Rejection of Fluorescence Background in Resonance and Spontaneous Raman Microspectroscopy

Raman spectroscopy is often plagued by a strong fluorescent background, particularly for biological samples. If a sample is excited with a train of ...

University of California, Davis

&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x57FA;&#x4E8E;&#x9002;&#x914D;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x5171;&#x632F;&#x62C9;&#x66FC;&#x6563;&#x5C04; &#xFF08;SERRS&#xFF09; &#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x9AD8;&#x3001; &#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x68C0;&#x6D4B;&#x51DD;&#x8840;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684; alpha &#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x5B9E;&#x73B0;&#x9AD8;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x548C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6781;&#x9650;&#x7684; 100 &#x901A;&#x8FC7;&#x76D1;&#x6D4B; SERRS &#x4FE1;&#x53F7;&#x53D8;&#x5316;&#x65F6;&#x5355;&#x6B65;&#x6267;&#x884C;&#x7684;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4E0B;&#x5348;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x9002;&#x914D;&#x3002;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x6B67;&#x89C6;&#x4ECE;&#x5176;&#x4ED6;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x8BC1;&#x660E;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x3002;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x9644;&#x7740;&#x662F;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x57FA;&#x4E8E;&#x9002;&#x914D;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4F7F;&#x7528;&#x8D1F;&#x63A7;&#x5236;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x6240;&#x793A;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x53EF;&#x4EE5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x5B58;&#x5728;&#x590D;&#x6742;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6; 10%&#x80CE;&#x725B;&#x8840;&#x6E05;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x3001; 5&#39; &#x4E0A;&#x9650;&#x3001; 3&#39; &#x4E0A;&#x9650;&#x9644;&#x7740;&#x6709;&#x8DB3;&#x591F;&#x5F3A;&#x52B2;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8BCA;&#x65AD;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E0B;&#x7684; 1 nM &#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x9644;&#x7740;&#x62C9;&#x66FC;&#x63A2;&#x9488;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x591A;&#x8DEF;&#x590D;&#x7528;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5B9E;&#x65BD;&#x62DF;&#x8BAE;&#x7684;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x3002;

&#x57FA;&#x4E8E;&#x9002;&#x914D;&#x7684; SERRS &#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x3002;

We describe an aptamer-based surface enhanced resonance Raman scattering (SERRS) sensor with high sensitivity, specificity, and stability for the detection of a coagulation protein, human alpha-thrombin. The sensor achieves high sensitivity and a limit of detection of 100 pM by monitoring the SERRS signal change upon the single-step of thrombin binding to immobilized thrombin binding aptamer. The selectivity of the sensor is demonstrated by the specific discrimination of thrombin from other protein analytes. The specific recognition and binding of thrombin by the thrombin binding aptamer is essential to the mechanism of the aptamer-based sensor, as shown through measurements using negative control oligonucleotides. In addition, the sensor can detect 1 nM thrombin in the presence of complex biofluids, such as 10% fetal calf serum, demonstrating that the immobilized, 5'-capped, 3'-capped aptamer is sufficiently robust for clinical diagnostic applications. Furthermore, the proposed sensor may be implemented for multiplexed detection using different aptamer-Raman probe complexes.

Aptamer-based SERRS sensor for thrombin detection.

Se describe un apt&#xE1;mero basado superficie mejorada resonancia Ram&#xE1;n (SERRS) sensor con una alta sensibilidad, especificidad y estabilidad para la detecci&#xF3;n de una prote&#xED;na de coagulaci&#xF3;n, la alfa-trombina. El sensor alcanza una alta sensibilidad y un l&#xED;mite de detecci&#xF3;n de 100 pM mediante la supervisi&#xF3;n del cambio de se&#xF1;al SERRS sobre el solo paso de la trombina de uni&#xF3;n a trombina inmovilizada apt&#xE1;mero uni&#xF3;n. La selectividad del sensor se demuestra por la discriminaci&#xF3;n espec&#xED;fica de la trombina de analitos otras prote&#xED;nas. El reconocimiento espec&#xED;fico y uni&#xF3;n de la trombina por la trombina apt&#xE1;mero uni&#xF3;n es esencial para el mecanismo del sensor apt&#xE1;mero basado, como se muestra a trav&#xE9;s de mediciones utilizando oligonucle&#xF3;tidos de control negativo. Adem&#xE1;s, el sensor puede detectar 1 nM de trombina en presencia de biofluidos complejos, tales como suero de ternera fetal al 10%, lo que demuestra que el inmovilizado, 5&#x26;#39;-capsulado, 3&#x26;#39;-capsulado apt&#xE1;mero es suficientemente robusto para aplicaciones de diagn&#xF3;stico cl&#xED;nico. Adem&#xE1;s, el sensor propuesto puede ser aplicado para la detecci&#xF3;n multiplexada utilizando diferentes aptamer Raman complejos de sonda.

Apt&#xE1;mero basado SERRS sensor para la detecci&#xF3;n de trombina

On d&#xE9;crit un aptam&#xE8;re &#xE0; base de surface renforc&#xE9;e par r&#xE9;sonance Raman (SERRS) du capteur avec une sensibilit&#xE9; &#xE9;lev&#xE9;e, la sp&#xE9;cificit&#xE9;, et la stabilit&#xE9; de d&#xE9;tection d&#x26;#39;une prot&#xE9;ine de coagulation, l&#x26;#39;alpha-thrombine. Le capteur r&#xE9;alise une grande sensibilit&#xE9; et une limite de d&#xE9;tection de 100 pM en surveillant le changement de signal SERRS sur la seule &#xE9;tape de la thrombine se liant &#xE0; la thrombine immobilis&#xE9;e contraignant aptam&#xE8;re. La s&#xE9;lectivit&#xE9; du capteur est d&#xE9;montr&#xE9; par la discrimination sp&#xE9;cifique de la thrombine &#xE0; partir des analytes d&#x26;#39;autres prot&#xE9;ines. La reconnaissance sp&#xE9;cifique de la thrombine et de liaison par la thrombine aptam&#xE8;re liaison est essentielle pour le m&#xE9;canisme du capteur &#xE0; base aptam&#xE8;re, comme repr&#xE9;sent&#xE9; par des mesures en utilisant des oligonucl&#xE9;otides de contr&#xF4;le n&#xE9;gatif. En outre, le capteur peut d&#xE9;tecter 1 nM de thrombine en pr&#xE9;sence de liquides biologiques complexes, tels que du s&#xE9;rum de veau foetal &#xE0; 10%, ce qui d&#xE9;montre que le immobilis&#xE9;, 5&#x26;#39;-capped, 3&#x26;#39;-capped aptam&#xE8;re est suffisamment robuste pour applications diagnostiques cliniques. En outre, le capteur propos&#xE9; peut &#xEA;tre mis en &#x153;uvre pour la d&#xE9;tection multiplex en utilisant diff&#xE9;rents complexes de la sonde aptam&#xE8;re-Raman.

Aptam&#xE8;res bas&#xE9;e sur capteur pour la d&#xE9;tection SERRS thrombine

Wir beschreiben eine Aptamer-basierte Oberfl&auml;che erh&ouml;hte Resonanz Raman-Streuung (SERRS) Sensor mit hoher Empfindlichkeit, Spezifit&auml;t und Stabilit&auml;t f&uuml;r den Nachweis eines Proteins Koagulation, menschliches Alpha-Thrombin. Der Sensor erreicht hohe Empfindlichkeit und einer Nachweisgrenze von 100 pM durch &Uuml;berwachung der SERRS-Signal-&Auml;nderung auf die einstufige Thrombin binden an immobilisiert Thrombin Bindung Aptamer. Die Selektivit&auml;t des Sensors wird durch die spezifische Diskriminierung von Thrombin aus anderen Protein-Analyten demonstriert. Die spezifische Anerkennung und die Bindung von Thrombin durch die Thrombin-Bindung-Aptamer unbedingt den Mechanismus des Sensors Aptamer-basierten, wie durch Messungen mittels Negativkontrolle Oligonukleotide gezeigt. Dar&uuml;ber hinaus erkennt der Sensor 1 nM Thrombin in Anwesenheit von komplexen hinter, z. B. 10 % Fetales Kalb Serum, demonstrieren, dass die immobilisierte, 5&#39;-begrenzt, 3&#39;-capped Aptamer robust genug f&uuml;r klinische Diagnostik-Anwendungen ist. Dar&uuml;ber hinaus kann die vorgeschlagene Sensor f&uuml;r Multiplex-Erkennung mit verschiedenen Aptamer-Raman-Sonde-komplexe implementiert werden.

Aptamer-basierte SERRS-Sensor f&uuml;r Thrombin-Erkennung.

Descriviamo un basata su aptamer superficie maggiore risonanza sensore di Raman scattering (SERRS) con alta sensibilit&agrave;, specificit&agrave; e stabilit&agrave; per la rilevazione di una proteina della coagulazione, alfa-trombina umana. Il sensore raggiunge un&#39;elevata sensibilit&agrave; e un limite di rilevazione di 100 pM monitorando il cambiamento del segnale SERRS sul passo del legame della trombina a immobilizzato trombina associazione aptamer. La selettivit&agrave; del sensore &egrave; dimostrata dalla discriminazione specifica della trombina da altri analiti di proteine. Il riconoscimento specifico e vincolante della trombina con la trombina associazione aptamer &egrave; essenziale per il meccanismo del sensore basato su aptamer, come mostrato attraverso misurazioni utilizzando oligonucleotidi controllo negativo. Inoltre, il sensore pu&ograve; rilevare 1 trombina nM in presenza di complessi ha, come il siero fetale di vitello 10%, dimostrando che la 5&#39;--capped, 3&#39; capped aptamer immobilizzato, &egrave; sufficientemente robusto per le applicazioni di diagnostiche cliniche. Inoltre, il sensore proposto pu&ograve; essere implementato per rilevazione multiplex utilizzando complessi sonda Raman-aptamer diversi.

Sensore basato su Aptamer SERRS per il rilevamento di trombina.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x51DD;&#x56FA;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x3B1;-&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x3001;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x5897;&#x5F37;&#x5171;&#x9CF4;&#x30E9;&#x30DE;&#x30F3;&#x6563;&#x4E71;&#xFF08;SERRS&#xFF09;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306F;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x3001;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x5B9F;&#x884C;&#x6642;&#x306B;SERRS&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;100 pM&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x9650;&#x754C;&#x3092;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x691C;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5DEE;&#x5225;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3068;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x304C;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;5&#x26;#39;-&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;3&#x26;#39;-&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A3A;&#x65AD;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x5805;&#x7262;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;10&#xFF05;&#x30A6;&#x30B7;&#x80CE;&#x5150;&#x8840;&#x6E05;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x751F;&#x4F53;&#x6DB2;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;1nM&#x306E;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30E9;&#x30DE;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x591A;&#x91CD;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;SERRS&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xAC10;&#xB3C4;, &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC778;&#xAC04; &#xC54C;&#xD30C;-&#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48; &#xC751;&#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xD55C; aptamer &#xAE30;&#xBC18; &#xD45C;&#xBA74; &#xAC15;&#xD654; &#xB41C; &#xACF5;&#xBA85; &#xB77C;&#xB9CC; &#xC0B0;&#xB780; (SERRS) &#xC13C;&#xC11C;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC13C;&#xC11C; &#xB2EC;&#xC131; &#xB192;&#xC740; &#xAC10;&#xB3C4; 100&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C; &#xD55C;&#xACC4; &#xC624;&#xD6C4; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; SERRS &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558; &#xC5EC; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; aptamer&#xB97C; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC13C;&#xC11C;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; analytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xD55C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xBA85; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Oligonucleotides &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBCFC; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC14;&#xC640; &#xAC19;&#xC774; &#xD2B9;&#xC815; &#xC778;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; aptamer &#xD558; &#xC5EC; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; aptamer &#xAE30;&#xBC18; &#xC13C;&#xC11C;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC13C;&#xC11C;&#xB294; &#xD2B8; &#xB86C; nM 1 &#xBE48; 10% &#xD0DC;&#xC544; &#xC1A1;&#xC544;&#xC9C0; &#xD608; &#xCCAD;, &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC774;&#xC9C0;, 5&#39;-&#xCD9C;&#xC7A5;, 3&#39;-&#xCD9C;&#xC7A5; aptamer&#xB294; &#xCDA9;&#xBD84;&#xD788; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC784;&#xC0C1; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xB4F1; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; biofluids&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xC13C;&#xC11C;&#xB294; &#xB2E4;&#xC911;&#xD654; &#xB41C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB2E4;&#xB978; aptamer Raman &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD6C;&#xD604;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Aptamer &#xAE30;&#xBC18; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; SERRS &#xC13C;&#xC11C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x589E;&#x5F3A;&#x62C9;&#x66FC;&#x6563;&#x5C04; &#xFF08;SERS&#xFF09; &#x4F7F;&#x7528;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x9002;&#x914D; &#xFF08;TBA&#xFF09; &#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x76F4;&#x63A5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5206;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x6280;&#x672F;&#x5229;&#x7528;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x7684;&#x7EB3;&#x7C73;&#x94F6;&#x5B98;&#x80FD; 15 mer &#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x7279;&#x5B9A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x9002;&#x914D;&#x5206;&#x5B50;&#x5DEF;&#x57FA; &#xFF08;5&#39;-GGTTGGTGTGGTTGG-3&#39;) &#x5F62;&#x6210;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x78C1;&#x8DEF;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x5BF9;&#x5E94;&#x7684;&#x9002;&#x914D;&#x548C;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x3001; &#x65B0;&#x9AD8;&#x5CF0;&#x7684;&#x62C9;&#x66FC;&#x632F;&#x52A8;&#x4E50;&#x961F; (&#x4E3B;&#x8981;&#x5728; 1140&#x5E74;&#x3001; &#x7B2C; 1540 &#x53F7;&#x548C; 1635 cm(-1)) &#x6240;&#x7279;&#x6709;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6307;&#x51FA;&#x540E;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x5F53;&#x9644;&#x7740;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50;&#x7EC4;&#x88C5;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x7EA6;&#x675F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5982;&#x725B;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;BSA&#xFF09; &#x4E0D;&#x9075;&#x5B88;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5149;&#x8C31;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7528;&#x4E8E;&#x65E0;&#x6807;&#x7B7E;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x76F4;&#x63A5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x5176;&#x5B83;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x9002;&#x914D;&#x5B50;&#x6709;&#x7684;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7;&#x8868;&#x9762;&#x589E;&#x5F3A;&#x62C9;&#x66FC;&#x5149;&#x8C31;&#x9002;&#x914D;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x76F4;&#x63A5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

In this study, we exploit the sensitivity offered by surface-enhanced Raman scattering (SERS) for the direct detection of thrombin using the thrombin-binding aptamer (TBA) as molecular receptor. The technique utilizes immobilized silver nanoparticles that are functionalized with thiolated thrombin-specific binding aptamer, a 15-mer (5'-GGTTGGTGTGGTTGG-3') quadruplex forming oligonucleotide. In addition to the Raman vibrational bands corresponding to the aptamer and blocking agent, new peaks (mainly at 1140, 1540, and 1635 cm(-1)) that are characteristic of the protein are observed upon binding of thrombin. These spectral changes are not observed when the aptamer-nanoparticle assembly is exposed to a nonbinding protein such as bovine serum albumin (BSA). This methodology could be further used for the development of label-free biosensors for direct detection of proteins and other molecules of interest for which aptamers are available.

Direct detection of aptamer-thrombin binding via surface-enhanced Raman spectroscopy.

Dans cette &#xE9;tude, nous exploitons la sensibilit&#xE9; offerte par surface-enhanced Raman (SERS) pour la d&#xE9;tection directe de la thrombine en utilisant l&#x26;#39;aptam&#xE8;re liant &#xE0; la thrombine (TBA) en tant que r&#xE9;cepteur mol&#xE9;culaire. La technique utilise immobilis&#xE9;es nanoparticules d&#x26;#39;argent qui sont fonctionnalis&#xE9;s avec thiol&#xE9; sp&#xE9;cifique de la thrombine aptam&#xE8;re liaison, un oligonucl&#xE9;otide 15-m&#xE8;re quadruplex (5&#x26;#39;-GGTTGGTGTGGTTGG-3 &#x26;#39;) formant. En plus des bandes Raman vibrationnels correspondant &#xE0; l&#x26;#39;aptam&#xE8;re et agent de blocage, des pics de nouvelles (principalement &#xE0; 1140, 1540 et 1635 cm (-1)) qui sont caract&#xE9;ristiques de la prot&#xE9;ine sont observ&#xE9;es lors de la liaison de la thrombine. Ces modifications spectrales ne sont pas observ&#xE9;es lorsque l&#x26;#39;ensemble de aptam&#xE8;re-nanoparticule est expos&#xE9; &#xE0; une prot&#xE9;ine non liant telle que l&#x26;#39;albumine de s&#xE9;rum bovin (BSA). Cette m&#xE9;thodologie pourrait &#xEA;tre utilis&#xE9;e pour le d&#xE9;veloppement de biocapteurs sans &#xE9;tiquette pour la d&#xE9;tection directe des prot&#xE9;ines et autres mol&#xE9;cules d&#x26;#39;int&#xE9;r&#xEA;t pour lesquels aptam&#xE8;res sont disponibles.

D&#xE9;tection directe de la thrombine aptam&#xE8;res-Binding Via Surface-enhanced spectroscopie Raman

In dieser Studie haben wir ausgenutzt, um die Empfindlichkeit von Surface enhanced Raman-Streuung (SERS) f&uuml;r den direkten Nachweis von Thrombin mithilfe der Thrombin-Bindung Aptamer (TBA) als molekulare Rezeptor angeboten. Die Technik nutzt immobilisierte silberne-Nanopartikeln, die mit Thiolated Thrombin-spezifische Bindungen Aptamer, ein 15-Mer funktionalisierten sind (5&#39;-GGTTGGTGTGGTTGG-3&#39;) Quadruplex Oligonukleotid bilden. Neben der Raman-Schwingungs-Bands, die entspricht der Aptamer und blockierende Agent, neue Spitzenwerte (vor allem bei 1140, 1540 und 1635 sind cm(-1)), die charakteristisch f&uuml;r das Protein sind bei der Bindung von Thrombin beobachtet. Diese spektralen &Auml;nderungen werden nicht gewahrt, wenn die Assembly Aptamer-Nanopartikel zu einem unverbindlichen Protein wie Rinderserumalbumin (BSA) ausgesetzt ist. Diese Methodik kann weiter verwendet werden, f&uuml;r die Entwicklung der Etikett-freie Biosensoren f&uuml;r direkte Nachweis von Proteinen und anderen Molek&uuml;len von Interesse f&uuml;r die Aptamere verf&uuml;gbar sind.

Direkte Nachweis von Aptamer-Thrombin-Bindung &uuml;ber Surface enhanced Raman-Spektroskopie.

In questo studio, sfruttiamo la sensibilit&agrave; offerta dalla superficie-enhanced Raman scattering (SERS) per la rilevazione diretta di trombina mediante la trombina-associazione aptamer (TBA) come recettori molecolari. La tecnica utilizza immobilizzate nanoparticelle d&#39;argento che sono funzionalizzate con tiolate aptamer legame trombina-specifico, un g-quadruplex 15-mer (5 &#39;-GGTTGGTGTGGTTGG - 3&#39;) formando del oligonucleotide. Oltre le bande vibrazionale Raman corrispondente al aptamer e agente bloccante, nuove vette (principalmente al 1140, 1540 e 1635 cm(-1)) che sono caratteristici della proteina sono osservati al legame della trombina. Questi cambiamenti spettrali non si osservano quando l&#39;Assemblea aptamer-nanoparticella &egrave; esposto a una non vincolante proteine come l&#39;albumina di siero bovino (BSA). Questa metodologia potrebbe essere ulteriormente utilizzata per lo sviluppo di biosensori privo di etichetta per la rilevazione diretta delle proteine e altre molecole di interesse per cui aptameri sono disponibili.

Rilevazione diretta dell&#39;associazione aptamer-trombina tramite spettroscopia Raman superficie-enhanced.

&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#xFF08;TBA&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x5897;&#x5F37;&#x30E9;&#x30DE;&#x30F3;&#x6563;&#x4E71;&#xFF08;SERS&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x60AA;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x5316;&#x3001;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x3001;15-mer&#x306E;&#xFF08;5&#x26;#39;-GGTTGGTGTGGTTGG-3 &#x26;#39;&#xFF09;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x56DB;&#x91CD;&#x9396;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x9280;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x5264;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30E9;&#x30DE;&#x30F3;&#x632F;&#x52D5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x304C;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#xFF08;&#x4E3B;&#x306B;1140&#x5E74;&#x3067;&#x3001;1540&#x5E74;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;1635&#x30BB;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#xFF08;-1&#xFF09;&#xFF09;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x6642;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#xFF08;BSA&#xFF09;&#x30A6;&#x30B7;&#x8840;&#x6E05;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x62D8;&#x675F;&#x529B;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x304C;&#x7528;&#x610F;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3084;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x4ED6;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;

&#x8868;&#x9762;&#x5897;&#x5F37;&#x30E9;&#x30DE;&#x30F3;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x306E;Via&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x3001;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x691C;&#x51FA;

&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD45C;&#xBA74; &#xAC15;&#xD654; &#xB77C;&#xB9CC; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48;&#xC744; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; aptamer (&#xBBF8;&#xC815;)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C1;&#xC811; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB85C; (SERS)&#xB97C; &#xBE44; &#xC0B0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xACF5; &#xB418;&#xB294; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC545;&#xC6A9;. &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; thiolated &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48; &#xD2B9;&#xC815; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; aptamer, 15 &#xBA54; &#xB974;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; functionalized &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC774;&#xC9C0; &#xC2E4;&#xBC84; &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790; (5&#39;-GGTTGGTGTGGTTGG-3&#39;) quadruplex oligonucleotide&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Aptamer &#xBC0F; &#xCC28;&#xB2E8; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;, &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBD09;&#xC6B0;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xB77C;&#xB9CC; &#xC9C4;&#xB3D9; &#xBC34;&#xB4DC; &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; (1140, 1540, 1635&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC740; cm(-1))&#xC740; &#xAD00;&#xCC30; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;. Aptamer &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xC18C; &#xD608; &#xCCAD; &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; (BSA) &#xB4F1; nonbinding &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB418; &#xBA74; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xBCC0;&#xD654; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xAC80;&#xCD9C; &#xBC0F; aptamers &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xC5C6;&#xB294; biosensors&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD94;&#xAC00; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD45C;&#xBA74; &#xAC15;&#xD654; &#xB77C;&#xB9CC; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; aptamer-&#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xAC80;&#xCD9C;.

En este estudio, explotar la sensibilidad ofrecida por una mayor superficie de dispersi&#xF3;n Raman (SERS) para la detecci&#xF3;n directa de la trombina mediante el apt&#xE1;mero de uni&#xF3;n a trombina (TBA) como receptor molecular. La t&#xE9;cnica utiliza nanopart&#xED;culas de plata inmovilizadas que est&#xE1;n funcionalizadas con tiolado trombina-espec&#xED;fica aptamer vinculante, un 15-mer (5&#x26;#39;-GGTTGGTGTGGTTGG-3 &#x26;#39;) oligonucle&#xF3;tido cu&#xE1;druple formaci&#xF3;n. Adem&#xE1;s de las bandas Raman vibracionales correspondientes a la aptamer y agente de bloqueo, picos nuevos (principalmente en 1140, 1540, y 1635 cm (-1)) que son caracter&#xED;sticos de la prote&#xED;na se observ&#xF3; tras la uni&#xF3;n de la trombina. Estos cambios espectrales no se observ&#xF3; cuando el conjunto aptamer nanopart&#xED;culas se expone a una prote&#xED;na no vinculante, tales como alb&#xFA;mina de suero bovino (BSA). Esta metodolog&#xED;a podr&#xED;a usarse adem&#xE1;s para el desarrollo de etiqueta libres-biosensores para la detecci&#xF3;n directa de las prote&#xED;nas y otras mol&#xE9;culas de inter&#xE9;s para los que apt&#xE1;meros est&#xE1;n disponibles.

Detecci&#xF3;n directa de trombina aptamer Encuadernaci&#xF3;n trav&#xE9;s de la superficie mejorada Espectroscop&#xED;a Raman

Un octacarboxyhemicarcerand solubile in acqua &egrave; stato usato come una navetta per il trasporto di substrati redox-attiva attraverso il mezzo acquoso e consegnarli alla proteina bersaglio. I risultati mostrano che i deboli interazioni polivalente e flessibilit&agrave; conformazionale pu&ograve; essere sfruttati per legare reversibilmente complessi assemblaggi supramolecolari di molecole biologiche. Idrofobo elettroni donatori e accettori sono stati incapsulati all&#39;interno di hemicarcerand e trasferimento di elettroni fotoindotti (ET) tra il Zn-sostituiti citocromo c (MW = 12.3 kD) e i complessi host-guest (MW = 2.2 kD) &egrave; stato usato per sondare l&#39;associazione tra il hemicarceplex caricato negativamente e la proteina caricata positivamente. Il comportamento dell&#39;Assemblea della proteina-hemicarcerand-ospite ternario risultante &egrave; stato indagato in due limiti vincolanti: (1) quando K(encaps) &amp;gt; K(assoc), il hemicarcerand trasporta il ligando alla proteina mentre protegge dall&#39;acquoso; e (2), quando K(assoc) &amp;gt; K(encaps), il complesso hemicarcerand-proteina &egrave; formato in primo luogo, e la hemicarcerand agisce come un sito del recettore artificiale che intercetta ligandi dalla soluzione e li posiziona vicino il sito attivo del metalloenzyme. In entrambi i casi, &egrave; molto pi&ugrave; veloce che a causa della diffusione incontri con i rispettivi gratis donatore o accettore in soluzione ET mediata dal hemicarcerand associato a proteine. Le tariffe ET misurate suggeriscono che la regione dominante che il complesso ospite sulla superficie della proteina &egrave; coerenza con la zona di attracco del partner redox nativo del citocromo c. La forte associazione con la proteina &egrave; attribuita alla conformazione flessibile e adattabile carica distribuzione di hemicarcerand, che consentono di superficie-corrispondenza con il citocromo.

Docking elettrostatico di un assemblaggio supramolecolare ospite al citocromo c sondati dal trasferimento di elettroni fotoindotti bidirezionale.

&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027; octacarboxyhemicarcerand &#x88AB;&#x7528;&#x4F5C;&#x822A;&#x5929;&#x98DE;&#x673A;&#x8981;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x6C34;&#x4ECB;&#x8D28;&#x4F20;&#x8F93;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x6D3B;&#x6027;&#x57FA;&#x8D28;&#x548C;&#x9001;&#x5230;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5229;&#x7528;&#x591A;&#x4EF7;&#x5F31;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x6784;&#x8C61;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x53EF;&#x9006;&#x5C06;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x8D85;&#x5206;&#x5B50;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x751F;&#x7269;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x7535;&#x5B50;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x548C;&#x53D7;&#x4F17;&#x5C01;&#x88C5;&#x5185;&#x7684; hemicarcerand &#x548C;&#x5149;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7535;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB; (ET) &#x4E4B;&#x95F4;&#x53D6;&#x4EE3;&#x950C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c (MW = 12.3 kD) &#x4E3B;&#x673A;&#x6765;&#x5BBE;&#x914D;&#x5408;&#x7269; (MW = 2.2 kD&#xFF09; &#x7528;&#x6765;&#x63A2;&#x6D4B;&#x8D1F;&#x7535;&#x8377;&#x7684; hemicarceplex &#x548C;&#x6B63;&#x7535;&#x8377;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E09;&#x5143;&#x86CB;&#x767D;-hemicarcerand-&#x6765;&#x5BBE;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x88AB;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x9650;&#x5236;&#xFF1A; &#xFF08;1&#xFF09; &#x5F53; K(encaps) &#x226B; hemicarcerand K(assoc)&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x4FDD;&#x62A4;&#x5B83;&#x514D;&#x53D7;&#x6C34;&#x7684;&#x4ECB;&#x8D28; &#xFF1B; &#x8FD0;&#x8F93;&#x86CB;&#x767D;&#x914D;&#x4F53;(2) &#x5F53; K(assoc) &gt; K(encaps)&#xFF0C;hemicarcerand-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x7B2C;&#x4E00;&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x548C; hemicarcerand &#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x53D7;&#x4F53;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x622A;&#x83B7;&#x4ECE;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x63A5;&#x8FD1;&#x7684;&#x91D1;&#x5C5E;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x5408; hemicarcerand ET &#x662F;&#x6BD4;&#x7531;&#x4E8E;&#x6269;&#x6563;&#x578B;&#x9047;&#x5230;&#x4E0E;&#x5404;&#x81EA;&#x7684;&#x81EA;&#x7531;&#x6350;&#x52A9;&#x6216;&#x627F;&#x5151;&#x4EBA;&#x5728;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x4E2D;&#x7684;&#x5FEB;&#x5F97;&#x591A;&#x3002;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684; ET &#x7387;&#x8868;&#x660E;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x4E3B;&#x5BA2;&#x4F53;&#x590D;&#x6742;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c &#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x672C;&#x673A;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#x505C;&#x9760;&#x533A;&#x57DF;&#x76F8;&#x4E00;&#x81F4;&#x3002;&#x5F3A;&#x5173;&#x8054;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x662F;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E;&#x7075;&#x6D3B;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x548C;&#x9002;&#x5E94;&#x6027;&#x5F3A;&#x7684;&#x7535;&#x8377;&#x5206;&#x5E03;&#x7684; hemicarcerand&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20;&#x8868;&#x9762;&#x76F8;&#x5339;&#x914D;&#x3002;

&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c &#x9759;&#x7535;&#x5BF9;&#x63A5;&#x8D85;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x4E3B;&#x5BA2;&#x4F53;&#x5927;&#x4F1A;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7531;&#x53CC;&#x5411;&#x5149;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7535;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3002;

A water-soluble octacarboxyhemicarcerand was used as a shuttle to transport redox-active substrates across the aqueous medium and deliver them to the target protein. The results show that weak multivalent interactions and conformational flexibility can be exploited to reversibly bind complex supramolecular assemblies to biological molecules. Hydrophobic electron donors and acceptors were encapsulated within the hemicarcerand, and photoinduced electron transfer (ET) between the Zn-substituted cytochrome c (MW = 12.3 kD) and the host-guest complexes (MW = 2.2 kD) was used to probe the association between the negatively charged hemicarceplex and the positively charged protein. The behavior of the resulting ternary protein-hemicarcerand-guest assembly was investigated in two binding limits: (1) when K(encaps) â‰« K(assoc), the hemicarcerand transports the ligand to the protein while protecting it from the aqueous medium; and (2) when K(assoc) > K(encaps), the hemicarcerand-protein complex is formed first, and the hemicarcerand acts as an artificial receptor site that intercepts ligands from solution and positions them close to the active site of the metalloenzyme. In both cases, ET mediated by the protein-bound hemicarcerand is much faster than that due to diffusional encounters with the respective free donor or acceptor in solution. The measured ET rates suggest that the dominant binding region of the host-guest complex on the surface of the protein is consistent with the docking area of the native redox partner of cytochrome c. The strong association with the protein is attributed to the flexible conformation and adaptable charge distribution of the hemicarcerand, which allow for surface-matching with the cytochrome.

Electrostatic docking of a supramolecular host-guest assembly to cytochrome c probed by bidirectional photoinduced electron transfer.

Un octacarboxyhemicarcerand solubles dans l&#39;eau a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; comme un service de navette pour transporter les substrats actifs en oxydor&eacute;duction dans le milieu aqueux et de livrer &agrave; la prot&eacute;ine cible. Les r&eacute;sultats montrent que de faibles interactions MULTIVALENTES et flexibilit&eacute; conformationnelle peuvent &ecirc;tre exploit&eacute;es pour &eacute;tablir une liaison r&eacute;versible assemblages supramol&eacute;culaires complexes de mol&eacute;cules biologiques. Donneurs d&#39;&eacute;lectrons hydrophobe et accepteurs ont &eacute;t&eacute; encapsul&eacute;s dans le hemicarcerand et transfert d&#39;&eacute;lectron photoinduit (ET) entre Zn-substitu&eacute;s cytochrome c (MW = 12,3 kD) et les complexes de l&#39;h&ocirc;te-invit&eacute; (MW = 2.2 kD) a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; pour &eacute;tudier l&#39;association entre la hemicarceplex charg&eacute;e n&eacute;gativement et la prot&eacute;ine charg&eacute;e positivement. Le comportement de l&#39;assembly r&eacute;sultant de la prot&eacute;ine-hemicarcerand-commentaires ternaire a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute; dans deux des limites contraignantes: (1) lorsque K(encaps) &#x226B; K(assoc), le hemicarcerand transporte le ligand &agrave; la prot&eacute;ine tout en le prot&eacute;geant de la solution aqueuse ; et (2) quand K(assoc) &gt; K(encaps), le complexe hemicarcerand-prot&eacute;ine est form&eacute; en premier, et le hemicarcerand agit comme un site r&eacute;cepteur artificiel qui intercepte les ligands de solution et les positions &agrave; proximit&eacute; du site actif de la m&eacute;talloenzyme. Dans les deux cas, ET v&eacute;hicul&eacute;e par le hemicarcerand protein-bound est beaucoup plus rapide que celle due &agrave; des rencontres par diffusion avec le libre donneur ou accepteur en solution. Les mesures des taux ET sugg&egrave;rent que la r&eacute;gion de liaison dominante du complexe h&ocirc;te-invit&eacute; sur la surface de la prot&eacute;ine est conforme &agrave; la zone d&#39;ancrage du partenaire natif d&#39;oxydor&eacute;duction du cytochrome c. L&#39;association &eacute;troite avec la prot&eacute;ine est attribu&eacute;e &agrave; la conformation flexible et la distribution de charge adaptable de la hemicarcerand, qui permettent une surface &eacute;quivalente avec le cytochrome.

Accostage &eacute;lectrostatique d&#39;un assemblage supramol&eacute;culaire de h&ocirc;te-invit&eacute; &agrave; cytochrome c sond&eacute; par transfert d&#39;&eacute;lectron photoinduit bidirectionnel.

Ein wasserl&ouml;sliches Octacarboxyhemicarcerand diente als ein Shuttle zum Redox-aktiven Substraten &uuml;ber die w&auml;ssrigen Medium transportieren und liefern sie an das Zielprotein. Die Ergebnisse zeigen, dass schwache multivalenter Interaktionen und Konformations&auml;nderungen Flexibilit&auml;t ausgenutzt werden k&ouml;nnen, um komplexe supramolekulare Assemblys umkehrbar an biologische Molek&uuml;le zu binden. Hydrophobe Elektron Spender und Acceptors wurden innerhalb des Hemicarcerand und photoinduzierte Elektronentransfer (ET) zwischen der Zn-substituierte Cytochrom c gekapselt (MW = 12,3 kD) und der Host-Gast-komplexe (MW = 2.2 kD) wurde verwendet, um die Zuordnung zwischen den negativ geladenen Hemicarceplex und das positiv geladene Protein zu sondieren. Das Verhalten der resultierenden tern&auml;re Protein-Hemicarcerand-Guest-Assembly wurde in zwei verbindliche Grenzwerte untersucht: (1) bei K(encaps) &#x226B; K(assoc), die Hemicarcerand transportiert den Liganden an das Protein w&auml;hrend den Schutz vor den w&auml;ssrigen Medium; und (2), wenn K(assoc) &gt; K(encaps), der Hemicarcerand-Protein-Komplex wird zuerst gebildet, und der Hemicarcerand dient als eine k&uuml;nstliche Rezeptor-Website, f&auml;ngt Liganden von L&ouml;sung und positioniert sie nahe der Metalloenzyme aktiv. In beiden F&auml;llen ist vermittelt durch die Protein-gebundenen Hemicarcerand ET viel schneller als die aufgrund der Diffusionsprozess Begegnungen mit den jeweiligen freien Spender oder Akzeptor in L&ouml;sung. Die gemessenen ET-Preise schlagen vor, da&szlig; die Region dominierenden Bindung der Host-Gast-Komplex auf der Oberfl&auml;che des Proteins docking Bereich der native Redox-Partner der Cytochrom c entspricht. Die starke Assoziation mit dem Protein ist die flexible Konformation und anpassungsf&auml;hige Ladungsverteilung der Hemicarcerand, die Oberfl&auml;che-Abgleich mit dem Cytochrom erm&ouml;glichen zugeschrieben.

Elektrostatische Andocken einer selbstassemblierten Host-Gast-Assembly an Cytochrom c sondiert durch bidirektionale photoinduzierte Elektronentransfer.

&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027; octacarboxyhemicarcerand &#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x30EC;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x57FA;&#x8CEA;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x5A92;&#x4F53;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x8F38;&#x9001;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x591A;&#x4FA1;&#x306E;&#x5F31;&#x3044;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306B;&#x751F;&#x4F53;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x8D85;&#x5206;&#x5B50;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x5229;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x96FB;&#x5B50;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x306E; hemicarcerand&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E9C;&#x925B;&#x7F6E;&#x63DB;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c &#x9593;&#x306E;&#x5149;&#x8A98;&#x8D77;&#x96FB;&#x5B50;&#x79FB;&#x52D5; (ET) &#x5185;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F; (MW 12.3 = kD) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8; &#xFF0D; &#x30B2;&#x30B9;&#x30C8;&#x932F;&#x4F53; (MW = 2.2 kD) &#x8CA0;&#x8377;&#x96FB;&#x306E; hemicarceplex &#x3068;&#x6B63;&#x8377;&#x96FB;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x9593;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;2 &#x3064;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x5236;&#x9650;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x4E09;&#x5143;&#x7CFB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; hemicarcerand &#x30B2;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x6319;&#x52D5;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;: (1) &#x3068;&#x304D; K(encaps) &#x226B; K(assoc)&#x3001;hemicarcerand&#x3001;&#x8F38;&#x9001;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x6C34;&#x6027;&#x5A92;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;; &#x4FDD;&#x8B77;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#xFF08;2&#xFF09; &#x3068; K(assoc) &#x76EE; K(encaps)&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306B;&#x3001;hemicarcerand &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x304C;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;hemicarcerand &#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x3092;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x91D1;&#x5C5E;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;ET &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x7D50;&#x5408; hemicarcerand &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x62E1;&#x6563;&#x3068;&#x306E;&#x51FA;&#x4F1A;&#x3044;&#x3092;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x7121;&#x6599;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC; &#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x9AD8;&#x901F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E; ET &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x5408;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8; &#xFF0D; &#x30B2;&#x30B9;&#x30C8;&#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30EC;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x306F;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c &#x306E;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F37;&#x3044;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8868;&#x9762;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0; &#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x3001;hemicarcerand &#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x306E;&#x96FB;&#x8377;&#x5206;&#x5E03;&#x306B;&#x5E30;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9759;&#x96FB;&#x8D85;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;-&#x30B2;&#x30B9;&#x30C8; &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c &#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x53CC;&#x65B9;&#x5411;&#x5149;&#x8A98;&#x8D77;&#x96FB;&#x5B50;&#x79FB;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3002;

&#xC218;&#xC6A9; &#xC131; octacarboxyhemicarcerand &#xC218;&#xC131; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; redox active &#xAE30;&#xD310; &#xC804;&#xC1A1; &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC154;&#xD2C0;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xC57D;&#xD55C; &#xB610;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131; &#xC5ED; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; supramolecular &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC545;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xC804;&#xC790; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xC640; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; hemicarcerand, &#xBC0F; photoinduced &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; (&#xB3D9;&#xBD80; &#xD45C;&#xC900;&#xC2DC;) &#xC0AC;&#xC774; Zn &#xB300;&#xCCB4; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCEA1;&#xC290;&#xD654; &#xB41C; (MW = 12.3 kD) &#xBC0F; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;-&#xAC8C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB2E8;&#xC9C0; (MW = 2.2 kD) &#xBD80;&#xC815; &#xCCAD;&#xAD6C; hemicarceplex&#xACFC; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCCAD;&#xAD6C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD00;&#xC131;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C;. &#xB450; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC81C;&#xD55C;&#xC5D0; &#xC870;&#xC0AC; &#xACB0;&#xACFC; 3 &#xC9C4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-hemicarcerand-&#xAC8C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; &#xB3D9;&#xC791;: (1) &#xB54C; K(encaps) &#x226B; K(assoc), &#xC218;&#xC131; &#xB9E4;&#xCCB4;;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xD638; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C;&#xB294; hemicarcerand &#xC218;&#xC1A1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; (2) &#xB54C; K(assoc) &amp;gt; K(encaps), hemicarcerand-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xB294; &#xBA3C;&#xC800; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; hemicarcerand &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; ligands &#xAC00;&#xB85C;&#xCC44;&#xC11C;&#xB294; metalloenzyme&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC704;&#xCE58;&#xB294; &#xC778;&#xACF5; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC5ED;&#xD560;. &#xB450; &#xACBD;&#xC6B0; &#xBAA8;&#xB450; &#xC678; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; hemicarcerand&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xB294; &#xAC01;&#xAC01; &#xBB34;&#xB8CC; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xB610;&#xB294; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; diffusional &#xC870;&#xC6B0; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC800;&#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xBE60;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCE21;&#xC815;&#xB41C; &#xC678; &#xC694;&#xAE08; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;-&#xAC8C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c&#xC758; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; redox &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xC758; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xC601;&#xC5ED;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC15;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC5F0;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; hemicarcerand&#xC758; &#xC801;&#xC751;&#xB825;&#xC774; &#xCDA9;&#xC804; &#xC720;&#xD1B5;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778;.

Supramolecular &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;-&#xAC8C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c &#xC815;&#xC804;&#xAE30; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xC591;&#xBC29;&#xD5A5; photoinduced &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870;&#xC0AC;.

Un octacarboxyhemicarcerand soluble en agua se utiliz&oacute; como un servicio de transporte para el transporte de sustratos redox activos en el medio acuoso y entregarlos a la prote&iacute;na diana. Los resultados muestran que las interacciones multivalentes d&eacute;biles y flexibilidad conformacional pueden explotarse para enlazar reversible complejas supramoleculares asambleas a mol&eacute;culas biol&oacute;gicas. Donantes del electr&oacute;n hidrof&oacute;bico y aceptadores fueron encapsulados dentro del hemicarcerand y la transferencia de electrones fotoinducida (ET) entre el Zn-sustituido citocromo c (MW = 12.3 kD) y los complejos de host-guest (MW = 2.2 kD) se utiliz&oacute; para sondear la asociaci&oacute;n entre los hemicarceplex cargado negativamente y la prote&iacute;na cargada positivamente. El comportamiento de la Asamblea de prote&iacute;na-hemicarcerand-hu&eacute;sped ternario resultante fue investigado en dos l&iacute;mites de enlace: (1) cuando K(encaps) &#x226B; K(assoc), el hemicarcerand transporta el ligando a la prote&iacute;na mientras que lo protege contra el medio acuoso; y (2) cuando K(assoc) &gt; K(encaps), el complejo de hemicarcerand-prote&iacute;na se form&oacute; primero, y el hemicarcerand act&uacute;a como un sitio receptor artificial que intercepta ligandos de soluci&oacute;n y les posiciona cerca el sitio activo de la metaloenzima. En ambos casos, ET mediada por la hemicarcerand protein-bound es mucho m&aacute;s r&aacute;pido que el que por difusionales encuentros con los respectivos donantes gratis o aceptador en soluci&oacute;n. Las tarifas de ET medidas sugieren que la regi&oacute;n de enlace dominante del complejo host-guest en la superficie de la prote&iacute;na es coherente con la zona de acoplamiento del socio redox nativa del citocromo c. La fuerte asociaci&oacute;n con la prote&iacute;na se atribuye a la conformaci&oacute;n flexible y la distribuci&oacute;n de carga adaptable de la hemicarcerand, que permiten la superficie coincidente con el citocromo.

Acoplamiento electrost&aacute;tico de una Asamblea de host-guest supramolecular al citocromo c sondeado por transferencia de electrones fotoinducida bidireccional.

&#x56DB;&#x91CD;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30F3;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x306A;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x9AD8;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30F3;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x306A;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x56DB;&#x91CD;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6E29;&#x5EA6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30E9;&#x30DE;&#x30F3;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x3079;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x6307;&#x7D0B;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x6E29;&#x5EA6;&#x3067;&#x306E;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x3001;&#x56DB;&#x91CD;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x8A3A;&#x65AD;&#x3067;1480&#x30BB;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#xFF08;-1&#xFF09;&#x306E;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#xFF08;C8 = N7-H2&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#xFF09;&#x3092;&#x4F34;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;K&#xFF08;+&#xFF09;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#xFF08;&#x3042;&#x308B;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x307E;&#x3067;&#xFF09;&#x9006;&#x306B;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x56DB;&#x91CD;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30E9;&#x30DE;&#x30F3;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;

Strutture quadruplex sono strutture di ordine superiore formate da oligonucleotidi ricco di guanina. Nel presente studio, alterazioni conformazionali indotte dalla temperatura delle strutture quadruplex di aptameri e altri ricchi di guanina oligonucleotidi sono sondati dalla spettroscopia Raman. In particolare, drammatici cambiamenti nella regione delle impronte digitali sono osservati negli spettri di trombina associazione aptamer a temperature pi&ugrave; elevate. Questi cambiamenti sono accompagnati da una diminuzione dell&#39;intensit&agrave; del picco cm(-1) 1480 (attribuita a C8 = N7-H2), che &egrave; diagnostico della struttura quadruplex. Mostriamo anche che questi cambiamenti possono essere invertiti (in una certa misura) tramite l&#39;aggiunta di ioni K(+).

Cambiamenti conformazionali nelle strutture del oligonucleotide quadruplex sondati dalla spettroscopia Raman.

Structures sont des structures quadruplex d&#x26;#39;ordre sup&#xE9;rieur form&#xE9;s par oligonucl&#xE9;otides riches en guanine. Dans la pr&#xE9;sente &#xE9;tude, la temp&#xE9;rature changements conformationnels induits dans les structures quadruplex de aptam&#xE8;res et d&#x26;#39;autres riches en guanine oligonucl&#xE9;otides sont sond&#xE9;s par spectroscopie Raman. En particulier, des changements dramatiques dans la r&#xE9;gion d&#x26;#39;empreintes digitales sont observ&#xE9;s dans les spectres de la thrombine aptam&#xE8;re de liaison &#xE0; des temp&#xE9;ratures &#xE9;lev&#xE9;es. Ces modifications sont accompagn&#xE9;es par une diminution de l&#x26;#39;intensit&#xE9; des 1480 cm -1) de cr&#xEA;te (attribu&#xE9; &#xE0; C8 = N7-H2), qui est de diagnostic de la structure quadruplex. Nous montrons &#xE9;galement que ces changements pourront &#xEA;tre invers&#xE9;s (dans une certaine mesure) par l&#x26;#39;addition de K (+) des ions.

Les changements de conformation dans les structures oligonucl&#xE9;otidiques Quadruplex sond&#xE9;e par spectroscopie Raman

Quadruplex Strukturen sind h&ouml;here Auftragsstrukturen von Guanin-reiche Oligonukleotide gebildet. In der vorliegenden Studie sind Temperatur-induzierte Konformationsver&auml;nderungen Quadruplex Strukturen Aptamere und andere Guanin-Reich-Oligonukleotide durch Raman-Spektroskopie untersucht. Dramatische Ver&auml;nderungen in der Fingerabdruck-Region sind insbesondere in den Spektren von Thrombin Bindung Aptamer bei h&ouml;heren Temperaturen beobachtet. Diese Ver&auml;nderungen werden begleitet durch eine Abnahme in der Intensit&auml;t des H&ouml;hepunktes 1480 cm(-1) (zur&uuml;ckzuf&uuml;hren auf C8 = N7-H2), ist die Diagnose der Quadruplex-Struktur. Wir zeigen auch, dass diese &Auml;nderungen (zu einem gewissen Grad) durch Zugabe von K(+) Ionen r&uuml;ckg&auml;ngig gemacht werden k&ouml;nnen.

Konformationsver&auml;nderungen Quadruplex Oligonukleotid Strukturen von Raman-Spektroskopie untersucht.

&#x78C1;&#x8DEF;&#x7ED3;&#x6784;&#x662F;&#x7531;&#x5BCC;&#x542B;&#x9E1F;&#x560C;&#x5464;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x9AD8;&#x987A;&#x5E8F;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F4E;&#x6E29;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x9002;&#x914D;&#x5B50;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x5BCC;&#x542B;&#x9E1F;&#x560C;&#x5464;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x78C1;&#x8DEF;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x62C9;&#x66FC;&#x5149;&#x8C31;&#x63A2;&#x6D4B;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;&#x6307;&#x7EB9;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x6025;&#x5267;&#x53D8;&#x5316;&#x662F;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x9644;&#x7740;&#x5728;&#x8F83;&#x9AD8;&#x6E29;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x7684;&#x5149;&#x8C31;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x4F34;&#x968F;&#x7740;&#x7684; 1480 cm(-1) &#x5CF0;&#x503C;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x964D; &#xFF08;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E; C8 = N7 H2&#xFF09;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x8BCA;&#x65AD;&#x7684;&#x78C1;&#x8DEF;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x66F4;&#x6539;&#x53EF;&#x4EE5; &#xFF08;&#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#xFF09; &#x626D;&#x8F6C; K(+) &#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x52A0;&#x6CD5;&#x3002;

&#x62C9;&#x66FC;&#x5149;&#x8C31;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7684;&#x78C1;&#x8DEF;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

Quadruplex structures are higher order structures formed by guanine-rich oligonucleotides. In the present study, temperature-induced conformational changes in the quadruplex structures of aptamers and other guanine-rich oligonucleotides are probed by Raman spectroscopy. In particular, dramatic changes in the fingerprint region are observed in the spectra of thrombin binding aptamer at higher temperatures. These changes are accompanied by a decrease in the intensity of the 1480 cm(-1) peak (attributed to C8 = N7-H2), which is diagnostic of the quadruplex structure. We also show that these changes can be reversed (to a certain extent) by addition of K(+) ions.

Conformational changes in quadruplex oligonucleotide structures probed by Raman spectroscopy.

Quadruplex &#xAD6C;&#xC870;&#xCCB4;&#xAC00; guanine &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; oligonucleotides&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xB192;&#xC740; &#xC21C;&#xC11C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; aptamers &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; guanine &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; oligonucleotides quadruplex &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654; &#xC628;&#xB3C4; &#xC720;&#xB3C4; &#xB77C;&#xB9CC; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870;&#xC0AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xC9C0;&#xBB38; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xC628;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; aptamer&#xC758; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; 1480 cm(-1) &#xD53C;&#xD06C;&#xC758; &#xAC15;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; (c8&#xC5D0; N7-H2 =),&#xC774; quadruplex &#xAD6C;&#xC870;&#xCCB4;&#xC758; &#xC9C4;&#xB2E8;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; K(+) &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC744; (&#xC5B4;&#xB290; &#xC815;&#xB3C4;)&#xC744; &#xC804;&#xD658;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Quadruplex oligonucleotide &#xAD6C;&#xC870; &#xB77C;&#xB9CC; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;.

Estructuras cu&#xE1;druples son estructuras de orden superior formadas por guanina-ricos oligonucle&#xF3;tidos. En el presente estudio, la temperatura inducidas por los cambios conformacionales en las estructuras cu&#xE1;druples de apt&#xE1;meros y los otros oligonucle&#xF3;tidos ricos en guanina son investigados por espectroscopia Raman. En particular, los cambios dram&#xE1;ticos en la regi&#xF3;n de huellas dactilares se observan en los espectros de apt&#xE1;mero trombina uni&#xF3;n a temperaturas m&#xE1;s altas. Estos cambios son acompa&#xF1;ados por una disminuci&#xF3;n en la intensidad de los 1480 cm -1) pico (atribuido a C8 = N7-H2), que es diagn&#xF3;stico de la estructura cu&#xE1;druplex. Tambi&#xE9;n muestran que estos cambios se pueden reversar (hasta cierto punto) por la adici&#xF3;n de K (+) iones.

Cambios en la conformaci&#xF3;n de las estructuras de oligonucle&#xF3;tidos Cuadruplex investigados por espectroscopia Raman

&#x91D1;&#x5C5E;&#x66FF;&#x4EE3;&#x7684;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x662F;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x751F;&#x7269;&#x76F8;&#x5173;&#x7535;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB; (ET) &#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x5B83;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8BB8;&#x591A;&#x4FEE;&#x9970;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7559;&#x5728;&#x5176;&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x548C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6709;&#x76CA;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#xFF0C;&#x5230;&#x7535;&#x5B50;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x5176;&#x57FA;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4F20;&#x8F93;&#x3002;ET-&#x53D6;&#x4EE3;&#x950C;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; P450(cam) &#x548C;&#x5C0F;&#x6709;&#x673A;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x57FA;&#x5C3C;&#x5965;&#x5185;&#x65AF;&#x548C;&#x4E8C;&#x8302;&#x94C1;&#xFF0C;&#x54EA;&#x4E9B;&#x80FD;&#x591F;&#x8BBF;&#x95EE;&#x4E86;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x901A;&#x9053;&#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x63A5;&#x8FD1;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x50CF;&#x5176;&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x57FA;&#x677F;&#x3001; &#x6A1F;&#x8111;&#x7B49;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x6B64;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x4E4B;&#x540E;&#x7684;&#x66FF;&#x6362;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684; Gunsalus &#x548C;&#x540C;&#x4E8B; [&#x74E6;&#x683C;&#x7EB3;&#xFF0C;G.C.(1981 &#x5E74;) &#x4E2D;&#x5357;&#x5DE5;&#x4E1A;&#x5927;&#x5B66; J.Biol.&#x5316;&#x5B66; 256&#xFF0C;6262 6265]&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5F62;&#x5F0F;&#x950C;-&#x53D6;&#x4EE3;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3001; F450 &#x548C; F420&#xFF0C;&#x5C55;&#x73B0;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5149;&#x7269;&#x7406;&#x548C;&#x5149;&#x5316;&#x5B66;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;F420 &#x7684; ET &#x884C;&#x4E3A;&#x8868;&#x660E;&#x758F;&#x6C34;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;-&#x4E3B;&#x52A8;&#x914D;&#x4F53;&#x80FD;&#x591F;&#x7A7F;&#x900F;&#x7684;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x81EA;&#x5DF1;&#x653E;&#x5728;&#x76F4;&#x63A5;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x950C;&#x535F;&#x5549;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;ET &#x6DEC;&#x706B;&#x901F;&#x5EA6;&#x8F83;&#x6162; F450 &#x6CE8;&#x610F;&#x5230;&#x6307;&#x793A;&#x8BE5;&#x534F;&#x4F1A;&#x662F;&#x5F31;&#x548C;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x901A;&#x9053;&#x5916;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA; F420 &#x5BF9;&#x5E94;&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; P450(cam) &#x7684;&#x5F00;&#x653E;&#x7ED3;&#x6784;&#x867D;&#x7136; F450 &#x6709;&#x6A1F;&#x8111;&#x542B;&#x6709;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; P450(cam) &#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x5C01;&#x95ED;&#x6216;&#x90E8;&#x5206;&#x5C01;&#x95ED;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x950C;&#x7ED1;&#x5B9A; P450(cam) &#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0E;&#x9EC4;&#x5B9E;&#x5148;&#x751F;&#x548C;&#x540C;&#x4E8B;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E00;&#x81F4; [&#x5229;&#x3001; Y.T &#xFF08;2010 &#x5E74;&#xFF09; &#x4E2D;&#x5357;&#x5DE5;&#x4E1A;&#x5927;&#x5B66;&#x751F;&#x5316; 49&#xFF0C;3412 3419] &#x548C;&#x672A;&#x6765;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x540E;&#x679C;&#x5BF9;&#x6B64;&#x53D7;&#x6B22;&#x8FCE;&#x7684;&#x91D1;&#x5C5E;&#x9176;&#x3002;

&#x950C;&#x53D6;&#x4EE3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; P450(cam)&#xFF1A; &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6784;&#x8C61;&#x8868;&#x5F81; F420 &#x548C; F450 &#x5149;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7535;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x3002;

Metal substitution of heme proteins is widely applied in the study of biologically relevant electron transfer (ET) reactions. It has been shown that many modified proteins remain in their native conformation and can provide useful insights into the molecular mechanism of electron transfer between the native protein and its substrates. We investigated ET reactions between zinc-substituted cytochrome P450(cam) and small organic compounds such as quinones and ferrocene, which are capable of accessing the protein's hydrophobic channel and binding close to the active site, like its native substrate, camphor. Following the substitution method developed by Gunsalus and co-workers [Wagner, G. C., et al. (1981) J. Biol. Chem. 256, 6262-6265], we have identified two dominant forms of the zinc-substituted protein, F450 and F420, that exhibit different photophysical and photochemical properties. The ET behavior of F420 suggests that hydrophobic redox-active ligands are able to penetrate the hydrophobic channel and place themselves in the direct vicinity of the Zn-porphyrin. In contrast, the slower ET quenching rates observed in the case of F450 indicate that the association is weak and occurs outside of the protein channel. Therefore, we conclude that F420 corresponds to the open structure of the native cytochrome P450(cam) while F450 has a closed or partially closed channel that is characteristic of the camphor-containing cytochrome P450(cam). The existence of two distinct conformers of Zn-bound P450(cam) is consistent with the findings of Goodin and co-workers [Lee, Y.-T., et al. (2010) Biochemistry 49, 3412-3419] and has significant consequences for future electron transfer studies on this popular metalloenzyme.

Zinc-Substituted Cytochrome P450(cam): Characterization of Protein Conformers F420 and F450 by Photoinduced Electron Transfer.

Substitution m&eacute;tal des prot&eacute;ines de l&#39;h&egrave;me est largement appliqu&eacute;e dans l&#39;&eacute;tude des r&eacute;actions de transfert d&#39;&eacute;lectrons biologiquement pertinente. Il a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; que plusieurs prot&eacute;ines modifi&eacute;es restent dans leur conformation native et peuvent fournir des indications utiles sur le m&eacute;canisme mol&eacute;culaire d&#39;&eacute;lectron transfert entre la prot&eacute;ine native et ses substrats. Nous avons &eacute;tudi&eacute; les r&eacute;actions ET entre substitu&eacute;s en zinc du cytochrome P450(cam) et petits compos&eacute;s organiques tels que quinones et ferroc&egrave;ne, qui sont capables d&#39;acc&eacute;der &agrave; canal hydrophobes de la prot&eacute;ine et liaison &agrave; proximit&eacute; du site actif, comme son substrat native, camphre. Suivant la m&eacute;thode de substitution d&eacute;velopp&eacute; par Gunsalus et ses collaborateurs [Wagner, C., et coll. (1981) J. Biol. Chem. 256, 6262-6265], nous avons identifi&eacute; deux formes dominantes de la prot&eacute;ine zinc-substitu&eacute;s, F450 et F420, qui pr&eacute;sentent diff&eacute;rents photophysiques et photochimiques propri&eacute;t&eacute;s. Le comportement ET de F420 sugg&egrave;re que des ligands hydrophobes actifs en oxydor&eacute;duction sont capables de p&eacute;n&eacute;trer la cha&icirc;ne hydrophobe et se placer dans le voisinage direct de la Zn-porphyrine. En revanche, les vitesses plus lentes de d&eacute;sactivation ET observ&eacute;s dans le cas de F450 indiquent que l&#39;association est faible et se produit en dehors de la cha&icirc;ne de prot&eacute;ine. Par cons&eacute;quent, nous concluons que les F420 correspond &agrave; la structure ouverte du cytochrome native P450(cam) tandis que F450 a une chaine ferm&eacute;e ou partiellement ferm&eacute;e qui est caract&eacute;ristique du cytochrome P450(cam) contenant du camphre. L&#39;existence de deux conform&egrave;res distinctes de liaison Zn P450(cam) est conforme aux r&eacute;sultats de Goodin et ses collaborateurs [Lee, Y. T., et coll. (2010) biochimie 49, 3412-3419] et a des cons&eacute;quences importantes pour les &eacute;tudes de transfert d&#39;&eacute;lectron futurs sur cette m&eacute;talloenzyme populaire.

Zinc-substitu&eacute;s Cytochrome P450(cam) : Caract&eacute;risation des prot&eacute;ines conform&egrave;res F420 et F450 par transfert d&#39;&eacute;lectron photoinduit.

Metall Substitution von H&auml;m Proteine wird weitgehend in der Studie der biologisch relevanten Elektronentransferreaktionen (ET) angewendet. Es hat sich gezeigt, dass viele modifizierte Proteine in ihrer nativen Konformation bleiben und bieten n&uuml;tzliche Einblicke in die molekularen Mechanismen der Elektronen zwischen den nativen Protein und seine Substrate &uuml;bertragen. Wir untersuchten ET Reaktionen zwischen Zink-substituierte Cytochrom P450(cam) und kleine organische Verbindungen wie Chinone und Ferrocen, die welche den Zugriff auf das Protein hydrophobe Kanal und Bindung in der N&auml;he der aktiven Site, wie seine einheimischen Substrat, Kampfer geeignet sind. Nach der Substitutionsmethode entwickelt von Gunsalus und Kollegen [Wagner, G. C., Et Al. (1981) J. 256 der Biol.-Chem., 6262-6265], wir haben ermittelt, dass zwei dominante Formen des Proteins Zink-substituierte, F450 und F420, die verschiedenen photophysikalische und photochemischen Eigenschaften aufweisen. Das ET-Verhalten von F420 legt nahe, dass die hydrophobe Redox-aktiven Liganden sind in der Lage, den hydrophoben Kanal zu durchdringen und setzen Sie sich in unmittelbarer N&auml;he des Zn-Porphyrin. Im Gegensatz dazu zufolge die langsameren ET abschrecken Preise beobachtet bei F450 Dachverbands ist schwach und tritt au&szlig;erhalb der Eiwei&szlig;-Kanal. Daher schlie&szlig;en wir, dass F420 die offene Struktur von der systemeigenen Cytochrom P450(cam) entspricht w&auml;hrend F450 einen geschlossenen oder teilweise geschlossenen Kanal verf&uuml;gt, der charakteristisch f&uuml;r die Kampfer-haltigen Cytochrom P450(cam) ist. Die Existenz von zwei verschiedene Konformere der Zn gebundene P450(cam) steht im Einklang mit den Ergebnissen der Goodin und Mitarbeiter [Lee, Y.-T., Et Al. (2010) Biochemie 49, 3412-3419] und hat bedeutende Konsequenzen f&uuml;r zuk&uuml;nftige Elektronen-Transfer-Studien auf diesem beliebten Metalloenzyme.

Zink-substituierte Cytochrom P450(cam): Charakterisierung von Protein Conformers F420 und F450 durch photoinduzierte Elektronentransfer.

Metallo sostituzione delle proteine eme &egrave; ampiamente applicata nello studio delle reazioni di trasferimento (ET) elettroni biologicamente rilevanti. &Egrave; stato dimostrato che molte proteine modificate rimangono nella loro conformazione nativa e possono fornire indicazioni utili nel meccanismo molecolare dell&#39;elettrone di trasferimento tra la proteina nativa e i suoi substrati. Abbiamo studiato le reazioni ET tra zinco-sostituita citocromo P450(cam) e piccoli composti organici quali chinoni e ferrocene, che sono in grado di accedere a canali idrofobici di proteine e associazione vicino il sito attivo, come suo substrato nativo, canfora. Seguendo il metodo di sostituzione sviluppato da Gunsalus e collaboratori [Wagner, G. C., et al (1981) j Biol Chem. 256, 6262-6265], abbiamo identificato due forme dominanti della proteina zinco-sostituita, F450 e F420, che esibiscono Propriet&agrave; fotochimiche e photophysical diverse. Il comportamento di ET di F420 suggerisce che idrofobici ligandi redox-attiva sono in grado di penetrare il canale idrofobico e pongono nelle immediate vicinanze di Zn-porfirina. In contrasto, le tariffe pi&ugrave; lente di tempra ET osservate nel caso F450 indicano che l&#39;associazione &egrave; debole e si verifica di fuori del canale proteico. Pertanto, possiamo concludere che F420 corrisponde alla struttura aperta del citocromo nativo P450(cam) mentre F450 &egrave; un canale chiuso o parzialmente chiuso che &egrave; caratteristico del citocromo contenenti canfora P450(cam). L&#39;esistenza di due distinte conformisti di Zn-bound P450(cam) &egrave; coerenza con le risultanze Goodin e collaboratori [Lee, Y.-T., et al (2010) biochimica 49, 3412-3419] e ha conseguenze significative per gli studi di trasferimento di elettroni futuro su questo popolare metalloenzyme.

Zinco-sostituita citocromo P450(cam): Caratterizzazione della proteina conformeri F420 e F450 dal trasferimento di elettroni fotoindotti.

&#x91D1;&#x5C5E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x30D8;&#x30E0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x96FB;&#x5B50;&#x79FB;&#x52D5; (ET) &#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x5E83;&#x304F;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x6539;&#x826F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x9593;&#x96FB;&#x5B50;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x8EE2;&#x9001;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304F;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E9C;&#x925B;&#x7F6E;&#x63DB;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; P450(cam) &#x3068;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x6709;&#x6A5F;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x30AD;&#x30CE;&#x30F3;&#x3068;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30F3;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3078;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x57FA;&#x677F;&#x3001;&#x6A1F;&#x8133;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x3069; ET &#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6B21;&#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x6CD5; Gunsalus &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x540C;&#x50DA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x305F; [&#x30EF;&#x30B0;&#x30CA;&#x30FC;&#x3001;g. c., et al. (1981) J. &#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66; 256&#x3001;6262-6265]&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5149;&#x7269;&#x7406;&#x30FB;&#x5149;&#x5316;&#x5B66;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059; 2 &#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;&#x4E9C;&#x925B;&#x7F6E;&#x63DB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; F450 &#x3068; F420&#x3001;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;F420 &#x306E; ET &#x306E;&#x6319;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30EC;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x304C;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x6D78;&#x900F;&#x3057;&#x3001;&#x81EA;&#x5206;&#x81EA;&#x8EAB;&#x3092;&#x4E9C;&#x925B;&#x30DD;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x8FD1;&#x508D;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;F450 &#x5834;&#x5408;&#x3092;&#x8A8D;&#x3081; ET &#x3082;&#x9045;&#x3044;&#x713C;&#x5165;&#x901F;&#x5EA6;&#x5354;&#x4F1A;&#x5F31;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x5916;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;.&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;F450 &#x6A1F;&#x8133;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; P450(cam) &#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x9589;&#x9396;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x9589;&#x3058;&#x305F;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9593; F420 &#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0; P450(cam) &#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Goodin &#x3068;&#x540C;&#x50DA;&#x306E;&#x6240;&#x898B;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x660E;&#x77AD;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE; Zn &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; P450(cam) &#x306E;&#x5B58;&#x5728; [&#x30A4; &#x30FB;&#x5EB7;&#x5B5D; et al. (2010) &#x751F;&#x5316;&#x5B66; 49, 3412 3419] &#x3053;&#x306E;&#x4EBA;&#x6C17;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x91D1;&#x5C5E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x8EE2;&#x9001;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3002;

&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0; P450(cam): &#x4E9C;&#x925B;&#x7F6E;&#x63DB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; F420 &#x3068;&#x5149;&#x8A98;&#x8D77;&#x96FB;&#x5B50;&#x79FB;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; F450&#x3002;

Heme &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE08;&#xC18D; &#xB300;&#xCCB4;&#xB294; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xAD00;&#xB828; &#xC804;&#xC790; &#xC1A1;&#xAE08; (&#xB3D9;&#xBD80;) &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB110;&#xB9AC; &#xC801;&#xC6A9; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB9CE;&#xC740; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xB0A8;&#xC544; &#xBC0F; &#xCC9C;&#xC5F0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xADF8; &#xAE30;&#xD310; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1; &#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC544;&#xC5F0; &#xB300;&#xCCB4; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; p450(cam)&#xC640; &#xD034; &#xBC0F; ferrocene, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4; &#xD558; &#xACE0; &#xD604;&#xC7AC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAE30;&#xD310;, &#xC7A5;&#xB1CC;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xAC19;&#xC740; &#xC791;&#xC740; &#xC720;&#xAE30; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBC18;&#xC751; &#xC678; &#xC870;&#xC0AC;. Gunsalus&#xACFC; &#xB3D9;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB41C; &#xB300;&#xCCB4; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xB2E4;&#xC74C; [&#xBC14;&#xADF8;&#xB108;, G. C. &#xADF8; &#xC678; &#xC5EC;&#xB7EC;&#xBD84; (1981) J. Biol. &#xD654;&#xD559; 256, 6262-6265], &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xC544;&#xC5F0; &#xB300;&#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; F450 &#xBC0F; F420, &#xB2E4;&#xB978; photophysical &#xBC0F; &#xAD11;&#xD654;&#xD559; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. F420 &#xC678; &#xB3D9;&#xC791; &#xC18C;&#xC218; redox active ligands &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xCE68;&#xD22C; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C1;&#xC811; Zn-&#xD3EC; &#xB974; &#xD53C; &#xB9B0; &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; &#xC790;&#xC2E0;&#xC744; &#xBC30;&#xCE58; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, F450 &#xACBD;&#xC6B0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB290;&#xB9B0; &#xC678; &#xB0C9;&#xAC01; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD611;&#xD68C; &#xC57D;&#xD55C; &#xC774;&#xBA70; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCC44;&#xB110; &#xB54C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; F420 &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; p450(cam)&#xC758; &#xC624;&#xD508; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; f450&#xB294; &#xB2EB;&#xD78C; &#xB610;&#xB294; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2EB;&#xD78C; &#xCC44;&#xB110; &#xC2DC; &#xD1A0;&#xB294; &#xB179; &#xB098;&#xBB34;&#xC5D0; &#xB4E4;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; &#xD06C;&#xB86C; p450(cam)&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xACB0;&#xB860; &#xC9C0;&#xC5C8;&#xB2E4;. Zn &#xBC14;&#xC778;&#xB529; p450(cam)&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; conformers&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; Goodin&#xC640; &#xB3D9;&#xB8CC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; [Lee, Y.. &#xC678;. (2010) &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; 49, 3412-3419]&#xC774; &#xC778;&#xAE30; metalloenzyme&#xC5D0; &#xBBF8;&#xB798;&#xC758; &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;.

&#xC544;&#xC5F0; &#xB300;&#xCCB4; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P450(cam): &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Conformers&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; F420 &#xBC0F; F450 Photoinduced &#xC804;&#xC790; &#xC1A1;&#xAE08;.

Metal sustituci&oacute;n de hemoprote&iacute;nas se aplica extensamente en el estudio de reacciones de transferencia (ET) de electrones biol&oacute;gicamente relevantes. Se ha demostrado que muchas prote&iacute;nas modificadas permanecer&aacute;n en su conformaci&oacute;n nativa y pueden proporcionar la transferencia de ideas &uacute;tiles sobre el mecanismo molecular de electrones entre la prote&iacute;na nativa y sus substratos. Investigamos las reacciones ET entre cinc-sustituido citocromo P450(cam) y peque&ntilde;os compuestos org&aacute;nicos como quinonas y ferroceno, que son capaces de acceder a canal hidrof&oacute;bico de la prote&iacute;na y enlace cerca del sitio activo, como su sustrato nativo, alcanfor. Siguiendo el m&eacute;todo de sustituci&oacute;n desarrollado por Gunsalus y colaboradores [Wagner, C. G., et al (1981) J. Biol Chem. 256, 6262-6265], hemos identificado dos formas dominantes de la prote&iacute;na cinc-sustituido, F450 y F420, que exhiben propiedades fotoqu&iacute;micas y fotof&iacute;sicas diferentes. El comportamiento de ET de F420 sugiere que hidrof&oacute;bico ligandos redox activos son capaces de penetrar el canal hidrof&oacute;bico y colocarse en las inmediaciones de la Zn-porfirina. En cambio, las tasas de enfriamiento m&aacute;s lentas de ET observadas en el caso de F450 indican que la asociaci&oacute;n es d&eacute;bil y se produce fuera del canal de la prote&iacute;na. Por lo tanto, concluimos que F420 corresponde a la estructura abierta de la citocromo nativo P450(cam) mientras F450 tiene un canal cerrado o parcialmente cerrado que es caracter&iacute;stico de la citocromo que contienen alcanfor P450(cam). La existencia de dos distintos conformadores de Zn-limite P450(cam) es consistente con los resultados de Goodin y colaboradores [Lee, Y.-T., et al (2010) bioqu&iacute;mica 49, 3412-3419] y tienen consecuencias significativas para estudios de transferencia de electrones futuras en este popular metaloenzima.

Citocromo cinc-Substituted P450(cam): Caracterizaci&oacute;n de la prote&iacute;na conformadores F420 y F450 por transferencia electr&oacute;nica fotoinducida.

Cynthia V. Pagba

Center for Biophotonics Science and Technology

University of California, Davis

Rejection of Fluorescence Background in Resonance and Spontaneous Raman Microspectroscopy

Cynthia V. Pagba

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Center for Biophotonics Science and Technology

University of California, Davis

Rejection of Fluorescence Background in Resonance and Spontaneous Raman Microspectroscopy

Center for Biophotonics Science and Technology