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Optimized Transfection Strategy for Expression and Electrophysiological Recording of Recombinant Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T Cells

The in vitro expression and electrophysiological recording of recombinant voltage-gated ion channels in cultured human embryonic kidney cells (HEK-293T) ...

University of Waterloo

&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x544A;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E8E;&#x8BB8;&#x591A;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x63D0;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x5728;&#x7A3B;&#x7530;&#x690E;&#x5B9E; stagnalis &#x4E2D;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x53D1;&#x751F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7269;&#x7406;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x5173;&#x7CFB;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x548C;&#x7F51;&#x7F57;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x4E92;&#x8865;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x5728;&#x7A3B;&#x7530;&#x690E;&#x5B9E;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x8981;&#x6C42; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x63A5;&#x5934;&#x5907;&#x9009;&#x6848;&#x6587;&#x7684;&#x7A3B;&#x7530;&#x690E;&#x5B9E;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x5BF9;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684; N &#x548C; P Q &#x578B;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x4EA4;&#x66FF;&#x62FC;&#x63A5;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x8FDB;&#x884C;&#x7269;&#x7406;&#x4EA4;&#x4E92;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x86CB;&#x767D; Mint1 &#x548C;&#x6728;&#x6876;&#xFF0C;&#x548C;&#x8BE5;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x5E9F;&#x9664;&#x540E;&#x7684;&#x6728;&#x6876;&#x6216;&#x84C4;&#x610F;&#x7834;&#x574F;&#x9499;&#x901A;&#x9053; Mint1 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x6CE8;&#x5C04;&#x540E;&#x7684; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x6572;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; Mint1 &#x548C;&#x6728;&#x6876;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5728;&#x6D3B;&#x52A8;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x975E; L &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#x548C;&#x65E0;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x5229;&#x7528;&#x4F18;&#x5316;&#x9499;&#x6761;&#x76EE;&#xFF0C;&#x5373;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x7269;&#x7406;&#x534F;&#x4F1A;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x548C;&#x7F51;&#x7F57;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x7ED3;&#x6784;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x4E4B;&#x95F4;&#x786E;&#x5B9A;&#x65E0;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;

We report here that unlike what was suggested for many vertebrate neurons, synaptic transmission in Lymnaea stagnalis occurs independent of a physical interaction between presynaptic calcium channels and a functional complement of SNARE proteins. Instead, synaptic transmission in Lymnaea requires the expression of a C-terminal splice variant of the Lymnaea homolog to mammalian N- and P/Q-type calcium channels. We show that the alternately spliced region physically interacts with the scaffolding proteins Mint1 and CASK, and that synaptic transmission is abolished following RNA interference knockdown of CASK or after the injection of peptide sequences designed to disrupt the calcium channel-Mint1 interactions. Our data suggest that Mint1 and CASK may serve to localize the non-L-type channels at the active zone and that synaptic transmission in invertebrate neurons utilizes a mechanism for optimizing calcium entry, which occurs independently of a physical association between calcium channels and SNARE proteins.

Calcium channel structural determinants of synaptic transmission between identified invertebrate neurons.

Nous rapportons ici que, contrairement &#xE0; ce qui a &#xE9;t&#xE9; sugg&#xE9;r&#xE9; pour les neurones de vert&#xE9;br&#xE9;s nombreux, la transmission synaptique dans Lymnaea stagnalis se produit ind&#xE9;pendamment d&#x26;#39;une interaction physique entre les canaux calciques pr&#xE9;synaptiques et un compl&#xE9;ment fonctionnelle des prot&#xE9;ines SNARE. Au lieu, la transmission synaptique chez Lymnaea n&#xE9;cessite l&#x26;#39;expression d&#x26;#39;un variant d&#x26;#39;&#xE9;pissage C-terminale de l&#x26;#39;homologue d&#x26;#39;Lymnaea mammif&#xE8;res N-canaux calciques et P / Q de type. Nous montrons que la r&#xE9;gion en alternance &#xE9;piss&#xE9; interagit physiquement avec des &#xE9;chafaudages prot&#xE9;ines du MINT1 et CASK, et que la transmission synaptique est supprim&#xE9;e &#xE0; la suite knockdown interf&#xE9;rence de l&#x26;#39;ARN du tonneau ou apr&#xE8;s l&#x26;#39;injection de s&#xE9;quences peptidiques con&#xE7;us pour perturber les canaux calciques-MINT1 interactions. Nos donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que MINT1 et CASK peut servir &#xE0; localiser les canaux non-L-Type &#xE0; la zone active et que la transmission synaptique dans les neurones d&#x26;#39;invert&#xE9;br&#xE9;s utilise un m&#xE9;canisme pour l&#x26;#39;entr&#xE9;e de calcium optimisation, qui se produit ind&#xE9;pendamment d&#x26;#39;une association physique entre les canaux calciques et les prot&#xE9;ines SNARE .

D&#xE9;terminants des canaux calciques structurels de la transmission synaptique entre neurones identifi&#xE9;s invert&#xE9;br&#xE9;s

Calcium-Kanal-strukturellen Determinanten der synaptischen &#xDC;bertragung zwischen Neuronen identifiziert Wirbellosen.

Segnaliamo qui che a differenza di quanto era stato ipotizzato per molti neuroni vertebrati, Trasmissione sinaptica in Lymnaea stagnalis si verifica indipendente di un&#39;interazione fisica tra i canali di calcio presinaptico e un complemento funzionale delle proteine SNARE. Trasmissione sinaptica in Lymnaea richiede invece, l&#39;espressione di una variante di splice C-terminale dell&#39;omologo di Lymnaea ai canali di calcio tipo P/Q e N - mammiferi. Mostriamo che la regione impiombata alternativamente fisicamente interagisce con le proteine ponteggi Mint1 e botte, e che la trasmissione sinaptica &egrave; abolita dopo atterramento di interferenza RNA di botte o dopo l&#39;iniezione di sequenze peptidiche progettato per distruggere le interazioni di canale-Mint1 di calcio. I nostri dati suggeriscono che la Mint1 e botte pu&ograve; servire per localizzare i canali di tipo non L presso la zona attiva e che la trasmissione sinaptica nei neuroni degli invertebrati utilizza un meccanismo per l&#39;ottimizzazione di ingresso di calcio, che si verifica indipendentemente da un&#39;associazione fisica tra canali di calcio e le proteine SNARE.

Determinanti strutturali di calcio canale di trasmissione sinaptica identificati tra i neuroni degli invertebrati.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x4F55;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x3001;Lymnaea stagnalis&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;SNARE&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;Lymnaea&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;N&#x304A;&#x3088;&#x3073;P / Q&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;Lymnaea&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EA4;&#x4E92;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x9818;&#x57DF;&#x304C;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306B;&#x8DB3;&#x5834;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;Mint1&#x3068;CASK&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;CASK&#x306E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;Mint1&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x59A8;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x6CE8;&#x5C04;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x5F8C;&#x306B;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;Mint1&#x3068;CASK&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x975E;L&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3084;&#x7121;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;SNARE&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x9593;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x95A2;&#x9023;&#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7121;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x6C7A;&#x5B9A;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC5EC;&#xAE30; &#xB9CE;&#xC740; &#xCC99;&#xCD94; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC74;&#xC758; &#xD55C; &#xBB34;&#xC5C7; &#xB2EC;&#xB9AC; Lymnaea stagnalis&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; presynaptic &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; SNARE &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCF4;&#xC644; &#xAC04;&#xC758; &#xC2E4;&#xC81C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC2E0;, Lymnaea&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; Lymnaea &#xCCB4; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; N &#xBC0F; P/Q &#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC2A4;&#xD50C;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; variant&#xC758; &#xC2DD;&#xC774; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xB294; &#xC811;&#xD569;&#xB41C; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; Mint1 &#xBC0F; &#xD1B5;, &#xC2A4; &#xCE90; &#xD3F4;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; &#xD3D0;&#xC9C0; RNA &#xAC04;&#xC12D; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xD1B5; &#xB610;&#xB294; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;-Mint1 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC124;&#xACC4; &#xB41C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xC8FC;&#xC785; &#xD6C4; &#xB2E4;&#xC74C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; Mint1 &#xBC0F; &#xD1B5; &#xD328;-&#xD0C0;&#xC785; &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBB34;&#xCC99; &#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; SNARE &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC04;&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xCE7C;&#xC298; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC744; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xC804;&#xC1A1; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xC0AC;&#xC774; &#xBB34;&#xCC99; &#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xB274;&#xB7F0; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Presentamos aqu&#xED; que a diferencia de lo que se sugiri&#xF3; para las neuronas de vertebrados muchos, la transmisi&#xF3;n sin&#xE1;ptica en Lymnaea stagnalis se produce independientemente de una interacci&#xF3;n f&#xED;sica entre los canales de calcio presin&#xE1;pticos y un complemento funcional de las prote&#xED;nas SNARE. En su lugar, la transmisi&#xF3;n sin&#xE1;ptica en Lymnaea requiere la expresi&#xF3;n de una variante de empalme C-terminal de la Lymnaea hom&#xF3;logo a mam&#xED;feros-N y P / Q canales de tipo de calcio. Se demuestra que la regi&#xF3;n alternativamente empalmados interacciona f&#xED;sicamente con la Mint1 andamios prote&#xED;nas y barricas, y que la transmisi&#xF3;n sin&#xE1;ptica es abolida despu&#xE9;s de ca&#xED;da la interferencia de ARN de barrica o despu&#xE9;s de la inyecci&#xF3;n de secuencias de p&#xE9;ptidos dise&#xF1;ados para interrumpir los canales de calcio Mint1 interacciones. Nuestros datos sugieren que Mint1 CASK y puede servir para localizar los canales no-L-tipo en la zona activa y que la transmisi&#xF3;n sin&#xE1;ptica en las neuronas de invertebrados utiliza un mecanismo para optimizar la entrada de calcio, que se produce de forma independiente de una asociaci&#xF3;n f&#xED;sica entre los canales de calcio y las prote&#xED;nas SNARE .

Determinantes estructurales de los canales de calcio transmisi&#xF3;n sin&#xE1;ptica entre las neuronas identificadas invertebrados

&#x5706;&#x9525;&#x9B54;&#x672F;&#x5E08;&#x80BD;&#x6BD2;&#x7D20; &omega;-&#x828B;&#x87BA;&#x6BD2;&#x7D20; MVIIA &#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F; N &#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x8F6C;&#x3001; &#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x7A97;&#x53E3;&#x963B;&#x6B62;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x73B0;&#x5728;&#x5728;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x9798;&#x5185;&#x6CE8;&#x5C04;&#x9547;&#x75DB;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x884C;&#x52A8;&#x7684; MVIIA &#x7A81;&#x53D8;&#x548C; tsA 201 &#x7EC6;&#x80DE;&#x6682;&#x6001;&#x8868;&#x8FBE;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x8868;&#x660E;&#x5148;&#x524D;&#x5047;&#x5B9A;&#x5916;&#x90E8;&#x57DF; IIIS5 H5 &#x5730;&#x533A; EF &#x624B;&#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x6539;&#x53D8;&#x5757;&#x7531;&#x6B27;&#x7C73;&#x8304;-&#x828B;&#x87BA;&#x6BD2;&#x7D20; GVIA &#x548C; MVIIA (&#x4E30;&#x3001; Z.&#x4F53;&#x80B2;&#x3001; &#x54C8;&#x7C73;&#x5FB7;&#xFF0C;J.&#x3001; &#x591A;&#x6797;&#xFF0C;C.&#x3001; Bosey&#x3001; G.M.&#x3001; Snutch&#x3001; T.&#x4F53;&#x80B2;&#x548C; Zamponi&#xFF0C;&#xFF08;2001 &#x5E74;&#xFF09; G.W.J.Biol.276&#xFF0C;&#x5316;&#x5B66; 15728 15735)&#xFF0C;&#x5DF2;&#x77E5;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD; GVIA &#x7684;&#x4E94;&#x4E2A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x5F15;&#x5165;&#x963B;&#x585E; &#xFF08;&#x548C;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x4E0B;&#x6E38;&#x7684; EF &#x624B;&#xFF09; &#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684; MVIIA &#x5757;&#xFF0C;&#x5728;&#x8F83;&#x5C0F;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x4E0E; GVIA &#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6709;&#x4E9B;&#x91CD;&#x53E0;&#xFF0C;MVIIA &#x548C; GVIA &#x5757;&#x4E0D;&#x5171;&#x4EAB;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x5728;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6; &#xFF08;&#x5927;&#x7EA6; 3 microm&#xFF09;&#xFF0C;MVIIA &#x53EF;&#x9006;&#x963B;&#x6B62; L-&#xFF0C;P/Q-&#xFF0C;&#x548C; R &#x578B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; T &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; MVIIA &#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x603B;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x5B88;&#x6052;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x9AD8;&#x7535;&#x538B;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x3002;MVIIA N &#x578B;&#x6C9F;&#x9053;&#x6548;&#x5E94;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; MVIIA &#x963B;&#x6B62;&#x4F11;&#x606F;&#x3001; &#x5F00;&#x653E;&#x548C;&#x706D;&#x6D3B;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;&#x867D;&#x7136; MVIIA &#x5757;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x4E0D;&#x662F;&#x7535;&#x538B;&#x7684;&#x4E5F;&#x4E0D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x9891;&#x7387;&#x7684;&#x4F46;&#x4ECE;&#x5757;&#x6062;&#x590D;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x5F3A;&#x70C8;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x5728;&#x51B2;&#x6D17;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6C34;&#x6BC1;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x53EF;&#x53D8;&#xFF0C;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x5F31;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x6F5C;&#x5728;&#x4E3E;&#x884C;&#x671F;&#x95F4;&#x6BD2;&#x7D20;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D; N &#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F62;&#x6210;&#x53EF;&#x9006;&#x548C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x5730;&#x914D;&#x5408; MVIIA &#x6A21;&#x578B;&#x3002;

&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x77AC;&#x6001;&#x8868;&#x793A;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x6027;&#x9499;&#x6E20;&#x9053; &omega;-&#x828B;&#x87BA;&#x6BD2;&#x7D20;&#x7531; GVIA &#x548C; MVIIA&#x3002;

The Conus magus peptide toxin omega-conotoxin MVIIA is considered an irreversible, specific blocker of N-type calcium channels, and is now in clinical trials as an intrathecal analgesic. Here, we have examined the action of MVIIA on mutant and wild type calcium channels transiently expressed in tsA-201 cells. Although we have shown previously that mutations in a putative external EF-hand motif in the domain IIIS5-H5 region alters block by both omega-conotoxin GVIA and MVIIA (Feng, Z. P., Hamid, J., Doering, C., Bosey, G. M., Snutch, T. P., and Zamponi, G. W. (2001) J. Biol. Chem. 276, 15728-15735), the introduction of five point mutations known to affect GVIA blocking (and located downstream of the EF-hand) affected MVIIA block to a smaller degree compared with GVIA. These data suggest that despite some overlap, MVIIA and GVIA block does not share identical channel structural determinants. At higher concentrations (approximately 3 microm), MVIIA reversibly blocked L-, P/Q-, and R-type, but not T-type channels, indicating that the overall architecture of the MVIIA site is conserved in all types of high voltage-activated calcium channels. A kinetic analysis of the MVIIA effects on the N-type channel showed that MVIIA blocked resting, open, and inactivated channels. Although the development of MVIIA block did not appear to be voltage-, nor frequency-dependent, the degree of recovery from block strongly depended on the potential applied during washout. Interestingly, the degree of washout was highly variable and appeared to weakly depend on the holding potential applied during toxin application. We propose a model in which N-type calcium channels can form both reversible and irreversible complexes with MVIIA.

Determinants of inhibition of transiently expressed voltage-gated calcium channels by omega-conotoxins GVIA and MVIIA.

Le Conus magus peptide toxine om&#xE9;ga-conotoxine MVIIA est consid&#xE9;r&#xE9; comme un ph&#xE9;nom&#xE8;ne irr&#xE9;versible, bloqueur sp&#xE9;cifique des canaux calciques de type N, et est actuellement en essais cliniques comme analg&#xE9;sique intrath&#xE9;cal. Ici, nous avons examin&#xE9; l&#x26;#39;action de MVIIA sur mutantes et sauvages canaux calciques de type transitoire exprim&#xE9;es dans le CST-201 cellules. Bien que nous l&#x26;#39;avons montr&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment que des mutations dans un putatif externe motif EF-hand dans le domaine IIIS5-H5 r&#xE9;gion modifie bloc &#xE0; la fois par les om&#xE9;ga-conotoxine GVIA et MVIIA (Feng, ZP, Hamid, J., Doering, C., Bosey, GM , Snutch, TP, et Zamponi, GW (2001) J. Biol. Chem. 276, 15728-15735), l&#x26;#39;introduction de cinq mutations ponctuelles connues pour affecter GVIA blocage (et situ&#xE9;e en aval du bloc EF-hand) affect&#xE9;e &#xE0; MVIIA dans une moindre mesure par rapport &#xE0; GVIA. Ces donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que malgr&#xE9; un certain chevauchement, MVIIA et GVIA bloc ne partage pas les d&#xE9;terminants de canaux identiques structurelles. &#xC0; des concentrations plus &#xE9;lev&#xE9;es (environ 3 microm), MVIIA r&#xE9;versible bloqu&#xE9;e L, P/Q- et R-type, mais pas canaux de type T, ce qui indique que l&#x26;#39;architecture globale du site MVIIA est conserv&#xE9;e dans tous les types de haute tension activ&#xE9; canaux calciques. Une analyse cin&#xE9;tique des effets MVIIA sur le canal de type N a montr&#xE9; que MVIIA bloqu&#xE9; de repos, les canaux ouverts, et inactiv&#xE9;. Bien que le d&#xE9;veloppement de MVIIA bloc ne semble pas y avoir de tension, ni d&#xE9;pendant de la fr&#xE9;quence, le degr&#xE9; de r&#xE9;cup&#xE9;ration du bloc d&#xE9;pend fortement du potentiel appliqu&#xE9; durant le lavage. Fait int&#xE9;ressant, le degr&#xE9; de lavage &#xE9;tait tr&#xE8;s variable et semble faiblement d&#xE9;pendent du potentiel de maintien appliqu&#xE9;e lors de l&#x26;#39;application de toxine. Nous proposons un mod&#xE8;le dans lequel les canaux calciques de type N peuvent former des complexes &#xE0; la fois r&#xE9;versibles et irr&#xE9;versibles avec MVIIA.

D&#xE9;terminants de l&#x26;#39;inhibition de la exprim&#xE9;e de mani&#xE8;re transitoire les canaux calciques voltage-d&#xE9;pendants par Omega-conotoxines GVIA et MVIIA

Determinanten der Hemmung von transient exprimiert spannungsabh&#xE4;ngige Kalziumkan&#xE4;le durch Omega-Conotoxine GVIA und MVIIA.

Tossina peptide Conus magus MVIIA omega-conotossina &egrave; considerato un irreversibile, specifico bloccante dei canali del calcio di tipo N ed &egrave; ora in studi clinici come analgesico intratecale. Qui, abbiamo esaminato l&#39;azione di MVIIA di mutanti e wild type calcio canali transitoriamente espresse nelle cellule di tsA-201. Anche se abbiamo dimostrato in precedenza che le mutazioni in un motivo esterno putativo di EF-mano nella regione del dominio IIIS5-H5 altera blocco dalla omega-conotossina GVIA sia MVIIA (Feng, Z. P., Hamid, J., Doering, C., Denis, G. M., Snutch, T. P. e Zamponi, W. G. (2001) j Biol Chem. 276, 15728-15735), l&#39;introduzione di mutazioni puntiformi cinque noti per influenzare GVIA blocco (e situato a valle di EF-hand) blocco MVIIA interessato a un grado inferiore rispetto ai GVIA. Questi dati suggeriscono che nonostante qualche sovrapposizione, MVIIA e GVIA blocco non condividere determinanti strutturali canale identici. A concentrazioni pi&ugrave; elevate (circa 3 microm), bloccato reversibilmente MVIIA L-, P/Q-, e R-type, ma non canali di tipo T, che indica che l&#39;architettura complessiva del sito MVIIA &egrave; conservato in tutti i tipi di canali del calcio attivati dal voltaggio elevato. Un&#39;analisi cinetica degli effetti MVIIA sul canale N-tipo ha dimostrato che MVIIA bloccato canali riposo, aperti e inattivati. Anche se lo sviluppo del blocco di MVIIA non sembrano essere tensione-, n&eacute; dipendente dalla frequenza, il grado di recupero dal blocco dipendeva fortemente il potenziale applicato durante il lavaggio. &Egrave; interessante notare che, il grado di washout &egrave; altamente variabile e appariva debolmente dipendono dall&#39;azienda potenziale applicato durante l&#39;applicazione della tossina. Vi proponiamo un modello nel quale N-tipo canali calcio possono formare complessi reversibili e irreversibili con MVIIA.

Determinanti di inibizione del calcio voltaggio-dipendenti transitoriamente espresso canali dalla omega-conotossina GVIA e MVIIA.

&#x5186;&#x9310;&#x9B54;&#x8853;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3C9;-&#x30B3;&#x30CE;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;MVIIA&#x306F;&#x3001;N&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306A;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x9AC4;&#x8154;&#x5185;&#x93AE;&#x75DB;&#x85AC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x3067;&#x73FE;&#x5728;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306B;TSA-201&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;MVIIA&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3C9;-&#x30B3;&#x30CE;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;GVIA&#x3068;MVIIA&#xFF08;&#x98A8;&#x6C34;&#x3001;ZP&#x3001;&#x30CF;&#x30DF;&#x30C9;&#x3001;J.&#x3001;Doering&#x3001;C.&#x3001;Bosey&#x3001;GM&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;IIIS5-H5&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x5916;&#x90E8;&#x306E;EF-&#x30CF;&#x30F3;&#x30C9;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3001;Snutch&#x3001;TP&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Zamponi&#x3001;GW&#xFF08;2001&#xFF09;J.&#x8BB8;&#x6587;&#x732E;&#x3002;276&#x3001;15728&#x304B;&#x3089;15735&#xFF09;&#x3001;GVIA&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;&#x3068;EF-&#x30CF;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306B;&#xFF09;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;MVIIA&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;5&#x70B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;GVIA&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x3088;&#x308A;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x90E8;&#x91CD;&#x8907;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;MVIIA&#x3068;GVIA&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x304C;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x5EA6;&#xFF08;&#x7D04;3&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xFF09;&#x3067;&#x3001;MVIIA&#x306F;&#x53EF;&#x9006;MVIIA&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x96FB;&#x5727;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x3067;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;L-&#x3001;P/Q-&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;R-&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;T&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3002; N&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;MVIIA&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;MVIIA&#x306F;&#x3001;&#x5B89;&#x9759;&#x6642;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; MVIIA&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x5727;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x306E;&#x5EA6;&#x5408;&#x3044;&#x304C;&#x5F37;&#x304F;&#x30A6;&#x30A9;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x6642;&#x306B;&#x5370;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30A6;&#x30A9;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x53EF;&#x5909;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x5F31;&#x3044;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306E;&#x9069;&#x7528;&#x6642;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4FDD;&#x6301;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x767B;&#x5834;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;N&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C;MVIIA&#x3067;&#x53EF;&#x9006;&#x3068;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x30AA;&#x30E1;&#x30AC;-&#x30B3;&#x30CE;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;GVIA&#x3068;MVIIA&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;

Conus magus &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB3C5; &#xC18C; &#xC624;&#xBA54;&#xAC00; conotoxin MVIIA N-&#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xB3CC;&#xC774;&#xD0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294;, &#xD2B9;&#xC815; &#xCC28;&#xB2E8; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xC5EC;&#xACA8;&#xC9C4;&#xB2E4; &#xACE0; intrathecal &#xC9C4;&#xD1B5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xAE08; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC0F; transiently tsA-201 &#xC140; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; MVIIA&#xC758; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF4;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; IIIS5 H5 &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1; &#xC678;&#xBD80; EF &#xC190;&#xC744; &#xC8FC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xC774; &#xBCC0;&#xACBD; &#xBE14;&#xB85D; &#xC624;&#xBA54;&#xAC00; conotoxin GVIA&#xC640; MVIIA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xB294; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; (Feng, Z. P.&#xAC00;, &#xC81C;&#xC774;, Doering, C. Bosey, G. M., Snutch, T. &#xD53C;, Zamponi, G. W. (2001) J. Biol. &#xD654;&#xD559; 276, 15728-15735), 5 &#xC810; &#xBCC0;&#xC774; GVIA&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xB3C4;&#xC785; GVIA&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xB354; &#xC791;&#xC740; &#xC815;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; MVIIA &#xBE14;&#xB85D; &#xCC28;&#xB2E8; (&#xBC0F; EF &#xC190;&#xC758; &#xD558;&#xB958;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58;). &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC77C;&#xBD80; &#xC911;&#xBCF5;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; MVIIA &#xBC0F; GVIA &#xBE14;&#xB85D; &#xB3D9;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xAD6C;&#xC870; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xACF5;&#xC720; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4; (&#xC57D; 3 microm), MVIIA &#xC5ED; &#xCC28;&#xB2E8; L-P/Q-, R-&#xD0C0;&#xC785;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; T-&#xD0C0;&#xC785; &#xCC44;&#xB110; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; MVIIA &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98; &#xB192;&#xC740; &#xC804;&#xC555; &#xD65C;&#xC131; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC885;&#xB958;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. N &#xD615; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; MVIIA &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D; MVIIA &#xD734;&#xC2DD; &#xC5F4;&#xACE0; &#xBD88;&#xD65C;&#xC131; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD588;&#xB2E4;. MVIIA &#xBE14;&#xB85D; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC804;&#xC555;-&#xB3C4; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xC885;&#xC18D; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;, &#xBE14;&#xB85D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD68C;&#xBCF5;&#xC758; &#xC815;&#xB3C4; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xD76C;&#xBBF8;&#xD558;&#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC720;&#xC2E4; &#xC815;&#xB3C4; &#xB192;&#xC740; &#xBCC0;&#xC218;&#xB294; &#xACE0; &#xC57D;&#xD558;&#xAC8C; &#xC9C0;&#xC8FC; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xB3C5; &#xC18C; &#xC801;&#xC6A9; &#xC911; &#xC801;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB4F1;&#xC7A5;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; N-&#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; MVIIA&#xB85C; &#xB418;&#xB3CC;&#xB9B4; &#xC218;&#xC640; &#xB3CC;&#xC774;&#xD0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD615;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

GVIA &#xBC0F; MVIIA transiently &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xCE7C;&#xC298;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xC624;&#xBA54;&#xAC00;-conotoxins&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC44;&#xB110;.

El p&#xE9;ptido Conus magus la toxina omega-conotoxina MVIIA se considera un bloqueador irreversible, espec&#xED;fico de los canales de calcio tipo N, y se encuentra actualmente en ensayos cl&#xED;nicos como un analg&#xE9;sico por v&#xED;a intratecal. Aqu&#xED;, hemos examinado la acci&#xF3;n de MVIIA de los canales de calcio mutantes y de tipo salvaje transitoriamente expresadas en la CST-201 c&#xE9;lulas. Aunque se ha demostrado previamente que las mutaciones en una supuesta externa EF-hand motivo en el dominio IIIS5-H5 regi&#xF3;n de bloque se altera tanto por &#xE1;cidos grasos omega-conotoxina GVIA y MVIIA (Feng, ZP, Hamid, J., Doering, C, Bosey, GM , Snutch, TP, y Zamponi, GW (2001) J. Biol.. Chem.. 276, 15728-15735), la introducci&#xF3;n de cinco mutaciones puntuales se sabe que afectan GVIA bloqueo (y situado aguas abajo del bloque de EF-mano) afectada MVIIA a en menor grado en comparaci&#xF3;n con GVIA. Estos datos sugieren que a pesar de algunas coincidencias, y el bloque de MVIIA GVIA no comparte id&#xE9;nticos determinantes estructurales del canal. A concentraciones m&#xE1;s altas (aproximadamente 3 micras), MVIIA reversiblemente bloqueada L, P/Q- y R-tipo, pero no de tipo T canales, lo que indica que la arquitectura general del sitio MVIIA se conserva en todos los tipos de circuitos de alta tensi&#xF3;n activado los canales de calcio. Un an&#xE1;lisis de la cin&#xE9;tica de los efectos MVIIA en el canal de tipo N mostr&#xF3; que MVIIA bloqueado los canales de descanso, abiertas, y se inactiva. Aunque el desarrollo de MVIIA bloque no parecen ser de voltaje, ni dependiente de la frecuencia, el grado de recuperaci&#xF3;n de bloque fuertemente dependiente del potencial aplicado durante el lavado. Curiosamente, el grado de lavado fue muy variable y parec&#xED;a depender d&#xE9;bilmente sobre el potencial de mantenimiento aplicado durante la aplicaci&#xF3;n de toxina. Proponemos un modelo en el que N-tipo de canales de calcio pueden formar complejos, tanto reversibles como irreversibles con MVIIA.

Factores determinantes de la inhibici&#xF3;n de la transitoriamente expres&#xF3; canales de calcio voltaje-dependientes de Omega-conotoxinas GVIA y MVIIA

&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x8BC4;&#x4F30;&#x548C;&#x65E0;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D; Cav2 &#x9499;&#x901A;&#x9053; &#xFF08;N &#x578B;&#x548C; P Q &#x578B;&#xFF09; &#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x7A3B;&#x7530;&#x690E;&#x5B9E; stagnalis &#x5206;&#x79BB;&#x8BE5;&#x8F6F;&#x4F53;&#x52A8;&#x7269;&#x9891;&#x9053; (LCav2a) &#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x9488;&#x5BF9;&#x76EE;&#x6807;&#x819C;&#x548C;&#x80BA;&#x9759;&#x8109;&#x53EF;&#x523B;&#x5F55; tsA 201 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x53EA;&#x65F6;&#x9996;&#x5148; 44 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684; LCav2a &#x66FF;&#x6362;&#x4E3A;&#x76F8;&#x5E94;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x5927;&#x9F20; Cav2.1&#x3002;&#x5F53;&#x4E0E;&#x5927;&#x9F20;&#x8F85;&#x52A9;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x7684; LCav2a-5 coexpressed&#39;rbA &#x7C7B;&#x4F3C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684; N &#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x5931;&#x6D3B;&#x3001; &#x7F3A;&#x4E4F;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x706D;&#x6D3B;&#x3001; &#x94A1;&#x79BB;&#x5B50;&#x548C;&#x9549;&#x5757;&#x4F18;&#x60E0;&#x6E17;&#x900F;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x672C;&#x673A;&#x7A3B;&#x7530;&#x690E;&#x5B9E;&#x9499;&#x7535;&#x6D41;&#xFF0C;LCav2a-5 &#x62A5;&#x544A; &#39; rbA &#x901A;&#x9053;&#x662F;&#x65E0;&#x52A8;&#x4E8E;&#x8877;&#x7684;&#x6B27;&#x7C73;&#x8304;-&#x828B;&#x87BA;&#x6BD2;&#x7D20; GVIA micromolar &#x6D53;&#x5EA6;&#x548C;&#x4E0D;&#x53D7;&#x785D;&#x82EF;&#x5730;&#x5E73;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x786E;&#x8BA4;&#x5B83;&#x4E0D; L &#x578B;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;LCav2a 5&#39;rbA &#x901A;&#x9053;&#x51E0;&#x4E4E;&#x662F;&#x5B8C;&#x5168;&#x548C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x8F6C;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6291;&#x5236;&#x9E1F;&#x82F7; 5&#39;-3-O-(&#x786B;&#x4EE3;) &#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#xFF0C;&#x4F46;&#x672A;&#x4F5C;&#x89C4;&#x5B9A;&#x7684; syntaxin1&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x65E0;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x4EE5;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x8C03;&#x5236;&#x4ECE;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x540C;&#x884C;&#x3002;

&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x8C03;&#x63A7;&#x65E0;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x9499;&#x901A;&#x9053; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x540C;&#x6E90;&#x3002;

Here we report the first assessment of the expression and modulation of an invertebrate alpha1 subunit homolog of mammalian presynaptic Cav2 calcium channels (N-type and P/Q-type) in mammalian cells. Our data show that molluscan channel (LCav2a) isolated from Lymnaea stagnalis is effectively membrane-targeted and electrophysiologically recordable in tsA-201 cells only when the first 44 amino acids of LCav2a are substituted for the corresponding region of rat Cav2.1. When coexpressed with rat accessory subunits, the biophysical properties of LCav2a-5'rbA resemble those of mammalian N-type calcium channels with respect to activation and inactivation, lack of pronounced calcium dependent inactivation, preferential permeation of barium ions, and cadmium block. Consistent with reports of native Lymnaea calcium currents, the LCav2a-5'rbA channel is insensitive to micromolar concentrations of omega-conotoxin GVIA and is not affected by nifedipine, thus confirming that it is not of the L-type. Interestingly, the LCav2a-5'rbA channel is almost completely and irreversibly inhibited by guanosine 5'-3-O-(thio)triphosphate but not regulated by syntaxin1, suggesting that invertebrate presynaptic calcium channels are differently modulated from their vertebrate counterparts.

Expression and modulation of an invertebrate presynaptic calcium channel alpha1 subunit homolog.

Nous rapportons ici la premi&#xE8;re &#xE9;valuation de l&#x26;#39;expression et la modulation d&#x26;#39;un invert&#xE9;br&#xE9; alpha1 homologue sous-unit&#xE9; de mammif&#xE8;res pr&#xE9;synaptiques CAV2 canaux calciques (de type N et P / Q-type) dans les cellules de mammif&#xE8;res. Nos donn&#xE9;es montrent que les mollusques canal (LCav2a) isol&#xE9;s &#xE0; partir de Lymnaea stagnalis est effectivement la membrane cible et &#xE9;lectrophysiologique enregistrable dans le CST-201 cellules seulement lorsque les 44 premiers acides amin&#xE9;s de LCav2a sont substitu&#xE9;s &#xE0; la r&#xE9;gion correspondante de rat Cav2.1. Lorsque co-exprim&#xE9; avec sous-unit&#xE9;s accessoires chez le rat, les propri&#xE9;t&#xE9;s biophysiques de LCav2a-5&#x26;#39;rbA ressemblent &#xE0; ceux de mammif&#xE8;res canaux calciques de type N en ce qui concerne l&#x26;#39;activation et d&#x26;#39;inactivation, le manque de calcium inactivation prononc&#xE9;e &#xE0; charge, la perm&#xE9;ation pr&#xE9;f&#xE9;rentielle des ions baryum, le cadmium et le bloc. Conform&#xE9;ment aux rapports de natifs courants calciques Lymnaea, le canal LCav2a-5&#x26;#39;rbA est insensible aux concentrations micromolaires d&#x26;#39;acides gras om&#xE9;ga-conotoxine GVIA et n&#x26;#39;est pas affect&#xE9; par la nif&#xE9;dipine, confirmant ainsi que ce n&#x26;#39;est pas de la L-Type. Int&#xE9;ressant, le canal LCav2a-5&#x26;#39;rbA est presque compl&#xE8;tement et de mani&#xE8;re irr&#xE9;versible inhib&#xE9;e par la guanosine 5&#x26;#39;-3-O-(thio) triphosphate, mais pas r&#xE9;gul&#xE9;e par syntaxin1, ce qui indique que les canaux calciques pr&#xE9;synaptiques invert&#xE9;br&#xE9;s sont diff&#xE9;remment modul&#xE9; &#xE0; partir de leurs homologues vert&#xE9;br&#xE9;s.

Expression et modulation d&#x26;#39;un homologue invert&#xE9;br&#xE9;s canal de calcium pr&#xE9;synaptique Subunit Alpha1

Expression und Modulation eines wirbellosen pr&#xE4;synaptischen Calcium-Kanal-alpha1-Untereinheit homolog.

Qui riportiamo la prima valutazione dell&#39;espressione e la modulazione di un omologo di subunit&agrave; alfa1 invertebrati di mammiferi presinaptiche Cav2 calcio canali (tipo N e tipo P/Q) in cellule di mammifero. I nostri dati mostrano che canale cotti (LCav2a) isolato da Lymnaea stagnalis &egrave; efficacemente mirati a membrana e destre registrabili in tsA-201 cellule solo quando i primo 44 amminoacidi di LCav2a sono sostituiti per la corrispondente regione del ratto Cav2.1. Quando coespressi con subunit&agrave; accessorie ratto, le propriet&agrave; biofisiche di LCav2a-5&#39;rbA assomigliano a quelle dei mammiferi canali di calcio di tipo N rispetto alla attivazione ed inattivazione, mancanza di inattivazione dipendente calcio pronunciato, preferenziale permeazione degli ioni bario e blocco di cadmio. Coerente con i rapporti di native Lymnaea correnti di calcio, il LCav2a-5&#39;rbA canale &egrave; insensibile alle concentrazioni micromolari di omega-conotossina GVIA e non &egrave; influenzata dalla nifedipina, confermando cos&igrave; che non &egrave; del tipo L. Interessante, il LCav2a-5 &#39;rbA canale &egrave; quasi completamente e irreversibilmente inibito da guanosina 5&#39; trifosfato - O-(thio)-3, ma non regolato da syntaxin1, suggerendo che canali calcio presinaptico invertebrati sono modulati diversamente dalle loro controparti vertebrati.

Espressione e la modulazione di un omologo invertebrati calcio presinaptico canale alpha1 subunit&agrave;.

&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3067;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;CAV2&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;N&#x578B;&#x3068;P / Q&#x578B;&#xFF09;&#x306E;&#x7121;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x3B1;1&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x67FB;&#x5B9A;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;Lymnaea stagnalis&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8EDF;&#x4F53;&#x52D5;&#x7269;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;LCav2a&#xFF09;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;LCav2a&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;44&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x304C;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;Cav2.1&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;TSA-201&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x8A18;&#x9332;&#x3092;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;LCav2a-5&#x26;#39;rbA&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306A;&#x6D78;&#x900F;&#x3001;&#x30AB;&#x30C9;&#x30DF;&#x30A6;&#x30E0;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;N&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;Lymnaea&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;LCav2a-5&#x26;#39;rbA&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3C9;-&#x30B3;&#x30CE;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;GVIA&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x920D;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;L-&#x578B;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3001;&#x30CB;&#x30D5;&#x30A7;&#x30B8;&#x30D4;&#x30F3;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;LCav2a-5&#x26;#39;rbA&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x307B;&#x307C;&#x5B8C;&#x5168;&#x3067;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306B;5&#x26;#39;-3-O-&#xFF08;&#x30C1;&#x30AA;&#xFF09;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304F;syntaxin1&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x7121;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5909;&#x8ABF;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x7121;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x3B1;1&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x8ABF;&#x7BC0;

&#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; presynaptic Cav2 &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; (N &#xD615; &#xBC0F; P/Q &#xD0C0;&#xC785; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;)&#xC758; &#xBB34;&#xCC99; &#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; alpha1 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xCCB4;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870; &#xC2DD;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xD3C9;&#xAC00; &#xBCF4;&#xACE0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; molluscan &#xCC44;&#xB110; (LCav2a) Lymnaea stagnalis&#xC5D0;&#xC11C; &#xC808;&#xC5F0; &#xC774;&#xBA70; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1; &#xD55C; electrophysiologically &#xAE30;&#xB85D; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; tsA-201 &#xC140;&#xC5D0; Lcav2a&#xC758; &#xCC98;&#xC74C; 44 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC950; cav2.1&#xC758; &#xD574;&#xB2F9; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xCCB4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC5EC;. &#xC950; &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC; subunits, LCav2a-5&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xC18D;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; coexpressed &#xB54C; &#39; rbA &#xB2EE;&#xC740; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; N-&#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;, &#xBC1C;&#xC74C;&#xB41C; &#xCE7C;&#xC298; &#xC885;&#xC18D; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;, &#xBC14; &#xB968; &#xC774;&#xC628;&#xACFC; &#xCE74;&#xB4DC;&#xBBB4; &#xBE14;&#xB85D;&#xC758; &#xD2B9;&#xD61C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC758;. &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; Lymnaea &#xCE7C;&#xC298; &#xC804;&#xB958;, LCav2a-5&#xC758; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#39; rbA &#xCC44;&#xB110; &#xC624;&#xBA54;&#xAC00; conotoxin GVIA&#xC758; micromolar &#xC9D1;&#xC911;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; L &#xD615;&#xC758; &#xC548;&#xC740; &#xD655;&#xC778; nifedipine&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, LCav2a 5&#39;rbA &#xCC44;&#xB110;&#xC740; &#xAC70;&#xC758; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xACE0; irreversibly guanosine 5&#39;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;-3-O-(thio) &#xC0BC;&#xC778;&#xC0B0; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; syntaxin1, &#xBB34;&#xCC99; &#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; presynaptic &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xCC99;&#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xB4E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB974;&#xAC8C; &#xBCC0;&#xC870;&#xB294; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD1B5;&#xC81C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294;&#xB2E4;.

&#xC2DD; &#xBC0F; &#xBB34;&#xCC99; &#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; presynaptic &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; alpha1 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xCCB4;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;.

Aqu&#xED; se presenta la primera evaluaci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n y la modulaci&#xF3;n de un hom&#xF3;logo de la subunidad alfa1 de invertebrados de los mam&#xED;feros los canales de calcio presin&#xE1;pticos CAV2 (tipo N y P / Q-tipo) en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero. Nuestros datos muestran que los moluscos canal (LCav2a) aislado de Lymnaea stagnalis es efectivamente membrana espec&#xED;fica y electrofisiol&#xF3;gicamente grabable en TSA-201 c&#xE9;lulas s&#xF3;lo cuando los primeros 44 amino&#xE1;cidos de LCav2a son sustituidos por la regi&#xF3;n correspondiente de rata Cav2.1. Cuando coexpresan con subunidades accesorias de rata, las propiedades biof&#xED;sicas de LCav2a-5&#x26;#39;rbA parecen a los de mam&#xED;feros canales de calcio del tipo N con respecto a la activaci&#xF3;n y desactivaci&#xF3;n, la falta de inactivaci&#xF3;n calcio pronunciado dependiente, permeaci&#xF3;n preferencial de iones de bario, y el bloque de cadmio. De acuerdo con informes de las corrientes de calcio nativas Lymnaea, el canal LCav2a-5&#x26;#39;rbA es insensible a las concentraciones micromolares de GVIA omega-conotoxina y no es afectado por la nifedipina, confirmando as&#xED; que no es del tipo L. Curiosamente, el canal LCav2a-5&#x26;#39;rbA es casi completamente e irreversiblemente inhibida por guanosina 5&#x26;#39;-3-O-(tio) trifosfato pero no regulada por syntaxin1, lo que sugiere que los canales de calcio son invertebrados presin&#xE1;pticos diferente modulada de sus hom&#xF3;logos de vertebrados.

Expresi&#xF3;n y modulaci&#xF3;n de un invertebrado Hom&#xF3;logo presin&#xE1;ptica de canales de calcio subunidad alfa1

&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x6709;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x5047;&#x8BBE;&#x9A7E;&#x8F66;&#x6216;&#x50AC;&#x5316;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7684;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7279;&#x5B9A;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x51C6;&#x5907;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5708;&#x5957;&#x3001; &#x7A81;&#x89E6;&#x548C;&#x7F51;&#x7F57;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x673A;&#x5236;&#x7684; Ca2 +-&#x89E6;&#x53D1;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x8FC7;&#x5269;&#x7684;&#x5916;&#x6E90;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x8DB3;&#x591F;&#x5757;&#x7F51;&#x7F57;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9E;&#x4E0D;&#x6291;&#x5236; Ca2 + &#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3001; &#x591A;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x6216;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x7F51;&#x7F57;&#x548C;&#x7A81;&#x89E6;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x5F71;&#x54CD;&#x6709;&#x9650;&#xFF0C;&#x4F46;&#x9AD8;&#x5242;&#x91CF;&#x7684;&#x7CDC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x5904;&#x7406;&#x663E;&#x8457;&#x6291;&#x5236;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x4F4E;&#x5242;&#x91CF;&#x7684;&#x7CDC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x5BF9; Ca2 + &#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x6216;&#x591A;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x5E76;&#x65E0;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E76;&#x672A;&#x6539;&#x53D8;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x66F4;&#x76F4;&#x63A5;&#x5730;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x89E6;&#x53D1;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x9014;&#x5F84;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x5708;&#x5957;&#x3001; &#x7A81;&#x89E6;&#x548C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7ACB;&#x5373;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F19;&#x4F34;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x80DE;&#x9636;&#x6BB5;&#x9664;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x53EF;&#x80FD;&#x4ECD;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x89E6;&#x53D1;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;

&#x89E6;&#x53D1;&#x9499;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x6536;&#x76CA;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;

Complexes of specific presynaptic proteins have been hypothesized to drive or catalyze the membrane fusion steps of exocytosis. Here we use a stage-specific preparation to test the roles of SNAREs, synaptotagmin, and SNARE-binding proteins in the mechanism of Ca2+-triggered membrane fusion. Excess exogenous proteins, sufficient to block SNARE interactions, did not inhibit either the Ca2+ sensitivity, extent, or kinetics of fusion. In contrast, despite a limited effect on SNARE and synaptotagmin densities, treatments with high doses of chymotrypsin markedly inhibited fusion. Conversely, low doses of chymotrypsin had no effect on the Ca2+ sensitivity or extent of fusion but did alter the kinetic profile, indicating a more direct involvement of other proteins in the triggered fusion pathway. SNAREs, synaptotagmin, and their immediate binding partners are critical to exocytosis at a stage other than membrane fusion, although they may still influence the triggered steps.

Calcium-triggered membrane fusion proceeds independently of specific presynaptic proteins.

Complexes de prot&#xE9;ines sp&#xE9;cifiques pr&#xE9;synaptiques ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;mis l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se de conduire ou de catalyser les &#xE9;tapes de fusion membranaire de l&#x26;#39;exocytose. Ici, nous utilisons une pr&#xE9;paration sp&#xE9;cifique au stade de tester les r&#xF4;les des collets, synaptotagmine et SNARE-prot&#xE9;ines de liaison dans le m&#xE9;canisme de Ca2 + fusion membranaire d&#xE9;clench&#xE9;e. Exc&#xE9;dent prot&#xE9;ines exog&#xE8;nes, suffisantes pour bloquer les interactions SNARE, n&#x26;#39;a pas inhib&#xE9; soit le Ca 2 + de sensibilit&#xE9;, mesure, ou la cin&#xE9;tique de la fusion. En revanche, en d&#xE9;pit d&#x26;#39;un effet limit&#xE9; sur SNARE et les densit&#xE9;s synaptotagmine, les traitements avec des doses &#xE9;lev&#xE9;es de la chymotrypsine inhib&#xE9;e de fa&#xE7;on marqu&#xE9;e la fusion. Inversement, de faibles doses de chymotrypsine n&#x26;#39;a eu aucun effet sur le Ca2 + de sensibilit&#xE9; ou l&#x26;#39;&#xE9;tendue de la fusion, mais ne modifie pas le profil cin&#xE9;tique, indiquant une implication plus directe des prot&#xE9;ines d&#x26;#39;autres dans la voie de fusion d&#xE9;clench&#xE9;e. SNARE, synaptotagmine, et leurs partenaires de liaison imm&#xE9;diates sont indispensables &#xE0; l&#x26;#39;exocytose &#xE0; un stade autre que la fusion membranaire, m&#xEA;me si elles peuvent encore influencer les &#xE9;tapes d&#xE9;clench&#xE9;es.

Calcium-d&#xE9;clench&#xE9; Fusion membranaire Recettes des Ind&#xE9;pendamment de prot&#xE9;ines sp&#xE9;cifiques pr&#xE9;synaptiques

Calcium-aktivierten Membranfusion erfolgt unabh&#xE4;ngig von spezifischen pr&#xE4;synaptischen Proteine.

Complessi di proteine presinaptiche specifiche hanno ipotizzati per guidare o catalizzare i passaggi di fusione di membrana di esocitosi. Qui usiamo una fase specifica preparazione per testare i ruoli di insidie, SHP2 e proteine SNARE-associazione nel meccanismo di Ca2 +-innescata la fusione della membrana. Eccesso proteine esogene, sufficiente a blocco SNARE interazioni, non ha fatto inibire il Ca2 + sensibilit&agrave;, misura o cinetica di fusione. Al contrario, nonostante un limitato effetto sulla densit&agrave; SNARE e SHP2, trattamenti con alte dosi di chimotripsina inibiscono marcatamente fusion. Al contrario, dosi basse di chimotripsina ha avuto alcun effetto sulla misura della fusione o Ca2 + sensibilit&agrave; ma hanno modificato il profilo cinetico, che indica un pi&ugrave; diretto coinvolgimento di altre proteine nella via della fusione innescata. SNAREs, SHP2 e loro immediata associazione partner sono fondamentali per esocitosi in una fase diversa da fusione di membrana, anche se essi possono ancora influenzare la procedura innescata.

Fusione di membrana attivata da calcio procede indipendentemente dalle specifiche proteine presinaptiche.

&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30BF;&#x30B0;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x3068;Ca2 +&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;SNARE&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SNARE&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x904E;&#x5270;&#x306A;&#x5916;&#x200B;&#x200B;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x306E;Ca2 +&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x3001;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;SNARE&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30BF;&#x30B0;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x30AD;&#x30E2;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x9AD8;&#x7528;&#x91CF;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x878D;&#x5408;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;&#x30AD;&#x30E2;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x4F4E;&#x7528;&#x91CF;&#x306F;&#x3001;&#x878D;&#x5408;&#x306E;Ca2 +&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3084;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x878D;&#x5408;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30BF;&#x30B0;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5373;&#x6642;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x9032;&#x884C;&#x3059;&#x308B;

&#xD2B9;&#xC815; presynaptic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xB610;&#xB294; exocytosis &#xB9C9; &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xACC4; &#xCD09;&#xB9E4; &#xAC00;&#xC124; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Ca2 +&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0;&#xC11C; SNAREs, synaptotagmin, &#xC62C; &#xBB34; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xBB34;&#xB300; &#xAD00;&#xB828; &#xC900;&#xBE44;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;-&#xB9C9; &#xD4E8;&#xC804; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ca2 + &#xAC10;&#xB3C4;, &#xBC94;&#xC704;, &#xB610;&#xB294; &#xC735;&#xD569;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xACFC;&#xB3C4; exogenous &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xBE14;&#xB85D; &#xBB34; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xC62C; &#xBB34;&#xC640; synaptotagmin &#xBC00;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xBC94;&#xC6A9;&#xC131;&#xC758; &#xACE0;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB294; &#xD4E8;&#xC804; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC800;&#xD574;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C;, &#xBC94;&#xC6A9;&#xC131;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; Ca2 + &#xAC10;&#xB3C4; &#xB610;&#xB294; &#xC735;&#xD569;&#xC758; &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xB41C; &#xD4E8;&#xC804; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xCC38;&#xC5EC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD588; &#xC5B4;. &#xBE44;&#xB85D; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC601;&#xD5A5; sNAREs, synaptotagmin, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC989;&#xAC01;&#xC801;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xB294; exocytosis &#xB9C9; &#xD4E8;&#xC804; &#xC774;&#xC678;&#xC758; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;.

&#xCE7C;&#xC298; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; &#xB9C9; &#xD4E8;&#xC804; &#xD2B9;&#xC815; presynaptic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C4;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Los complejos de prote&#xED;nas espec&#xED;ficas presin&#xE1;pticos han planteado la hip&#xF3;tesis de conducir o catalizar los pasos de fusi&#xF3;n de la membrana de la exocitosis. Aqu&#xED; se utiliza una etapa de preparaci&#xF3;n espec&#xED;fica para probar las funciones de trampas, sinaptotagmina, y las prote&#xED;nas SNARE en el mecanismo de uni&#xF3;n de Ca2 + activada por la fusi&#xF3;n de membranas. El exceso de prote&#xED;nas ex&#xF3;genas, suficiente para bloquear las interacciones SNARE, no inhibi&#xF3; ni la sensibilidad de Ca2 +, la extensi&#xF3;n o la cin&#xE9;tica de la fusi&#xF3;n. En contraste, a pesar de un efecto limitado sobre SNARE y densidades sinaptotagmina, los tratamientos con altas dosis de quimotripsina marcadamente inhibida fusi&#xF3;n. A la inversa, las dosis bajas de quimotripsina tuvo ning&#xFA;n efecto sobre la sensibilidad de Ca2 + o extensi&#xF3;n de la fusi&#xF3;n, pero alter&#xF3; el perfil cin&#xE9;tico, lo que indica una participaci&#xF3;n m&#xE1;s directa de otras prote&#xED;nas en la v&#xED;a de fusi&#xF3;n disparado. Trampas, sinaptotagmina, y sus socios de uni&#xF3;n inmediatas son fundamentales para la exocitosis en una etapa distinta de la fusi&#xF3;n de membranas, aunque todav&#xED;a pueden influir en las medidas activadas.

De calcio activados por fusi&#xF3;n de la membrana procede Independientemente de prote&#xED;nas espec&#xED;ficas presin&#xE1;pticos

&#x5728;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x4E0E;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x91CA;&#x653E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x8026;&#x5408;&#x7684;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x5F97;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EF;&#x80FD;&#x76F4;&#x63A5;&#x5BF9;&#x7A81;&#x89E6;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x53CD;&#x9988;&#x610F;&#x89C1;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x6D88;&#x6781;&#x8C03;&#x8282;&#x9499;&#x6761;&#x76EE;&#x548C;&#x95F4;&#x63A5;&#x6D89;&#x53CA;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4FE1;&#x4F7F;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;&#x5355;&#x4E2A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4ECE;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x548C;&#x65E0;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x9776;&#x5411;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x65B0;&#x9896;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x9700;&#x8981;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x5F00;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x7684;&#x5F53;&#x524D;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x4E0E;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x91CA;&#x653E;&#x673A;&#x68B0;&#x3002;

In vertebrates, the physical coupling between presynaptic calcium channels and synaptic vesicle release proteins enhances the efficiency of neurotransmission. Recent evidence indicates that these synaptic proteins may feedback directly on synaptic release by negatively regulating calcium entry, and indirectly through pathways involving second messenger molecules. Studies of individual neurons from both vertebrates and invertebrates have provided novel insights into the roles of scaffolding proteins in calcium channel targeting and neurotransmitter release. These studies require us to expand current models of synaptic transmission.

Functional interactions between presynaptic calcium channels and the neurotransmitter release machinery.

Chez les vert&#xE9;br&#xE9;s, le couplage physique entre les canaux calciques pr&#xE9;synaptiques et synaptiques lib&#xE8;rent des prot&#xE9;ines des v&#xE9;sicules am&#xE9;liore l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de la neurotransmission. Des donn&#xE9;es r&#xE9;centes indiquent que ces prot&#xE9;ines synaptiques peut commentaires directement sur la lib&#xE9;ration synaptique en r&#xE9;gulant n&#xE9;gativement l&#x26;#39;entr&#xE9;e du calcium, et indirectement par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire des voies impliquant des mol&#xE9;cules de seconds messagers. Les &#xE9;tudes de neurones individuels de deux vert&#xE9;br&#xE9;s et les invert&#xE9;br&#xE9;s ont fourni des informations nouvelles dans les r&#xF4;les de prot&#xE9;ines d&#x26;#39;&#xE9;chafaudage dans le ciblage des canaux calciques et la lib&#xE9;ration des neurotransmetteurs. Ces &#xE9;tudes nous obligent &#xE0; &#xE9;largir les mod&#xE8;les actuels de la transmission synaptique.

Interactions fonctionnelles entre les canaux calciques pr&#xE9;synaptiques et la lib&#xE9;ration des neurotransmetteurs de machines

Funktionelle Wechselwirkungen zwischen pr&#xE4;synaptischen Kalziumkan&#xE4;le und die Freisetzung von Neurotransmittern Maschinen.

Nei vertebrati, l&#39;accoppiamento fisico tra canali calcio presinaptico e proteine rilascio Vescicola sinaptica migliora l&#39;efficienza della neurotrasmissione. Recenti evidenze indicano che queste proteine sinaptiche possono feedback direttamente sul rilascio sinaptico regolando negativamente entrata di calcio e indirettamente attraverso percorsi che coinvolgono molecole di secondo messaggero. Studi di singoli neuroni vertebrati e invertebrati hanno fornito nuove intuizioni i ruoli delle proteine ponteggi nel canale di targeting e neurotrasmettitore rilascio del calcio. Questi studi ci impongono di espandere i modelli attuali della trasmissione sinaptica.

Interazioni funzionali tra canali calcio presinaptico e neurotrasmettitore rilasciano macchinari.

&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x9593;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x8CA0;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x306B;&#x30BB;&#x30AB;&#x30F3;&#x30C9;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x5206;&#x5B50;&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x3068;&#x7121;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304B;&#x3089;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8DB3;&#x5834;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x5C55;&#x958B;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x6A5F;&#x68B0;&#x9593;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;

&#xCC99;&#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C;, presynaptic &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC04;&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xACB0;&#xD569; neurotransmission&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xC99D;&#xAC70;&#xAC00; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xCE7C;&#xC298; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCC99;&#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBC0F; &#xBB34;&#xCC99; &#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xBE44; &#xACC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Presynaptic &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xAE30;&#xACC4;&#xB97C; &#xD574;&#xC81C;.

En los vertebrados, el acoplamiento f&#xED;sico entre los canales de calcio presin&#xE1;pticos y sin&#xE1;pticas prote&#xED;nas de liberaci&#xF3;n ves&#xED;cula aumenta la eficiencia de la neurotransmisi&#xF3;n. La evidencia reciente indica que estas prote&#xED;nas sin&#xE1;pticas pueden directamente sobre la liberaci&#xF3;n sin&#xE1;ptica, regulando negativamente la entrada de calcio, e indirectamente a trav&#xE9;s de v&#xED;as de participaci&#xF3;n de las mol&#xE9;culas de segundos mensajeros. Los estudios de las neuronas individuales de los vertebrados e invertebrados han proporcionado nuevos conocimientos sobre las funciones de las prote&#xED;nas de andamiaje en la orientaci&#xF3;n de los canales de calcio y la liberaci&#xF3;n de neurotransmisores. Estos estudios nos obligan a ampliar los modelos actuales de la transmisi&#xF3;n sin&#xE1;ptica.

Interacciones funcionales entre los canales de calcio presin&#xE1;pticos y la maquinaria de la liberaci&#xF3;n de neurotransmisores

&#x9499;&#x901A;&#x9053; &beta; &#x4E9A;&#x57FA;&#x662F;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#x548C;&#x819C;&#x5B54; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x65E0;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269; (&#x7A3B;&#x7530;&#x690E;&#x5B9E; stagnalis&#xFF09; &#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684; P/Q-n-&#x952E;&#x5165;&#x9499;&#x901A;&#x9053; (LCav2)&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4E0E;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7A81;&#x89E6; &beta; &#x4E9A;&#x57FA; colocalized&#xFF0C;&#x662F;&#x9886;&#x5148;&#x7684;&#x8D85;&#x51FA;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x7684; &beta; &#x4E9A;&#x57FA;&#x4ECE;&#x7269;&#x7406;&#x4E0A;&#x89E3;&#x8026;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8C03;&#x89E3;&#x4E2D;&#x6210;&#x719F;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x7684; LCav2 &#x9891;&#x9053;&#x8FD8;&#x53C2;&#x4E0E;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x4E2D;&#x7684;&#x4EA7;&#x7269;&#x3002;&Beta; &#x4E9A;&#x57FA;&#x4E0E;&#x7A81;&#x89E6;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x548C;&#x90A3;&#x4E9B;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x6025;&#x8BCA;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x5DEE;&#x5F02;&#x534F;&#x4F1A;&#x8868;&#x660E; &beta; &#x4E9A;&#x57FA;&#x53EF;&#x80FD; Cav2 &#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x529F;&#x80FD;&#x672A;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x89E6;&#x6210;&#x719F;&#x8F6C;&#x578B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x9499;&#x901A;&#x9053; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;&#x4E0E; &beta; &#x4E9A;&#x57FA;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x89E3;&#x8026;&#x3002;

Calcium channel beta subunits are key modulators of calcium channel function and membrane targeting of the pore-forming alpha1 subunit. Here we show that an invertebrate (Lymnaea stagnalis) homolog of P/Q- and N-type calcium channels (LCav2), although colocalized with beta subunits in synapses of mature neurons, is physically uncoupled from the beta subunits in the leading edge of growth cones of outgrowing neurons. Moreover, LCav2 channels that mediate transmitter release in mature synapses also participate in neuronal outgrowth in growth cones. The differential association of beta subunits with synaptic calcium channels and those expressed in emergent neuronal growth suggests that beta subunits may play a role in the transformation of Cav2 calcium channel function in immature neurons and mature synapses.

Uncoupling of calcium channel alpha1 and beta subunits in developing neurons.

Sous-unit&#xE9;s de canaux de calcium b&#xEA;ta sont des modulateurs cl&#xE9;s de la fonction du canal de calcium et de la membrane de ciblage de la sous-unit&#xE9; alpha 1 porog&#xE8;ne. Nous montrons ici que d&#x26;#39;un invert&#xE9;br&#xE9; (Lymnaea stagnalis) homologue de P/Q- et les canaux calciques de type N (LCav2), bien que sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta colocalis&#xE9;s avec des synapses de neurones matures, est physiquement d&#xE9;coupl&#xE9;e des sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta dans le bord d&#x26;#39;attaque de la croissance c&#xF4;nes de neurones. l&#x26;#39;&#xE9;troit En outre, LCav2 canaux qui interviennent dans la lib&#xE9;ration du transmetteur au niveau des synapses matures &#xE9;galement participer &#xE0; l&#x26;#39;excroissance neuronale dans les c&#xF4;nes de croissance. L&#x26;#39;association diff&#xE9;rentielle de sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta avec les canaux calciques synaptiques et de celles exprim&#xE9;es dans la croissance neuronale &#xE9;mergente sugg&#xE8;re que les sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta peuvent jouer un r&#xF4;le dans la transformation de la fonction du canal de calcium Cav2 dans les neurones immatures et matures synapses.

D&#xE9;couplage des canaux calciques alpha1 et sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta dans les neurones en d&#xE9;veloppement

Entkopplung der Calcium-Kanal-alpha1 und beta-Untereinheiten in sich entwickelnden Neuronen.

Subunit&agrave; beta di calcio canale sono chiave modulatori della funzione dei canali calcio e membrana targeting della subunit&agrave; alfa1 formando dei pori. Qui vi mostriamo che un invertebrato (Lymnaea stagnalis) omologo di P/Q- e N-tipo canali calcio (LCav2), anche se colocalized con subunit&agrave; beta nelle sinapsi dei neuroni maturi, &egrave; fisicamente disgiunti da una subunit&agrave; beta nell&#39;avanguardia dei coni di crescita del superamento dei neuroni. Inoltre, LCav2 canali che mediano il rilascio del trasmettitore nelle sinapsi mature partecipano anche escrescenza neuronale nei coni di crescita. L&#39;associazione differenziale della subunit&agrave; beta con canali calcio sinaptica e quelli espressi nella crescita neuronale emergente suggerisce che le subunit&agrave; beta possono svolgere un ruolo nella trasformazione di Cav2 funzione di canale di calcio nei neuroni immaturi e maturi sinapsi.

Sganciamento del calcio canale alpha1 beta subunit&agrave; e nello sviluppo di neuroni.

L-&#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x9176;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6B21;&#x6570;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x4F46;&#x76F4;&#x63A5;&#x8D21;&#x732E;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x7535;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4ECD;&#x7136;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x86EE;&#x8352;&#x4E4B;&#x5730;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x53CA;&#x529F;&#x80FD;&#x9274;&#x5B9A;&#x7684;&#x8F6F;&#x4F53;&#x52A8;&#x7269;&#x7684; L-&#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#xFF0C;LCa (v) 1&#xFF0C;&#x5E76;&#x8C03;&#x67E5;&#x5176;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x534F;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x653E;&#x7535;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;LCav1 &#x901A;&#x9053;&#x5C55;&#x89C8;&#x8BB8;&#x591A;&#x6807;&#x5FD7;&#x7684;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269; L &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x9AD8;&#x7535;&#x538B;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3001; &#x6162;&#x6162;&#x706D;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x548C;&#x4E8C;&#x6C22;&#x5421;&#x5576;&#x7C7B;&#x654F;&#x611F;&#x548C;&#x5F55;&#x97F3;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x4E0E; EGTA &#x7684;&#x6807;&#x51C6;&#x6D53;&#x5EA6;&#x663E;&#x793A;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x706D;&#x6D3B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5305;&#x62EC;&#x5C0F;&#x4E8E;&#x7EA6; 20%&#x7684;&#x5F53;&#x524D;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x7A3B;&#x7530;&#x690E;&#x5B9E;&#x547C;&#x5438;&#x7F51;&#x7EDC;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x603B;&#x7684;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;L &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#x662F;&#x4E0D;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7A81;&#x89E6;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x4FDD;&#x6301;&#x8282;&#x594F;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x653E;&#x7535;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x7EF4;&#x6301;&#x8282;&#x594F;&#x6A21;&#x5F0F;&#x6D3B;&#x52A8;&#x57FA;&#x672C;&#x547C;&#x5438;&#x884C;&#x4E3A;&#x5728;&#x7A3B;&#x7530;&#x690E;&#x5B9E; L-&#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

L-&#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x548C;&#x5C04;&#x51FB;&#x4E2D;&#x65E0;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x547C;&#x5438;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

L-type calcium channel activity has been associated with a number of cytoplasmic responses, including gene transcription and activation of calcium-dependent enzymes, yet their direct contribution to the electrical activities of neurons has remained largely unexplored. Here we report the cloning and functional characterization of a molluscan L-type calcium channel homologue, LCa(v)1, and investigate its role in coordinating neuronal firing patterns. The LCav1 channel exhibits many hallmarks of vertebrate L-type channels in that it is high-voltage activated, slowly inactivating, and dihydropyridine sensitive and displays calcium-dependent inactivation in recording solutions with standard EGTA concentrations. We show that despite comprising less than approximately 20% of the total whole cell current in identified Lymnaea respiratory network neurons, the L-type channels are essential for maintaining rhythmic action potential discharges without being involved in synaptic release. Our data therefore suggest an important role of L-type calcium channels in maintaining rhythmical pattern activity underlying breathing behavior in Lymnaea.

In vitro characterization of L-type calcium channels and their contribution to firing behavior in invertebrate respiratory neurons.

L-type d&#x26;#39;activit&#xE9; des canaux calciques a &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9;e &#xE0; un certain nombre de r&#xE9;ponses cytoplasmiques, y compris la transcription des g&#xE8;nes et l&#x26;#39;activation des enzymes d&#xE9;pendantes du calcium, mais leur contribution directe aux activit&#xE9;s &#xE9;lectriques des neurones est rest&#xE9; largement inexplor&#xE9;. Nous rapportons ici le clonage et la caract&#xE9;risation fonctionnelle d&#x26;#39;un mollusque de type L homologue du canal de calcium, l&#x26;#39;ACV (v) 1, et d&#x26;#39;enqu&#xEA;ter sur son r&#xF4;le dans la coordination des modes de d&#xE9;charges neuronales. Le canal LCav1 pr&#xE9;sente plusieurs poin&#xE7;ons de vert&#xE9;br&#xE9;s canaux de type L en ce que il est activ&#xE9; &#xE0; haute tension, lentement inactivant, et sensibles dihydropyridine et affiche de calcium-d&#xE9;pendante dans l&#x26;#39;inactivation des solutions d&#x26;#39;enregistrement avec des concentrations EGTA standard. Nous montrons que, malgr&#xE9; comprenant moins de 20% environ de la cellule totale toute actuelle dans les neurones Lymnaea identifi&#xE9;s r&#xE9;seau des voies respiratoires, les canaux de type L sont essentiels pour maintenir les rejets d&#x26;#39;action potentiels rythmiques sans &#xEA;tre impliqu&#xE9; dans la lib&#xE9;ration synaptique. Nos donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent donc un r&#xF4;le important de canaux calciques de type L dans le maintien de l&#x26;#39;activit&#xE9; rythmique de la respiration du comportement sous-jacent dans Lymnaea.

Caract&#xE9;risation in vitro des canaux calciques de type L et leur contribution &#xE0; tir Comportement dans invert&#xE9;br&#xE9;s neurones respiratoires

L-Typ-Kalzium-Kanal-Aktivit&auml;t wurde verkn&uuml;pft mit einer Reihe von zytoplasmatischen Reaktionen, einschlie&szlig;lich gen-Transkription und Aktivierung der Kalzium-abh&auml;ngige Enzyme, noch ihre direkte Beitrag zur elektrischen Aktivit&auml;ten der Neuronen ist weitgehend unerforscht geblieben. Hier berichten wir das Klonen und Funktionelle Charakterisierung von einem Weichtiererzeugnisse L-Typ-Kalzium-Kanal Homolog, LCa (V) 1, und seine Rolle bei der Koordinierung der neuronale feuern Muster zu untersuchen. Der LCav1 Kanal Exponate viele Kennzeichen der Wirbeltiere L-Typ-Kan&auml;le in diesem Hochspannungs-aktiviert ist, langsam zu inaktivieren, und Dihydropyridin empfindlich und zeigt Kalzium-abh&auml;ngige Inaktivierung in Aufnahme L&ouml;sungen mit standard-EGTA-Konzentrationen. Wir zeigen, dass trotz bestehend aus weniger als etwa 20 % der insgesamt ganze Zelle aktuelle in identifizierten Lymnaea respiratorische Netzwerk Neuronen, die L-Typ-Kan&auml;le wesentlich f&uuml;r die Aufrechterhaltung der rhythmischen Aktionspotential Einleitungen ohne synaptische Release beteiligt zu sein. Unsere Daten zeigen daher eine wichtige Rolle des L-Typ-Kalzium-Kan&auml;le in Aufrechterhaltung rhythmische Muster Aktivit&auml;t Atmung Verhalten in Lymnaea zugrunde.

In-vitro Charakterisierung von L-Typ-Kalzium-Kan&auml;le und ihren Beitrag zum Verhalten in wirbellosen Atemwege Neuronen feuern.

Attivit&agrave; del canale calcio tipo L &egrave; stato associato con un numero di risposte citoplasmatiche, compresa la trascrizione del gene e l&#39;attivazione di enzimi calcio-dipendente, eppure loro contributo diretto alle attivit&agrave; elettrica dei neuroni &egrave; rimasto in gran parte inesplorata. Qui riportiamo la clonazione e caratterizzazione funzionale di un calcio di tipo L cotti canale omologo, LCa (v) 1 e indagare il suo ruolo nel coordinare modelli di infornamento di un neurone. Il LCav1 canale Mostre che molti tratti distintivi dei vertebrati canali L-type che &egrave; attivato ad alta tensione, lentamente inattivanti e diidropiridinico sensibile e inattivazione calcio-dipendente schermi in soluzioni con concentrazioni di EGTA standard di registrazione. Mostriamo che nonostante composto da meno di circa il 20% della cellula intera totale corrente in neuroni di rete respiratoria Lymnaea identificati, i canali L-type sono essenziali per mantenere scariche di potenziale d&#39;azione ritmica senza essere coinvolti nel rilascio sinaptico. I nostri dati suggeriscono pertanto un ruolo importante dei canali di calcio tipo L a mantenere l&#39;attivit&agrave; di pattern ritmici sottostanti il comportamento di respirazione in Lymnaea.

Caratterizzazione in vitro dei canali del calcio di tipo L e loro contributo al comportamento nei neuroni respiratori invertebrati di infornamento.

L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x6570;&#x306F;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3078;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x8CA2;&#x732E;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x672A;&#x8E0F;&#x306E;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;LCA&#xFF08;v&#xFF09;&#x306F;1&#x3001;&#x8EDF;&#x4F53;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x706B;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x8ABF;&#x6574;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; LCav1&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x5F90;&#x3005;&#x306B;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x9AD8;&#x96FB;&#x5727;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x70B9;&#x3067;&#x3001;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;L&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x3001;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A;EGTA&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x89E3;&#x6C7A;&#x7B56;&#x3092;&#x8A18;&#x9332;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;Lymnaea&#x547C;&#x5438;&#x5668;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x5408;&#x8A08;&#x306E;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D04;20&#xFF05;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;L-&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30EA;&#x30BA;&#x30DF;&#x30AB;&#x30EB;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306E;&#x653E;&#x96FB;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;Lymnaea&#x3067;&#x30EA;&#x30BA;&#x30DF;&#x30AB;&#x30EB;&#x306A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x57FA;&#x76E4;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x547C;&#x5438;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x7121;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x547C;&#x5438;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3092;&#x713C;&#x6210;&#x3078;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D3;&#x30C8;&#x30ED;&#x7279;&#x6027;&#x306B;

L &#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xCE7C;&#xC298;-&#xC758;&#xC874; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC751;&#xB2F5; &#xC218;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5B4; &#xC544;&#xC9C1; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC804;&#xAE30; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB294; &#xC8FC;&#xB85C; &#xBBF8;&#xAC1C;&#xCC99; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBCF4;&#xACE0; molluscan L &#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; homologue, LCa (v) 1, &#xCC44;&#xB110; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBC1C;&#xC0AC; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xC870;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;. LCav1 &#xCC44;&#xB110; &#xC804;&#xC2DC; &#xADF8; &#xCC99;&#xCD94; L &#xD615; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC740; &#xB192;&#xC740; &#xC804;&#xC555; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xCC9C;&#xCC9C;&#xD788; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; dihydropyridine &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C;&#xACFC; &#xD45C;&#xC900; EGTA &#xB18D;&#xB3C4;&#xC640; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xB179;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB514;&#xC2A4;&#xD50C;&#xB808;&#xC774; &#xCE7C;&#xC298; &#xC885;&#xC18D; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD1D; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xB41C; Lymnaea &#xD638;&#xD761;&#xAE30; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD604;&#xC7AC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC57D; 20%&#xB97C; &#xD568;&#xC720; &#xD558;&#xB294; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; L-&#xD0C0;&#xC785; &#xCC44;&#xB110; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xB9AC;&#xB4EC; &#xC561;&#xC158; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; &#xBC29;&#xC804;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; L-&#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; Lymnaea&#xC5D0;&#xC11C; &#xD638;&#xD761; &#xB3D9;&#xC791; &#xAE30;&#xBCF8; &#xB9AC;&#xB4EC; &#xD328;&#xD134; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC720;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

L &#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; &#xBB34;&#xCC99; &#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xD638;&#xD761; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD589;&#xB3D9; &#xD574; &#xACE0;&#xC5D0; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xAE30;&#xC5EC;&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654;.

L-tipo de la actividad del canal de calcio se ha asociado con una serie de respuestas frente al citoplasma, incluyendo la transcripci&#xF3;n de genes y la activaci&#xF3;n de enzimas dependientes del calcio, sin embargo, su contribuci&#xF3;n directa a las actividades el&#xE9;ctricas de las neuronas se ha mantenido en gran parte inexplorado. Aqu&#xED; mostramos la clonaci&#xF3;n y caracterizaci&#xF3;n funcional de un molusco tipo L hom&#xF3;logo del canal de calcio, LCA (v) 1, e investigar su papel en la coordinaci&#xF3;n de los patrones neuronales de cocci&#xF3;n. El canal LCav1 exhibe caracter&#xED;sticas de muchos vertebrados canales tipo L en que es de alto voltaje se activa, lentamente inactivante, y sensible dihidropiridina y muestra dependiente de calcio en la grabaci&#xF3;n de inactivaci&#xF3;n con soluciones est&#xE1;ndar de concentraciones EGTA. Se demuestra que a pesar de que comprende menos de aproximadamente el 20% del total de c&#xE9;lulas conjunto actual en las neuronas de la red identificados Lymnaea respiratorias, los canales de tipo L son esenciales para el mantenimiento de descargas r&#xED;tmicas de potencial de acci&#xF3;n, sin intervenir en la liberaci&#xF3;n sin&#xE1;ptica. Nuestros datos sugieren que por lo tanto, un importante papel de los canales de calcio tipo L en el mantenimiento de la actividad r&#xED;tmica comportamiento patr&#xF3;n subyacente de respiraci&#xF3;n en Lymnaea.

Caracterizaci&#xF3;n in vitro de los canales de calcio tipo L y su contribuci&#xF3;n a la cocci&#xF3;n en el comportamiento de invertebrados neuronas respiratorias

&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x70DF;&#x78B1;&#x578B;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53; &#xFF08;nAChR&#xFF09; &#x4E9A;&#x57FA;&#x57FA;&#x7840;&#x5728;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; (CNS) &#x7684;&#x7A3B;&#x7530;&#x690E;&#x5B9E; stagnalis &#x8F6F;&#x4F53;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x80C6;&#x78B1;&#x80FD;&#x4F20;&#x8F93;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x7B80;&#x5E76; PCR &#x514B;&#x9686;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5411; nAChR &#x4E9A;&#x57FA;&#x663E;&#x793A;&#x9AD8;&#x5E8F;&#x5217;&#x76F8;&#x4F3C;&#x6027;&#x7684; 12 &#x4E9A;&#x57FA;&#x3001; &#x54EA; 10 &#x4E2A; &alpha;-&#x578B;&#xFF0C;1 &#x662F; &beta;-&#x578B;&#xFF0C;&#x548C; 1 &#x4E0D;&#x5217;&#x4E3A;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x5E8F;&#x5217;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;&#x5DF2;&#x67E5;&#x660E;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x5F02;&#x6E90;&#x8868;&#x8FBE;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x54CD;&#x5E94;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x963F;&#x5C14;&#x6CD5;&#x578B;&#x4E9A;&#x57FA;&#x53EF;&#x5206;&#x4E3A;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x8FDB;&#x884C;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50; (&#x5174;&#x594B;) &#x7684;&#x7FA4;&#x4F53;&#x548C;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x8FDB;&#x884C; (&#x6291;&#x5236;) &#x6E20;&#x9053;&#x53C2;&#x4E0E;&#x80C6;&#x78B1;&#x80FD;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x3002;&#x7A3B;&#x7530;&#x690E;&#x5B9E; nAChR &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x7531;&#x623F;&#x5730;&#x4EA7;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5B9A;&#x91CF; pcr &#x548C;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5B83;&#x662F;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x6570;&#x5B57;&#x4E0E;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x8868;&#x793A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5927;&#x5927;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x81F3;&#x5C11; 10%&#x7684;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x663E;&#x793A;&#x63A2;&#x6D4B; nAChR &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x80C6;&#x78B1;&#x80FD;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x6C34;&#x75B1;&#x7684;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x3001; &#x8868;&#x8FBE;&#x6240;&#x793A;&#x5360;&#x5927;&#x7EA6; 10%&#x7684;&#x4E2D;&#x6240;&#x6709;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; nAChR &#x5B50;&#x7C7B;&#x578B;&#x53EF;&#x6BD4;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5FEB;&#x901F;&#x80C6;&#x78B1;&#x80FD;&#x4F20;&#x8F93;&#x5728;&#x7A3B;&#x7530;&#x690E;&#x5B9E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A81;&#x51FA;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0E;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x7269;&#x79CD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x8981;&#x9AD8;&#x5F97;&#x591A;&#x3002;

&#x9274;&#x5B9A;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7A3B;&#x7530;&#x690E;&#x5B9E; stagnalis &#x8F6F;&#x4F53;&#x52A8;&#x7269;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x70DF;&#x78B1;&#x578B;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x3002;

We described a family of nicotinic acetylcholine receptor (nAChR) subunits underlying cholinergic transmission in the central nervous system (CNS) of the mollusc Lymnaea stagnalis. By using degenerate PCR cloning, we identified 12 subunits that display a high sequence similarity to nAChR subunits, of which 10 are of the alpha-type, 1 is of the beta-type, and 1 was not classified because of insufficient sequence information. Heterologous expression of identified subunits confirms their capacity to form functional receptors responding to acetylcholine. The alpha-type subunits can be divided into groups that appear to underlie cation-conducting (excitatory) and anion-conducting (inhibitory) channels involved in synaptic cholinergic transmission. The expression of the Lymnaea nAChR subunits, assessed by real time quantitative PCR and in situ hybridization, indicates that it is localized to neurons and widespread in the CNS, with the number and localization of expressing neurons differing considerably between subunit types. At least 10% of the CNS neurons showed detectable nAChR subunit expression. In addition, cholinergic neurons, as indicated by the expression of the vesicular ACh transporter, comprise approximately 10% of the neurons in all ganglia. Together, our data suggested a prominent role for fast cholinergic transmission in the Lymnaea CNS by using a number of neuronal nAChR subtypes comparable with vertebrate species but with a functional complexity that may be much higher.

Identification and functional expression of a family of nicotinic acetylcholine receptor subunits in the central nervous system of the mollusc Lymnaea stagnalis.

Nous avons d&#xE9;crit une famille de r&#xE9;cepteur de l&#x26;#39;ac&#xE9;tylcholine nicotiniques (nAChR) sous-unit&#xE9;s qui sous-tendent la transmission cholinergique dans le syst&#xE8;me nerveux central (SNC) de la stagnalis mollusque Lymnaea. En utilisant d&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;e clonage par PCR, nous avons identifi&#xE9; 12 sous-unit&#xE9;s qui affichent une similarit&#xE9; de s&#xE9;quence &#xE9;lev&#xE9;e pour les sous-unit&#xE9;s nAChR, dont 10 sont de l&#x26;#39;alpha-type, 1 est du type b&#xEA;ta, et 1 n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; class&#xE9; en raison de l&#x26;#39;information de s&#xE9;quence insuffisante. L&#x26;#39;expression h&#xE9;t&#xE9;rologue des sous-unit&#xE9;s identifi&#xE9;es confirme leur capacit&#xE9; &#xE0; former des r&#xE9;cepteurs fonctionnels r&#xE9;pondant &#xE0; l&#x26;#39;ac&#xE9;tylcholine. Les sous-unit&#xE9;s alpha de type peuvent &#xEA;tre divis&#xE9;s en groupes qui apparaissent &#xE0; la base de cations-conductrice (excitateur) et d&#x26;#39;anions-conductrice (inhibitrice) impliqu&#xE9;s dans les canaux de transmission cholinergique synaptique. L&#x26;#39;expression des sous-unit&#xE9;s nAChR Lymnaea, &#xE9;valu&#xE9;e par PCR quantitative en temps r&#xE9;el et hybridation in situ, indique qu&#x26;#39;il est localis&#xE9;e pour les neurones et g&#xE9;n&#xE9;ralis&#xE9;e dans les CNS, avec le nombre et la localisation des neurones exprimant diff&#xE9;rentes consid&#xE9;rablement entre les diff&#xE9;rents types de sous-unit&#xE9;s. Au moins 10% des neurones du SNC ont montr&#xE9; d&#xE9;tectable expression sous-unit&#xE9; nAChR. En outre, les neurones cholinergiques, comme indiqu&#xE9; par l&#x26;#39;expression du transporteur v&#xE9;siculaire ACh, repr&#xE9;sentent environ 10% des neurones dans tous les ganglions. Ensemble, nos donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent un r&#xF4;le important pour la transmission cholinergique rapide dans le SNC Lymnaea en utilisant un certain nombre de sous-types de nAChR neuronaux comparables avec des esp&#xE8;ces de vert&#xE9;br&#xE9;s, mais avec une complexit&#xE9; fonctionnelle qui peut &#xEA;tre beaucoup plus &#xE9;lev&#xE9;.

Identification et expression fonctionnelle d&#x26;#39;une famille de sous-unit&#xE9;s nicotiniques r&#xE9;cepteurs de l&#x26;#39;ac&#xE9;tylcholine dans le syst&#xE8;me nerveux central du mollusque Lymnaea stagnalis

Wir beschrieben eine Familie nikotinische Acetylcholin-Rezeptor (nAChR)-Untereinheiten, die cholinerge &Uuml;bertragung in das Zentralnervensystem (ZNS) von der Molluske Spitzschlammschnecke zugrunde. Mithilfe der degenerierten PCR-Klonen wir identifiziert 12 Untereinheiten, die eine hohe Sequenz &Auml;hnlichkeit zum nAChR Untereinheiten Anzeigen von 10 von Alpha-Typ, sind 1 ist des Beta-Typs und 1 wurde wegen unzureichender Sequenzinformationen nicht klassifiziert. Heterologe Expression von ermittelten Untereinheiten best&auml;tigt ihre F&auml;higkeit zur funktionelle Rezeptoren reagieren auf Acetylcholin zu bilden. Die Alpha-Typ-Untereinheiten gliedern sich in Gruppen, die scheinbar kation-Durchf&uuml;hrung (exzitatorischen) zugrunde liegen und Durchf&uuml;hrung von Anion (hemmende) Kan&auml;le synaptischen cholinerge &Uuml;bertragung beteiligt. Der Ausdruck der Lymnaea nAChR-Untereinheiten, bewertet von Real time quantitativen PCR und in Situ Hybridisierung, zeigt, dass es zu Neuronen lokalisiert und im ZNS, in der Zahl und Lokalisation des Ausdr&uuml;ckens Neuronen unterscheiden sich erheblich zwischen Untereinheit Typen weit verbreitet ist. Mindestens 10 % der CNS Neuronen zeigte nachweisbar nAChR Untereinheit Ausdruck. Dar&uuml;ber hinaus umfassen cholinerge Neuronen, wie durch den Ausdruck des vesikul&auml;ren ACh Transporters, etwa 10 % der Neuronen in alle Ganglien. Zusammen, unsere Daten vorgeschlagen eine herausragende Rolle f&uuml;r die schnelle cholinerge &Uuml;bertragung im ZNS Lymnaea unter Verwendung von neuronalen nAChR Untertypen vergleichbar mit Wirbeltierarten, sondern mit einer funktionalen Komplexit&auml;t, die wesentlich h&ouml;her sein k&ouml;nnen.

Identifizierung und funktionaler Ausdruck einer Familie nikotinische Acetylcholin-Rezeptor-Untereinheiten in das zentrale Nervensystem der Weichtiere Spitzschlammschnecke.

Abbiamo descritto una famiglia delle subunit&agrave; del recettore (nAChR) nicotinici acetilcolina sottostante trasmissione colinergica nel sistema nervoso centrale (SNC) di mollusco Lymnaea stagnalis. Mediante clonazione PCR degenerato, abbiamo identificato 12 subunit&agrave; che visualizzano una somiglianza di sequenza alta di nAChR subunit&agrave;, di cui 10 sono del tipo alfa, 1 &egrave; del tipo beta, e 1 non &egrave; stato classificato a causa di informazioni insufficienti sequenza. Espressione eterologa di subunit&agrave; identificate conferma la loro capacit&agrave; di formare recettori funzionali rispondono all&#39;acetilcolina. La subunit&agrave; alfa-tipo possono essere suddivisi in gruppi che sembrano sottendono alla conduzione di cationi (eccitatorio) e conducendo anione (inibitori) canali coinvolti nella trasmissione colinergica sinaptica. L&#39;espressione di Lymnaea subunit&agrave; nAChR, valutata da real time PCR quantitativa e l&#39;ibridazione in situ, indica che &egrave; localizzato ai neuroni e diffuso nel sistema nervoso centrale, con il numero e la localizzazione di esprimere i neuroni differiscono notevolmente tra i tipi di subunit&agrave;. Almeno il 10% dei neuroni CNS ha mostrato espressione subunit&agrave; nAChR rilevabili. Inoltre, i neuroni colinergici, come indicato dall&#39;espressione del trasportatore vescicolare ACh, costituiscono circa il 10% dei neuroni in tutti i gangli. Insieme, i nostri dati suggerirono un ruolo importante per la trasmissione veloce colinergici nel SNC Lymnaea utilizzando un certo numero di sottotipi di nAChR neuronali comparabili con specie di vertebrati, ma con una complessit&agrave; funzionale che pu&ograve; essere molto pi&ugrave; alto.

Identificazione ed espressione funzionale di una famiglia di subunit&agrave; del recettore nicotinico dell&#39;acetilcolina nel sistema nervoso centrale di mollusco Lymnaea stagnalis.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x8EDF;&#x4F53;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;Lymnaea stagnalis&#x306E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#xFF08;CNS&#xFF09;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x6027;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;nAChR&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PCR&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x7E2E;&#x9000;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;10&#x304C;&#x3B1;-&#x578B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x306E;nAChR&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x9AD8;&#x3044;&#x914D;&#x5217;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x3092;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30A4;12&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;1&#x306F;&#x3B2;&#x578B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x3068;1&#x304C;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x60C5;&#x5831;&#x306E;&#x5206;&#x985E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x8B58;&#x5225;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x7570;&#x7A2E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x578B;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5C0E;&#x96FB;&#x6027;&#xFF08;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#xFF09;&#x3068;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5C0E;&#x96FB;&#x6027;&#xFF08;&#x6291;&#x5236;&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x308B;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x5206;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x5B9A;&#x91CF;PCR&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;in situ&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x8A55;&#x4FA1;Lymnaea&#x306E;nAChR&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6570;&#x3068;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3068;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; CNS&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;10&#xFF05;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x306E;nAChR&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x7D04;10&#xFF05;&#x3092;&#x5360;&#x3081;&#x308B;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x7A2E;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;nAChR&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x9AD8;&#x304F;&#x306A;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x3068;Lymnaea&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x9AD8;&#x901F;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x8EDF;&#x4F53;&#x200B;&#x200B;&#x52D5;&#x7269;Lymnaea Stagnalis&#x306E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x6027;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x767A;&#x73FE;

Mollusc Lymnaea stagnalis&#xC758; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (CNS)&#xC5D0;&#xC11C; cholinergic &#xC804;&#xC1A1; &#xAE30;&#xBCF8; nicotinic &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (nAChR) subunits &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD0C0;&#xB77D; &#xD55C; PCR &#xD074;&#xB85C;&#xB2DD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB192;&#xC740; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131; nAChR &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; 12 subunits &#xC2DD;&#xBCC4;, &#xC5B4;&#xB290; 10&#xC740; &#xC54C;&#xD30C; &#xD0C0;&#xC785;&#xC758; 1 &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD0C0;&#xC785;&#xC758; &#xC774;&#xBA70; 1&#xB294; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xC21C;&#xC11C; &#xC815;&#xBCF4;&#xAC00; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBD84;&#xB958; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;. &#xD655;&#xC778; &#xB41C; subunits&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DD; &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC54C;&#xD30C; &#xD0C0;&#xC785; subunits &#xC591;&#xC774;&#xC628;-&#xC2E4;&#xC2DC; (&#xD765;&#xBD84; &#xC131;&#xC758;) &#xAE30;&#xCD08;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xB294; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xB20C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xC2E4;&#xC2DC; (&#xAE08;&#xC9C0;) &#xCC44;&#xB110; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; cholinergic &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC;. &#xC9C4;&#xC9DC; &#xD3C9;&#xAC00; nAChR subunits &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; PCR &#xC2DC;&#xAC04;&#xACFC; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1;, &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xBC0F; &#xC218;&#xC640; &#xD45C;&#xD604; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xD615;&#xC2DD; &#xAC04;&#xC5D0; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; CNS&#xC5D0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC784;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; Lymnaea&#xC758; &#xD45C;&#xD604;. &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xC911;&#xCD94; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; 10% &#xAC10;&#xC9C0; nAChR &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, cholinergic &#xB274;&#xB7F0; &#xB098;&#xB178;&#xBBF8;&#xD130; &#xD06C; &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB300;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC911;&#xCD94;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC57D; 10%. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBE44;&#xAD50; &#xC2E0;&#xACBD; nAChR &#xD558;&#xC704;&#xC758; &#xC218;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; Lymnaea CNS &#xBE60;&#xB978; cholinergic &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xD568;&#xAED8;, &#xCC99;&#xCD94; &#xC885; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC778; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xC774; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xB192;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2E0;&#xBD84;&#xC99D;&#xACFC; nicotinic &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; mollusc Lymnaea stagnalis&#xC758; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xD45C;&#xD604;.

Se describe una familia de receptores nicot&#xED;nicos de la acetilcolina (nAChR) subunidades que subyacen a la transmisi&#xF3;n colin&#xE9;rgica en el sistema nervioso central (SNC) del molusco Lymnaea stagnalis. Mediante el uso de degenerados clonaci&#xF3;n de PCR, se identificaron 12 subunidades que muestran una alta similitud de secuencia de subunidades nAChR, de los cuales 10 son del tipo alfa, 1 es del tipo beta, y 1 no se clasific&#xF3; a causa de informaci&#xF3;n de la secuencia insuficiente. Expresi&#xF3;n heter&#xF3;loga de las subunidades identificadas confirma su capacidad para formar receptores funcionales que responden a la acetilcolina. Las subunidades de tipo alfa-pueden dividirse en grupos que parecen subyacer cati&#xF3;n conductora (excitador) y el ani&#xF3;n conductora (inhibitoria) canales implicados en la transmisi&#xF3;n colin&#xE9;rgica sin&#xE1;ptica. La expresi&#xF3;n de las subunidades de nAChR Lymnaea, evaluada por PCR cuantitativa en tiempo real, e hibridaci&#xF3;n in situ, indica que es localizado en las neuronas y generalizada en el sistema nervioso central, con el n&#xFA;mero y la localizaci&#xF3;n de las neuronas que expresan que difieren considerablemente entre los distintos tipos de subunidades. Al menos el 10% de las neuronas del sistema nervioso central mostr&#xF3; expresi&#xF3;n detectable subunidad nAChR. Adem&#xE1;s, las neuronas colin&#xE9;rgicas, como se indica por la expresi&#xF3;n de la vesicular transportador de ACh, comprenden aproximadamente 10% de las neuronas en todos los ganglios. En conjunto, nuestros datos sugieren un papel destacado para la r&#xE1;pida transmisi&#xF3;n colin&#xE9;rgica en el SNC Lymnaea mediante el uso de un n&#xFA;mero de subtipos de nAChR neuronales comparables con las especies de vertebrados, pero con una complejidad funcional que puede ser mucho mayor.

Identificaci&#xF3;n y expresi&#xF3;n funcional de una familia de receptores de acetilcolina nicot&#xED;nicos subunidades en el Sistema Nervioso Central del molusco Lymnaea stagnalis

Rem2 &#x5C5E;&#x4E8E; RGK &#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x5C0F;&#x86CB;&#x767D;&#x5DF2;&#x77E5;&#x5176;&#x6210;&#x5458;&#x4E0E;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x9499;&#x901A;&#x9053; &beta; &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x6291;&#x5236;&#x6216;&#x5E9F;&#x9664;&#x9499;&#x7535;&#x6D41;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6807;&#x8BC6;&#x7684; Rem2 &#x57FA;&#x7840;&#x529F;&#x80FD;&#x57DF;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x521B;&#x5EFA;&#x51E0;&#x4E2A; N-&#x6216; C-&#x672B;&#x671F;&#x622A;&#x65AD;&#x7684; Rem2 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x5BA1;&#x67E5;&#x901A;&#x8FC7;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4E0E; Ca(v) &beta; &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x5E76;&#x89C4;&#x7BA1;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684; Ca (v) 2.2 N &#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;TsA 201 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; Rem2 &#x7684;&#x5171;&#x7126;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x793A;&#x5B83;&#x5305;&#x542B;&#x819C;&#x9488;&#x5BF9;&#x5176; C-&#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x76F8;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x5171;&#x6C89;&#x6DC0;&#x5316;&#x9A8C;&#x663E;&#x793A; Ca(v) beta(3) &#x4E92;&#x52A8;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E; Rem2 &#x6B8B;&#x7559; 1-123&#x3002;&#x53EA;&#x6709; Rem2 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7ED1;&#x5B9A; &beta; &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x5747;&#x80FD;&#x964D;&#x4F4E;&#x6574;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9499;&#x7535;&#x6D41;&#x3002;

Rem2 &#x8C03;&#x63A7;&#x7684; N &#x578B;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;

Rem2 belongs to the RGK family of small GTPases whose members are known to interact with the voltage gated calcium channel beta subunit, and to inhibit or abolish calcium currents. To identify the underlying functional domains of Rem2, we created several N- or C-terminally truncated Rem2 proteins and examined their abilities to interact with the Ca(v) beta subunit and to regulate the activities of Ca(v)2.2 N-type calcium channels. Confocal imaging of Rem2 in tsA-201 cells revealed that it contains a membrane-targeting signal in its C-terminus, consistent with previous studies. Co-precipitation assays showed that Ca(v) beta(3) interaction depends on Rem2 residues 1-123. Only Rem2 proteins that targeted the cell membrane as well as bound the beta subunit were able to reduce whole cell calcium currents.

Molecular determinants of Rem2 regulation of N-type calcium channels.

REM2 appartient &#xE0; la famille RGK des petites GTPases dont les membres sont connus pour interagir avec la sous-unit&#xE9; b&#xEA;ta de tension calcique d&#xE9;pendant de canal, et d&#x26;#39;inhiber ou supprimer les courants de calcium. Pour identifier les domaines fonctionnels de sous-jacents REM2, nous avons cr&#xE9;&#xE9; N-ou C-terminale de plusieurs tronqu&#xE9;e REM2 prot&#xE9;ines et examin&#xE9; leurs capacit&#xE9;s &#xE0; interagir avec la sous-unit&#xE9; beta Ca (v) et de r&#xE9;glementer les activit&#xE9;s de Ca (v) 2,2 calciques de type N canaux. Imagerie confocale de REM2 dans le CST-201 cellules a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; qu&#x26;#39;il contient un signal de la membrane cible dans son extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale, en accord avec les &#xE9;tudes pr&#xE9;c&#xE9;dentes. Co-pr&#xE9;cipitation essais ont montr&#xE9; que Ca (v) beta (3) l&#x26;#39;interaction d&#xE9;pend de REM2 r&#xE9;sidus 1-123. Seuls REM2 prot&#xE9;ines qui cibl&#xE9;es de la membrane cellulaire, ainsi que la sous-unit&#xE9; b&#xEA;ta li&#xE9;s ont r&#xE9;ussi &#xE0; r&#xE9;duire l&#x26;#39;ensemble des courants de calcium des cellules.

D&#xE9;terminants mol&#xE9;culaires de REM2 r&#xE8;glement des canaux calciques de type N

Rem2 geh&ouml;rt zur Familie RGK der kleinen GTPasen, deren Mitglieder mit der Spannung Gating Kalziumkanal Beta Untereinheit, interagieren und zu hemmen bzw. zu beseitigen Kalzium Str&ouml;me bekannt sind. Um die zugrunde liegenden funktionalen Bereichen Rem2 zu identifizieren, wir haben mehrere N - oder C-unheilbar abgeschnittene Rem2 Proteine und untersucht ihre F&auml;higkeiten, mit der Ca(v)-Beta-Untereinheit und regulieren die T&auml;tigkeit der Ca (V) 2,2 N-Typ-Kalzium-Kan&auml;le zu interagieren. Konfokale Bildgebung von Rem2 in TsA-201 Zellen offenbart, dass es ein Membran-targeting Signal in seiner C-Terminus, konsistent mit fr&uuml;heren Studien enth&auml;lt. Temperaturen Proben zeigten, dass Rem2 R&uuml;ckst&auml;nde 1-123 Ca(v) beta(3) Interaktion abh&auml;ngt. Nur Rem2 Proteine, die gezielt die Zellmembran als auch die Beta-Untereinheit gebunden konnten ganze Zelle Kalzium Str&ouml;me zu reduzieren.

Molekulare Determinanten Rem2 Verordnung N-Typ-Kalzium-Kan&auml;le.

Rem2 appartiene alla famiglia del piccolo GTPases i cui membri sono conosciuti per interagire con la tensione gated calcio canale subunit&agrave; beta e per inibire o abolire le correnti calcio RGK. Per identificare i domini funzionali sottostanti di Rem2, abbiamo creato diverse N - o C-terminale troncate Rem2 proteine ed esaminate le loro abilit&agrave; di interagire con la subunit&agrave; beta di Ca(v) e di regolare l&#39;attivit&agrave; di Ca (v) 2,2 canali di calcio di tipo N. Imaging Confocal di Rem2 nelle cellule tsA-201 ha rivelato che esso contiene un segnale di membrana-targeting in C-capolinea, coerenza con gli studi precedenti. Coprecipitazione dosaggi ha mostrato che Ca(v) beta(3) interazione dipende Rem2 residui 1-123. Solo le proteine Rem2 che mirati la membrana delle cellule come pure legato la subunit&agrave; beta sono stati in grado di ridurre le correnti di calcio intera cellula.

Determinanti molecolari del regolamento Rem2 dei canali del calcio di tipo N.

Rem2&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x6D41;&#x308C;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3001;&#x53C8;&#x306F;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;GTPase&#x306E;RGK&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x5C5E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Rem2&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;N-&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x305F;C&#x672B;&#x7AEF;Rem2&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3068;Ca&#xFF08;v&#xFF09;&#x306E;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3068;Ca&#xFF08;V&#xFF09;2.2 N&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3002; TSA-201&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;Rem2&#x306E;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x819C;&#x6A19;&#x7684;&#x5316;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5171;&#x6C88;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;&#xFF08;3&#xFF09;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;Rem2&#x6B8B;&#x57FA;1&#x304B;&#x3089;123&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x306B;&#x306E;&#x307F;Rem2&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

N&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;Rem2&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;

Rem2 &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC774; &#xC804;&#xC555; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; &#xCE7C;&#xC298; &#xC804;&#xB958; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC791;&#xC740; GTPases RGK &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD55C;&#xB2E4;. Rem2&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC5EC;&#xB7EC; N-&#xB610;&#xB294; C-&#xB9D0;&#xAE30; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; Rem2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xACE0; Ca (v)&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; Ca(v) &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; 2.2 N-&#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. Confocal &#xC601;&#xC0C1; tsA-201 &#xC140;&#xC5D0; rem2&#xC758; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; C-&#xB9D0;&#xB2E8;, &#xC774;&#xC804;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58;&#xC5D0; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xBC1C;&#xD45C; &#xD588;&#xB2E4;. Co-precipitation &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD588;&#xB2E4; Ca(v) beta(3) &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; Rem2 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 1-123&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xB300;&#xC0C1; Rem2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xCE7C;&#xC298; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xC904;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;.

N-&#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; Rem2 &#xADDC;&#xC815;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;.

REM2 pertenece a la familia RGK de las peque&#xF1;as GTPasas, cuyos miembros se sabe que interact&#xFA;an con la subunidad beta cerrada de voltaje del canal de calcio, y para inhibir o suprimir las corrientes de calcio. Para identificar los dominios funcionales de REM2 subyacentes, hemos creado N-o varios truncada C-terminal REM2 prote&#xED;nas y examin&#xF3; su capacidad para interactuar con la subunidad beta de Ca (v) y para regular las actividades de Ca (v) 2,2 calcio tipo N canales. Imagen confocal de REM2 en TSA-201 c&#xE9;lulas revel&#xF3; que contiene una se&#xF1;al de membrana de metas en su C-terminal, de acuerdo con estudios previos. Co-precipitaci&#xF3;n ensayos mostraron que el Ca (v) beta (3) la interacci&#xF3;n depende de REM2 residuos 1-123. S&#xF3;lo REM2 prote&#xED;nas que dirigidos la membrana celular, as&#xED; como obligado la subunidad beta fueron capaces de reducir las corrientes de calcio enteros de c&#xE9;lulas.

Determinantes moleculares de la REM2 Reglamento de canales de calcio tipo N

&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C (PKC) &#x589E;&#x5F3A;&#x5206;&#x6CCC;&#x80BD;&#x80FD;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6D77;&#x5154;&#xFF0C;&#x90E8;&#x5206;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x7801;&#x5934;&#x80BD;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x65B0;&#x5730;&#x70B9;&#x3002;&#x54EA;&#x4E9B;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x88AB;&#x8D29;&#x8FD0;&#x5230;&#x8FD9;&#x7C7B;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x597D;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x663E;&#x793A; PKC &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FEB;&#x901F;&#x62DB;&#x52DF;&#x65B0; Ca (V) 2 &#x4E9A;&#x57FA;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#xFF0C;&#x548C; latrunculin B&#x3001; &#x6291;&#x5236;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x805A;&#x5408;&#x5242;&#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#xFF0C;&#x62DB;&#x52DF;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x805A;&#x5408;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x963B;&#x6B62; Ca (V) 2 &#x4E9A;&#x57FA;&#x53EA;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x7684;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x8FB9;&#x7F18;&#x7684;&#x5916;&#x89C2;&#x3002;&#x5728;&#x9759;&#x606F;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;Ca (V) 2 &#x542B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x9A7B;&#x7559;&#x5728;&#x4E2D;&#x90E8;&#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x3001; &#x4F46;&#x5747;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x4ECE;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x7684;&#x5E72;&#x9884;&#x3002;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x7684; PKC&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x88AB;&#x8FD0;&#x9001;&#x5230; lamellipodium &#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x3002;Lamellipodium &#x5185;&#x90E8;&#x901A;&#x9053;&#x63D2;&#x5165;&#x6700;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x901A;&#x8BAF;&#x91CF;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x4E0D;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x9700;&#x8981;&#x5B8C;&#x6574;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x3002;PKC &#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x624D;&#x505A; Ca (V) 2 &#x6E20;&#x9053;&#x4E0E;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5173;&#x8054;&#x548C;&#x63A5;&#x53D7;&#x63D2;&#x5165;&#x5230;&#x8D28;&#x819C;&#x3002;

Pkc &#x80DE;&#x5185;&#x8D29;&#x5356;&#x7684; Ca (V) 2 &#x4E4B;&#x524D;&#xFF0C;&#x5176;&#x5FEB;&#x901F;&#x62DB;&#x8058;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x3002;

Activation of protein kinase C (PKC) potentiates secretion in Aplysia peptidergic neurons, in part by inducing new sites for peptide release at growth cone terminals. The mechanisms by which ion channels are trafficked to such sites are, however, not well understood. We now show that PKC activation rapidly recruits new Ca(V)2 subunits to the plasma membrane, and that recruitment is blocked by latrunculin B, an inhibitor of actin polymerization. In contrast, inhibition of microtubule polymerization selectively prevents the appearance of Ca(V)2 subunits only at the distal edge of the growth cone. In resting neurons, Ca(V)2-containing organelles reside in the central region of growth cones, but are absent from distal lamellipodia. After activation of PKC, these organelles are transported on microtubules to the lamellipodium. The ability to traffic to the most distal sites of channel insertion inside the lamellipodium does, therefore, not require intact actin but requires intact microtubules. Only after activation of PKC do Ca(V)2 channels associate with actin and undergo insertion into the plasma membrane.

PKC-induced intracellular trafficking of Ca(V)2 precedes its rapid recruitment to the plasma membrane.

L&#x26;#39;activation de la prot&#xE9;ine kinase C (PKC) potentialise la s&#xE9;cr&#xE9;tion dans les neurones peptidergiques aplysie, en partie en induisant de nouveaux sites pour la production de peptide dans les terminaux c&#xF4;ne de croissance. Les m&#xE9;canismes par lesquels les canaux ioniques sont victimes de la traite &#xE0; de tels sites sont cependant pas bien compris. Nous allons maintenant montrer que l&#x26;#39;activation PKC recrute rapidement de nouvelles Ca (V) 2 sous-unit&#xE9;s &#xE0; la membrane plasmique, et que le recrutement est bloqu&#xE9; par latrunculine B, un inhibiteur de polym&#xE9;risation de l&#x26;#39;actine. Par contre, l&#x26;#39;inhibition de la polym&#xE9;risation des microtubules emp&#xEA;che s&#xE9;lectivement l&#x26;#39;apparition de Ca (V) 2 sous-unit&#xE9;s seulement &#xE0; la bordure distale du c&#xF4;ne de croissance. Dans les neurones de repos, Ca (V) 2 contenant organites r&#xE9;sident dans la r&#xE9;gion centrale de c&#xF4;nes de croissance, mais sont absentes de distale lamellipodes. Apr&#xE8;s activation de la PKC, ces organites sont transport&#xE9;s sur les microtubules &#xE0; la lamellipode. La capacit&#xE9; de trafic vers les sites les plus distales de l&#x26;#39;insertion &#xE0; l&#x26;#39;int&#xE9;rieur du canal lamellipode ne, par cons&#xE9;quent, pas besoin d&#x26;#39;actine intacte, mais il faut microtubules intactes. C&#x26;#39;est seulement apr&#xE8;s activation de la PKC faire Ca (V) 2 canaux associ&#xE9;s avec l&#x26;#39;actine et subissent l&#x26;#39;insertion dans la membrane plasmique.

PKC induite par le trafic intracellulaire de Ca (V) 2 pr&#xE9;c&#xE8;de son recrutement rapide de la membrane plasmique

Aktivierung der Proteinkinase C (PKC) Spurenelement Sekretion in Aplysia peptiderge Neuronen, teilweise durch neue Standorte f&uuml;r Peptid-Release am Wachstum-Kegel-Terminals zu induzieren. Die Mechanismen, durch welche, die Ionen Kan&auml;le zu solchen Websites verschleppt werden, jedoch nicht gut verstehen. Wir zeigen nun, dass PKC Aktivierung schnell neue Ca (V) 2-Untereinheiten an der Plasmamembran Rekruten und die Rekrutierung Latrunculin B, ein Inhibitor der Aktin-Polymerisation geblockt wird. Hemmung der Microtubule Polymerisierung verhindert dagegen selektiv die Darstellung der Ca (V) 2 Untereinheiten nur am distalen Rand der Wachstumskegel. In Ruhe Neuronen, Ca (V) 2-haltigen Organellen befinden sich in der Region Zapfen mit Wachstum aber Fehlen von distale Lamellipodium. Nach Aktivierung des PKC werden diese Organellen auf Mikrotubuli zu den Lamellipodium transportiert. Die M&ouml;glichkeit, den Datenverkehr zu den distalen Seiten Kanal einf&uuml;gen innerhalb der Lamellipodium, daher erfordert keine intakten Aktin aber intakt Mikrotubuli erfordert. Erst nach Aktivierung des PKC Ca (V) 2 Kan&auml;le ordnen Aktin und Einf&uuml;gen in die Plasmamembran zu unterziehen.

PKC-induzierte intrazellul&auml;re Menschenhandel von Ca (V) 2, ist seine schnelle Rekrutierung durch die Plasmamembran vorangestellt.

Attivazione della protein chinasi C (PKC) potenzia la secrezione in Aplysia peptidergic neuroni, in parte inducendo nuovi siti per il rilascio del peptide a terminali del cono di crescita. I meccanismi di cui ione canali sono trafficate a tali siti sono, tuttavia, non ben compreso. Mostriamo ora attivazione PKC reclute rapidamente nuove subunit&agrave; Ca (V) 2 per la membrana plasmatica, che tale assunzione &egrave; bloccato da latrunculin B, un inibitore della polimerizzazione dell&#39;actina. In contrasto, inibizione della polimerizzazione dei microtubuli selettivamente previene la comparsa delle subunit&agrave; Ca (V) 2 soltanto al bordo distale del cono di crescita. In neuroni, Ca (V) 2-contenente organuli risiedono nella regione centrale dei coni di crescita, di riposo, ma sono assenti da lamellipodia distale. Dopo l&#39;attivazione della PKC, questi organelli sono trasportati su microtubuli alla lamellipodium. La capacit&agrave; di traffico verso i siti pi&ugrave; distali d&#39;inserzione del canale all&#39;interno del lamellipodium, pertanto, non necessitano di actina intatto ma richiede microtubuli intatti. Solo dopo l&#39;attivazione della PKC Ca (V) 2 canali associare all&#39;actina e sottoporsi ad inserimento nella membrana del plasma.

PKC indotta intracellulare traffico di Ca (V) 2 precede il suo rapido reclutamento alla membrana del plasma.

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#xFF08;PKC&#xFF09;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x7AEF;&#x5B50;&#x306E;&#x3068;&#x3053;&#x308D;&#x3067;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30E1;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B7;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6027;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x969B;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;&#x3001;&#x305D;&#x306E;PKC&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;CA&#xFF08;V&#xFF09;2&#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x52DF;&#x96C6;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x63A1;&#x7528;&#x304C;latrunculin B&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x91CD;&#x5408;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x91CD;&#x5408;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x304C;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x306E;&#x307F;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x9060;&#x4F4D;&#x7AEF;&#x3067;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;2&#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5916;&#x89B3;&#x3092;&#x9632;&#x304E;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5B89;&#x9759;&#x6642;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;V&#xFF09;2&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x306F;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x4E2D;&#x592E;&#x90E8;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x9060;&#x4F4D;&#x306E;&#x8449;&#x72B6;&#x4EEE;&#x8DB3;&#x3092;&#x6B20;&#x5E2D;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PKC&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5F8C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x306F;&#x3001;&#x8449;&#x72B6;&#x4EEE;&#x8DB3;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x3092;&#x642C;&#x9001;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8449;&#x72B6;&#x4EEE;&#x8DB3;&#x5185;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x633F;&#x5165;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x9060;&#x4F4D;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; PKC&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;2&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x884C;&#x3044;&#x3001;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x305F;&#x5F8C;&#x306B;&#x306E;&#x307F;&#x3002;

Ca&#x306E;PKC&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8F38;&#x9001;&#xFF08;V&#xFF09;2&#x306F;&#x3001;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x63A1;&#x7528;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x7F6E;&#x304D;&#x307E;&#x3059;

&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C (PKC)&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xB2E8;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558; &#xC5EC; &#xC77C;&#xBD80; Aplysia peptidergic &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84; &#xBE44; potentiates. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC774;&#xC628;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC44;&#xB110;&#xC740; &#xADF8;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;,, &#xC774;&#xD574; &#xC798; &#xD558;&#xC9C0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C0;&#xAE08; PKC &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0C8; Ca (V) 2 subunits &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC2E0;&#xBCD1; &#xBC0F; &#xADF8; &#xBAA8;&#xC9D1; latrunculin B&#xC758; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC911; &#xD569; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, microtubule &#xC911; &#xD569; &#xC800;&#xD574;&#xB294; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC758; &#xC6D0;&#xC2EC; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xB9CC; Ca (V) 2 subunits&#xC758; &#xBAA8;&#xC591;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB274;&#xB7F0;, Ca (V) organelles 2 &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC131;&#xC7A5; &#xCF58;&#xC758; &#xC911;&#xC559; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD734;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xACB0; &#xC11D; &#xD558;&#xB2E4; &#xC6D0;&#xC2EC; lamellipodia&#xC5D0;&#xC11C;. PKC&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD6C4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; organelles microtubules&#xB294; lamellipodium &#xD558;&#xC5D0; &#xC6B4;&#xC1A1; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB0B4;&#xBD80;&#xB294; lamellipodium &#xCC44;&#xB110; &#xC0BD;&#xC785;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB9D0; &#xCD08; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xD2B8;&#xB798;&#xD53D; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xB9D0;&#xB77C; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; microtubules &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. PKC&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xD560; Ca (V) 2 &#xCC44;&#xB110; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD558; &#xACE0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0BD;&#xC785;&#xC744; &#xBC1B; &#xB2E4;.

PKC &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca (V) 2&#xC758; &#xBC00;&#xB9E4; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xCC44;&#xC6A9; &#xC55E;.

La activaci&#xF3;n de la prote&#xED;na quinasa C (PKC) potencia la secreci&#xF3;n de las neuronas en Aplysia peptid&#xE9;rgicas, en parte, mediante la inducci&#xF3;n de nuevos sitios para la liberaci&#xF3;n de p&#xE9;ptidos en los terminales del cono de crecimiento. Los mecanismos por los cuales los canales i&#xF3;nicos se trata a dichos sitios son, sin embargo, no entiende bien. Vamos a demostrar que la activaci&#xF3;n de la PKC con rapidez los nuevos reclutas de Ca (V) 2 subunidades en la membrana plasm&#xE1;tica, y que el reclutamiento est&#xE1; bloqueada por latrunculin B, un inhibidor de la polimerizaci&#xF3;n de la actina. En contraste, la inhibici&#xF3;n de la polimerizaci&#xF3;n de microt&#xFA;bulos selectivamente previene la aparici&#xF3;n de Ca (V) 2 subunidades s&#xF3;lo en el borde distal del cono de crecimiento. En las neuronas en reposo, Ca (V) 2-contienen org&#xE1;nulos residen en la regi&#xF3;n central de los conos de crecimiento, pero est&#xE1;n ausentes de distal lamellipodia. Despu&#xE9;s de la activaci&#xF3;n de la PKC, estos org&#xE1;nulos son transportados en microt&#xFA;bulos a la lamellipodium. La capacidad de tr&#xE1;fico a los sitios m&#xE1;s distales de la inserci&#xF3;n en el interior del canal lamellipodium hace, por tanto, no requieren actina intacta pero requiere microt&#xFA;bulos intactos. S&#xF3;lo despu&#xE9;s de la activaci&#xF3;n de la PKC DO Ca. (V) 2 canales asociados con la actina y se someten a la inserci&#xF3;n en la membrana plasm&#xE1;tica.

PKC inducida por el tr&#xE1;fico intracelular de Ca (V) 2 precede a su r&#xE1;pido reclutamiento a la membrana plasm&#xE1;tica

&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x975E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; T &#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053; (LCa(v)3) &#x8868;&#x793A;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8F6F;&#x4F53;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x62E5;&#x6709;&#x8BA9;&#x4EBA;&#x8054;&#x60F3;&#x8D77;&#x6240;&#x6709;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; T &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x5B83;&#x5C55;&#x793A; T &#x578B;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5982;&quot;&#x77AC;&#x53D8;&quot;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&quot;&#x5C0F;&#x5C0F;&quot;&#x7684;&#x6807;&#x7B7E;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x4E0E; Ba(2+) &#x7535;&#x5BFC;&#x5173;&#x8054;&#x5F88;&#x96BE;&#x8C03;&#x548C;&#x4E0E;&#x6B64;&#x901A;&#x9053;&#x5728;&#x5F88;&#x591A;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&quot;&#x5927;&quot;&#x3002;LCa (v) 3 &#x662F;&#x5927;&#x4E8E;&#x8868;&#x793A;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#x4EFB;&#x4F55;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7684; 25%&#x3002;&#x5B83;&#x7F16;&#x7801;&#x8FDB;&#x884C;&#x5927;&#x5B8F;&#x89C2;&#x7535;&#x6D41;&#x4F53;&#x5916;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x3001; 322 kDa &#x86CB;&#x767D;&#x3002;(V) 3 LCa &#x4E5F;&#x662F;&#x8717;&#x725B;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x6700;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x3002;&#x5728;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x9759;&#x606F;&#x7535;&#x4F4D;&#x5F53;&#x524D;&#x7A97;&#x53E3;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E00;&#x6837;&#x5927;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x9891;&#x9053;&#x62A5;&#x9053;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x9065;&#x8FDC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x89C6;&#x89D2;&#x6765;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3001; &#x529F;&#x80FD;&#x3001; &#x836F;&#x7269;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x8FDB;&#x5316;&#x65B9;&#x9762;&#x7684; T &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#x3002;

&#x77AC;&#x53D8;&#x548C;&#x5927;&#x4ECE;&#x7A3B;&#x7530;&#x690E;&#x5B9E; stagnalis &#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x662F;&#x65E0;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x7684; T &#x578B;&#x901A;&#x9053; (LCav3) &#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;

Here we describe features of the first non-mammalian T-type calcium channel (LCa(v)3) expressed in vitro. This molluscan channel possesses combined biophysical properties that are reminiscent of all mammalian T-type channels. It exhibits T-type features such as "transient" kinetics, but the "tiny" label, usually associated with Ba(2+) conductance, is hard to reconcile with the "bigness" of this channel in many respects. LCa(v)3 is 25% larger than any voltage-gated ion channel expressed to date. It codes for a massive, 322-kDa protein that conducts large macroscopic currents in vitro. LCa(v)3 is also the most abundant Ca(2+) channel transcript in the snail nervous system. A window current at typical resting potentials appears to be at least as large as that reported for mammalian channels. This distant gene provides a unique perspective to analyze the structural, functional, drug binding, and evolutionary aspects of T-type channels.

Transient and big are key features of an invertebrate T-type channel (LCav3) from the central nervous system of Lymnaea stagnalis.

Nous d&#xE9;crivons ici les caract&#xE9;ristiques de la premi&#xE8;re non-mammif&#xE8;re canaux calciques de type T (LCA (v) 3) exprim&#xE9;es in vitro. Cette cha&#xEE;ne poss&#xE8;de mollusques combin&#xE9;s propri&#xE9;t&#xE9;s biophysiques qui rappellent de tous les mammif&#xE8;res canaux de type T. Il pr&#xE9;sente de type T des fonctionnalit&#xE9;s telles que &#x26;quot;transitoire&#x26;quot; cin&#xE9;tique, mais la &#x26;quot;petite&#x26;quot; &#xE9;tiquette, g&#xE9;n&#xE9;ralement associ&#xE9;e &#xE0; Ba (2 +) de la conductance, est difficile &#xE0; concilier avec la &#xAB;grandeur&#xBB; de ce canal &#xE0; bien des &#xE9;gards. LCA (v) 3 est 25% plus grande que n&#x26;#39;importe quel canal ionique voltage-d&#xE9;pendant exprim&#xE9; &#xE0; ce jour. Il code pour une massive, 322-kDa qui m&#xE8;ne de grands courants macroscopiques in vitro. LCA (v) 3 est aussi le plus abondant Ca (2 +) la transcription de canal dans le syst&#xE8;me nerveux d&#x26;#39;escargot. Une fen&#xEA;tre en cours au typiques potentiels de repos semble &#xEA;tre au moins aussi grande que celle rapport&#xE9;e pour les canaux de mammif&#xE8;res. Ce g&#xE8;ne lointain offre une perspective unique pour analyser la structure, la liaison fonctionnelle de drogue, et les aspects &#xE9;volutifs de canaux de type T.

Transitoire et Big sont des &#xE9;l&#xE9;ments cl&#xE9;s d&#x26;#39;un invert&#xE9;br&#xE9; T-Type de la Manche (LCav3) &#xE0; partir du syst&#xE8;me nerveux central de Lymnaea stagnalis

Hier beschreiben wir die Funktionen von den ersten nicht-S&auml;uger T-Typ Kalzium-Kanal (LCa(v)3) ausgedr&uuml;ckt in-vitro. Diese Weichtiererzeugnisse Kanal besitzt kombinierte biophysikalische Eigenschaften, erinnert an alle S&auml;ugetier-T-Typ-Kan&auml;le sind. Es stellt T-Typ Funktionen wie &quot;transient&quot; Kinetik, aber das &quot;kleine&quot; Label, gew&ouml;hnlich verbunden mit Ba(2+) Leitwert, ist schwer mit dem &quot;verwunschen&quot; dieses Kanals in vielerlei Hinsicht zu vereinbaren. LCa (V) 3 ist 25 % gr&ouml;&szlig;er als jede Spannung-gated Ion Channel bisher ausgedr&uuml;ckt. Es kodiert f&uuml;r ein massiv, 322-kDa-Protein, das gro&szlig;e makroskopische Str&ouml;me, die in-vitro f&uuml;hrt. LCa (V) 3 ist auch die h&auml;ufigste Ca(2+)-Kanal-Abschrift im Nervensystem Schnecke. Es erscheint ein Fenster am typischen ruhenden Potenziale mindestens so gro&szlig; sein wie die f&uuml;r S&auml;ugetier-Kan&auml;le gemeldet. Dieses ferne gen bietet eine einzigartige Perspektive, um die strukturelle, funktionelle, Droge-Bindung und evolution&auml;re Aspekte der T-Typ-Kan&auml;le zu analysieren.

Transienten und gro&szlig; sind Hauptmerkmale eines wirbellosen T-Typ-Kanals (LCav3) von zentralen Nervensystems der Spitzschlammschnecke.

Qui descriviamo le caratteristiche del primo canale del calcio T-tipo di mammiferi (LCa(v)3) espresso in vitro. Questo canale cotti possiede propriet&agrave; biofisiche combinato che ricordano tutti i canali di tipo T dei mammiferi. Esibisce le caratteristiche di tipo T come cinetica &quot;transitoria&quot;, ma l&#39;etichetta &quot;tiny&quot;, solitamente associata a Ba(2+) conduttanza, &egrave; difficilmente conciliabile con la &quot;grandezza&quot; di questo canale in molti aspetti. LCa (v) 3 &egrave; del 25% pi&ugrave; grande di qualsiasi canale di tensione-gated dello ione espresso fino ad oggi. Codici per una massiccia, 322-kDa proteina che conduce grandi correnti macroscopiche in vitro. LCa (v) 3 &egrave; anche la trascrizione di canale Ca(2+) pi&ugrave; abbondante nel sistema nervoso lumaca. Viene visualizzata una finestra corrente a potenziali di riposo tipici di essere almeno grande come quello segnalato per i canali dei mammiferi. Questo gene lontano fornisce una prospettiva unica per analizzare la strutturale, funzionale, l&#39;associazione di droga e aspetti evolutivi dei canali di tipo T.

Transitori e grandi sono le caratteristiche principali di un canale di tipo T degli invertebrati (LCav3) dal sistema nervoso centrale di Lymnaea stagnalis.

&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x975E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;T-&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;LCA&#xFF08;V&#xFF09;3&#xFF09;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8EDF;&#x4F53;&#x52D5;&#x7269;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;T&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x9023;&#x60F3;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A; &#x26;quot;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x26;quot;&#x52D5;&#x614B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;T&#x578B;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;Ba&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F; &#x26;quot;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x26;quot;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x70B9;&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E; &#x26;quot;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x26;quot;&#x3067;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3059;&#x3002; LCA&#xFF08;v&#xFF09;&#x306E;3&#x65E5;&#x306B;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3088;&#x308A;&#x3082;25&#xFF05;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; in vitro&#x3067;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x5DE8;&#x8996;&#x7684;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x3066;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x3001;322-kDa&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; LCA&#xFF08;V&#xFF09;3&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30BF;&#x30C4;&#x30E0;&#x30EA;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;&#x5B89;&#x9759;&#x6642;&#x306E;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3067;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30A6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30A6;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x540C;&#x3058;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9060;&#x3044;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3001;&#x85AC;&#x7269;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;T&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x5074;&#x9762;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x8996;&#x70B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x904E;&#x6E21;&#x7684;&#x306A;&#x30D3;&#x30C3;&#x30B0;Lymnaea Stagnalis&#x306E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x304B;&#x3089;&#x7121;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x3001;T&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;LCav3&#xFF09;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x7279;&#x5FB4;&#x306F;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x901A;&#x308A;

&#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; (LCa(v)3) &#xD45C;&#xD604; &#xCCB4; &#xC678; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBE44; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; T-&#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC124;&#xBA85;. &#xC774; molluscan &#xCC44;&#xB110; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; T-&#xD0C0;&#xC785; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC5F0;&#xC0C1; &#xACB0;&#xD569;&#xB41C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xC18D;&#xC131;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. T &#xD615; &#xAE30;&#xB2A5; &quot;&#xACFC;&#xB3C4;&quot; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xB4F1;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; Ba(2+) &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &quot;&#xC791;&#xC740;&quot; &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &quot;bigness&quot; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xCC44;&#xB110;&#xC758;&#xC640; &#xD654;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB835;&#xB2E4;. LCa (v) 3 &#xB0A0;&#xC9DC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD070; 25% &#xC774;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xD070; &#xAC70;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xB958; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8;, 322-kDa &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCF54;&#xB4DC;. LCa (v) 3 &#xB2EC;&#xD33D;&#xC774; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xB300;&#xD654; &#xAE30;&#xB85D; &#xC774;&#xAE30;&#xB3C4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xD615;&#xC801;&#xC778; &#xD734;&#xC2DD; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD604;&#xC7AC; &#xCC3D; &#xD06C;&#xAE30; &#xC774;&#xC0C1; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xB85C; &#xC11C;. &#xC774; &#xBA3C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;, &#xAE30;&#xB2A5;, &#xB9C8;&#xC57D; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; T-&#xD0C0;&#xC785; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC9C4;&#xD654; &#xCE21;&#xBA74; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xAD00;&#xC810;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACFC;&#xB3C4; &#xD558; &#xACE0; &#xD070;&#xC740; Lymnaea stagnalis&#xC758; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBB34;&#xCC99; &#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; T-&#xD0C0;&#xC785; &#xCC44;&#xB110; (LCav3)&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

A continuaci&#xF3;n se describen las caracter&#xED;sticas de los primeros animales no mam&#xED;feros del canal de calcio tipo T (LCA (v) 3) se expresa in vitro. Este canal posee moluscos combinados propiedades biof&#xED;sicas que son una reminiscencia de todos los mam&#xED;feros de tipo T-canales. Presenta caracter&#xED;sticas de tipo T, tales como &#x26;quot;transitorios&#x26;quot; cin&#xE9;tica, pero la &#x26;quot;peque&#xF1;a&#x26;quot; etiqueta, generalmente asociada con Ba (2 +) de la conductancia, es dif&#xED;cil de conciliar con la &#x26;quot;grandeza&#x26;quot; de este canal, en muchos aspectos. LCA (v) 3 es un 25% m&#xE1;s grande que cualquier canal i&#xF3;nico dependiente de voltaje expresado hasta la fecha. Codifica para una masiva, 322-kDa prote&#xED;na que lleva a cabo grandes corrientes macrosc&#xF3;picas in vitro. LCA (v) 3 es tambi&#xE9;n el m&#xE1;s abundante de Ca (2 +) transcripci&#xF3;n canal en el sistema nervioso caracol. Una ventana actual en t&#xED;picos potenciales de reposo parece ser al menos tan grande como la descrita para los canales de mam&#xED;feros. Este gen distante proporciona una perspectiva &#xFA;nica para analizar los aspectos estructurales, funcionales vinculante, de drogas, y los aspectos evolutivos de tipo T canales.

Transitoria y Big son caracter&#xED;sticas clave de un invertebrado de tipo T Canal (LCav3) del sistema nervioso central de la Lymnaea stagnalis

&#x65E0;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269; L-&#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;LCa(v) 1&#xFF0C;&#x4ECE;&#x6C60;&#x5858;&#x8717;&#x725B;&#x7A3B;&#x7530;&#x690E;&#x5B9E; stagnalis &#x5206;&#x79BB;&#x662F;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; Ca(v) 1.2 (&alpha;1C) &#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6CA1;&#x6709;&#x533A;&#x522B;&#x3002;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B; L &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#x88AB;&#x9650;&#x5236;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x53C2;&#x6570;&#x7684;&#x72ED;&#x7A84;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x4EE5;&#x8717;&#x725B;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x6267;&#x884C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x8717;&#x725B;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684; L &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x533A;&#x522B;&#x662F;&#x4E8C;&#x6C22;&#x5421;&#x5576;&#x7C7B;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#xFF1A; 100 nM &#x4F0A;&#x62C9;&#x5730;&#x5E73;&#x5C55;&#x54C1;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; Ca(v) 1.2 &#x7535;&#x6D41;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x8717;&#x725B; LCa (v) 1 &#x5927;&#x5757;&#x7535;&#x6D41;&#x3002;&#x672C;&#x673A;&#x8717;&#x725B;&#x901A;&#x9053;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5B9D;&#x8D35;&#x7684;&#x4EE3;&#x7406;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x4ECE;&#x5148;&#x524D;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x6B8B;&#x7559;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x5EFA;&#x6A21;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x3002;&#x6B63;&#x5982;&#x9884;&#x6599;&#xFF0C;LCa (v) 1 &#xFF08;N_3o18&#xFF0C;F_3i10 &#x548C; I_4i12&#xFF09; &#x66FF;&#x6362; DHP &#x9065;&#x611F;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6B8B;&#x7559;&#x53D8;&#x5316;&#x5728;&#x5404;&#x81EA;&#x7684;&#x7ACB;&#x573A;&#xFF0C;&#x4F0A;&#x62C9;&#x5730;&#x5E73;&#x5757;&#x7684; LCa (v) 1 &#x6548;&#x4EF7;&#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; Ca(v) 1.2 Ca(v) 1.2&#x3001; &#xFF08;Q_3o18&#xFF0C;Y_3i10 &#x548C; M_4i12&#xFF09; &#x5F15;&#x53D1;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;LCa(v) 1 &#x901A;&#x9053;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A; N_3o18_Q &#x7A81;&#x53D8;&#x964D;&#x4F4E;&#x751A;&#x81F3;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65; DHP &#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x548C;&#x4E09;&#x91CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x8F74;&#x627F;&#x52A0;&#x5F3A;&#x4F0A;&#x62C9;&#x5730;&#x5E73;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#xFF0C;&#x4ECD;&#x4FDD;&#x7559;&#x7740;&#x964D;&#x4F4E;&#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#xFF0C;(S)-&#x6E7E; K8644&#x3002;

&#x4E8C;&#x6C22;&#x5421;&#x5576;&#x7C7B;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E2D;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x4E0D;&#x592A;&#x654F;&#x611F;&#x65E0;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269; L-&#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053; (LCa v 1&#xFF09; &#x7684;&#x6620;&#x5C04;&#x3002;

Invertebrate L-type calcium channel, LCa(v) 1, isolated from the pond snail Lymnaea stagnalis is nearly indistinguishable from mammalian Ca(v) 1.2 (Î±1C) calcium channel in biophysical characteristics observed in vitro. These L-type channels are likely constrained within a narrow range of biophysical parameters to perform similar functions in the snail and mammalian cardiovascular systems. What distinguishes snail and mammalian L-type channels is a difference in dihydropyridine sensitivity: 100 nM isradipine exhibits a significant block of mammalian Ca(v) 1.2 currents without effect on snail LCa(v)1 currents. The native snail channel serves as a valuable surrogate for validating key residue differences identified from previous experimental and molecular modeling work. As predicted, three residue changes in LCa(v)1 (N_3o18, F_3i10, and I_4i12) replaced with DHP-sensing residues in respective positions of Ca(v) 1.2, (Q_3o18, Y_3i10, and M_4i12) raises the potency of isradipine block of LCa(v)1 channels to that of mammalian Ca(v) 1.2. Interestingly, the single N_3o18_Q mutation in LCa(v) 1 channels lowers DHP sensitivity even further and the triple mutation bearing enhanced isradipine sensitivity, still retains a reduced potency of agonist, (S)-Bay K8644.

Mapping of dihydropyridine binding residues in a less sensitive invertebrate L-type calcium channel (LCa v 1).

Invert&#xE9;br&#xE9;s des canaux calciques de type L, LCA (v) 1, isol&#xE9; de l&#x26;#39;&#xE9;tang d&#x26;#39;escargot Lymnaea stagnalis est presque impossible &#xE0; distinguer de mammif&#xE8;res Ca (v) 1,2 canaux calciques (&#x3B1;1C) dans les caract&#xE9;ristiques biophysiques observ&#xE9;s in vitro. Ces canaux de type L sont susceptibles limit&#xE9;e dans une fourchette &#xE9;troite de param&#xE8;tres biophysiques &#xE0; exercer des fonctions similaires dans l&#x26;#39;escargot et de mammif&#xE8;res syst&#xE8;mes cardio-vasculaire. Ce qui distingue d&#x26;#39;escargots et de mammif&#xE8;res canaux de type L est une diff&#xE9;rence de sensibilit&#xE9; dihydropyridine: 100 nM isradipine pr&#xE9;sente un bloc important de mammif&#xE8;res Ca (v) 1,2 courants sans effet sur escargot LCA (v) 1 courants. Le canal d&#x26;#39;escargot natif sert comme un substitut pr&#xE9;cieux pour la validation des diff&#xE9;rences de r&#xE9;sidus cl&#xE9;s identifi&#xE9;s &#xE0; partir des travaux de mod&#xE9;lisation pr&#xE9;c&#xE9;dente exp&#xE9;rimentale et mol&#xE9;culaire. Comme pr&#xE9;vu, trois changements de r&#xE9;sidus dans l&#x26;#39;ACV (V) 1 (N_3o18, F_3i10, et I_4i12) remplac&#xE9;s par des DHP-d&#xE9;tection de r&#xE9;sidus dans les positions respectives de Ca (v) 1.2, (Q_3o18, Y_3i10, et M_4i12) soul&#xE8;ve la puissance du bloc isradipine de LCA (v) 1 canaux &#xE0; celle de mammif&#xE8;re Ca (v) 1,2. Fait int&#xE9;ressant, la mutation N_3o18_Q unique dans l&#x26;#39;ACV (v) 1 canaux abaisse la sensibilit&#xE9; DHP encore plus loin et la mutation triple tenant am&#xE9;lior&#xE9; la sensibilit&#xE9; isradipine, conserve encore une puissance r&#xE9;duite de l&#x26;#39;agoniste, (S)-Bay K8644.

Cartographie des dihydropyridines r&#xE9;sidus de liaison dans un canal calcique invert&#xE9;br&#xE9;s Moins sensible de type L (LCA V 1)

Wirbellosen L-f&ouml;rmige Kalzium-Kanal, LCa(v) 1, isoliert aus dem Teich-Schnecke Spitzschlammschnecke ist fast von S&auml;ugetier-Ca(v) 1.2 (&alpha;1C)-Kalzium-Kanal im biophysikalischen Eigenschaften beobachtet in-vitro unterscheiden. Diese L-Typ-Kan&auml;le werden wahrscheinlich in einem engen Bereich von biophysikalischen Parameter eingeschr&auml;nkt, in der Schnecke und S&auml;ugetier-Herz-Kreislauf-Systeme &auml;hnliche Aufgaben erf&uuml;llen. Was unterscheidet Schnecke und S&auml;ugetier-L-Typ-Kan&auml;le ist ein Unterschied in Dihydropyridin-Empfindlichkeit: 100 nM Isradipin weist einen erheblichen Block S&auml;ugetier-Ca(v) 1.2 Str&ouml;mungen ohne Auswirkung auf Schnecke LCa (V) 1 Str&ouml;mungen. Der native Schnecke-Kanal dient als einen wertvollen Ersatz f&uuml;r die &Uuml;berpr&uuml;fung der wichtigsten R&uuml;ckstand Unterschiede identifiziert aus fr&uuml;heren experimentelle und Molekulare Modellierung Arbeit. Wie vorausgesagt, drei R&uuml;ckstand &Auml;nderungen in LCa (V) 1 (N_3o18, F_3i10 und I_4i12) ersetzt mit DHP-Sensorik R&uuml;ckst&auml;nde in den jeweiligen Positionen Ca(v) 1.2 (Q_3o18, Y_3i10 und M_4i12) erh&ouml;ht die Wirksamkeit von Isradipin Block von LCa (V) 1-der S&auml;ugetier-Ca(v) 1.2 Kan&auml;le. Interessant ist, die einzelne N_3o18_Q-Mutation in LCa(v) 1 Kan&auml;le senkt DHP Empfindlichkeit noch weiter und dreifach Mutation Lagers enhanced Isradipin Empfindlichkeit, beh&auml;lt noch eine geringere Wirksamkeit von Agonist, (S)-Bay K8644.

Zuordnung von Dihydropyridin Bindung R&uuml;ckst&auml;nde in einem weniger empfindlichen Wirbellosen L-Typ-Kalzium-Kanal (LCa V 1).

Invertebrati canale del calcio tipo L, LCa(v) 1, isolato dalla lumaca di stagno Lymnaea stagnalis &egrave; quasi indistinguibile dal canale di calcio Ca(v) 1.2 (&alpha;1C) dei mammiferi in biofisiche caratteristiche osservate in vitro. Questi canali di tipo L probabilmente sono vincolati all&#39;interno di una ristretta gamma di parametri biofisici per svolgere funzioni simili nella lumaca e sistemi cardiovascolari dei mammiferi. Ci&ograve; che distingue la lumaca e mammiferi canali L-type &egrave; una differenza di sensibilit&agrave; diidropiridinico: 100 nM Isradipina esibisce un significativo blocco di mammiferi Ca(v) 1.2 correnti senza effetto sulla lumaca LCa (v) 1 correnti. Il canale nativo lumaca serve come un surrogato prezioso per la convalida di differenze residui chiave identificate dalla precedente sperimentale e lavoro di modellazione molecolare. Come previsto, tre cambiamenti di residui in LCa (v) 1 (N_3o18, F_3i10 e I_4i12) sostituito con DHP-sensing residui nelle rispettive posizioni di Ca(v) 1.2, (Q_3o18, Y_3i10 e M_4i12) genera la potenza di Isradipina blocco di LCa (v) 1 canali a quella dei mammiferi Ca(v) 1.2. &Egrave; interessante notare che, la singola mutazione N_3o18_Q in LCa(v) 1 canali abbassa la sensibilit&agrave; DHP ulteriormente e il cuscinetto di mutazione triple migliorata la sensibilit&agrave; Isradipina, conserva ancora una potenza ridotta di agonista, (S)-Bay K8644.

Mappatura dei residui associazione diidropiridinico in un meno sensibile degli invertebrati canale calcio di tipo L (LCa v 1).

&#x6C60;&#x30AB;&#x30BF;&#x30C4;&#x30E0;&#x30EA;Lymnaea stagnalis&#x304B;&#x3089;&#x9694;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7121;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3001;LCA&#xFF08;v&#xFF09;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x56F3;1&#x306B;&#x793A;&#x3059;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#xFF08;&#x3B1;1C&#xFF09;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x307B;&#x307C;&#x533A;&#x5225;&#x304C;&#x3064;&#x304B;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;L-&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x30AB;&#x30BF;&#x30C4;&#x30E0;&#x30EA;&#x3068;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x8840;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x305F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x72ED;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x5185;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30AB;&#x30BF;&#x30C4;&#x30E0;&#x30EA;&#x3068;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;L-&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306E;&#x5DEE;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#xFF1A;100 nM&#x306E;&#x30A4;&#x30B9;&#x30E9;&#x30B8;&#x30D4;&#x30F3;&#x306F;&#x30AB;&#x30BF;&#x30C4;&#x30E0;&#x30EA;LCA&#xFF08;V&#xFF09;1&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30AB;&#x30BF;&#x30C4;&#x30E0;&#x30EA;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x524D;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3068;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x4F5C;&#x696D;&#x304B;&#x3089;&#x8B58;&#x5225;&#x30AD;&#x30FC;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30B5;&#x30ED;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3068;&#x3057;&#x3066;Ca&#x306E;&#x5404;&#x4F4D;&#x7F6E;&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#x3001;&#xFF08;Q_3o18&#x3001;Y_3i10&#x3001;&#x3068;M_4i12&#xFF09;&#x306E;DHP&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x7F6E;&#x63DB;LCA&#x306E;3&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#xFF08;V&#xFF09;1&#xFF08;N_3o18&#x3001;F_3i10&#x3001;&#x3068;I_4i12&#xFF09;&#x30A4;&#x30B9;&#x30E9;&#x30B8;&#x30D4;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x52B9;&#x529B;&#x3092;&#x767A;&#x751F;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x4E88;&#x6E2C;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#x301C;LCA&#xFF08;v&#xFF09;&#x306E;1&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;LCA&#x306E;&#x5358;&#x4E00;N_3o18_Q&#x5909;&#x7570;&#xFF08;V&#xFF09;1&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C;&#x3055;&#x3089;&#x306B;DHP&#x611F;&#x5EA6;&#x3068;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A4;&#x30B9;&#x30E9;&#x30B8;&#x30D4;&#x30F3;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x4E09;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x4E0B;&#x3052;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x3001;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306E;&#x52B9;&#x529B;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#xFF08;S&#xFF09;&#x30D9;&#x30A4;K8644&#x3002;

&#x6A5F;&#x5BC6;&#x6027;&#x306E;&#x4F4E;&#x3044;&#x7121;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;LCA V 1&#xFF09;

&#xBB34;&#xCC99; &#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; L &#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;, LCa(v) 1, Lymnaea stagnalis &#xC5F0;&#xBABB; &#xB2EC;&#xD33D;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; &#xCCB4; &#xC678; &#xAD00;&#xCC30; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; Ca(v) 1.2 (&alpha;1C) &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC70;&#xC758; &#xAD6C;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC774; L &#xD615; &#xC218;&#xB85C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xB2EC;&#xD33D;&#xC774; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xD608;&#xAD00; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xC758; &#xC881;&#xC740; &#xBC94;&#xC704; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Dihydropyridine &#xAC10;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xBB34;&#xC2A8; &#xB2EC;&#xD33D;&#xC774; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; L &#xD615; &#xCC44;&#xB110; &#xAD6C;&#xBD84;: 100 nM isradipine &#xC804;&#xC2DC; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBE14;&#xB85D; &#xB2EC;&#xD33D;&#xC774; LCa (v) 1&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; Ca(v) 1.2 &#xC804;&#xB958; &#xC804;&#xB958;. &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB2EC;&#xD33D;&#xC774; &#xCC44;&#xB110; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xC8FC;&#xC694; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xCC28;&#xC774; &#xAC80;&#xC99D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xC791;&#xC5C5; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xB300;&#xB9AC;&#xB85C; &#xC11C; &#xC5ED;&#xD560;. &#xC608;&#xCE21;, LCa (v) 1 (N_3o18, F_3i10, &#xBC0F; I_4i12) DHP &#xAC10;&#xC9C0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xCCB4; &#xC138; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBCC0;&#xD654; Ca(v) 1.2, (Q_3o18, Y_3i10, &#xBC0F; M_4i12) &#xC81C;&#xAE30; LCa (v) 1&#xC758; isradipine &#xBE14;&#xB85D;&#xC758; &#xD798;&#xC744; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; Ca(v) 1.2&#xC758; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAC01;&#xAC01;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, LCa(v) 1 &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xC77C; N_3o18_Q &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; DHP &#xAC10;&#xB3C4; &#xB354;&#xC6B1; &#xC808;&#xAC10; &#xD558; &#xACE0; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; isradipine &#xAC10;&#xB3C4; &#xD5A5;&#xC0C1;, &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; (S)&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; &#xD6A8;&#xB2A5;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0;-&#xBCA0;&#xC774; K8644.

&#xB35C; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xBB34;&#xCC99; &#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; L &#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; (LCa v 1) dihydropyridine &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xB9E4;&#xD551;.

Invertebrados tipo L del canal de calcio, LCA (v) 1, aislado del estanque caracol Lymnaea stagnalis es casi indistinguible de mam&#xED;feros Ca (v) 1,2 canal de calcio (&#x3B1;1C) en caracter&#xED;sticas biof&#xED;sicas observados in vitro. Estos canales de tipo L es probable limitado dentro de un estrecho rango de par&#xE1;metros biof&#xED;sicos para llevar a cabo funciones similares en el caracol y los mam&#xED;feros sistemas cardiovascular. Lo que distingue caracoles y mam&#xED;feros canales tipo L es una diferencia en la sensibilidad dihidropiridina: 100 nM isradipina exhibe un bloque significativo de mam&#xED;feros Ca v) 1,2 corrientes sin efecto sobre caracol LCA (v) 1 corrientes. El canal caracol nativa sirve como un sustituto valioso para la validaci&#xF3;n de las diferencias principales residuos identificados a partir de trabajos anteriores de modelado experimental y molecular. Como se predijo, tres cambios de residuos en los ACV (V) 1 (N_3o18, F_3i10 y I_4i12) sustituido por DHP-detecci&#xF3;n de residuos en las posiciones respectivas de Ca (v) 1.2, (Q_3o18, Y_3i10 y M_4i12) aumenta la potencia del bloque de isradipina del LCA (v) los canales 1 a la de los mam&#xED;feros Ca (v) 1.2. Curiosamente, la mutaci&#xF3;n N_3o18_Q solo en ACV (V) 1 canales disminuye la sensibilidad DHP a&#xFA;n m&#xE1;s y la mutaci&#xF3;n triples teniendo una mayor sensibilidad isradipina, a&#xFA;n conserva una potencia reducida de agonista, (S)-Bay K8644.

J. David Spafford

Department of Biology

University of Waterloo

Optimized Transfection Strategy for Expression and Electrophysiological Recording of Recombinant Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T Cells

J. David Spafford

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University of Waterloo

Optimized Transfection Strategy for Expression and Electrophysiological Recording of Recombinant Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T Cells

Department of Biology