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Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation

Dendritic cells (DCs) can be considered sentinels of the immune system which play a critical role in its initiation and response to infection1. Detection ...

Mount Sinai School of Medicine 

&#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBD84;&#xC790;-1 (PECAM-1)&#xC740; &#xD608;&#xC561; &#xC138;&#xD3EC;, &#xD608;&#xC18C;&#xD310;, &#xB4F1;&#xC758; &#xBC94;&#xC704; &#xBC0F; &#xD608;&#xAD00; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;. PECAM-1 &#xD6C4;&#xC790; immunoreceptor &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xAE30;&#xBC18; &#xAE08;&#xC9C0; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xAF2C;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB418; &#xACE0; &#xC811;&#xCC29;&#xC81C; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xD638; &#xC18D;&#xC131;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB974;&#xBA74; &#xCCB4; &#xC678;&#xB294; &#xD608;&#xC18C;&#xD310;&#xC758; &#xC9D1;&#xACC4; &#xC5B5;&#xC81C; PECAM-1 &#xC2E0;&#xD638; &#xC99D;&#xBA85; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; PECAM 1 &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC950;&#xC640; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; &#xC774;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4; &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD608;&#xC804; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC774; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;. &#xC6B0;&#xB9AC; PECAM 1 &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xD608;&#xC804;&#xC740; &#xB354; &#xD070;, &#xBCF4;&#xB2E4; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xD615;&#xC131; &#xBCF4;&#xC5EC; intravital &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xBC0F; cremaster &#xADFC;&#xC721; arterioles &#xBD80;&#xC0C1; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC720;&#xB3C4; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558; &#xACE0; &#xC548;&#xC815; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC81C;&#xC5B4; &#xC774;&#xC2DD; &#xBC1B;&#xC740; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; PECAM-1 &#xACE8; &#xC218; &#xC774;&#xC2DD; &#xBC1B;&#xC740; &#xD1B5;&#xC81C; &#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD070; &#xD608;&#xC804; &#xD615;&#xC131;&#xB3C4; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD608;&#xC804; &#xC99D;&#xC758; &#xCCA0; &#xC5FC;&#xD654; &#xBAA8;&#xB378; &#xACBD; &#xB3D9;&#xB9E5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD608;&#xC804; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. PECAM 1 &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC950; &#xC2DC;&#xAC04; 75% &#xD608;&#xAD00; &#xD3D0;&#xC0C9;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xD1B5;&#xC81C; &#xC950; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC9E7;&#xC740;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; PECAM 1 &#xD608;&#xC804; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC5D0;&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD608;&#xC18C;&#xD310; PECAM 1 in vivo &#xD608;&#xC804; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;-1 (PECAM-1) &#x662F;&#x8868;&#x793A;&#x8303;&#x56F4;&#x7684;&#x8840;&#x6DB2;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#xFF0C;&#x548C;&#x5BF9;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;PECAM 1 &#x62E5;&#x6709;&#x80F6;&#x7C98;&#x5242;&#x548C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#xFF0C;&#x540E;&#x8005;&#x6B63;&#x5728;&#x4ECB;&#x5BFC; immunoreceptor &#x57FA;&#x4E8E;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x56FE;&#x6848;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x5C3E;&#x90E8;&#x3002;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x6700;&#x8FD1;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; PECAM 1 &#x4FE1;&#x53F7;&#x6291;&#x5236;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x7684;&#x805A;&#x96C6;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; PECAM-1 &#x57FA;&#x56E0;&#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x8F90;&#x5C04;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8C03;&#x67E5;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53D7;&#x4F53;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x8840;&#x6813;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x6D3B;&#x4F53;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x6FC0;&#x5149;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x635F;&#x4F24;&#x63D0;&#x777E;&#x808C;&#x5C0F;&#x52A8;&#x8109;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x8840;&#x6813;&#x5F62;&#x6210; PECAM 1 &#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20;&#x88AB;&#x66F4;&#x5927;&#xFF0C;&#x6BD4;&#x4E2D;&#x66F4;&#x5FEB;&#x5730;&#x5F62;&#x6210;&#x63A7;&#x5236;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x548C;&#x5219;&#x8F83;&#x4E3A;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x5728;&#x6536;&#x5230; PECAM 1 &#x7F3A;&#x9AA8;&#x9AD3;&#xFF0C;&#x6BD4;&#x6536;&#x5230;&#x63A7;&#x5236;&#x79FB;&#x690D;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x79FB;&#x690D;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8FD8;&#x6210;&#x7ACB;&#x4E86;&#x5927;&#x6813;&#x3002;&#x4E09;&#x6C2F;&#x5316;&#x94C1;&#x7684;&#x8840;&#x6813;&#x5F62;&#x6210;&#x6A21;&#x578B;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x8C03;&#x67E5;&#x9888;&#x52A8;&#x8109;&#x8840;&#x6813;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;PECAM-1-&#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5230; 75%&#x8840;&#x7BA1;&#x95ED;&#x585E;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5728;&#x5927;&#x5927;&#x5C11;&#x4E8E;&#x5BF9;&#x7167;&#x7EC4;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x63D0;&#x4F9B;&#x53C2;&#x4E0E; PECAM 1 &#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x4E2D;&#x7684;&#x8840;&#x6813;&#x5F62;&#x6210;&#x8D1F;&#x5411;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;

&#x8840;&#x5C0F;&#x677F; PECAM-1 &#x6291;&#x5236;&#x4F53;&#x5185;&#x8840;&#x6813;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;

Platelet endothelial cell adhesion molecule-1 (PECAM-1) is a cell surface glycoprotein receptor expressed on a range of blood cells, including platelets, and on vascular endothelial cells. PECAM-1 possesses adhesive and signaling properties, the latter being mediated by immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs present on the cytoplasmic tail of the protein. Recent studies in vitro have demonstrated that PECAM-1 signaling inhibits the aggregation of platelets. In the present study we have used PECAM-1-deficient mice and radiation chimeras to investigate the function of this receptor in the regulation of thrombus formation. Using intravital microscopy and laser-induced injury to cremaster muscle arterioles, we show that thrombi formed in PECAM-1-deficient mice were larger, formed more rapidly than in control mice, and were more stable. Larger thrombi were also formed in control mice that received transplants of PECAM-1-deficient bone marrow, in comparison to mice that received control transplants. A ferric chloride model of thrombosis was used to investigate thrombus formation in carotid arteries. In PECAM-1-deficient mice the time to 75% vessel occlusion was significantly shorter than in control mice. These data provide evidence for the involvement of platelet PECAM-1 in the negative regulation of thrombus formation.

Platelet PECAM-1 inhibits thrombus formation in vivo.

Mol&eacute;cule-1 d&#39;adh&eacute;sion cellule endoth&eacute;liale plaquettaire (PECAM-1) est un r&eacute;cepteur de glycoprot&eacute;ine de surface cellulaire exprim&eacute; sur une plage de cellules de sang, y compris les plaquettes et sur les cellules endoth&eacute;liales vasculaires. PECAM-1 poss&egrave;de des propri&eacute;t&eacute;s adh&eacute;sives et signalisation, m&eacute;di&eacute;e par immunoreceptor tyrosine-fonction inhibitrice motifs pr&eacute;sents sur la queue cytoplasmique de la prot&eacute;ine. De r&eacute;centes &eacute;tudes in vitro ont d&eacute;montr&eacute; que la signalisation PECAM-1 inhibe l&#39;agr&eacute;gation des plaquettes. Dans la pr&eacute;sente &eacute;tude nous avons utilis&eacute; des souris d&eacute;ficientes PECAM-1 et rayonnement chim&egrave;res d&#39;enqu&ecirc;ter sur le fonctionnement de ce r&eacute;cepteur dans la r&eacute;gulation de la formation du thrombus. &Agrave; l&#39;aide de la microscopie intravitale et blessure induite par laser art&eacute;rioles du muscle cr&eacute;master, nous montrons que le thrombus form&eacute;s chez les souris d&eacute;ficientes en PECAM-1 &eacute;taient plus gros, form&eacute; plus rapidement que dans souris de contr&ocirc;le et sont plus stables. Thrombus plus grandes ont aussi &eacute;t&eacute; form&eacute;s chez les souris t&eacute;moins qui ont re&ccedil;u une greffe de moelle osseuse de PECAM-1-d&eacute;ficient, en comparaison avec des souris qui ont re&ccedil;u des greffes de contr&ocirc;le. Un mod&egrave;le de chlorure ferrique de la thrombose a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; pour &eacute;tudier la formation de thrombus dans les art&egrave;res carotides. Dans PECAM-1-deficient souris le temps d&#39;occlusion du vaisseau 75 % a &eacute;t&eacute; significativement plus courte que chez les souris t&eacute;moins. Ces donn&eacute;es fournissent des preuves de l&#39;implication des plaquettes PECAM-1 dans la r&eacute;gulation n&eacute;gative de la formation du thrombus.

Plaquettes PECAM-1 inhibe la formation de thrombus in vivo.

Thrombozyten endothelial Zelle Adh&auml;sion Molek&uuml;l-1 (PECAM-1) ist ein Zelle-Oberfl&auml;che Glykoprotein-Rezeptor auf eine Reihe von Blutk&ouml;rperchen, Thrombozyten, einschlie&szlig;lich und vaskul&auml;ren endothelialen Zellen ausgedr&uuml;ckt. PECAM-1 besitzt Klebstoff und Signalisierung Eigenschaften, die letztere wird vermittelt durch Aramburuzabala Tyrosin-basierte hemmenden Motive auf der zytoplasmatischen Schwanz des Proteins vorhanden. In-vitro-Studien haben bewiesen, dass PECAM-1 Signalisierung die Aggregation der Thrombozyten hemmt. Wir haben in der vorliegenden Studie verwendet PECAM-1-defizienten M&auml;usen und Strahlung Chim&auml;ren, die Funktion dieses Rezeptors bei der Regulierung der Thrombus-Bildung zu untersuchen. Mit intravital-Mikroskopie und Laser-induzierte Sch&auml;digung des Cremaster-Muskel-Arteriolen, zeigen wir, dass Thromben gebildet PECAM-1-defizienten M&auml;usen schneller als in gebildet, gr&ouml;&szlig;er waren, Steuern, M&auml;use und stabiler wurden. Gr&ouml;&szlig;ere Thromben bildeten sich auch in den Steuerelement-M&auml;usen, die Transplantation von Knochenmark PECAM-1-Mangel, im Vergleich zu M&auml;usen zu empfangen, die Steuerelement-Transplantationen zu empfangen. Ein Eisenchlorid-Modell der Thrombose wurde zur Thrombus-Bildung in Halsarterien zu untersuchen. PECAM-1-Mangel M&auml;usen die Zeit, um 75 % Schiff Okklusion war deutlich k&uuml;rzer als bei Kontrolle M&auml;usen. Diese Daten sind Beweis f&uuml;r die Beteiligung der Thrombozyten PECAM-1 bei der negativen Regulation des Thrombus-Bildung.

Thrombozyten PECAM-1 hemmt Thrombus-Bildung in-vivo.

Piastrine cellule endoteliali adesione molecola-1 (PECAM-1) &egrave; un recettore glicoproteina di superficie espresso su una gamma di cellule del sangue, incluse piastrine e sulle cellule endoteliali vascolari. PECAM-1 possiede propriet&agrave; adesive e segnalazione, mediata da immunoreceptor basati su tirosina motivi inibitori presenti sulla coda citoplasmatica della proteina. Recenti studi in vitro hanno dimostrato che la segnalazione PECAM-1 inibisce l&#39;aggregazione delle piastrine. Nel presente studio abbiamo usato PECAM-1-deficient mice and radiazione chimere per indagare la funzione di questo recettore nella regolazione della formazione di trombi. Utilizzando la microscopia intravital e lesioni laser-indotta di arteriole muscolo cremastere, mostriamo che trombi formate nel mouse PECAM-1-carenti erano pi&ugrave; grandi, formato pi&ugrave; rapidamente rispetto a topi di controllo e sono stati pi&ugrave; stabili. Trombi pi&ugrave; grandi si formarono anche nei topi di controllo che hanno ricevuto trapianti di midollo osseo PECAM-1-carenti, rispetto ai topi che hanno ricevuto trapianti di controllo. Per studiare la formazione di trombi nelle arterie carotidee &egrave; stato utilizzato un modello di cloruro ferrico di trombosi. Nel deficit di PECAM-1 topi il tempo di occlusione del vaso 75% era significativamente pi&ugrave; brevi rispetto a topi di controllo. Questi dati forniscono la prova per il coinvolgimento di piastrine PECAM-1 nella regolazione negativa della formazione di trombi.

Piastrinica PECAM-1 inibisce la formazione di trombi in vivo.

&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x5206;&#x5B50; 1 (PECAM 1) &#x8840;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3068;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x5C64;&#x7CD6;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3067;&#x3059;&#x3002;PECAM 1 &#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5F8C;&#x8005;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x6291;&#x5236;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C6;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x63A5;&#x7740;&#x3068;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x6240;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;In vitro &#x3067;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;PECAM 1 &#x3092;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x51DD;&#x96C6;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x6211;&#x3005; &#x306F; PECAM 1 &#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x653E;&#x5C04;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x8840;&#x6813;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x3002;&#x751F;&#x4F53;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x30AF;&#x30EC;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x7B4B;&#x7D30;&#x52D5;&#x8108;&#x3078;&#x306E;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x8A98;&#x8D77;&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; PECAM 1 &#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8840;&#x6813;&#x3067;&#x3088;&#x308A;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x3001;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x3088;&#x308A;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x8840;&#x6813;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x79FB;&#x690D;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066; PECAM 1 &#x6B20;&#x640D;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x306E;&#x79FB;&#x690D;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5869;&#x5316;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x9244;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x8840;&#x6813;&#x75C7;&#x306E;&#x981A;&#x52D5;&#x8108;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8840;&#x6813;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;PECAM 1 &#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x6642;&#x9593; 75 &#xFF05; &#x8840;&#x7BA1;&#x9589;&#x585E;&#x3067;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x77ED;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;PECAM 1 &#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x8840;&#x6813;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x8CA0;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x3067;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8840;&#x5C0F;&#x677F; PECAM 1 in vivo &#x3067;&#x306E;&#x8840;&#x6813;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Plaqueta c&eacute;lulas endoteliales mol&eacute;cula 1 de adhesi&oacute;n (PECAM-1) es un receptor de glicoprote&iacute;na de superficie celular expresado en una gama de c&eacute;lulas sangu&iacute;neas, incluyendo las plaquetas y en las c&eacute;lulas endoteliales vasculares. PECAM-1 posee propiedades adhesivas y se&ntilde;alizaci&oacute;n, el &uacute;ltimo es mediada por immunoreceptor basadas en tirosina inhibidor motivos presentes en la cola citopl&aacute;smica de la prote&iacute;na. Recientes estudios in vitro han demostrado que la se&ntilde;alizaci&oacute;n de PECAM-1 inhibe la agregaci&oacute;n de plaquetas. En el presente estudio hemos utilizado ratones PECAM-1-deficientes y radiaci&oacute;n quimeras para investigar la funci&oacute;n de este receptor en la regulaci&oacute;n de la formaci&oacute;n del trombo. Usando microscopia intravital y lesi&oacute;n inducida por l&aacute;ser en las arteriolas de M&uacute;sculo crem&aacute;ster, demostramos que los trombos formados en ratones deficientes PECAM-1 eran m&aacute;s grandes, formado m&aacute;s r&aacute;pidamente que en ratones de control y eran m&aacute;s estables. Tambi&eacute;n se formaron grandes trombos en ratones de control que recibieron transplante de m&eacute;dula &oacute;sea de PECAM-1-deficiente, en comparaci&oacute;n con los ratones que recibieron trasplantes de control. Se utiliz&oacute; un modelo de cloruro f&eacute;rrico de trombosis para investigar la formaci&oacute;n de trombos en arterias car&oacute;tidas. En deficiencia de PECAM-1 ratones el tiempo a la oclusi&oacute;n de los vasos 75% fue significativamente menor en los ratones de control. Estos datos proporcionan evidencia de la implicaci&oacute;n de la plaqueta PECAM-1 en la regulaci&oacute;n negativa de la formaci&oacute;n del trombo.

Plaqueta PECAM-1 inhibe la formaci&oacute;n de trombos en vivo.

&#x65B0;&#x578B;&#x57FA;&#x56E0;&#x9910;&#x8D39;&#x88AB;&#x9694;&#x79BB;&#x5728;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6216;&#x4E0A;&#x8C03;&#x65E9;&#x671F;&#x795E;&#x7ECF;&#x89C4;&#x8303;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5DEE;&#x5F02;&#x663E;&#x793A;&#x5C4F;&#x5E55;&#x3002;&#x9910;&#x8D39;&#x8868;&#x793A;&#x6BCD;&#x7CFB;&#x548C; zygotically&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728; midgastrula &#x9636;&#x6BB5;&#x4E4B;&#x540E;&#x662F;&#x795E;&#x7ECF;&#x5916;&#x80DA;&#x5C42;&#x4E0A;&#x8C03;&#x3002;&#x5B83;&#x88AB;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x677F;&#xFF0C;&#x540E;&#x6765;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x5927;&#x8111;&#x3001; &#x773C;&#x775B;&#x548C;&#x810A;&#x9AD3;&#x3002;&#x6574;&#x4E2A;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#x9910;&#x8D39;&#x7684;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#x5BFC;&#x81F4;&#x524D;&#x622A;&#x65AD;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0D;&#x6784;&#x6210;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6B21;&#x4E3B;&#x529E;&#x5355;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E8C;&#x6B21;&#x8F74;&#x5411;&#x7ED3;&#x6784;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x5206;&#x88C2;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x8005;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x8F74;&#x91CD;&#x590D;&#x3002;&#x9910;&#x8D39;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x7684; Morpholino &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x51CF;&#x5C11;&#x5BFC;&#x81F4;&#x81F4;&#x547D;&#x6027;&#x6216;&#x5F02;&#x5E38;&#x7684; gastrulation&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x91CD;&#x5927; midgastrula &#x80DA;&#x80CE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;Midgastrula &#x80DA;&#x80CE;&#x8D85;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE;&#x9910;&#x8D39;&#x4E5F;&#x51FA;&#x73B0;&#x4E86;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x9910;&#x8D39;&#x4E0E;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x86CB;&#x767D;-4 &#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x8111;&#x888B;&#x5728;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x5E3D;&#x5916;&#x80DA;&#x5C42;&#x795E;&#x7ECF;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x534F;&#x540C;&#x6548;&#x5E94;&#x3002;&#x9910;&#x8D39;&#x5DF2;&#x6CA1;&#x6709;&#x4EE5;&#x524D;&#x7279;&#x70B9;&#x57DF;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x53EF;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6838;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;Orthologues&#xFF0C;&#x73B0;&#x5DF2;&#x5728;&#x4EBA;&#x529B;&#x3001; &#x9F20;&#x6807;&#x3001; &#x9E21;&#x548C;&#x6CB3;&#x8C5A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x9910;&#x8D39;&#xFF0C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x6D3B;&#x548C;&#x524D;&#x540E;&#x56FE;&#x6848;&#x3002;

&#x65B0;&#x578B;&#x57FA;&#x56E0;&#x9910;&#x8D39;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x6D3B;&#x548C;&#x524D;&#x540E;&#x9635;&#x5217;&#x4E2D;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;

The novel gene ashwin was isolated in a differential display screen for genes activated or up-regulated early in neural specification. ashwin is expressed maternally and zygotically, and it is up-regulated in the neural ectoderm after the midgastrula stage. It is expressed in the neural plate and later in the embryonic brain, eyes, and spinal cord. Overexpression of ashwin in whole embryos leads to anterior truncations and other defects. However, a second Organizer does not form, and the secondary axial structures may result from splitting of the Organizer, rather than axis duplication. Morpholino oligonucleotide-mediated reduction in ashwin expression leads to lethality or abnormalities in gastrulation, as well as significant apoptosis in midgastrula embryos. Apoptosis is also observed in midgastrula embryos overexpressing ashwin. Coexpression of ashwin with the bone morphogenetic protein-4 antagonist noggin has a synergistic effect on neural-specific gene expression in isolated animal cap ectoderm. Ashwin has no previously characterized domains, although two nuclear localization signals can be identified. Orthologues have been identified in the human, mouse, chicken, and pufferfish genomes. Our results suggest that ashwin regulates cell survival and anteroposterior patterning.

Novel gene ashwin functions in Xenopus cell survival and anteroposterior patterning.

L&#39;ashwin nouveau g&egrave;ne a &eacute;t&eacute; isol&eacute; dans un &eacute;cran de visualisation diff&eacute;rentielle des g&egrave;nes activ&eacute;s ou r&eacute;gul&eacute;e au d&eacute;but de la sp&eacute;cification neuronale. Ashwin est exprim&eacute; pour la m&egrave;re et zygotically, et il est r&eacute;gul&eacute;e dans l&#39;ectoderme neural apr&egrave;s le stade moyen. Elle s&#39;exprime dans la plaque neurale et plus tard dans le cerveau embryonnaire, des yeux et la moelle &eacute;pini&egrave;re. Surexpression d&#39;ashwin chez les embryons tout m&egrave;ne &agrave; troncations ant&eacute;rieures et d&#39;autres d&eacute;fauts. Toutefois, un organisateur de second ne forme pas, et les structures secondaires axiales peuvent r&eacute;sulter de fractionnement de l&#39;organisateur, plut&ocirc;t que de la duplication de l&#39;axe. R&eacute;duction oligonucl&eacute;otide morpholino ashwin expression conduit &agrave; l&eacute;talit&eacute; ou anomalies de gastrulation, ainsi que l&#39;apoptosis significatif dans des embryons de moyen. L&#39;apoptose est &eacute;galement observ&eacute;e chez les embryons moyen surexprimant ashwin. Coexpression d&#39;ashwin avec la caboche d&#39;antagoniste de 4-prot&eacute;ine morphog&eacute;n&eacute;tique osseuse a un effet synergique sur l&#39;expression g&eacute;nique de neurones sp&eacute;cifiques dans l&#39;ectoderme cap animal isol&eacute;. Ashwin a caract&eacute;ris&eacute; non pr&eacute;c&eacute;demment de domaines, m&ecirc;me si les deux signaux de localisation nucl&eacute;aire peuvent &ecirc;tre identifi&eacute;s. Orthologues ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s chez l&#39;homme, souris, poulet et poisson-globe g&eacute;nomes. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent qu&#39;ashwin r&eacute;glemente la survie cellulaire et structuration ant&eacute;ro-post&eacute;rieure.

Fonctions du nouveau g&egrave;ne ashwin dans la survie cellulaire Xenopus et structuration ant&eacute;ro-post&eacute;rieure.

Die neuartige gen Ashwin wurde einem differenziellen Display f&uuml;r Gene aktiviert oder oben-geregelt in neuronalen Spezifikation fr&uuml;hen isoliert. Ashwin wird Maternal und zygotically ausgedr&uuml;ckt, und es ist oben-geregelt in der neuralen Ektoderm, nach Einf&uuml;hrung der midgastrula. Es wird in der Neural-Platte und sp&auml;ter in der embryonalen Gehirn, Augen und R&uuml;ckenmark ausgedr&uuml;ckt. Eine &Uuml;berexpression von Ashwin im ganzen Embryonen f&uuml;hrt zu anterior K&uuml;rzungen und andere Defekte. Jedoch k&ouml;nnen eine zweite Veranstalter nicht bilden und die axialen Sekund&auml;rstrukturen durch Aufspaltung der Veranstalter, sondern als Achse Vervielf&auml;ltigung. Morpholino Oligonukleotid-vermittelte Verringerung Ashwin Ausdruck f&uuml;hrt zu Letalit&auml;t oder Anomalien im Gastrulation sowie bedeutendes Apoptosis in midgastrula Embryonen. Apoptosis wird auch in midgastrula Embryonen &uuml;berexprimierenden Ashwin beobachtet. Coexpression von Ashwin mit der Knochen morphogenetische Protein-4-Antagonist-Birne hat eine synergistische Wirkung auf neuronale-spezifische Genexpression in isolierten tierischen GAP Ektoderm. Ashwin hat nicht zuvor Dom&auml;nen, gekennzeichnet, obwohl zwei nukleare Lokalisierung Signale identifiziert werden k&ouml;nnen. Orthologues wurden in der Mensch, Maus, Huhn und Kugelfisch Genomen. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass diese Ashwin Zelle &uuml;berleben und anteroposterioren Musterung regelt.

Neuartige Genfunktionen-Ashwin Xenopus Zelle &uuml;berleben und anteroposterioren Musterung.

Il romanzo gene ashwin &egrave; stato isolato in un display differenziale per geni attivati o up-regolato all&#39;inizio nella specifica neurale. Ashwin &egrave; espresso per via materna e zygotically, ed &egrave; up-regolata in ectoderma neurale dopo la fase di midgastrula. &Egrave; espressa nella piastra neurale e successivamente nel cervello embrionale, occhi e del midollo spinale. Sovraespressione di ashwin negli embrioni tutto conduce a troncamenti anteriori e altri difetti. Tuttavia, non formano un secondo Organizzatore, e le strutture assiali secondarie possono derivare da spaccare di Organizer, piuttosto che la duplicazione di asse. Oligonucleotides del oligonucleotide-mediata riduzione nell&#39;espressione di ashwin conduce alla letalit&agrave; o anomalie nella gastrulazione, nonch&eacute; significativi apoptosis in embrioni midgastrula. Apoptosis inoltre &egrave; osservato negli embrioni midgastrula con sovraesprimono relativa ashwin. Coexpression di ashwin con zucca bone morphogenetic protein-4 antagonista ha un effetto sinergico sull&#39;espressione del gene neurali specifici in ectoderma cap animale isolato. Ashwin non precedentemente ha caratterizzato domini, anche se possono essere identificati due segnali di localizzazione nucleare. Orthologues sono stati identificati nell&#39;essere umano, del mouse, pollo e pesce palla genomi. I nostri risultati suggeriscono che ashwin regola la sopravvivenza delle cellule e anteroposteriore patterning.

Funzioni di ashwin gene romanzo nella sopravvivenza delle cellule di Xenopus e anteroposteriore patterning.

&#x65B0;&#x898F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30A2;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x30A6;&#x30A3;&#x30F3;&#x5DEE;&#x52D5;&#x8868;&#x793A;&#x753B;&#x9762;&#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x65E9;&#x671F;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E9;&#x30EB;&#x4ED5;&#x69D8;&#x3067;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30B7;&#x30E5;&#x30A6;&#x30A3;&#x30F3;&#x6BCD;&#x6027;&#x3068; zygotically&#x3001;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x795E;&#x7D4C;&#x5916;&#x80DA;&#x8449;&#x306E;&#x8ABF;&#x6574;&#x3001;midgastrula &#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x5F8C;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x795E;&#x7D4C;&#x677F;&#x3001;&#x80DA;&#x306E;&#x8133;&#x3001;&#x773C;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x810A;&#x9AC4;&#x4EE5;&#x964D;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30B7;&#x30E5;&#x30A6;&#x30A3;&#x30F3;&#x5168;&#x4F53;&#x80DA;&#x3067;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x524D;&#x65B9;&#x306E;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306B; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30AC;&#x30CA;&#x30A4;&#x30B6;&#x30FC;&#x306F;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305A;&#x3001;&#x30BB;&#x30AB;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x8EF8;&#x69CB;&#x9020;&#x8EF8;&#x306E;&#x91CD;&#x8907;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x4E3B;&#x50AC;&#x8005;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5272;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3089;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Morpholino &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x5A92;&#x4ECB;&#x524A;&#x6E1B;&#x30A2;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x30A6;&#x30A3;&#x30F3;&#x5F0F;&#x81F4;&#x6B7B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x539F;&#x8178;&#x9665;&#x5165;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F; midgastrula &#x80DA;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x30A2;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x30A6;&#x30A3;&#x30F3;&#x904E;&#x5270; midgastrula &#x80DA;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30B7;&#x30E5;&#x30A6;&#x30A3;&#x30F3;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; 4 &#x62EE;&#x6297; noggin &#x3068;&#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x795E;&#x7D4C;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x76F8;&#x4E57;&#x52B9;&#x679C;&#x5916;&#x80DA;&#x8449;&#x5206;&#x96E2;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x5E3D;&#x5B50;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2 &#x6838;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x30A2;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x30A6;&#x30A3;&#x30F3;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7B2C;&#x30AA;&#x30FC;&#x30BD;&#x30ED;&#x30AC;&#x30B9;&#x4EBA;&#x9593;&#x3067;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x30C1;&#x30AD;&#x30F3;&#x306E;&#x30D5;&#x30B0;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x30A6;&#x30A3;&#x30F3;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3068;&#x524D;&#x5F8C;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

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&#xC18C;&#xC124; &#xC9C4; ashwin &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB610;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC0AC;&#xC591;&#xC5D0; &#xC77C;&#xCC0D; &#xC5C5; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC28;&#xB4F1; &#xB514;&#xC2A4;&#xD50C;&#xB808;&#xC774; &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. ashwin&#xC740; &#xC784;&#xC0B0;&#xBD80;&#xC640; zygotically, &#xD45C;&#xD604; &#xB418; &#xACE0; midgastrula &#xBB34;&#xB300; &#xD6C4; &#xC2E0;&#xACBD; ectoderm&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5C5; &#xADDC;&#xC81C; &#xC774;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD310;&#xACFC; &#xBC30;&#xC544; &#xB1CC;, &#xB208;, &#xBC0F; &#xCC99;&#xC218;&#xC758; &#xB4B7;&#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0; ashwin overexpression &#xC55E;&#xCABD;&#xC5D0; &#xC798;&#xB9BC; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xB9AC;&#xB4DC;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC870;&#xC9C1;&#xC790;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBCF4;&#xC870; &#xCD95; &#xAD6C;&#xC870; &#xCD95; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC8FC;&#xCD5C;&#xC790;, &#xBD84;&#xD560; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Morpholino oligonucleotide &#xC911;&#xC7AC; &#xAC10;&#xC18C; ashwin &#xC2DD; &#xCE58; &#xC0AC; &#xC728; &#xB610;&#xB294; gastrulation&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC774;&#xC0C1; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; midgastrula &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; apoptosis&#xB97C; &#xB9AC;&#xB4DC;. Apoptosis&#xB294; &#xB610;&#xD55C; ashwin overexpressing midgastrula &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Coexpression ashwin &#xBF08; &#xC804;&#xCCB4;&#xC801; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 4 &#xC801;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xBA38;&#xB9AC;&#xC640;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xC790; ectoderm&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC2DC;&#xB108;&#xC9C0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC544;&#xB2C8; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; Ashwin&#xC740; 2 &#xAC1C;&#xC758; &#xD575; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC2E0;&#xD638; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;,&#xC774; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Orthologues &#xC778;&#xAC04;, &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xCE58;&#xD0A8;&#xACFC; &#xBCF5;&#xC5B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; ashwin &#xC870;&#xC808; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xBC0F; anteroposterior &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xD560; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Xenopus &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xBC0F; anteroposterior &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xD560; &#xC18C;&#xC124; &#xC720;&#xC804;&#xC790; ashwin &#xD568;&#xC218;.

El gene nuevo ashwin fue aislado en una pantalla de despliegue diferencial de genes activados o regulados hasta principios de especificaci&oacute;n neural. Ashwin expresa maternal y zygotically, y es regulado en el ectodermo neural hasta despu&eacute;s de la etapa midgastrula. Se expresa en la placa neural y luego en el cerebro embrionario, ojos y m&eacute;dula espinal. Sobreexpresi&oacute;n de ashwin en embriones todo conduce a truncamientos anteriores y otros defectos. Sin embargo, no forma un segundo organizador, y las estructuras axiales secundarias pueden resultar de partir del organizador, en lugar de duplicaci&oacute;n de eje. Morfolino oligonucle&oacute;tidos mediada por reducci&oacute;n en la expresi&oacute;n de ashwin conduce a mortalidad o anormalidades en gastrulaci&oacute;n, as&iacute; como importantes apoptosis en embriones midgastrula. Apoptosis se observa tambi&eacute;n en embriones midgastrula overexpressing ashwin. Coexpresi&oacute;n de ashwin con el noggin antagonista de 4-prote&iacute;nas morfogen&eacute;ticas de hueso tiene un efecto sin&eacute;rgico sobre la expresi&oacute;n g&eacute;nica de nervios espec&iacute;ficos en el ectodermo del casquillo animal aislado. Ashwin no previamente ha caracterizado dominios, aunque pueden identificarse dos se&ntilde;ales de localizaci&oacute;n nuclear. Orthologues se han identificado en el ser humano, rat&oacute;n, pollo y pez globo genomas. Nuestros resultados sugieren que Ashwin regula la supervivencia celular y patrones anteroposterior.

Funciones de ashwin gene nuevo en la supervivencia de la c&eacute;lula de Xenopus y patrones anteroposterior.

Cellular processes depend on the function of intracellular molecular networks. The curation of the literature relevant to specific biological pathways is important for many theoretical and experimental research teams and communities. No current tool supports web publication or hosting of user-developed large scale annotated pathway diagrams. Sharing via web publication is needed to allow real-time access to the current literature pathway knowledge-base, both privately within a research team or publicly among the outside research community. Web publication also facilitates team and/or community input into the curation process while allowing centralized control of the curation and validation process. We have developed new tool to address these needs. Biological Pathway Publisher (BioPP) is a software suite for converting CellDesigner Systems Biology Markup Language (CD-SBML) formatted pathways into a web viewable format. The BioPP suite is available for private use and for depositing knowledge-bases into a newly created public repository.

BioPP: a tool for web-publication of biological networks.

&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6709;&#x5173;&#x7279;&#x5B9A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x5730;&#x65B9;&#x6027;&#x662F;&#x6587;&#x5B66;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x7406;&#x8BBA;&#x548C;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7814;&#x7A76;&#x5C0F;&#x7EC4;&#x548C;&#x793E;&#x533A;&#x3002;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F53;&#x524D;&#x5DE5;&#x5177;&#x652F;&#x6301; web &#x51FA;&#x7248;&#x7269;&#x6216;&#x627F;&#x8F7D;&#x7684;&#x7528;&#x6237;&#x5F00;&#x53D1;&#x5927;&#x578B;&#x6CE8;&#x660E;&#x901A;&#x8DEF;&#x5173;&#x7CFB;&#x56FE;&#x3002;&#x5206;&#x4EAB;&#x901A;&#x8FC7; web &#x51FA;&#x7248;&#x7269;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5141;&#x8BB8;&#x5BF9;&#x5F53;&#x524D;&#x6587;&#x5B66;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x5B9E;&#x65F6;&#x8BBF;&#x95EE;&#x77E5;&#x8BC6;&#x5E93;&#xFF0C;&#x65E2;&#x7814;&#x7A76;&#x56E2;&#x961F;&#x5185;&#x79C1;&#x4E0B;&#x6216;&#x516C;&#x5F00;&#x5916;&#x90E8;&#x7814;&#x7A76;&#x793E;&#x4F1A;&#x3002;Web &#x51FA;&#x7248;&#x7269;&#x8FD8;&#x6709;&#x5229;&#x4E8E;&#x56E2;&#x961F;&#x548C;/&#x6216;&#x793E;&#x4F1A;&#x6295;&#x5165;&#x5730;&#x65B9;&#x6027;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x5141;&#x8BB8;&#x7684;&#x5730;&#x65B9;&#x6027;&#x548C;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x96C6;&#x4E2D;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x65B0;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x6765;&#x6EE1;&#x8DB3;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9700;&#x6C42;&#x3002;&#x751F;&#x7269;&#x9014;&#x5F84;&#x53D1;&#x5E03;&#x670D;&#x52A1;&#x5668; (BioPP) &#x662F;&#x4E3A;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x6807;&#x8BB0;&#x8BED;&#x8A00; CellDesigner (CD SBML) &#x683C;&#x5F0F;&#x7684;&#x8DEF;&#x5F84;&#x8F6C;&#x6362;&#x6210; web &#x53EF;&#x67E5;&#x770B;&#x683C;&#x5F0F;&#x7684;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x5957;&#x4EF6;&#x3002;BioPP &#x5957;&#x4EF6;&#x662F;&#x53EF;&#x4F9B;&#x79C1;&#x4EBA;&#x4F7F;&#x7528;&#xFF0C;&#x5B58;&#x5165;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x521B;&#x5EFA;&#x7684;&#x516C;&#x5171;&#x50A8;&#x5B58;&#x5E93;&#x7684;&#x77E5;&#x8BC6;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;

BioPP&#xFF1A; &#x7528;&#x4E8E; web &#x51FA;&#x7248;&#x7269;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

Processus cellulaires d&#xE9;pendent de la fonction de r&#xE9;seaux mol&#xE9;culaires intracellulaires. La curation de la documentation pertinente &#xE0; certains m&#xE9;canismes biologiques est important pour de nombreuses &#xE9;quipes de recherche th&#xE9;orique et exp&#xE9;rimentale et des communaut&#xE9;s. Aucun outil actuel prend en charge la publication Web ou l&#x26;#39;h&#xE9;bergement de l&#x26;#39;utilisateur d&#xE9;velopp&#xE9;e &#xE0; grande &#xE9;chelle des diagrammes annot&#xE9;s de la voie. Partage via la publication Web est n&#xE9;cessaire pour permettre en temps r&#xE9;el l&#x26;#39;acc&#xE8;s &#xE0; la voie la litt&#xE9;rature actuelle base de connaissances, tant en priv&#xE9; au sein d&#x26;#39;une &#xE9;quipe de recherche ou publiquement au sein de la communaut&#xE9; de recherche &#xE0; l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur. Publication sur le Web facilite &#xE9;galement l&#x26;#39;&#xE9;quipe et / ou commentaires de la communaut&#xE9; dans le processus de curation, tout en permettant un contr&#xF4;le centralis&#xE9; de la curation et processus de validation. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un nouvel outil pour r&#xE9;pondre &#xE0; ces besoins. Editeur voie biologique (BioPP) est une suite logicielle pour convertir CellDesigner Systems Biology Markup Language (CD-SBML) voies format&#xE9;s dans un format lisibles sur le web. La suite BioPP est disponible pour un usage priv&#xE9; et pour le d&#xE9;p&#xF4;t des bases de connaissances dans un r&#xE9;f&#xE9;rentiel public nouvellement cr&#xE9;&#xE9;.

BioPP: un outil pour le Web-publication de r&#xE9;seaux biologiques

Zellul&auml;re Prozesse h&auml;ngen von der Funktion des intrazellul&auml;ren molekulare Netzwerke. Die Kuration der Literatur f&uuml;r spezifischen biologischen Bahnen relevant ist wichtig f&uuml;r viele theoretische und experimentelle Forschungsteams und Gemeinschaften. Keine aktuellen Tool unterst&uuml;tzt Web-Publikation oder hosting von Benutzer entwickelten gro&szlig;en Skala versehen-Weg-Diagramme. Teilen &uuml;ber Web-Publikation ist erforderlich, um Echtzeit-Zugriff auf die aktuelle Literatur Weg Wissensbasis, sowohl privat in einem Forschungsteam, oder &ouml;ffentlich unter der &auml;u&szlig;eren Forschergemeinde erlauben. Webpublikation erleichtert au&szlig;erdem das Team und/oder Gemeinschaft beim erlauben zentralisierte Steuerung des Kuration und Validierung in der Kuration-Prozess einbringen. Wir haben neues Instrument, um diese Bed&uuml;rfnisse entwickelt. Biologische Pathway-Verlag (BioPP) ist eine Softwaresuite f&uuml;r CellDesigner Systems Biology Markup Language (CD-SBML) formatiert Wege in ein Web darstellbares Format umwandeln. Die BioPP-Suite ist f&uuml;r den privaten Gebrauch und f&uuml;r die Hinterlegung von Wissensdatenbanken in einem neu erstellten &ouml;ffentlichen Repository verf&uuml;gbar.

BioPP: ein Werkzeug f&uuml;r Web-Publikation von biologischer Netzwerke.

Processi cellulari dipendono dalla funzione di reti molecolari intracellulari. La curatela della letteratura pertinente a specifici percorsi biologici &egrave; importante per molti gruppi di ricerca teorica e sperimentale e delle Comunit&agrave;. Nessun strumento corrente supporta la pubblicazione web o hosting di scala grande sviluppata dall&#39;utente annotato pathway diagrammi. Condivisione tramite pubblicazione web &egrave; necessaria per consentire l&#39;accesso in tempo reale del percorso corrente letteratura knowledge-base, sia privatamente all&#39;interno di un team di ricerca, o pubblicamente tra la comunit&agrave; di ricerca esterno. Pubblicazione Web facilita anche la squadra e/o comunit&agrave; di input nel processo di curatela, consentendo il controllo centralizzato della curatela e validazione del processo. Abbiamo sviluppato nuovi tool per soddisfare queste esigenze. Editore Pathway biologici (BioPP) &egrave; una suite di software per la conversione di percorsi CellDesigner Systems Biology Markup Language (CD-SBML) formattato in un formato visualizzabile del web. La suite BioPP &egrave; disponibile per uso privato e per il deposito di basi di conoscenza in un repository pubblico appena creato.

BioPP: uno strumento per la pubblicazione web delle reti biologiche.

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BioPP: &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xC6F9; &#xCD9C;&#xD310;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Procesos celulares dependen de la funci&#xF3;n de intracelulares redes moleculares. La curadur&#xED;a de la literatura relevante a determinados procesos biol&#xF3;gicos es importante para muchos equipos de investigaci&#xF3;n te&#xF3;rica y experimental y las comunidades. No hay ninguna herramienta actual soporta publicaci&#xF3;n en la web o el alojamiento de los diagramas de escala desarrollada por el usuario de la v&#xED;a de gran anotadas. Compartir a trav&#xE9;s de publicaci&#xF3;n en la web es necesario para permitir en tiempo real el acceso a la v&#xED;a de la literatura actual base de conocimientos, tanto en privado como dentro de un equipo de investigaci&#xF3;n p&#xFA;blicos o en la comunidad de investigaci&#xF3;n externa. Publicaci&#xF3;n en la Web tambi&#xE9;n facilita el equipo y / o aportes de la comunidad en el proceso de curaci&#xF3;n al tiempo que permite un control centralizado de la curaci&#xF3;n y el proceso de validaci&#xF3;n. Hemos desarrollado nueva herramienta para hacer frente a estas necesidades. Autor v&#xED;a biol&#xF3;gica (BioPP) es una suite de software para la conversi&#xF3;n de CellDesigner Biolog&#xED;a de Sistemas (Lenguaje de marcado de CD-SBML) las v&#xED;as de formato en un formato web visible. La suite BioPP est&#xE1; disponible para uso privado y para el dep&#xF3;sito de las bases de conocimiento en un repositorio p&#xFA;blico de nueva creaci&#xF3;n.

BioPP: una herramienta para la publicaci&#xF3;n en Web de redes biol&#xF3;gicas

&#x5165;&#x95E8;&#x4E2D;&#x751F;&#x7269;&#x901A;&#x8DEF;&#x5EFA;&#x8BBE;&#x4E0E;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Getting started in biological pathway construction and analysis.

Mise en route en construction et de l&#x26;#39;analyse biologique Pathway

Erste Schritte in biologischen Weg Konstruktion und Analyse.

Getting started in analisi e costruzione del pathway biologici.

&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x3068;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x5165;&#x9580;

&#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xD1B5;&#xB85C; &#xAC74;&#xC124; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xAE30;.

Primeros pasos en la construcci&#xF3;n v&#xED;a biol&#xF3;gica y An&#xE1;lisis

&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x67D3;&#x5F88;&#x96BE;&#x5B9E;&#x73B0;&#x6700;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x548C;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x6210;&#x719F;&#x3002;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (Dc) &#x4EE3;&#x8868;&#x4E4B;&#x95F4;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x3001; &#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x73AF;&#x8282;&#x3002;&#x5212;&#x5B9A;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E3B;&#x8981;&#x96C6;&#x6563;&#x63A7;&#x5236;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x53CD;&#x5411;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x708E;&#x75C7;&#x901A;&#x8DEF;&#x9887;&#x5177;&#x6311;&#x6218;&#x6027;&#x7684;&#x4EFB;&#x52A1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F18;&#x5316;&#x548C;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x6709;&#x6548;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x8BA9;&#x6211;&#x4EEC;&#x77ED;&#x6682;&#x5FEB;&#x9012; DNA &#x7684;&#x5929;&#x771F;&#x4E3B;&#x533A;&#x8BAE;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF; nucleofection &#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6E90;&#x6027; DCs &#x4E0E;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x53CA;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x6548;&#x7387;&#x7531;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x8D28;&#x7C92;&#x662F; nucleoporated&#x3002;&#x4EE5; nucleoporation &#x7684;&#x6548;&#x679C;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x5BF9;&#x76F4;&#x6D41;&#x6210;&#x719F;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x6807;&#x8BB0;&#x7269; CD86 &#x548C; MHCII GFP &#x9633;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#x8FDB;&#x884C;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x8FBE;&#x5230; 70%&#xFF0C;&#x8D85;&#x8FC7; 50%&#xFF0C;&#x8F6C;&#x67D3;&#x6548;&#x7387;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x6700;&#x4F73;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x6761;&#x4EF6;&#x548C; CD86 &#x548C; MHCII &#x8868;&#x8FBE;&#x4E0D;&#x53D8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; RNA (siRNA) &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684;&#x94BB;&#x673A;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E00;&#x3001; &#x5173;&#x952E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x8BC6;&#x522B;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &#xFF08;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#xFF09; &#x53CD;&#x5E94;&#x611F;&#x67D3;&#x65B0;&#x57CE;&#x75AB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x96C6;&#x6563;&#x63A7;&#x5236;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x3002;&#x94BB;&#x673A;-&#x6211;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x65E0;&#x6CD5;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7684;&#x897F;&#x65B9; siRNA &#x6CBB;&#x7597;&#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x3002;&#x94BB;&#x673A;-&#x6211;&#x51FB;&#x5012;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; IFN&beta; mRNA &#x4E0E;&#x8D1F;&#x63A7;&#x5236; siRNA &#x76F8;&#x6BD4;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; 75%&#x3002;&#x672C;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x5E94;&#x63A2;&#x8BA8;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B; DCs &#x4E2D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x5B9D;&#x8D35;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x9A8C;&#x8BC1;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x8F6C;&#x8D28;&#x7C92;&#x548C; siRNA &#x67D3;&#x4EBA;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6765;&#x6E90;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Transfection of primary immune cells is difficult to achieve at high efficiency and without cell activation and maturation. Dendritic cells (DCs) represent a key link between the innate and adaptive immune systems. Delineating the signaling pathways involved in the activation of human primary DCs and reverse engineering cellular inflammatory pathways have been challenging tasks. We optimized and validated an effective high-throughput transfection protocol, allowing us to transiently express DNA in naÃ¯ve primary DCs, as well as investigate the effect of gene silencing by RNA interference. Using a high-throughput nucleofection system, monocyte-derived DCs were nucleoporated with a plasmid expressing green fluorescent protein (GFP), and transfection efficiency was determined by flow cytometry, based on GFP expression. To evaluate the effect of nucleoporation on DC maturation, the expression of cell surface markers CD86 and MHCII in GFP-positive cells was analyzed by flow cytometry. We established optimal assay conditions with a cell viability reaching 70%, a transfection efficiency of over 50%, and unchanged CD86 and MHCII expression. We examined the impact of small interfering RNA (siRNA)-mediated knockdown of RIG-I, a key viral recognition receptor, on the induction of the interferon (IFN) response in DCs infected with Newcastle disease virus. RIG-I protein was undetectable by Western blot in siRNA-treated cells. RIG-I knockdown caused a 75% reduction in the induction of IFNÎ² mRNA compared with the negative control siRNA. This protocol should be a valuable tool for probing the immune response pathways activated in human DCs.

Validation of efficient high-throughput plasmid and siRNA transfection of human monocyte-derived dendritic cells without cell maturation.

La transfection de cellules immunitaires primaires est difficile &#xE0; r&#xE9;aliser avec une grande efficacit&#xE9; et sans activation cellulaire et la maturation. Les cellules dendritiques (DC) repr&#xE9;sentent un lien essentiel entre les syst&#xE8;mes immunitaire inn&#xE9;e et adaptative. D&#xE9;limiter les voies de signalisation impliqu&#xE9;es dans l&#x26;#39;activation de l&#x26;#39;homme PED primaires et reverse engineering cellulaires voies inflammatoires ont &#xE9;t&#xE9; des t&#xE2;ches difficiles. Nous avons optimis&#xE9; et valid&#xE9; un protocole de transfection efficaces &#xE0; haut d&#xE9;bit, ce qui nous permet d&#x26;#39;exprimer de fa&#xE7;on transitoire l&#x26;#39;ADN dans les PED na&#xEF;fs primaires, ainsi que d&#x26;#39;&#xE9;tudier l&#x26;#39;effet de l&#x26;#39;inactivation des g&#xE8;nes par ARN interf&#xE9;rence. Gr&#xE2;ce &#xE0; un syst&#xE8;me nucl&#xE9;ofection haut d&#xE9;bit, d&#xE9;riv&#xE9;es de monocytes PED ont &#xE9;t&#xE9; nucleoporated avec un plasmide exprimant la prot&#xE9;ine fluorescente verte efficacit&#xE9; (GFP), et la transfection a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;e par cytom&#xE9;trie de flux, bas&#xE9; sur l&#x26;#39;expression de GFP. Pour &#xE9;valuer l&#x26;#39;effet de la maturation des DC sur nucleoporation, l&#x26;#39;expression de marqueurs de surface cellulaire CD86 et CMH II dans la GFP-positives cellules a &#xE9;t&#xE9; analys&#xE9;e par cytom&#xE9;trie de flux. Nous avons &#xE9;tabli les conditions optimales de dosage avec une viabilit&#xE9; cellulaire atteignant 70%, une efficacit&#xE9; de transfection de plus de 50%, et inchang&#xE9;e expression CD86 et CMH II. Nous avons examin&#xE9; l&#x26;#39;impact de petits ARN interf&#xE9;rents (siARN) m&#xE9;di&#xE9;e par inactivation de RIG-I, un r&#xE9;cepteur de reconnaissance cl&#xE9; virale, sur l&#x26;#39;induction de l&#x26;#39;interf&#xE9;ron (IFN) de r&#xE9;ponse dans les PED infect&#xE9;es par le virus de la maladie de Newcastle. RIG-I prot&#xE9;ine a &#xE9;t&#xE9; ind&#xE9;tectable par Western blot dans les cellules trait&#xE9;es siARN. RIG-I knockdown a provoqu&#xE9; une r&#xE9;duction de 75% dans l&#x26;#39;induction de l&#x26;#39;ARNm IFN&#x3B2; par rapport &#xE0; la siRNA contr&#xF4;le n&#xE9;gatif. Ce protocole devrait &#xEA;tre un outil pr&#xE9;cieux pour sonder les voies de la r&#xE9;ponse immunitaire activ&#xE9;es dans les PED de l&#x26;#39;homme.

Validation des efficace &#xE0; haut d&#xE9;bit transfection de plasmide et SiRNA des cellules dendritiques d&#xE9;riv&#xE9;es de monocytes Sans la maturation des cellules

Transfektion von prim&auml;ren Immunzellen ist schwierig, mit hoher Effizienz und ohne ZELLAKTIVIERUNG und Reifung zu erzielen. Dendritische Zellen (DCs) stellen eine wichtige Verbindung zwischen der angeborenen und erworbenen immunen Systemen dar. Abgrenzung der Signalwege die Aktivierung des menschlichen prim&auml;re DCs beteiligt und reverse engineering zellul&auml;re entz&uuml;ndliche Wege haben anspruchsvolle Aufgaben. Wir optimiert und validiert eine effektive Hochdurchsatz-Transfection-Protokoll, so dass wir vor&uuml;bergehend schnelles DNA in naiven prim&auml;re DCs sowie untersuchen die Auswirkungen der Gen-silencing von RNA-Interferenz. Mit einem hohen Durchsatz-Nucleofection-System, abgeleitete Monozyt DCs wurden Nucleoporated mit einem Plasmid Ausdr&uuml;cken gr&uuml;n fluoreszierende Protein (GFP) und Transfektion Effizienz von Durchflusszytometrie, basierend auf GFP-Expression festgelegt wurde. Um die Wirkung der Nucleoporation auf DC Reifung zu bewerten, wurde der Ausdruck der Zelle Oberfl&auml;che Marker CD86 und MHCII in den GFP-positiven Zellen durch Durchflusszytometrie analysiert. Wir optimale Assay-Bedingungen mit einer Zelle Entwicklungsf&auml;higkeit erreichen eine Transfektionseffizienz von &uuml;ber 50 %, 70 % und CD86 und MHCII Ausdruck unver&auml;ndert. Wir untersuchten die Auswirkungen der small interfering RNA (SiRNA) - vermittelten Niederschlag von RIG - ich, eine virale Tastenerkennung Rezeptor, auf die Induktion von Interferon (IFN) Antwort in DCs mit Newcastle Disease Virus infiziert. RIG-ich Protein wurde durch Western blot in SiRNA behandelten Zellen. RIG-ich Niederschlag verursachte eine Erm&auml;&szlig;igung von 75 % in die Induktion von IFN&beta; mRNA im Vergleich mit der Negativkontrolle SiRNA. Dieses Protokoll sollte ein wertvolles Werkzeug f&uuml;r die &Uuml;berpr&uuml;fung der Immunantwort Wege in menschlichen DCs aktiviert sein.

Validierung der effiziente Hochdurchsatz-Plasmid und SiRNA Transfektion von menschlichen Monozyte abgeleiteten dendritischen Zellen ohne Zelle Reifung.

Transfezione delle cellule del sistema immunitario primarie &egrave; difficile da realizzare ad alta efficienza e senza maturazione e attivazione delle cellule. Le cellule dendritiche (DCs) rappresentano un collegamento fondamentale tra il sistema immunitario innato e adattivo. Delineare le vie di segnalazione coinvolte nell&#39;attivazione dei controller di dominio primario umano e reverse engineering cellulare infiammatorie percorsi hanno stato impegnativo compiti. Abbiamo ottimizzato e convalidato un protocollo di transfezione di alto-rendimento effettivo, ci permette di DNA transitoriamente espresso in na&iuml;ve controller primario di dominio, come pure indagare l&#39;effetto di silenziamento genico di interferenza del RNA. Utilizzando un sistema di alto-rendimento nucleofection, monocyte-derivati DCs sono stati nucleoporated con un plasmide esprimendo la green fluorescent protein (GFP) e transfezione efficienza &egrave; stata determinata mediante citometria a flusso, basato sull&#39;espressione di GFP. Per valutare l&#39;effetto di nucleoporation sulla maturazione della DC, l&#39;espressione di marcatori di superficie cellulare CD86 e MHCII in cellule GFP-positive &egrave; stato analizzato tramite flusso cytometry. Abbiamo stabilito le condizioni di dosaggio ottimale con una vitalit&agrave; cellulare raggiungendo il 70%, un&#39;efficienza di trasfezione di oltre il 50% e immutata espressione CD86 e MHCII. Abbiamo esaminato l&#39;impatto di piccolo RNA interferente (siRNA) - mediata atterramento di RIG - I, un recettore chiave riconoscimento virale, sull&#39;induzione della risposta di interferone (IFN) in DCs infettati con virus della malattia di Newcastle. RIG-I della proteina era inosservabile da Western blot in cellule trattate con siRNA. RIG-atterramento mi ha causato una riduzione del 75% nell&#39;induzione di mRNA IFN&beta; confrontato con il controllo negativo siRNA. Questo protocollo dovrebbe essere un prezioso strumento per sondare il risposta immunitaria percorsi attivati nel controller di dominio umano.

Convalida di efficiente transfezione high-throughput del plasmide e siRNA di umane monocyte-derived cellule dendritiche senza maturazione delle cellule.

&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x3067;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6210;&#x719F;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;DC&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x3068;&#x9069;&#x5FDC;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x9593;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x8F2A;&#x90ED;&#x3092;&#x63CF;&#x304F;&#x3068;&#x3001;&#x30EA;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CB;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30B9;&#x30AF;&#x306B;&#x6311;&#x6226;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306B;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;&#x4E3B;&#x8981;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;DNA&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x691C;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5358;&#x7403;&#x7531;&#x6765;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;GFP&#xFF09;&#x3067;nucleoporated&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x3001;GFP&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; DC&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x306B;nucleoporation&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;GFP&#x967D;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;CD86&#x304A;&#x3088;&#x3073;MHCII&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;70&#xFF05;&#x3001;50&#xFF05;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x52B9;&#x7387;&#x3068;&#x3001;&#x5909;&#x308F;&#x3089;&#x306A;&#x3044;CD86&#x304A;&#x3088;&#x3073;MHCII&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30AB;&#x30C3;&#x30B9;&#x30EB;&#x75C5;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#xFF08;IFN&#xFF09;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#xFF08;siRNA&#xFF09;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;RIG-I&#x3001;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8A8D;&#x8B58;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; RIG-I&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;siRNA&#x51E6;&#x7406;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A6;&#x30A8;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; RIG-I&#x3092;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;siRNA&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;IFN&#x3B2;&#x306E;mRNA&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3067;75&#xFF05;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;DC&#x3067;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x63A2;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x304C;&#x306A;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#x30D2;&#x30C8;&#x5358;&#x7403;&#x7531;&#x6765;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x3068;siRNA&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x691C;&#x8A3C;

&#xAE30;&#xBCF8; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; transfection &#xACE0;&#xD6A8;&#xC728; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC131;&#xC219; &#xC5C6;&#xC774; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB835;&#xB2E4;. &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DCs) &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBC0F; &#xC801;&#xC751;&#xD615; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAC04;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xB9C1;&#xD06C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; Dc&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xBB18;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xB9AC;&#xBC84;&#xC2A4; &#xC5D4;&#xC9C0;&#xB2C8;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5FC;&#xC99D; &#xACBD;&#xB85C; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xB3C4;&#xC804; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xBC0F; &#xAE30;&#xBCF8; Dc &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C; transiently &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; DNA&#xB97C; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; transfection &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; RNA &#xAC04;&#xC12D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCE68;&#xBB35;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870;&#xC0AC;. &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; nucleofection &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, monocyte &#xD30C;&#xC0DD; Dc nucleoporated &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP)&#xACFC; transfection &#xD6A8;&#xC728; cytometry, GFP &#xC2DD;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. DC &#xC131;&#xC219;&#xC5D0; nucleoporation&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xB9C8;&#xCEE4; CD86 &#xBC0F; MHCII GFP-&#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DD; cytometry &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825; 70%, 50% &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; transfection &#xD6A8;&#xC728;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xB2EC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xC124;&#xB9BD;&#xACFC; cd86&#xACFC; MHCII &#xC2DD;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA (siRNA)-&#xC911;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xC7A5;&#xBE44;-&#xC601;&#xD5A5; &#xAC80;&#xC0AC; &#xB098;, &#xB274;&#xCE90;&#xC2AC; &#xBCD1; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; Dc&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; (IFN) &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xD0A4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC778;&#xC2DD; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;. &#xC7A5;&#xBE44;-&#xB098; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xC11C; &#xBD80;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC9C0; siRNA &#xCDE8;&#xAE09; &#xC140;&#xC5D0; &#xC624; &#xC810;. &#xC7A5;&#xBE44;-&#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xB09C; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC81C;&#xC5B4; Sirna&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; IFN&beta; Mrna&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; 75% &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC740; &#xC778;&#xAC04; Dc&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xACBD;&#xB85C; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xC140; &#xC131;&#xC219; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; monocyte &#xC720;&#xB798; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC640; siRNA transfection&#xC758; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La transfecci&#xF3;n de c&#xE9;lulas primarias inmunes es dif&#xED;cil de lograr en una alta eficiencia y sin activaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas y la maduraci&#xF3;n. Las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas (DC) representan un v&#xED;nculo clave entre los sistemas inmune innata y adaptativa. Delimitaci&#xF3;n de las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n implicadas en la activaci&#xF3;n de los pa&#xED;ses en desarrollo humanos b&#xE1;sicos y de ingenier&#xED;a inversa inflamatorios v&#xED;as celulares han sido dif&#xED;ciles tareas. Hemos optimizado y validado un sistema eficaz de alto rendimiento de protocolo de transfecci&#xF3;n, lo que nos permite expresar de forma transitoria de ADN en los pa&#xED;ses en desarrollo no tratados previamente primaria, as&#xED; como investigar el efecto de silenciamiento g&#xE9;nico por ARN de interferencia. El uso de un sistema de nucleofection de alto rendimiento, derivados de los monocitos pa&#xED;ses en desarrollo fueron nucleoporated con un pl&#xE1;smido que expresa la eficiencia de la prote&#xED;na verde fluorescente (GFP), y la transfecci&#xF3;n se determin&#xF3; por citometr&#xED;a de flujo, sobre la base de la expresi&#xF3;n de GFP. Para evaluar el efecto de la maduraci&#xF3;n nucleoporation DC, la expresi&#xF3;n de marcadores de superficie celular CD86 y MHCII en las buenas pr&#xE1;cticas agrarias de c&#xE9;lulas positivas se analizaron por citometr&#xED;a de flujo. Hemos establecido las condiciones &#xF3;ptimas de ensayo con una viabilidad celular llegando al 70%, una eficiencia de transfecci&#xF3;n de m&#xE1;s del 50%, y sin cambiar de expresi&#xF3;n CD86 y MHCII. Se examin&#xF3; el impacto de peque&#xF1;os ARN de interferencia (siRNA) mediada por ca&#xED;da de RIG-I, un receptor clave de reconocimiento viral, en la inducci&#xF3;n del interfer&#xF3;n (IFN) de respuesta en los pa&#xED;ses en desarrollo infectados por el virus de la enfermedad de Newcastle. RIG-I prote&#xED;nas era indetectable por Western blot en pacientes tratados con siRNA-c&#xE9;lulas. RIG-I precipitaci&#xF3;n caus&#xF3; una reducci&#xF3;n del 75% en la inducci&#xF3;n de ARNm de IFN en comparaci&#xF3;n con el siRNA control negativo. Este protocolo debe ser una valiosa herramienta para sondear las v&#xED;as de la respuesta inmune activadas en pa&#xED;ses en desarrollo humano.

Validaci&#xF3;n de alto rendimiento eficiente de la transfecci&#xF3;n de pl&#xE1;smidos y SiRNA de las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas humanas derivadas de monocitos-Sin la maduraci&#xF3;n de c&#xE9;lulas

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Dendritic cells are antigen-presenting cells that play an essential role in linking the innate and adaptive immune systems. Much research has focused on the signaling pathways triggered upon infection of dendritic cells by various pathogens. The high level of activity in the field makes it desirable to have a pathway-based resource to access the information in the literature. Current pathway diagrams lack either comprehensiveness, or an open-access editorial interface. Hence, there is a need for a dependable, expertly curated knowledgebase that integrates this information into a map of signaling networks.

Signaling network of dendritic cells in response to pathogens: a community-input supported knowledgebase.

Les cellules dendritiques sont des cellules pr&#xE9;sentatrices d&#x26;#39;antig&#xE8;ne qui jouent un r&#xF4;le essentiel en reliant les syst&#xE8;mes immunitaire inn&#xE9;e et adaptative. Beaucoup de recherches ont port&#xE9; sur les voies de signalisation d&#xE9;clench&#xE9;es lors de l&#x26;#39;infection des cellules dendritiques par divers agents pathog&#xE8;nes. Le niveau &#xE9;lev&#xE9; d&#x26;#39;activit&#xE9; dans le domaine, il est souhaitable de disposer d&#x26;#39;une ressource bas&#xE9;e sur la voie pour acc&#xE9;der &#xE0; l&#x26;#39;information dans la litt&#xE9;rature. Diagrammes de cha&#xEE;nes actuelles manquent soit l&#x26;#39;int&#xE9;gralit&#xE9; ou une interface de r&#xE9;daction en libre acc&#xE8;s. Par cons&#xE9;quent, il ya une n&#xE9;cessit&#xE9; d&#x26;#39;une fiable, experte organis&#xE9;e de connaissances qui int&#xE8;gre ces informations dans une carte des r&#xE9;seaux de signalisation.

R&#xE9;seau de signalisation des cellules dendritiques en r&#xE9;ponse &#xE0; des agents pathog&#xE8;nes: une communaut&#xE9; d&#x26;#39;entr&#xE9;e pris en charge la base de connaissances

Dendritische Zellen sind Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen, die eine wichtige Rolle bei der Verkn&uuml;pfung des angeborenen und erworbenen Immunsystems. Viel Forschung konzentriert sich auf die Signalwege, die nach Infektion von dendritischen Zellen durch verschiedene Erreger ausgel&ouml;st. Das hohe Niveau der T&auml;tigkeit im Bereich macht es w&uuml;nschenswert, eine Ressource Weg-basierten Zugriff auf die Informationen in der Literatur zu haben. Aktuelle Weg-Diagramme fehlen Vollst&auml;ndigkeit oder eine redaktionelle Open Access-Schnittstelle. Folglich, gibt es eine Notwendigkeit f&uuml;r eine zuverl&auml;ssige, professionell kuratierte Knowledgebase, die diese Informationen in der Karte der Signalisierung Netzwerke integriert.

Signalisierung Netzwerk von dendritischen Zellen als Reaktion auf Krankheitserreger: Beitrag-Gemeinschaft unterst&uuml;tzt Knowledgebase.

Le cellule dendritiche sono presentanti l&#39;antigene delle cellule che svolgono un ruolo essenziale nel collegamento il sistema immunitario innato e adattivo. Gran parte della ricerca si &egrave; concentrata sulle vie di segnalazione attivate su infezione delle cellule dendritiche da vari agenti patogeni. L&#39;alto livello di attivit&agrave; nel campo rende auspicabile avere una risorsa basata sul percorso per accedere alle informazioni in letteratura. Diagrammi percorso attuale mancano di completezza o un&#39;interfaccia editoriale open-access. Quindi, c&#39;&egrave; bisogno di un affidabile, sapientemente curata knowledgebase che integra queste informazioni in una mappa di reti di segnalazione.

Segnalazione rete di cellule dendritiche in risposta agli agenti patogeni: un comunit&agrave;-input supportato knowledgebase.

&#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBC0F; &#xC801;&#xC751;&#xD615; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;. &#xB9CE;&#xC740; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD544;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xBB38;&#xD5CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xD1B5;&#xB85C;-&#xAE30;&#xBC18; &#xC790;&#xC6D0;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xBC14;&#xB78C;&#xC9C1;&#xD55C; &#xB9CC;&#xB4E0;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xACBD;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC774;&#xC5B4;&#xADF8;&#xB7A8; &#xD3EC;&#xAD04;, &#xB610;&#xB294; &#xAC1C;&#xBC29;&#xD615; &#xD3B8;&#xC9D1; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBD80;&#xC871;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC774; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294;, &#xC804;&#xBB38;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD050;&#xB808;&#xC774;&#xD130; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;.

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Las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas son c&#xE9;lulas presentadoras de ant&#xED;geno, que juegan un papel fundamental en la vinculaci&#xF3;n de los sistemas inmune innata y adaptativa. Mucha investigaci&#xF3;n se ha centrado en las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n activadas en la infecci&#xF3;n de c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas por varios pat&#xF3;genos. El alto nivel de actividad en el campo hace que sea deseable tener un recurso basado v&#xED;a para acceder a la informaci&#xF3;n en la literatura. Diagramas actuales de la v&#xED;a o bien carecen de la amplitud, o una interfaz de edici&#xF3;n de acceso abierto. Por lo tanto, existe una necesidad de un fiable, expertamente curada base de conocimiento que integra esta informaci&#xF3;n en un mapa de las redes de se&#xF1;alizaci&#xF3;n.

La red de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas en la respuesta a pat&#xF3;genos: un sistema comunitario de entrada el apoyo de Conocimientos

Sonali Patil

Center for Translational Systems Biology and Department of Neurology

Mount Sinai School of Medicine

Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation