xE9;lulas T espec&#xED;ficas para c&#xE1;psidas de vectores basados &#x200B;&#x200B;en AAV2 y una variante de AAV filogen&#xE9;ticamente relacionados se detectaron. Vectores de clados AAV otros tales como AAV8 (ref. 3), sin embargo, no dio lugar a la activaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T espec&#xED;ficas de la c&#xE1;pside. A trav&#xE9;s de la generaci&#xF3;n de AAV2-AAV8 h&#xED;bridos y la creaci&#xF3;n de sitios dirigidos por mutaciones, que asigna el dominio que dirige la activaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T con el motivo de RXXR VP3, que se hab&#xED;a demostrado que confiere la uni&#xF3;n del viri&#xF3;n al hepar&#xE1;n sulfato proteoglicanos ( HSPG). Evaluaci&#xF3;n de las variantes de AAV naturales y artificiales mostraron correlaciones directas entre uni&#xF3;n a la heparina, la captaci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas humanas (DC) y la activaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T espec&#xED;ficas de la c&#xE1;pside. El papel de la uni&#xF3;n a la heparina en la activaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas CD8 (+) las c&#xE9;lulas T pueden ser &#xFA;tiles en la modulaci&#xF3;n de la inmunogenicidad de los ant&#xED;genos y mejorar el perfil de seguridad de los actuales vectores AAV para la terapia g&#xE9;nica.

Uni&#xF3;n a la heparina Dirige activaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T contra el virus adeno-asociado serotipo 2 c&#xE1;pside

&#x7EC6;&#x80DE;&#x6781;&#x6027;&#x7531;&#x65E0;&#x6570;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x7684;&#x7EBF;&#x7D22;&#xFF0C;&#x7CBE;&#x5FC3;&#x7B56;&#x5212;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6307;&#x5BFC;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x3001; &#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x548C;&#x521B;&#x9762;&#x6108;&#x5408;&#x7B49;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x7684;&#x64E6;&#x4F24;&#x4F24;&#x53E3;&#x5316;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x4F24;&#x53E3;&#x8FB9;&#x7F18;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E1C;&#x65B9;&#x5176;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x5B9E;&#x73B0;&#x7684;&#x4F24;&#x53E3;&#xFF0C;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8513;&#x5EF6;&#x5230;&#x4F24;&#x53E3;&#x7684;&#x65B0;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x7C98;&#x8FDE;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x522E;&#x53D7;&#x4F24;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x5BF9;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x79BB;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63A5;&#x89E6;&#x6CA1;&#x6709;&#x5206;&#x5316;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x6027;&#x7684;&#x5355;&#x5C42;&#x4E2D;&#x65AD;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x8FDE;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x4E24;&#x6781;&#x5316;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528; micropatterned &#x57FA;&#x677F;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x5E08;&#x80BE;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63A5;&#x89E6;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4F4D;&#x79FB;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x5B9E;&#x73B0;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x4E5F;&#x5F15;&#x8D77; centrosomal &#x8C03;&#x6574;&#x548C; lamellipodial &#x5230;&#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#x7684;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x4FA7;&#x8936;&#x8FB9;&#x3002;&#x4ECE; micropatterned &#x7EA6;&#x675F;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x540E;, &#x7EC6;&#x80DE;&#x5C55;&#x51FA;&#x4ECE;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x63A5;&#x89E6;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;&#x6270;&#x4E71; E-&#x9499;&#x7C98;&#x86CB;&#x767D;&#x53C2;&#x4E0E;&#x968F;&#x673A;&#x6838;&#x7ACB;&#x573A;&#x548C; lamellipodial &#x6D17;&#x724C;&#x4E2D;&#x56FE;&#x6848;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5E9F;&#x9664;&#x522E;&#x521B;&#x4F24;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x65B9;&#x5411;&#x8C03;&#x6574;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x8FC1;&#x79FB;&#x901F;&#x7387;&#x3002;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63A5;&#x89E6;&#x7684;&#x6781;&#x6027;&#x6240;&#x9700;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x9AA8;&#x67B6;&#x548C; Cdc42 &#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; RhoA &#x6216; Rac &#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x5C55;&#x793A;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x4E24;&#x6781;&#x5206;&#x5316;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x5F71;&#x54CD;&#x4F24;&#x53E3;&#x6108;&#x5408;&#x548C;&#x53D1;&#x5C55;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

&#x7531;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x901A;&#x8FC7; E-&#x9499;&#x9ECF;&#x9644;&#x89E6;&#x53D1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6781;&#x6027;&#x3002;

Cell polarity is orchestrated by numerous extracellular cues, and guides events such as chemotaxis, mitosis and wound healing. In scrape-wound assays of cell monolayers, wound-edge cells orient their centrosomes towards the wound, a process that appears to depend on the formation of new cell-extracellular-matrix adhesions as cells spread into the wound. In direct contrast to scrape-wounded cells, isolated cells without cell-cell contacts failed to polarize, suggesting that asymmetry of cell-cell adhesions resulting from monolayer disruption might contribute to polarization. By using micropatterned substrates to engineer such asymmetries in kidney epithelial cells, we found that cell-cell contact induced displacement of the nucleus towards the contact, and also caused centrosomal reorientation and lamellipodial ruffling to the distal side of the nucleus. Upon release from micropatterned constraints, cells exhibited directed migration away from the cell-cell contact. Disrupting E-cadherin engagement randomized nuclear position and lamellipodial ruffling in patterned cultures, and abrogated scrape-wound-induced cell reorientation, but not migration rate. Polarity that was induced by cell-cell contact required an intact actin cytoskeleton and Cdc42 activity, but not RhoA or Rac signaling. Together, these findings demonstrate a novel role for cell-cell adhesion in polarization, and have implications for wound healing and developmental patterning.

Cell polarity triggered by cell-cell adhesion via E-cadherin.

La polarit&#xE9; cellulaire est orchestr&#xE9;e par de nombreux signaux extracellulaires, et les &#xE9;v&#xE9;nements tels que des guides chimiotactisme, la mitose et de la cicatrisation des plaies. En gratter la plaie-dosages de monocouches de cellules, les plaies de pointe orienter leurs cellules centrosomes vers la plaie, un processus qui semble d&#xE9;pendre de la formation de nouvelles cellules-matrice extracellulaire-adh&#xE9;rences que les cellules r&#xE9;parties dans la plaie. En contraste direct &#xE0; gratter bless&#xE9;s cellules, des cellules isol&#xE9;es, sans contacts cellule-cellule a &#xE9;chou&#xE9; &#xE0; se polariser, ce qui sugg&#xE8;re que l&#x26;#39;asym&#xE9;trie de la cellule-cellule adh&#xE9;rences r&#xE9;sultant de la perturbation monocouche pourrait contribuer &#xE0; la polarisation. En utilisant des substrats micro&#xE9;lectrodes pour concevoir de telles asym&#xE9;tries dans les cellules &#xE9;pith&#xE9;liales r&#xE9;nales, nous avons constat&#xE9; que contact cellule-cellule induite d&#xE9;placement du noyau vers le contact, et a &#xE9;galement caus&#xE9; une r&#xE9;orientation centrosomale et fron&#xE7;age lamellipodial du c&#xF4;t&#xE9; distal du noyau. Lors de la lib&#xE9;ration des contraintes micro&#xE9;lectrodes, les cellules expos&#xE9;es dirig&#xE9; la migration loin du contact cellule-cellule. Perturber la E-cadh&#xE9;rine l&#x26;#39;engagement de position al&#xE9;atoire nucl&#xE9;aire et fron&#xE7;age lamellipodial dans les cultures &#xE0; motifs, et abrog&#xE9;e r&#xE9;orientation cellule gratter la plaie-induite, mais pas le taux de migration. Polarit&#xE9; qui a &#xE9;t&#xE9; induite par contact cellule-cellule a n&#xE9;cessit&#xE9; un cytosquelette d&#x26;#39;actine intacte et Cdc42 activit&#xE9;, mais pas de signalisation RhoA ou Rac. Ensemble, ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent un nouveau r&#xF4;le pour adh&#xE9;sion cellule-cellule de la polarisation, et ont des implications pour la cicatrisation des plaies et des motifs de d&#xE9;veloppement.

Polarit&#xE9; cellulaire d&#xE9;clench&#xE9; par adh&#xE9;sion cellule-cellule Via E-cadh&#xE9;rine

Zellpolarit&auml;t wird durch zahlreiche extrazellul&auml;re Signale inszeniert und f&uuml;hrt Veranstaltungen wie Chemotaxis, Mitose und Wundheilung. Bei kratzen-Wunde-Assays der Zelle Monolayers orient Wunde-Kante Zellen ihre Centrosomes auf die Wunde, ein Prozess, der anscheinend die Bildung der neuen Zelle extrazellul&auml;ren Matrix Adh&auml;sionen abh&auml;ngen, wie Zellen in die Wunde streuen. Im direkten Gegensatz zu kratzen-verwundet Zellen isolierte Zellen ohne Zell-Zell-Kontakte nicht polarisieren, was darauf hindeutet, dass Asymmetrie der Zell-Zell-Adh&auml;sionen Monolage St&ouml;rung infolge zur Polarisierung beitragen k&ouml;nnte. Solche Asymmetrien Niere Epithelzellen Ingenieur mit Micropatterned Substrate, fanden wir, dass die Zell-Zell-Kontakt verursachte Verschiebung des Kerns auf den Kontakt, und lie&szlig; auch centrosomal Neuausrichtung und Lamellipodial ruffling der distalen Seite des Zellkerns. Nach Entlassung aus Micropatterned Einschr&auml;nkungen ausgestellt Zellen gerichtete Migration Weg von der Zell-Zell-Kontakt. Endokrinsch&auml;dlichen E-Cadherin-Engagement randomisiert nuklearen Standpunkt und Lamellipodial halten muss gemusterten Kulturen und kratzen-Wunde-induced Zelle Neuorientierung, aber nicht die Migrationsrate aufgehoben. Polarit&auml;t, die durch Zell-Zell-Kontakt verursacht wurde ben&ouml;tigt, eine intakte Aktin-Zytoskelett und Cdc42 Aktivit&auml;t, aber nicht RhoA oder Rac signalisiert. Zusammen, diese Befunde zeigen eine neuartige Rolle f&uuml;r Zell-Zell-Adh&auml;sion in Polarisation, und wirken sich auf die Wundheilung und Entwicklungsst&ouml;rungen Musterung.

Zellpolarit&auml;t durch Zell-Zell-Adh&auml;sion &uuml;ber E-Cadherin ausgel&ouml;st.

Polarit&agrave; delle cellule &egrave; orchestrata da numerosi segnali extracellulari e le guide eventi come la chemiotassi, la mitosi e la guarigione della ferita. Raschiare-ferita dosaggi di monocellulari, ferita-bordo cellule orientano la loro cntrosome verso la ferita, un processo che sembra dipendere la formazione di nuove aderenze di matrice extracellulare delle cellule come cellule diffuse nella ferita. In diretto contrasto con cellule feriti ruspe, cellule isolate senza contatti cellula-cellula non &egrave; riuscito a polarizzare, suggerendo tale asimmetria di adesioni cellula-cellula risultante dall&#39;interruzione dello strato monomolecolare potrebbe contribuire alla polarizzazione. Utilizzando substrati micropatterned per ingegnere tali asimmetrie nelle cellule epiteliali renali, abbiamo scoperto che il contatto cellula-cellula indotta da spostamento del nucleo verso il contatto e anche causato centrosomal riorientamento e lamellipodial ruffling al lato distale del nucleo. Dopo il rilascio da vincoli micropatterned, cellule esposte migrazione diretto dal contatto cellula-cellula. Sconvolgere E-caderina fidanzamento randomizzati posizione nucleare e lamellipodial scompigliava fantasia culture e abrogata riorientamento raschiare-ferita-indotta delle cellule, ma non il tasso di migrazione. Polarit&agrave; che &egrave; stata indotta da contatto cellula-cellula ha richiesto un citoscheletro di actina intatto e Cdc42 attivit&agrave;, ma non RhoA o Rac di segnalazione. Insieme, questi risultati dimostrano un ruolo nuovo per l&#39;adesione cellula-cellula in polarizzazione e hanno implicazioni per la guarigione della ferita e il modello di sviluppo.

Polarit&agrave; cella innescato da adesione cellula-cellula tramite E-caderina.

&#x7D30;&#x80DE;&#x6975;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x753B;&#x7B56;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x3084;&#x5275;&#x50B7;&#x6CBB;&#x7652;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C9;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5358;&#x5C64;&#x3092;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x306E;&#x50B7;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x50B7;&#x6700;&#x5148;&#x7AEF;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5411;&#x304D;&#x3001;&#x50B7;&#x306B;&#x5E83;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE; - &#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x7652;&#x7740;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30D7;&#x50B7;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3059;&#x308A;&#x3001;&#x8CA0;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x63A5;&#x89E6;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x5C64;&#x306E;&#x7834;&#x58CA;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x63A5;&#x7740;&#x306E;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x504F;&#x5149;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x4E8C;&#x6975;&#x5316;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x814E;&#x81D3;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x6027;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x63A5;&#x89E6;&#x306F;&#x63A5;&#x89E6;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x6838;&#x306E;&#x5909;&#x4F4D;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x6838;&#x306E;&#x9060;&#x4F4D;&#x5074;&#x306B;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x518D;&#x914D;&#x5217;&#x3068;lamellipodial&#x6CE2;&#x6253;&#x3061;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x5236;&#x7D04;&#x304B;&#x3089;&#x89E3;&#x653E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x63A5;&#x89E6;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x96E2;&#x308C;&#x308B;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x51FA;&#x5C55;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5316;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;E-&#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306E;&#x7121;&#x4F5C;&#x70BA;&#x5316;&#x3001;&#x6838;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3068;lamellipodial&#x6CE2;&#x6253;&#x3061;&#x3092;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3057;&#x3001;&#x63BB;&#x304D;&#x53D6;&#x308A;&#x5DFB;&#x8A98;&#x5C0E;&#x7D30;&#x80DE;&#x518D;&#x914D;&#x5411;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x79FB;&#x884C;&#x7387;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x63A5;&#x89E6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6975;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Cdc42&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;RhoA&#x306E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;RAC&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x504F;&#x5149;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x63A5;&#x7740;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3057;&#x3001;&#x5275;&#x50B7;&#x6CBB;&#x7652;&#x3068;&#x767A;&#x9054;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x542B;&#x610F;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

E-&#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE; - &#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6975;&#x6027;

&#xC140; &#xADF9;&#xC131;&#xACFC; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870;&#xC728; &#xB41C; chemotaxis, &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4;, &#xC0C1;&#xCC98; &#xCE58;&#xC720; &#xB4F1; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xC548;&#xB0B4;. &#xAE01;&#xC5B4; &#xC0C1;&#xCC98; &#xC140; monolayers&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xCC98; &#xC9C0; &#xC140; &#xC0C1;&#xCC98;, &#xC140; &#xC0C1;&#xCC98;&#xC5D0; &#xD655;&#xC0B0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC138;&#xD3EC;-&#xAE30;&#xC9C8; &#xC720;&#xCC29; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB098;&#xB294; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xD5A5;&#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; centrosomes&#xC758; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC744; &#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE01;&#xC5B4; &#xBD80; &#xC0C1;&#xC790; &#xC140;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xB300;&#xBE44; &#xC140; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC5C6;&#xC774; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB41C; &#xC140; &#xBD84;&#xADF9; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC591;&#xADF9; &#xD654;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC911;&#xB2E8;&#xC744; &#xB2E8;&#xCE35;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC140; &#xC720;&#xCC29;&#xC758; &#xADF8; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;. Micropatterned &#xAE30;&#xD310; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; asymmetries &#xC5D4;&#xC9C0;&#xB2C8;&#xC5B4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC140; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98;&#xB97C; &#xD5A5;&#xD574; &#xD575;&#xC758; &#xBCC0;&#xC704;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; centrosomal &#xC7AC;&#xAD50;&#xC721; &#xBC0F; lamellipodial &#xD575;&#xC758; &#xC6D0;&#xC2EC; &#xCE21;&#xC744; ruffling &#xBC1C;&#xC0DD; &#xBC1C;&#xACAC;. Micropatterned &#xC81C;&#xC57D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD9C;&#xC2DC;, &#xC2DC; &#xC140; &#xC140; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xB3C5;&#xB41C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC804;&#xC2DC;. &#xBC29;&#xD574; &#xC804;&#xC790; cadherin &#xC57D;&#xD63C; &#xBB34;&#xC791;&#xC704; &#xD575; &#xC704;&#xCE58;&#xC640; &#xBB38;&#xD654;, &#xAF43;&#xBB34;&#xB2AC; lamellipodial&#xC5D0; &#xBB3C;&#xACB0;&#xC774; &#xACE0; &#xAE01;&#xC5B4; &#xC0C1;&#xCC98; &#xC720;&#xBC1C; &#xC140; &#xC7AC;&#xAD50;&#xC721;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD3D0;&#xC9C0;. &#xC140; &#xC811;&#xCD09;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xADF9;&#xC131; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton &#xBC0F; Cdc42 &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0; RhoA &#xB610;&#xB294; Rac &#xC2E0;&#xD638; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC591;&#xADF9; &#xD654;&#xC5D0; &#xC140; &#xC811;&#xCC29;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xC0C1;&#xCC98; &#xCE58;&#xC720; &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD328;&#xD134;&#xD654;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;.

&#xC140; &#xADF9;&#xC131; &#xC804;&#xC790; cadherin &#xD1B5;&#xD574; &#xC140; &#xC811;&#xCC29;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La polaridad celular es orquestada por numerosas se&#xF1;ales extracelulares, y gu&#xED;as de eventos tales como la quimiotaxis, la mitosis y la cicatrizaci&#xF3;n de la herida. En los ensayos de la herida raspadura-de monocapas celulares, heridas borde orientar sus c&#xE9;lulas centrosomas hacia la herida, un proceso que parece depender de la formaci&#xF3;n de nuevas c&#xE9;lulas de la matriz extracelular adherencias como c&#xE9;lulas distribuidas en la herida. En contraste directo para raspar heridos de las c&#xE9;lulas, las c&#xE9;lulas aisladas sin contactos c&#xE9;lula-c&#xE9;lula no a polarizar, lo que sugiere que la asimetr&#xED;a de las adherencias c&#xE9;lula-c&#xE9;lula que resultan de la interrupci&#xF3;n monocapa podr&#xED;a contribuir a la polarizaci&#xF3;n. Mediante el uso de sustratos micropatterned para dise&#xF1;ar tales asimetr&#xED;as en las c&#xE9;lulas epiteliales de ri&#xF1;&#xF3;n, hemos encontrado que el contacto c&#xE9;lula-c&#xE9;lula inducida desplazamiento del n&#xFA;cleo hacia el contacto, y tambi&#xE9;n caus&#xF3; reorientaci&#xF3;n centrosomal y fruncido lamellipodial al lado distal del n&#xFA;cleo. Tras la liberaci&#xF3;n de las restricciones micropatterned, c&#xE9;lulas expuestas dirigido la migraci&#xF3;n lejos del contacto c&#xE9;lula-c&#xE9;lula. La interrupci&#xF3;n de la E-cadherina compromiso de la posici&#xF3;n nuclear y aleatorizado fruncido lamellipodial en cultivos de patrones, y derog&#xF3; la raspadura de la herida inducida por la reorientaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas, pero no la tasa de migraci&#xF3;n. Polaridad que fue inducida por el contacto c&#xE9;lula-c&#xE9;lula requiere un citoesqueleto de actina intacta y la actividad Cdc42, pero no la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de RhoA o Rac. En conjunto, estos hallazgos ponen de manifiesto un nuevo papel para la adhesi&#xF3;n c&#xE9;lula-c&#xE9;lula en la polarizaci&#xF3;n, y tienen implicaciones para la cicatrizaci&#xF3;n de heridas y de los patrones de desarrollo.

Polaridad celular desencadenado por la adhesi&#xF3;n c&#xE9;lula-c&#xE9;lula a trav&#xE9;s de E-cadherina

&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; micromolded &#x5F39;&#x6027; micropost &#x9635;&#x5217;&#x6765;&#x8C03;&#x8282;&#x72EC;&#x7ACB;&#x5BF9;&#x80F6;&#x7C98;&#x5242;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x6750;&#x6599;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x6027;&#x80FD;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E8E;&#x57FA;&#x677F;&#x521A;&#x6027;&#x5E93;&#x7684;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86; micropost &#x521A;&#x6027;&#x5F71;&#x54CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x3001; &#x7126;&#x7C98;&#x8FDE;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x6536;&#x7F29;&#x548C;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x9AA8;&#x67B6;&#x6536;&#x7F29;&#x65E9;&#x671F;&#x53D8;&#x5316;&#x9884;&#x6D4B;&#x4EE5;&#x540E;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547D;&#x8FD0;&#x51B3;&#x5B9A;&#x4E2D;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;

&#x673A;&#x68B0;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x51E0;&#x4F55;&#x8C03;&#x5236;&#x5F39;&#x6027;&#x886C;&#x5E95;&#x3002;

We report the establishment of a library of micromolded elastomeric micropost arrays to modulate substrate rigidity independently of effects on adhesive and other material surface properties. We demonstrated that micropost rigidity impacts cell morphology, focal adhesions, cytoskeletal contractility and stem cell differentiation. Furthermore, early changes in cytoskeletal contractility predicted later stem cell fate decisions in single cells.

Mechanical regulation of cell function with geometrically modulated elastomeric substrates.

Nous rapportons la mise en place d&#x26;#39;une biblioth&#xE8;que de tableaux micromolded microtiges &#xE9;lastom&#xE8;res pour moduler la rigidit&#xE9; substrat ind&#xE9;pendamment des effets sur d&#x26;#39;autres propri&#xE9;t&#xE9;s adh&#xE9;sives et de surface des mat&#xE9;riaux. Nous avons d&#xE9;montr&#xE9; que la rigidit&#xE9; microtiges impacts morphologie cellulaire, adh&#xE9;sions focales, la contractilit&#xE9; du cytosquelette et la diff&#xE9;renciation des cellules souches. En outre, les premiers changements dans la contractilit&#xE9; du cytosquelette pr&#xE9;dit tard d&#xE9;coulent des d&#xE9;cisions du destin cellulaire dans des cellules individuelles.

R&#xE9;gulation m&#xE9;canique de la fonction des cellules avec des substrats &#xE9;lastom&#xE8;res G&#xE9;om&#xE9;triquement modul&#xE9;s

Wir berichten &uuml;ber die Einrichtung einer Bibliothek der Micromolded Elastomer Micropost Arrays auf Substrat Steifigkeit unabh&auml;ngig von Auswirkungen auf Klebstoff und andere materiellen Oberfl&auml;cheneigenschaften zu modulieren. Wir zeigten, dass Micropost Steifigkeit Zellmorphologie, fokalen Adh&auml;sionen, Zytoskelett Kontraktilit&auml;t und Stammzell-Differenzierung wirkt. Dar&uuml;ber hinaus prognostiziert fr&uuml;he Ver&auml;nderungen im Zytoskelett Kontraktilit&auml;t sp&auml;tere Stammzellen Schicksal Entscheidungen in den einzelnen Zellen.

Mechanische Regulierung der Zelle-Funktion mit geometrisch modulierte Elastomer Substraten.

Segnaliamo l&#39;istituzione di una biblioteca di matrici elastomeriche micropost micromolded modulare rigidit&agrave; substrato indipendentemente dagli effetti sull&#39;adesivo e altre propriet&agrave; superficiali del materiale. Abbiamo dimostrato che la rigidit&agrave; micropost impatti morfologia cellulare, adesioni focali, differenziazione delle cellule staminali e contrattilit&agrave; del citoscheletro. Inoltre, primi cambiamenti citoscheletrici contrattilit&agrave; predetto successive decisioni di destino delle cellule staminali in cellule singole.

Regolamento meccanica della funzione cella con substrati elastomerici geometricamente modulati.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x63A5;&#x7740;&#x5264;&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x6750;&#x6599;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x525B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;micromolded&#x30A8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x30DE;&#x30FC;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DD;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DD;&#x30B9;&#x30C8;&#x525B;&#x6027;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x3001;&#x63A5;&#x7740;&#x6591;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x6027;&#x3068;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x5F8C;&#x3067;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306B;&#x6B6F;&#x6B62;&#x3081;&#x3092;&#x304B;&#x3051;&#x308B;&#x3068;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x5E7E;&#x4F55;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x8ABF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x30DE;&#x30FC;&#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x898F;&#x5236;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC811;&#xCC29;&#xC81C; &#xBC0F; &#xAE30;&#xD0C0; &#xC7AC;&#xB8CC; &#xD45C;&#xBA74; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBCC4;&#xAC1C;&#xB85C; &#xAE30;&#xD310; &#xAC15;&#xC131; &#xBCC0;&#xC870; micromolded &#xD0C4;&#xC131; micropost &#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; &#xB3C4;&#xC11C;&#xAD00; &#xC124;&#xB9BD;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; micropost &#xAC15;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;, &#xCD08;&#xC810; &#xC720;&#xCC29;, cytoskeletal &#xC218;&#xCD95; &#xBC0F; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, cytoskeletal &#xC218;&#xCD95; &#xCD08;&#xAE30; &#xBCC0;&#xD654; &#xC608;&#xCE21; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140;&#xC5D0; &#xC800;&#xC7A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC6B4;&#xBA85; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC140; &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xAE30;&#xD558;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xC870; &#xB41C; &#xD0C4;&#xC131; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xADDC;&#xC81C;.

Se presenta el establecimiento de una biblioteca de micromolded matrices elast&#xF3;meras micropost para modular la rigidez del sustrato independientemente de los efectos sobre las propiedades adhesivas de la superficie y otros materiales. Hemos demostrado que la rigidez micropost impactos morfolog&#xED;a celular, adhesiones focales, la contractilidad del citoesqueleto y la diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas madre. Por otra parte, los primeros cambios en la contractilidad del citoesqueleto predijo m&#xE1;s tarde surgen las decisiones del destino celular en c&#xE9;lulas individuales.

Regulaci&#xF3;n mec&#xE1;nica de la funci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas con sustratos elastom&#xE9;ricos geom&#xE9;tricamente modulado

&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x5BF9;&#x57F9;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5FAE;&#x7C73;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x7684;&#x9635;&#x5217;&#x5185;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x8D85;&#x5FAE;&#x578B;&#x5E73;&#x53F0;&#x4E09;&#x7EF4; (3D) &#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x652F;&#x67B6; &#xFF08;&#x5FAE;&#x51DD;&#x80F6;&#xFF09;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5FAE;&#x578B;&#x6587;&#x5316;&#x6D88;&#x9664;&#x6269;&#x6563;&#x969C;&#x788D;&#x800C;&#x662F;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684; 3D &#x6587;&#x5316;&#x7CFB;&#x7EDF; (macrogels) &#x548C;&#x542F;&#x7528;&#x7EDF;&#x4E00;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x6574;&#x4E2A;&#x6587;&#x5316;&#x4EBA;&#x53E3;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5141;&#x8BB8;&#x5E94;&#x7528;&#xFF0C;&#x8DE8;&#x76F8;&#x5BF9;&#x5171;&#x9762;&#x5FAE;&#x51DD;&#x80F6;&#x6210;&#x50CF;&#x548C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x68C0;&#x67E5;&#x4E0E;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; (HGF) &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x4FE1;&#x53F7;-&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x6563;&#x5C04;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE; tubulogenesis &#x900F;&#x9732; 3D &#x6587;&#x5316;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EF4;&#x5EA6;&#x548C;&#x6539;&#x53D8;&#x523A;&#x6FC0;&#x7387;&#x3002;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5728; 2D &#x6587;&#x5316;&#x3001; &#x5FAE;&#x51DD;&#x80F6;&#x548C; macrogels &#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x8868;&#x660E;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC; ERK &#x4FE1;&#x53F7;&#x9A71;&#x52A8;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x662F;&#x5426;&#x5728; 2D &#x6216; 3D &#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x800C;&#x6B64; ERK &#x4FE1;&#x53F7;&#x662F;&#x540C;&#x6837;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6563;&#x5C04;&#x5BF9;&#x886C;&#x5E95; 2D &#x548C; 3d tubulogenesis&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6301;&#x7EED;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x53EA;&#x5728; 3D &#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x5185;&#x53D1;&#x751F;&#x9700;&#x8981; 3D tubulogenesis &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; 2D &#x6563;&#x5C04;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7279;&#x5B9A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4E0D;&#x80FD;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E0A;&#x80F6;&#x539F;&#x6D82;&#x5C42;&#x677F;&#x3001; &#x4E0B;&#x8C03;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E5F;&#x53D1;&#x751F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80F6;&#x539F;&#x51DD;&#x80F6;&#x4E0A;&#x7684;&#x4F46;&#x662F;&#x77AC;&#x6001;&#x548C;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8131;&#x6C2E;&#x9664;&#x78F7;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC4;&#x5408;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x5BF9;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x7684; siRNA &#x690D;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E0D;&#x80FD;&#x51CF;&#x5F31;&#x6563;&#x5C04;&#x5728; 2D &#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E76;&#x672A;&#x6291;&#x5236; tubulogenesis 3d&#x3002;&#x5171;&#x540C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x7EBF;&#x7D22;&#x7684; 3D &#x6587;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5E94;&#x5BF9;&#x53D7;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6BD4;&#x7387;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x800C;&#x7531;&#x77E9;&#x9635;&#x7EF4;&#x6570;&#x548C;&#x7A81;&#x51FA;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5728; 3D &#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x4FE1;&#x53F7;&#x89E3;&#x8026;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;

&#x89E3;&#x8026;&#x6269;&#x6563;&#x578B;&#x4ECE;&#x4E09;&#x7EF4;&#x63A7;&#x5236;&#x4FE1;&#x53F7; 3D &#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x5728; tubulogenesis &#x4E2D;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

We present a novel microfabricated platform to culture cells within arrays of micrometer-scale three-dimensional (3D) extracellular matrix scaffolds (microgels). These microscale cultures eliminate diffusion barriers that are intrinsic to traditional 3D culture systems (macrogels) and enable uniform cytokine stimulation of the entire culture population, as well as allow immunolabeling, imaging and population-based biochemical assays across the relatively coplanar microgels. Examining early signaling associated with hepatocyte growth factor (HGF)-mediated scattering and tubulogenesis of MDCK cells revealed that 3D culture modulates cellular responses both through dimensionality and altered stimulation rates. Comparing responses in 2D culture, microgels and macrogels demonstrated that HGF-induced ERK signaling was driven by the dynamics of stimulation and not by whether cells were in a 2D or 3D environment, and that this ERK signaling was equally important for HGF-induced cell scattering on 2D substrates and tubulogenesis in 3D. By contrast, we discovered a specific HGF-induced increase in myosin expression leading to sustained downregulation of myosin activity that occurred only within 3D contexts and was required for 3D tubulogenesis but not 2D scattering. Interestingly, although absent in cells on collagen-coated plates, downregulation of myosin activity also occurred for cells on collagen gels, but was transient and mediated by a combination of myosin dephosphorylation and enhanced myosin expression. Furthermore, upregulating myosin activity via siRNA targeted to a myosin phosphatase did not attenuate scattering in 2D but did inhibit tubulogenesis in 3D. Together, these results demonstrate that cellular responses to soluble cues in 3D culture are regulated by both rates of stimulation and by matrix dimensionality, and highlight the importance of decoupling these effects to identify early signals relevant to cellular function in 3D environments.

Decoupling diffusional from dimensional control of signaling in 3D culture reveals a role for myosin in tubulogenesis.

Nous pr&#xE9;sentons une nouvelle plate-forme de micro-usin&#xE9; &#xE0; des cellules en culture dans des tableaux de microm&#xE8;tre &#xE9;chelle en trois dimensions (3D) de la matrice extracellulaire (&#xE9;chafaudages microgels). Ces cultures &#xE0; micro-diffusion d&#x26;#39;&#xE9;liminer les obstacles qui sont intrins&#xE8;ques aux syst&#xE8;mes traditionnels de culture 3D (macrogels) et permettre la stimulation des cytokines uniforme de la population de la culture tout enti&#xE8;re, ainsi que de permettre des dosages immuno-marquage, d&#x26;#39;imagerie et de la population bas&#xE9;e sur biochimiques &#xE0; travers les microgels relativement coplanaires. L&#x26;#39;examen de signalisation associ&#xE9;s &#xE0; d&#xE9;but du facteur de croissance des h&#xE9;patocytes (HGF) &#xE0; m&#xE9;diation diffusion et tubulogen&#xE8;se de cellules MDCK r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que la culture 3D module la r&#xE9;ponse cellulaire &#xE0; la fois par dimensionnalit&#xE9; et les taux de stimulation alt&#xE9;r&#xE9;s. En comparant les r&#xE9;ponses dans la culture 2D, microgels et macrogels d&#xE9;montr&#xE9; que HGF induit ERK a &#xE9;t&#xE9; tir&#xE9;e par la dynamique de stimulation et non pas selon que les cellules &#xE9;taient dans un environnement 2D ou 3D, et que cette signalisation ERK &#xE9;tait tout aussi important pour la diffusion cellulaire induite par HGF- sur des substrats en 2D et en 3D tubulogen&#xE8;se. En revanche, nous avons d&#xE9;couvert un sp&#xE9;cifique HGF induit augmentation de l&#x26;#39;expression de myosine conduisant &#xE0; une r&#xE9;gulation n&#xE9;gative de l&#x26;#39;activit&#xE9; soutenue de myosine qui a eu lieu seulement dans des contextes 3D et a &#xE9;t&#xE9; n&#xE9;cessaire pour tubulogen&#xE8;se 3D, mais pas de diffusion 2D. Int&#xE9;ressant, bien que l&#x26;#39;absence de cellules sur le collag&#xE8;ne plaques rev&#xEA;tues, la r&#xE9;gulation n&#xE9;gative de l&#x26;#39;activit&#xE9; myosine &#xE9;galement produite par les cellules sur des gels de collag&#xE8;ne, mais &#xE9;tait transitoire et m&#xE9;di&#xE9;e par une combinaison de d&#xE9;phosphorylation de la myosine et expression de la myosine renforc&#xE9;e. En outre, l&#x26;#39;activit&#xE9; myosine r&#xE9;gulation positive par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire siARN cibl&#xE9; &#xE0; une myosine phosphatase n&#x26;#39;a pas att&#xE9;nu&#xE9; la diffusion en 2D, mais ne inhiber tubulogen&#xE8;se en 3D. Ensemble, ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que les r&#xE9;ponses cellulaires aux signaux solubles dans la culture 3D sont r&#xE9;gis par les deux taux de stimulation et par dimensionnalit&#xE9; matrice, et de souligner l&#x26;#39;importance du d&#xE9;couplage de ces effets afin d&#x26;#39;identifier les premiers signaux pertinents pour la fonction cellulaire dans des environnements 3D.

D&#xE9;couplage diffusionnelle de contr&#xF4;le dimensionnel de la signalisation dans la culture 3D r&#xE9;v&#xE8;le un r&#xF4;le &#xE0; jouer dans la myosine tubulogen&#xE8;se

Wir pr&auml;sentieren eine neuartige Microfabricated-Plattform f&uuml;r Kultur-Zellen in Arrays Mikrometer-Skala dreidimensionale (3D) extrazellul&auml;ren Matrix Ger&uuml;ste (Microgels). Diese Kulturen Microscale Hindernisse Verbreitung, die ergeben sich aus traditionellen 3D Kultur-Systeme (Macrogels) und einheitliche Cytokine Stimulierung der gesamten Kultur Bev&ouml;lkerung zu aktivieren, sowie Immunolabeling, Bildgebung und bev&ouml;lkerungsbezogenen biochemischen Assays &uuml;ber die relativ koplanar Microgels. Pr&uuml;fung der fr&uuml;hen Signalisierung Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGF) zugeordnet-vermittelte, Streuung und Tubulogenesis MDCK Zellen aufgedeckt, dass 3D Kultur zellul&auml;re Reaktionen durch Dimensionalit&auml;t moduliert und Anregung Preise ge&auml;ndert. Vergleich der Antworten in 2D Kultur, Microgels und Macrogels nachgewiesen, dass HGF-induzierte ERK Signalisierung getrieben wurde, durch die Dynamik der Stimulation und nicht durch Zellen, ob in 2D oder 3D Umgebung waren und diese ERK-Signalisierung f&uuml;r HGF-induced Zelle Streuung auf 2D Substrate und Tubulogenesis in 3D genauso wichtig war. Im Gegensatz dazu entdeckten wir eine spezifische HGF-induzierte Zunahme Myosin Ausdruck f&uuml;hrt zu anhaltenden Heraufregulation des Myosin-Aktivit&auml;t, die nur innerhalb der 3D Kontexten aufgetreten und war bei der 3D Tubulogenesis aber nicht 2D Streuung. Interessant ist, obwohl in den Zellen an fehlend Kollagen beschichtete Platten, Heraufregulation Myosin Aktivit&auml;t aufgetreten ist, auch Zellen auf Kollagen-Gel, jedoch war transient und vermittelte durch eine Kombination von Myosin Dephosphorylierung und Myosin Ausdruck verbessert. Au&szlig;erdem Heraufregulierung Myosin Aktivit&auml;t &uuml;ber SiRNA gezielt an ein Myosin-Phosphatase nicht abzuschw&auml;chen, Streuung in 2D aber hemmen Tubulogenesis in 3D. Zusammen zeigen diese Ergebnisse, dass zellul&auml;re Antworten auf l&ouml;sliche Signale in 3D Kultur, indem beide Preise der Stimulation und Matrix-Dimensionalit&auml;t reguliert werden und die Bedeutung unterstreichen der Entkoppelung diese Effekte um fr&uuml;he Signale f&uuml;r zellulare Funktion in 3D-Umgebungen zu identifizieren.

Entkopplung von Dimensionskontrolle signalisieren in 3D Kultur Diffusionsprozess offenbart eine Rolle f&uuml;r Myosin in Tubulogenesis.

Vi presentiamo una piattaforma romanzo microfabricated a cellule di coltura all&#39;interno delle matrici di micrometro-scala ponteggi di matrice extracellulare tridimensionale (3D) (microgels). Queste culture su microscala eliminano barriere di diffusione che sono intrinseci ai sistemi di cultura tradizionale 3D (macrogels) e abilitare uniforme cytokine stimolazione della popolazione intera cultura, cos&igrave; come permettono immunomarcatura, imaging e basati sulla popolazione dosaggi biochimici attraverso il microgels relativamente complanari. Esaminando la segnalazione precoce associata con fattore di crescita degli epatociti (HGF)-mediate scattering e tubulogenesis delle cellule MDCK rivel&ograve; che la cultura 3D modula cellular responses attraverso dimensionalit&agrave; e alterato tassi di stimolazione. Confrontando le risposte nella cultura 2D, microgels e macrogels hanno dimostrato che ERK HGF-indotta di segnalazione &egrave; stato guidato da dinamiche di stimolazione e non da se le cellule fossero in un ambiente 2D o 3D, e che questa segnalazione ERK era altrettanto importante per lo scattering di HGF-indotta delle cellule su substrati 2D e tubulogenesis in 3D. Al contrario, abbiamo scoperto un aumento specifico di HGF-indotta nell&#39;espressione della miosina, portando alla downregulation sostenuta delle attivit&agrave; di miosina che si &egrave; verificato solo all&#39;interno di contesti 3D ed &egrave; stato richiesto per tubulogenesis 3D ma non 2D scattering. &Egrave; interessante notare che, anche se assente nelle cellule su piastre rivestite con collagene, downregulation di attivit&agrave; della miosina si &egrave; verificato anche per celle su gel di collagene, ma &egrave; mediata da una combinazione di defosforilazione di miosina e transitori ed enhanced espressione della miosina. Inoltre, attivit&agrave; miosina upregulating via siRNA mirato ad una fosfatasi della miosina non ha fatto attenuare scattering in 2D ma inibire tubulogenesis in 3D. Insieme, questi risultati dimostrano cellular responses to spunti solubili nella cultura 3D sono regolati da entrambi tassi di stimolazione e di dimensionalit&agrave; di matrix che sottolineano l&#39;importanza di questi effetti per identificare i primi segnali rilevanti per la funzione cellulare in ambienti 3D di disaccoppiamento.

Disaccoppiamento diffusione dal controllo dimensionale di segnalazione in 3D cultura rivela un ruolo per la miosina in tubulogenesis.

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2D&#x6587;&#x5316;&#x3001;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x3068;HGF&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;ERK&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x304C;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x99C6;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;macrogels&#x3067;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;2&#x6B21;&#x5143;&#x307E;&#x305F;&#x306F;3&#x6B21;&#x5143;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;ERK&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x304C;HGF&#x8A98;&#x5C0E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6563;&#x4E71;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7B49;&#x3057;&#x304F;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;2D&#x3068;3D&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3067;&#x7BA1;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;3D&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3001;3D&#x7BA1;&#x5F62;&#x6210;&#x304C;2D&#x307E;&#x305B;&#x6563;&#x4E71;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x4E0B;&#x65B9;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;HGF&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3001;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3082;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x30B2;&#x30EB;&#x4E0A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8131;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x904E;&#x6E21;&#x7684;&#x306A;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3057;&#x305F;siRNA&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;2D&#x3067;&#x306E;&#x6563;&#x4E71;&#x6E1B;&#x8870;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;3D&#x3067;&#x7BA1;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x53EF;&#x6EB6;&#x306A;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x3068;&#x884C;&#x5217;&#x306E;&#x6B21;&#x5143;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;3D&#x74B0;&#x5883;&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

3&#x6B21;&#x5143;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;&#x306F;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6B21;&#x5143;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x3092;&#x30C7;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x7BA1;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

3 &#xCC28;&#xC6D0; (3D) &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8; &#xAC74;&#xC124; &#xAE30;&#xACC4; &#xC784;&#xB300; (microgels) &#xC18C;&#xC124; &#xFE59; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xBBF8;&#xD130; &#xADDC;&#xBAA8;&#xC758; &#xBC30;&#xC5F4; &#xB0B4;&#xC758; &#xBB38;&#xD654; &#xC140;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; microscale &#xBB38;&#xD654; immunolabeling, &#xD5C8;&#xC6A9;&#xC73C;&#xB85C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC804;&#xCCB4; &#xBB38;&#xD654; &#xC778;&#xAD6C;&#xC758; &#xADE0;&#xC77C; &#xD55C; cytokine &#xC790;&#xADF9; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (macrogels)&#xB97C; &#xB0B4;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xAE09; &#xC7A5;&#xBCBD;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3D9;&#xC77C; &#xD3C9;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; microgels&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC778;&#xAD6C; &#xAE30;&#xBC18; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC0F; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;. Hepatocyte &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; (HGF)&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xCD08;&#xAE30; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC80;&#xC0AC;-&#xBE44; &#xC0B0; &#xC911;&#xC7AC; &#xBC0F; MDCK &#xC140;&#xC758; tubulogenesis &#xBC1D;&#xD600; 3D &#xBB38;&#xD654; &#xCC28;&#xC6D0; &#xD1B5;&#xD574; &#xB450; &#xC138;&#xD3EC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xBCC0;&#xC870; &#xD558; &#xACE0; &#xC790;&#xADF9; &#xC694;&#xAE08; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xADF8; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559; &#xBC0F; &#xC140; 2D &#xB610;&#xB294; 3D &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC5C8;&#xB294; &#xC9C0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; ERK HGF &#xC720;&#xB3C4; &#xC2E0;&#xD638; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0;&#xC774; ERK &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xB3D9;&#xC77C; &#xD558; &#xAC8C; &#xAE30;&#xD310; 2D &#xBC0F; 3d&#xC5D0;&#xC11C; tubulogenesis&#xC5D0; HGF &#xC720;&#xBC1C; &#xC140; &#xC0B0;&#xB780;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC2DC;&#xC5F0; 2D &#xBB38;&#xD654;, microgels &#xBC0F; macrogels&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, 3D &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB0B4; &#xC5D0;&#xC11C;&#xB9CC; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; 3D tubulogenesis &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; 2D &#xC0B0;&#xB780;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; myosin &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; downregulation&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; myosin &#xC2DD;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; HGF &#xC720;&#xBC1C; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xBE44;&#xB85D; &#xACB0; &#xC11D; &#xC140; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xCF54;&#xD305; &#xC811;&#xC2DC;&#xC5D0; myosin &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; downregulation &#xB610;&#xD55C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC824; &#xC140; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBCC0;&#xC774; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; myosin dephosphorylation&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xC640; myosin &#xC2DD; &#xAC15;&#xD654;. &#xB610;&#xD55C;, myosin &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; siRNA &#xD1B5;&#xD574; upregulating myosin &#xD65C;&#xB3D9; &#xCC28;&#xC6D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44; &#xC0B0;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; 3d&#xC5D0;&#xC11C; tubulogenesis&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC785;&#xC99D; 3D &#xBB38;&#xD654; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC751;&#xB2F5; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xB450; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xCC28;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB418; &#xACE0; &#xB514; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; 3D &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD734;&#xB300; &#xC804;&#xD654; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xCD08;&#xAE30; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Diffusional 3D &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xCE58;&#xC218; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB514; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; myosin tubulogenesis&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xACC4;&#xC2DC; &#xD55C;&#xB2E4;.

Se presenta un novedoso microfabricated plataforma para la cultura dentro de las c&#xE9;lulas matrices de tres dimensiones (3D) de dimensiones microm&#xE9;tricas, andamios de la matriz extracelular (microgeles). Estas culturas microescala eliminar las barreras de difusi&#xF3;n que son intr&#xED;nsecas a los sistemas tradicionales de cultivo en 3D (macrogels) y permitir la estimulaci&#xF3;n de citoquinas uniforme de la poblaci&#xF3;n la cultura toda, as&#xED; como permitir que los ensayos de inmunomarcaci&#xF3;n, im&#xE1;genes y orientada a la poblaci&#xF3;n a trav&#xE9;s de los bioqu&#xED;micos microgeles relativamente coplanares. Examen de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de los primeros asociados con el factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) mediada por la dispersi&#xF3;n y tubulog&#xE9;nesis de c&#xE9;lulas MDCK revel&#xF3; que la cultura 3D modula la respuesta celular tanto a trav&#xE9;s de la dimensionalidad y las tasas de alteraci&#xF3;n de la estimulaci&#xF3;n. Al comparar las respuestas en la cultura 2D, microgeles y macrogels demostrado que el HGF inducido por la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de ERK fue impulsado por la din&#xE1;mica de la estimulaci&#xF3;n y no por si las c&#xE9;lulas se encontraban en un entorno 2D o 3D, y que esta se&#xF1;alizaci&#xF3;n ERK era igualmente importante para la dispersi&#xF3;n de c&#xE9;lulas HGF inducido sobre sustratos en 2D y en 3D tubulogenesis. Por el contrario, nos encontramos con una espec&#xED;fica HGF inducida por aumento de la expresi&#xF3;n de la miosina que conduce a regulaci&#xF3;n a la baja sostenida de la actividad de la miosina que se produjo s&#xF3;lo en los contextos en 3D y se requiere para tubulog&#xE9;nesis 3D, pero la dispersi&#xF3;n no es 2D. Curiosamente, aunque ausente en las c&#xE9;lulas sobre placas recubiertas de col&#xE1;geno, downregulation de actividad miosina tambi&#xE9;n producido por las c&#xE9;lulas en geles de col&#xE1;geno, pero fue transitoria y mediada por una combinaci&#xF3;n de desfosforilaci&#xF3;n miosina y expresi&#xF3;n miosina mejorada. Por otra parte, la actividad de la miosina a trav&#xE9;s de regulaci&#xF3;n al alza de siRNA dirigido a una fosfatasa miosina no atenu&#xF3; la dispersi&#xF3;n en 2D, pero no inhibe tubulog&#xE9;nesis en 3D. En conjunto, estos resultados demuestran que las respuestas celulares a las se&#xF1;ales solubles en la cultura en 3D est&#xE1;n regulados por las tasas de estimulaci&#xF3;n y la dimensionalidad de la matriz, y poner de relieve la importancia de la disociaci&#xF3;n de estos efectos para identificar las primeras se&#xF1;ales relevantes para la funci&#xF3;n celular en los entornos en 3D.

Desacoplamiento por difusi&#xF3;n de Control dimensional de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en la cultura en 3D revela un papel de la miosina en tubulogenesis

&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x68C0;&#x67E5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x4F7F;&#x7528;&#x52A8;&#x6001;&#x80F6;&#x57FA;&#x8D28;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7A7A;&#x95F4;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x4E0D;&#x540C;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF1A; &#x7B2C;&#x4E00;&#x662F;&#x6C38;&#x4E45;&#x975E;&#x5230;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3001; &#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x662F;&#x6C38;&#x4E45;&#x7C98;&#x63A5;&#x5242;&#x3001; &#x548C;&#x6700;&#x540E;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x4ECE; nonadhesive &#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x5207;&#x6362;&#x5230;&#x80F6;&#x7C98;&#x5242;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E0E;&#x7FA7;&#x9178;&#x7EC8;&#x6B62;&#x5355;&#x5C42; (SAMs)&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x521D;&#x59CB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x7532;&#x57FA;&#x7EC8;&#x6B62; SAMs &#x5141;&#x8BB8;&#x5438;&#x9644;&#x7684; nonadhesive &#x548C; tri(ethylene glycol) &#x7EC8;&#x6B62; SAMs &#x79CD;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x7535;&#x5316;&#x5B66;&quot;&#x5F00;&#x5173;&quot;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5230;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4E0A;&#x9884;&#x5148;&#x6307;&#x5B9A;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4ECE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x9EC4;&#x91D1;&#x8868;&#x9762;&#x91C7;&#x7528;&#x53CC;&#x5FAE;&#x63A5;&#x89E6;&#x5370;&#x5237;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x886C;&#x5E95;&#xFF0C;&#x8C03;&#x67E5;&#x4ECE;&#x7A84;&#x7A84;&#x7684;&#x3001; &#x5206;&#x652F;&#x8DEF;&#x8F68;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x7684;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8FC1;&#x79FB;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FBF;&#x5B9A;&#x6027;&#x94C5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x5982;&#x4F55;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x8FFD;&#x968F;&#x8005;&#x7684;&#x8FD0;&#x52A8;&#x65B9;&#x5411;&#x3002;&#x5EF6;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x793A;&#x5E73;&#x5747;&#x6765;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x4E94;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x59CB;&#x7EC8;&#x9009;&#x62E9;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5206;&#x652F;&#x4E4B;&#x524D;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8F93;&#x5165;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x5206;&#x652F;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x7684;&#x6C9F;&#x901A;&#x65B9;&#x9762;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6307;&#x5BFC;&#x4E0A;&#x76AE;&#x8868;&#x7684;&#x7C98;&#x6027;&#x6D41;&#x52A8;&#x3002;&#x6B64;&#x5E73;&#x53F0;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5229;&#x7528;&#x5728;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x5355;&#x4E2A;&#x548C;&#x591A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FC1;&#x79FB;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51B3;&#x7B56;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;

Micropatterned &#x52A8;&#x6001;&#x80F6;&#x57FA;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;

We present a novel approach to examine cell migration using dynamically adhesive substrates consisting of three spatially and functionally distinct regions: the first is permanently nonadhesive to cells, the second is permanently adhesive, and the final region is electrochemically switched from nonadhesive to adhesive. We applied a double microcontact printing approach to pattern gold surfaces with carboxylic acid-terminated self-assembled monolayers (SAMs) that permit initial cell adhesion, with methyl-terminated SAMs that permit adsorption of a nonadhesive, and with tri(ethylene glycol)-terminated SAMs that can be electrochemically "switched" to permit cell migration from a prespecified pattern onto a new pattern. Using these substrates, we investigated the migration of epithelial cells from monolayers onto narrow, branching tracks of extracellular matrix in order to characterize how lead cells influence the direction of movement of followers. Time-lapse imaging revealed that, on average, five cells consistently chose one branch before other cells entered the second branch, providing evidence to suggest that intercellular communication plays an important role in guiding the cohesive movement of epithelial sheets. This platform may be of use in furthering our understanding of the mechanisms underlying cellular decision-making during migration in both individual and multicellular contexts.

Micropatterned dynamically adhesive substrates for cell migration.

Nous pr&#xE9;sentons une nouvelle approche pour examiner la migration des cellules en utilisant des substrats dynamiquement adh&#xE9;sif constitu&#xE9; de trois r&#xE9;gions spatialement et fonctionnellement distinctes: la premi&#xE8;re est en permanence &#xE0; des cellules non adh&#xE9;sif, le second est en permanence adh&#xE9;sif, et dans la r&#xE9;gion final est &#xE9;lectrochimiquement activ&#xE9; &#xE0; partir non adh&#xE9;sive &#xE0; l&#x26;#39;adh&#xE9;sif. On applique une m&#xE9;thode &#xE0; double microcontact impression &#xE0; motif avec des surfaces d&#x26;#39;or &#xE0; terminaison d&#x26;#39;acide carboxylique monocouches auto-assembl&#xE9;es (SAM) qui permettent d&#x26;#39;adh&#xE9;rence de cellule initiale, par un groupe m&#xE9;thyle &#xE0; terminaison SAM qui permettent l&#x26;#39;adsorption d&#x26;#39;un non adh&#xE9;sif, et avec du tri (&#xE9;thyl&#xE8;neglycol) &#xE0; terminaison SAM qui peuvent &#xEA;tre &#xE9;lectrochimiquement &#x26;quot;commut&#xE9;s&#x26;quot; pour permettre la migration des cellules &#xE0; partir d&#x26;#39;un mod&#xE8;le pr&#xE9;d&#xE9;fini sur un nouveau mod&#xE8;le. L&#x26;#39;utilisation de ces substrats, nous avons &#xE9;tudi&#xE9; la migration des cellules &#xE9;pith&#xE9;liales de monocouches sur &#xE9;troit, ramification pistes de la matrice extracellulaire afin de caract&#xE9;riser la fa&#xE7;on dont les cellules de plomb influencer la direction du mouvement de partisans. Time-lapse d&#x26;#39;imagerie a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que, en moyenne, cinq cellules syst&#xE9;matiquement choisi une branche avant que les cellules d&#x26;#39;autres entr&#xE9;s dans la seconde branche, fournir des preuves pour sugg&#xE9;rer que la communication intercellulaire joue un r&#xF4;le important dans l&#x26;#39;orientation du mouvement coh&#xE9;rent de feuilles &#xE9;pith&#xE9;liales. Cette plate-forme peut &#xEA;tre utile pour approfondir notre compr&#xE9;hension des m&#xE9;canismes cellulaires sous-jacents de prise de d&#xE9;cision lors de la migration dans des contextes &#xE0; la fois individuels et multicellulaire.

Micro&#xE9;lectrodes substrats dynamiquement adh&#xE9;sives pour la migration des cellules

Wir pr&auml;sentieren einen neuartigen Ansatz zur Zellmigration mit dynamisch Klebstoff Substrate, bestehend aus drei r&auml;umlich und funktional unterschiedliche Regionen zu pr&uuml;fen: die erste ist dauerhaft nonadhesive Zellen, die zweite ist dauerhaft selbstklebend und die letzte Region ist elektrochemisch wechselte von der Nonadhesive zum Kleber. Wir einen doppelten Microcontact-Drucken-Ansatz auf Muster gold-Oberfl&auml;chen mit Carbons&auml;ure endende assembled Monolayers (SAMs), die anf&auml;ngliche Zelladh&auml;sion, mit Methyl-terminierte SAMs, die Adsorption von einer Nonadhesive zu erm&ouml;glichen und mit Tri(ethylene glycol) endende SAMs, die elektrochemisch &quot;geschalten werden k&ouml;nnen&quot; Zelle Migration aus einem vorgegebenen Muster auf ein neues Muster zulassen zulassen angewendet. Verwenden diese Substrate, untersucht wir die Migration von Epithelzellen von Monolayers auf schmalen, verzweigte Gleise der extrazellul&auml;ren Matrix, um charakterisieren wie Blei Zellen Einfluss auf die Richtung der Bewegung der Anh&auml;nger. Time-Lapse Bildgebung ergab, dass im Durchschnitt f&uuml;nf Zellen konsequent ein Zweig w&auml;hlte vor anderen Zellen die zweite Filiale eingegeben, den Nachweis verlangt, dass interzellul&auml;re Kommunikation spielt eine wichtige Rolle in der F&uuml;hrung der zusammenh&auml;ngenden Bewegung der epithelialen Bl&auml;tter. Diese Plattform kann unser Verst&auml;ndnis f&uuml;r die Mechanismen zellul&auml;rer Entscheidungen w&auml;hrend der Migration in sowohl die individuelle als auch die vielzelligen Kontexten F&ouml;rderung sein.

Micropatterned dynamisch Klebstoff Substrate f&uuml;r Zellmigration.

Vi presentiamo un nuovo approccio per esaminare la migrazione cellulare utilizzando substrati dinamicamente adesivi composto da tre spazialmente e funzionalmente distinte regioni: la prima &egrave; permanentemente nonadhesive alle cellule, la seconda &egrave; permanentemente adesiva e la regione finale elettrochimicamente &egrave; passata da nonadhesive di adesivo. Abbiamo applicato un approccio di stampa doppia microcontatto per le superfici del modello gold con monostrati auto acido carbossilico-terminato-assemblati (SAMs) che permettono l&#39;adesione delle cellule iniziali, con SAMs metil-terminato che permettono l&#39;adsorbimento di una nonadhesive e Sam ha terminato di tri(ethylene glycol) che pu&ograve; essere elettrochimicamente &quot;acceso&quot; per consentire la migrazione delle cellule da un modello pre su un nuovo modello. Utilizzando questi substrati, abbiamo studiato la migrazione delle cellule epiteliali da monostrati sui binari stretti, ramificazione della matrice extracellulare, al fine di caratterizzare come piombo cellule influenzano la direzione del movimento dei seguaci. Time-lapse imaging ha rivelato che, in media, cinque celle coerentemente scelgono un ramo prima di altre cellule entrato il secondo ramo, fornendo prove che suggeriscono che la comunicazione intercellulare gioca un ruolo importante nel guidare il movimento coeso di fogli epiteliale. Questa piattaforma pu&ograve; essere utile nel promuovere la comprensione dei meccanismi sottostanti processi decisionali cellulare durante la migrazione in contesti individuali e pluricellulari.

Micropatterned dinamicamente adesivi substrati per la migrazione delle cellule.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;3&#x7A7A;&#x9593;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x9818;&#x57DF;&#x304B;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x63A5;&#x7740;&#x5264;&#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x6052;&#x4E45;&#x7684;&#x306B;&#x975E;&#x63A5;&#x7740;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x4E8C;&#x3064;&#x76EE;&#x306F;&#x6C38;&#x4E45;&#x306B;&#x63A5;&#x7740;&#x5264;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x6700;&#x5F8C;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x975E;&#x7C98;&#x7740;&#x304B;&#x3089;&#x63A5;&#x7740;&#x5264;&#x306B;&#x5207;&#x308A;&#x66FF;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x7C98;&#x7740;&#x306E;&#x5438;&#x7740;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x7D42;&#x7AEF;SAM&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30F3;&#x9178;&#x672B;&#x7AEF;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#xFF08;SAM&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x91D1;&#x8868;&#x9762;&#x3078;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x3067;&#xFF08;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF09;&#x3067;&#x7D42;&#x4E86;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x4E0A;&#x306B;&#x4E8B;&#x524D;&#x306B;&#x6307;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B; &#x26;quot;&#x5207;&#x308A;&#x66FF;&#x3048;&#x26;quot;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;SAM&#x306E;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x925B;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x4FE1;&#x8005;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x306E;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x72ED;&#x3044;&#x3001;&#x5206;&#x5C90;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x4E0A;&#x306B;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x304B;&#x3089;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30E9;&#x30D7;&#x30B9;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x30B3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30CB;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x30B7;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x51DD;&#x96C6;&#x904B;&#x52D5;&#x3092;&#x5C0E;&#x304F;&#x4E0A;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306E;&#x5206;&#x5C90;&#x306B;&#x5165;&#x308B;&#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x5E73;&#x5747;&#x3067;5&#x3064;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x304C;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066;&#x4E00;&#x3064;&#x306E;&#x30D6;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C1;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x4EBA;&#x3068;&#x591A;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x3001;&#x79FB;&#x884C;&#x4E2D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x610F;&#x601D;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x6DF1;&#x3081;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x5F79;&#x306B;&#x7ACB;&#x3064;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x63A5;&#x7740;&#x57FA;&#x8CEA;

&#xC120;&#xBB3C;&#xC774; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xCC29; &#xAE30;&#xD310; 3 &#xACF5;&#xAC04;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC4;&#xAC1C;&#xC758; &#xC601;&#xC5ED; &#xAC80;&#xC0AC;: &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8;&#xB294; &#xC601;&#xAD6C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC140;&#xC5D0; &#xC811;&#xCC29;&#xC2DD;, &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8;&#xB294; &#xC601;&#xAD6C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xCC29; &#xBC0F; &#xCD5C;&#xC885; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xC811;&#xCC29;&#xC81C;&#xB97C; nonadhesive&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xD658; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; carboxylic &#xC0B0; &#xC885;&#xB8CC; &#xC870;&#xB9BD;&#xB41C; monolayers (SAMs) &#xCD08;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29;, &#xBA54; &#xD2F8;&#xC73C;&#xB85C; &#xB05D;&#xB098;&#xB294; Sams&#xB294; nonadhesive&#xC758; &#xD761;&#xCC29;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; tri(ethylene glycol)&#xB85C; &#xB05D;&#xB098;&#xB294; SAMs &#xC804;&#xD658;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &quot;&quot; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD328;&#xD134;&#xC5D0; prespecified &#xD328;&#xD134;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD45C;&#xBA74; &#xD328;&#xD134; &#xACE8;&#xB4DC; &#xB354;&#xBE14; microcontact &#xC778;&#xC1C4; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC801;&#xC6A9;. &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8; &#xC881;&#xC740;, &#xBD84;&#xAE30; &#xD2B8;&#xB799;&#xC5D0; monolayers&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xB9AC;&#xB4DC; &#xC140; &#xCD94;&#xC885;&#xC790;&#xC758; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC744; &#xC88C;&#xC6B0; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xD558;&#xB294; &#xC131;&#xACA9;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xC870;&#xC0AC;&#xC774; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;. &#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; &#xD654;&#xC0C1; &#xC9C4; &#xCC30;, &#xD3C9;&#xADE0; 5 &#xC140; &#xC77C;&#xAD00; &#xB418; &#xAC8C; &#xC120;&#xD0DD; &#xBD84;&#xAE30; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xD1B5;&#xC2E0; &#xC9C0;&#xCE68; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC2DC;&#xD2B8;&#xC758; &#xC751;&#xC9D1;&#xB825; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBD84;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB4E4;&#xC5B4;&#xAC00;&#xAE30; &#xC804;&#xC5D0; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC138;&#xD3EC; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC138;&#xD3EC; &#xC758;&#xC0AC; &#xACB0;&#xC815; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC804;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Micropatterned &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xCC29; &#xAE30;&#xD310;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se presenta un m&#xE9;todo novedoso para examinar la migraci&#xF3;n celular utilizando sustratos din&#xE1;micamente adhesivas consistentes en tres regiones espacial y funcionalmente distintas: el primero es permanentemente no adhesivo a las c&#xE9;lulas, la segunda es permanentemente adhesivo, y la regi&#xF3;n final se cambi&#xF3; de electroqu&#xED;micamente no adhesivo a adhesivo. Se aplic&#xF3; un enfoque microcontacto impresi&#xF3;n doble a las superficies de oro patr&#xF3;n con &#xE1;cido carbox&#xED;licos terminada en monocapas autoensambladas (SAM) que permitan la adhesi&#xF3;n celular inicial, con terminados en metil-SAM que permiten la adsorci&#xF3;n de un no adhesivo, y con tri (etilenglicol) terminado- MCS que puede ser electroqu&#xED;micamente &#x26;quot;conmutaci&#xF3;n&#x26;quot; para permitir la migraci&#xF3;n de c&#xE9;lulas a partir de un patr&#xF3;n especificado de antemano en un nuevo patr&#xF3;n. El uso de estos sustratos, se determin&#xF3; la migraci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas epiteliales de monocapas en estrecho, pistas de ramificaci&#xF3;n de la matriz extracelular con el fin de caracterizar c&#xF3;mo las c&#xE9;lulas de plomo influir en la direcci&#xF3;n del movimiento de seguidores. Time-lapse de im&#xE1;genes revelaron que, en promedio, cinco c&#xE9;lulas optado sistem&#xE1;ticamente por una rama antes de otras c&#xE9;lulas entr&#xF3; en la segunda rama, proporcionando evidencia para sugerir que la comunicaci&#xF3;n intercelular juega un papel importante en la orientaci&#xF3;n del movimiento coherente de capas epiteliales. Esta plataforma puede ser de utilidad en la promoci&#xF3;n de nuestra comprensi&#xF3;n de los mecanismos celulares de toma de decisiones durante la migraci&#xF3;n, tanto en contextos individuales y multicelular.

Micropatterned Sustratos din&#xE1;micamente adhesivas para la migraci&#xF3;n celular

&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x8D85;&#x5FAE;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x8D28;&#xFF0C;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x7EDF;&#x4E00;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x5BC6;&#x3001; &#x5782;&#x76F4;&#x3001; &#x5F39;&#x6027; microposts&#xFF0C;&#x4EE5;&#x7814;&#x7A76;&#x886C;&#x5E95;&#x521A;&#x5EA6;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x5F39;&#x6027; micropost &#x57FA;&#x677F;&#x662F; microposts &#x7684;&#x4ECE;&#x7845;&#x5927;&#x5E08; micromolded &#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4E0D;&#x540C;&#xFF0C;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x50F5;&#x5316;&#x7684;&#x886C;&#x5E95;&#x3002;&#x5F39;&#x6027;&#x7684; microposts &#x7684;&#x63D0;&#x793A;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x5370;&#x5237;&#x672F;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x5B98;&#x80FD;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5E95;&#x7269;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D;&#x53D8;&#x886C;&#x5E95;&#x521A;&#x5EA6;&#x53EA;&#x6709;&#x901A;&#x8FC7;&#x64CD;&#x7EB5; micropost &#x9AD8;&#x5EA6;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x5411;&#x8D34;&#x58C1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x5730;&#x5F62;&#x63D0;&#x793A;&#x3002;&#x6B64;&#x534F;&#x8BAE;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x5982;&#x4F55;&#x5236;&#x9020;&#x7845; micropost &#x6570;&#x7EC4;&#x5927;&#x5E08; (~ 2 &#x5468;&#x5B8C;&#x6210;) &#x548C;&#x5F39;&#x6027;&#x886C;&#x5E95; (3 d)&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5982;&#x4F55;&#x6267;&#x884C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x5B9E;&#x9A8C; (1-14 d)&#xFF0C;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF; (2 d)&#x3001; &#x7275;&#x5F15;&#x529B;&#x5206;&#x6790; (2 d) &#x4E0E;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x5316;&#x9A8C; (1 d) &#x8FD9;&#x4E9B;&#x886C;&#x5E95;&#xFF0C;&#x5BA1;&#x67E5;&#x886C;&#x5E95;&#x521A;&#x5EA6;&#x5BF9;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x7275;&#x5F15;&#x90E8;&#x961F;&#x4EE3;&#x3001; &#x7C98;&#x7740;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x3002;

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&#x867D;&#x7136;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#x4E2A;&#x522B;&#x6574;&#x5408;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x89E3;&#x4EBA;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x884C;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5F53;&#x591A;&#x4E2A;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x540C;&#x65F6;&#x8FDB;&#x884C; ECM&#xFF0C;&#x589E;&#x5F3A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5982;&#x4F55;&#x6574;&#x5408;&#x7A7A;&#x95F4;&#x534F;&#x8C03;&#x4EE5;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6CA1;&#x6709;&#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5B58;&#x5728;&#x9694;&#x79BB;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x4E0A;&#x7684;&#x6574;&#x5408;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x5FAE;&#x63A5;&#x89E6;&#x5370;&#x5237;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7B56;&#x7565;&#x6A21;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x5982;&#x4F55;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E0D;&#x540C;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x9648;&#x9E4F;&#x3002;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x9996;&#x5148;&#x5747;&#x5300;&#x5730;&#x5438;&#x9644;&#x5230;&#x805A; (&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x805A;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#xFF09; &#x90AE;&#x7968;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&quot;de-inked&quot;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#x514B;&#x670D;&#x4E86;&#x4F20;&#x7EDF;&#x5370;&#x5237;&#x672F;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5370;&#x82B1;&#x7A0E;&#x5D29;&#x6E83;&#x548C;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x8868;&#x9762;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x5C40;&#x9650;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x6574;&#x5408;&#x7A7A;&#x95F4;&#x5206;&#x9694;&#x56FE;&#x6848;&#x4E0E;&#x591A;&#x4E2A;&#x9648;&#x9E4F;&#xFF0C;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x50CF;&#x9884;&#x671F;&#x7684;&#x90A3;&#x6837;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x9694;&#x79BB;&#xFF0C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F62;&#x6210;&#x7C98;&#x8FDE;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E0E;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5728;&#x5355;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x66F2;&#x9762;&#x4E0A;&#x8DE8;&#x591A;&#x7EC4;&#x5206;&#x8868;&#x9762;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5206;&#x5F00;&#x4E2A;&#x522B;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x6765;&#x8C03;&#x89E3; ECM &#x7279;&#x5B9A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x529F;&#x80FD;&#x5408;&#x4F5C;&#x6307;&#x5357;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x548C;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;

&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x4E9A;&#x578B;&#x7684;&#x56FE;&#x6848;&#x591A;&#x7EC4;&#x5206;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A7A;&#x95F4;&#x9694;&#x79BB;&#x3002;

While it is well known that individual integrins are critical mediators of cell behavior, recent work has shown that when multiple types of integrins simultaneously engage the ECM, cell functions are enhanced. However, it is not known how integrins spatially coordinate to regulate cell adhesion because no reliable method exists to segregate integrins on the cell membrane. Here, we use a microcontact printing-based strategy to pattern multiple ECMs that bind distinct integrins in order to study how integrins might interact. In our technique, proteins are first adsorbed uniformly to a poly(dimethyl siloxane) stamp, and then selectively "de-inked." Our strategy overcomes several inherent limitations of conventional microcontact printing, including stamp collapse and limited functionality of the surface patterns. We show that integrins spatially segregate on surfaces patterned with multiple ECMs, as expected. Interestingly, despite spatial segregation of distinct integrins, cells could form adhesions and migrate across multicomponent surfaces as well as they do on single component surfaces. Together, our data indicate that although cells can segregate individual integrins on the cell surface to mediate ECM-specific binding, integrins function cooperatively to guide cell adhesion and migration.

Subcellular spatial segregation of integrin subtypes by patterned multicomponent surfaces.

S&#x26;#39;il est bien connu que les int&#xE9;grines individuelles sont des m&#xE9;diateurs essentiels du comportement des cellules, des travaux r&#xE9;cents ont montr&#xE9; que lorsque plusieurs types d&#x26;#39;int&#xE9;grines engager simultan&#xE9;ment l&#x26;#39;ECM, les fonctions cellulaires sont am&#xE9;lior&#xE9;es. Cependant, on ne sait pas comment les int&#xE9;grines dans l&#x26;#39;espace de coordonner de r&#xE9;glementer l&#x26;#39;adh&#xE9;sion cellulaire, car aucune m&#xE9;thode fiable permettant de s&#xE9;parer les int&#xE9;grines sur la membrane cellulaire. Ici, nous utilisons un micro-impression bas&#xE9;e sur la strat&#xE9;gie &#xE0; multiples motifs ECM qui lient les int&#xE9;grines distinctes afin d&#x26;#39;&#xE9;tudier la fa&#xE7;on dont les int&#xE9;grines pourraient interagir. Dans notre technique, les prot&#xE9;ines sont d&#x26;#39;abord adsorb&#xE9;s de mani&#xE8;re uniforme &#xE0; un poly (dim&#xE9;thyl siloxane) timbre, puis de mani&#xE8;re s&#xE9;lective &#x26;quot;d&#xE9;sencr&#xE9;e.&#x26;quot; Notre strat&#xE9;gie surmonte plusieurs limitations inh&#xE9;rentes &#xE0; l&#x26;#39;impression par microcontact conventionnel, y compris l&#x26;#39;effondrement de timbre et des fonctionnalit&#xE9;s limit&#xE9;es des motifs de surface. Nous montrons que les int&#xE9;grines spatialement s&#xE9;parer les motifs sur les surfaces avec ECM multiples, comme pr&#xE9;vu. Fait int&#xE9;ressant, malgr&#xE9; la s&#xE9;gr&#xE9;gation spatiale des int&#xE9;grines distinctes, les cellules pourraient former des adh&#xE9;rences et de migrer &#xE0; travers les surfaces multicomposants ainsi comme ils le font sur des surfaces de composants simples. Ensemble, nos donn&#xE9;es indiquent que, bien que les cellules peuvent s&#xE9;parer les int&#xE9;grines individuelles sur la surface de la cellule de m&#xE9;diation ECM-sp&#xE9;cifiques de liaison, les int&#xE9;grines fonctionner en coop&#xE9;ration afin de guider l&#x26;#39;adh&#xE9;sion cellulaire et la migration.

Subcellulaire la s&#xE9;gr&#xE9;gation spatiale des sous-types int&#xE9;grine par Patterned Surfaces multicomposant

Es ist bekannt, dass einzelne Integrine wichtige Mediatoren der Zelle Verhalten sind, hat j&uuml;ngsten Arbeiten gezeigt, wenn mehrere Typen von Integrine gleichzeitig ECM engagieren, Zelle Funktionen verbessert werden. Allerdings ist es nicht bekannt, wie Integrine r&auml;umlich koordinieren, um die Zelladh&auml;sion zu regulieren, weil keine zuverl&auml;ssige Methode vorhanden ist, um die Integrine auf der Zellmembran zu trennen. Hier verwenden wir eine Microcontact Drucken-basierte Strategie k&ouml;nnen Sie mehrere ECMs Mustern, die unterschiedliche Integrine binden, um zu studieren wie Integrine interagieren k&ouml;nnte. In unserer Technik Proteine adsorbiert zun&auml;chst einheitlich zu einem Poly (Dimethyl-Siloxan) Stempel und dann selektiv &quot;de-inked.&quot; Unsere Strategie &uuml;berwindet mehrere inh&auml;rente Beschr&auml;nkungen der herk&ouml;mmlichen Microcontact Druck inkl. Stempel Zusammenbruch und eingeschr&auml;nkte Funktionalit&auml;t der Oberfl&auml;che Muster. Wir zeigen, dass Integrine r&auml;umlich auf Oberfl&auml;chen, die mit mehreren ECMs, gemustert zu trennen, wie erwartet. Interessanterweise konnte Zellen trotz r&auml;umliche Trennung der verschiedenen Integrine Adh&auml;sionen bilden und Migration &uuml;ber Multikomponenten Oberfl&auml;chen ebenso wie auf Einzelkomponenten Oberfl&auml;chen. Zusammen, zeigen unsere Daten, dass zwar Zellen einzelne Integrine auf der Zelloberfl&auml;che, ECM-spezifische Bindungen vermitteln trennen k&ouml;nnen, Integrine kooperativ F&uuml;hrer Zelladh&auml;sion und Migration funktionieren.

Subzellulare r&auml;umliche Trennung der Integrin-Subtypen von gemusterten Multikomponenten-Oberfl&auml;chen.

Mentre &egrave; ben noto che le integrine individuali sono mediatori critiche del comportamento delle cellule, lavoro recente ha dimostrato che quando pi&ugrave; tipi di integrine impegnano simultaneamente l&#39;ECM, le funzioni della cellula vengono esaltate. Tuttavia, non &egrave; noto come le integrine spazialmente coordinano per regolare adesione cellulare perch&eacute; non esiste alcun metodo affidabile per segregare le integrine sulla membrana cellulare. Qui, usiamo una strategia basata su stampa microcontatto per pattern ECMs multiple che legano le integrine distinte per studiare come le integrine potrebbero interagire. Nella nostra tecnica, le proteine sono prima adsorbite uniformemente per un timbro (silossano dimetil) poli e poi selettivamente &quot;disinchiostrate.&quot; La nostra strategia supera diverse limitazioni intrinseche della stampa microcontatto convenzionali, tra cui timbro crollo e funzionalit&agrave; limitate dei modelli di superfici. Mostriamo che le integrine separare spazialmente su superfici modellate con ECMs multiple, come previsto. &Egrave; interessante notare che, nonostante la segregazione spaziale delle integrine distinte, cellule potrebbero formare aderenze e migrare attraverso superfici multicomponenti cos&igrave; come fanno su superfici del singolo componente. Insieme, i nostri dati indicano che anche se le cellule possono segregare i singole integrine sulla superficie delle cellule di mediare il legame specifico ECM, integrine funzionano cooperativamente all&#39;adesione cellulare guida e migrazione.

Segregazione spaziale sottocellulare di integrina sottotipi di fantasia superfici multicomponenti.

&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x3088;&#x304F;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6319;&#x52D5;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4E00;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x304C;&#x540C;&#x6642;&#x306B;ECM&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x5168;&#x304F;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x4E0A;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x304C;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x304C;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x8907;&#x6570;&#x306E;ECM&#x306B;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x306E;&#x5370;&#x5237;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x6700;&#x521D;&#x306B;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#xFF08;&#x30B8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B7;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#xFF09;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D7;&#x306B;&#x5747;&#x4E00;&#x306B;&#x5438;&#x7740;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B; &#x26;quot;&#x975E;&#x7D50;&#x3093;&#x3060;&#x3002;&#x26;quot;&#x5F53;&#x793E;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x3084;&#x8868;&#x9762;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x9650;&#x754C;&#x3092;&#x514B;&#x670D;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x304C;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x671F;&#x5F85;&#x901A;&#x308A;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;ECM&#x3001;&#x3067;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306B;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x96E2;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x7652;&#x7740;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x3067;&#x884C;&#x3046;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x591A;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x5168;&#x4F53;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;ECM-&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306E;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x63A5;&#x7740;&#x3084;&#x79FB;&#x52D5;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5354;&#x8ABF;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6A21;&#x69D8;&#x306E;&#x591A;&#x6210;&#x5206;&#x9762;&#x3067;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x7A7A;&#x9593;&#x5206;&#x96E2;

&#xAC1C;&#xBCC4; integrins &#xC140; &#xB3D9;&#xC791;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xB294; &#xC798; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xCD5C;&#xADFC; &#xC791;&#xD488; integrins&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC720;&#xD615;&#xC744; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; ECM &#xCC38;&#xC5EC;, &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAC15;&#xD654;&#xB294; &#xBCF4;&#xC774;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; integrins &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xBD84;&#xB9AC; integrins &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29;&#xC744; &#xD1B5;&#xC81C; &#xC870;&#xC815; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, microcontact &#xC778;&#xC1C4; &#xAE30;&#xBC18; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5EC;&#xB7EC; ECMs integrins &#xC218;&#xB3C4; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; integrins &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xD328;&#xD134;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xAE30;&#xC220; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xD3F4; &#xB9AC; (&#xB514; &#xBA54; &#xD2F8; &#xC2E4;&#xB85D; &#xC0B0;) &#xC2A4;&#xD0EC;&#xD504;&#xB97C; &#xADE0;&#xC77C; &#xD558; &#xAC8C; adsorbed &#xBA3C;&#xC800; &#xD558; &#xACE0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &quot;de-inked.&quot; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC804;&#xB7B5; &#xC2A4;&#xD0EC;&#xD504; &#xBD95;&#xAD34; &#xBC0F; &#xD45C;&#xBA74; &#xD328;&#xD134;&#xC758; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; microcontact &#xC778;&#xC1C4;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD55C;&#xACC4;&#xB97C; &#xADF9;&#xBCF5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; integrins &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC5EC;&#xB7EC; Ecms&#xC640; &#xBB34;&#xB2AC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC608;&#xC0C1; &#xB300;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; integrins&#xC758; &#xACF5;&#xAC04; &#xBD84;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xCC29;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xC218; &#xC788;&#xACE0; &#xAE61;&#xD1B5;&#xC774; &#xD45C;&#xBA74; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC640; &#xAC19;&#xC774; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xC140; &#xAC1C;&#xBCC4; integrins ECM &#xAD00;&#xB828; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xBE44;&#xB85D; integrins &#xC791;&#xB3D9; &#xD611;&#xB825; &#xAC00;&#xC774;&#xB4DC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAF43;&#xBB34;&#xB2AC; &#xAE61;&#xD1B5;&#xC774; &#xC11C;&#xD53C;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; integrin &#xD558;&#xC704;&#xC758; subcellular &#xACF5;&#xAC04; &#xBD84;&#xB9AC;.

Aunque es bien sabido que las integrinas individuales son mediadores cr&#xED;ticos del comportamiento de las c&#xE9;lulas, el trabajo reciente ha demostrado que cuando varios tipos de integrinas se dedican simult&#xE1;neamente a la MEC, las funciones celulares se han mejorado. Sin embargo, no se sabe c&#xF3;mo las integrinas espacialmente coordinar para regular la adhesi&#xF3;n celular debido a que no existe un m&#xE9;todo fiable para segregar las integrinas en la membrana celular. Aqu&#xED;, nosotros usamos un microcontacto de impresi&#xF3;n basado en la estrategia de ECM de patrones m&#xFA;ltiples que se unen a las integrinas diferentes con el fin de estudiar c&#xF3;mo las integrinas podr&#xED;an interactuar. En nuestra t&#xE9;cnica, las prote&#xED;nas son primero adsorbido de manera uniforme a un poli (dimetil siloxano) sello y, a continuaci&#xF3;n selectivamente &#x26;quot;de entintado.&#x26;quot; Nuestra estrategia supera varias limitaciones inherentes de impresi&#xF3;n por microcontacto convencional, incluyendo colapso sello y una funcionalidad limitada de los patrones superficiales. Se demuestra que las integrinas separar espacialmente en las superficies estampadas con el ECM m&#xFA;ltiples, como se esperaba. Curiosamente, a pesar de la segregaci&#xF3;n espacial de las integrinas diferentes, las c&#xE9;lulas pueden formar adherencias y migran a trav&#xE9;s de las superficies de m&#xFA;ltiples componentes, as&#xED; como lo hacen en superficies de los componentes individuales. En conjunto, nuestros datos indican que aunque las c&#xE9;lulas se pueden separar las integrinas individuales en la superficie celular para mediar ECM espec&#xED;ficos de uni&#xF3;n, las integrinas funcionan en conjunto para guiar a la adhesi&#xF3;n celular y la migraci&#xF3;n.

Ravi A. Desai

Department of Bioengineering

University of Pennsylvania

Microfabricated Post-Array-Detectors (mPADs): an Approach to Isolate Mechanical Forces

Ravi A. Desai

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Bioengineering

University of Pennsylvania

Microfabricated Post-Array-Detectors (mPADs): an Approach to Isolate Mechanical Forces

Department of Bioengineering