Single Cell Fate Mapping in Zebrafish

The ability to differentially label single cells has important implications in developmental biology. For instance, determining how hematopoietic, ...

Cincinnati Children's Hospital Medical Center

&#x9AD8;&#x5F37;&#x5EA6;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E0;&#x30C8;&#x79D2;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x819C;&#x624B;&#x8853;&#x304A;&#x3088;&#x3073; nanosurgical &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x624B;&#x8853;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8D85;&#x77ED; &#xFF08;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E0;&#x30C8;&#x79D2;&#xFF09; &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3078;&#x306E;&#x9069;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B5;&#x30D6; 10 &#x30D5;&#x30A7;&#x30E0;&#x30C8;&#x79D2;&#x30BB;&#x30EB;&#x4E0A;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x30B5;&#x30D6;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30F3;&#x624B;&#x8853;&#x30AB;&#x30C3;&#x30C8;&#x751F;&#x4F53;&#x819C;&#x4E0A;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x96C6;&#x675F;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6; &#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x76F8;&#x5BFE;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x901A;&#x904E;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x96A3;&#x63A5;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x7126;&#x70B9;&#x63A5;&#x7740;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA; nanosurgical &#x30A2;&#x30D6;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5404;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x304C;&#x3001;&#x624B;&#x8853;&#x3092;&#x65BD;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

Nanosurgery &#x8D85;&#x77ED; &#xFF08;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E0;&#x30C8;&#x79D2;&#xFF09; &#x30D1;&#x30EB;&#x30B9; &#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;: &#x819C;&#x306E;&#x624B;&#x8853;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7528;&#x3002;

&#x636E;&#x6089;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x98DE;&#x79D2;&#x6FC0;&#x5149;&#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x819C;&#x624B;&#x672F;&#x548C; nanosurgical &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x79BB;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5BF9;&#x751F;&#x6D3B;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6267;&#x884C;&#x624B;&#x672F;&#x4F7F;&#x7528;&#x8D85;&#x77ED; (&#x98DE;&#x79D2;) &#x7684;&#x6FC0;&#x5149;&#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x9002;&#x7528;&#x6027;&#x3002;&#x5F53;&#x5B50; 10 &#x98DE;&#x79D2;&#x8109;&#x51B2;&#x90FD;&#x96C6;&#x4E2D;&#x5230;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E0A;&#x65F6;&#xFF0C;&#x5C31;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x4F5C;&#x4E86;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x4E9A;&#x5FAE;&#x7C73;&#x624B;&#x672F;&#x5207;&#x53E3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x904D;&#x5386;&#x805A;&#x7126;&#x7684;&#x6FC0;&#x5149;&#x70B9;&#x76F8;&#x5BF9;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x62A5;&#x544A;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684; nanosurgical &#x6D88;&#x878D;&#x7684;&#x7C98;&#x7740;&#x6BD7;&#x90BB;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E00;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5728;&#x5F62;&#x6001;&#x4E0A;&#x65E0;&#x635F;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x624B;&#x672F;&#x3002;

&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4F7F;&#x7528;&#x8109;&#x51B2;&#x6FC0;&#x5149;&#x8D85;&#x77ED; (&#x98DE;&#x79D2;) nanosurgery&#xFF1A; &#x819C;&#x624B;&#x672F;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x79BB;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;

Membrane surgery and nanosurgical cell isolation using high-intensity femtosecond laser pulses is reported. We demonstrate the applicability of using ultrashort (femtosecond) laser pulses for performing surgery on live mammalian cells. When sub-10 femtosecond pulses were focused onto the cell, precise sub-micron surgical cuts were made on the biological membrane. Traversing the cells relative to the focused laser spot, we report on localized nanosurgical ablation of focal adhesion adjoining epithelial cells. In each study, the surgery was conducted without morphologically compromising the cells.

Cell nanosurgery using ultrashort (femtosecond) laser pulses: applications to membrane surgery and cell isolation.

Isolement de cellules nanosurgical et de chirurgie de membrane &agrave; l&#39;aide d&#39;impulsions laser femtosecondes de haute intensit&eacute; est signal&eacute;e. Nous d&eacute;montrons l&#39;applicabilit&eacute; de l&#39;utilisation d&#39;impulsions laser ultracourtes (femtoseconde) permettant d&#39;effectuer une chirurgie sur cellules de mammif&egrave;res vivants. Lorsque les impulsions femtoseconde sub-10 ont &eacute;t&eacute; concentr&eacute;es sur la cellule, coupes chirurgicales submicroniques pr&eacute;cis ont &eacute;t&eacute; faites sur la membrane biologique. Traversant les cellules par rapport &agrave; la tache laser focalis&eacute;, nous pr&eacute;sentons l&#39;ablation nanosurgical localis&eacute;e d&#39;adh&eacute;rence focale jouxtant les cellules &eacute;pith&eacute;liales. Dans chaque &eacute;tude, la chirurgie a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;e sans compromettre la morphologie des cellules.

Cellule nanochirurgie utilisant des impulsions laser ultracourtes (femtoseconde): applications d&#39;isolement de chirurgie et de la cellule membrane.

Zelle Nanochirurgie mit ultrakurzen (Femtosekunden) Laserpulse: Anwendungen Membran Chirurgie und Zell-Isolierung.

Membrana chirurgia e nanosurgical isolamento delle cellule mediante impulsi laser di femtosecondo ad alta intensit&agrave; &egrave; segnalato. Noi dimostrare l&#39;applicabilit&agrave; dell&#39;utilizzo di impulsi laser ultrashort (femtosecondo) per l&#39;esecuzione di chirurgia su cellule di mammifero dal vivo. Quando sub-10 femtosecond impulsi si sono concentrati sulla cella, sono stati fatti tagli chirurgici sub-micron preciso sulla membrana biologica. Attraversare le cellule rispetto il punto laser focalizzato, segnaliamo su ablazione nanosurgical localizzata di adesione focale adiacente le cellule epiteliali. In ogni studio, l&#39;intervento chirurgico &egrave; stato condotto senza compromettere morfologicamente le cellule.

Cella nanosurgery utilizzando impulsi laser ultrashort (femtosecondo): applicazioni di isolamento delle cellule e chirurgia membrana.

&#xB9C9; &#xC218;&#xC220; &#xBC0F; nanosurgical &#xC140; &#xC808;&#xC5F0; &#xAC15;&#xB3C4; &#xB192;&#xC740; &#xD3A8; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD384;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC218;&#xC220;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; ultrashort (&#xD3A8;) &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD384;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC801;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD558;&#xC704; 10 &#xD3A8; &#xD384;&#xC2A4; &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;, &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB860; &#xC218;&#xC220; &#xC0C1;&#xCC98; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCD08;&#xC810; &#xC811;&#xCC29; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; nanosurgical &#xC808;&#xC81C;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xCD08;&#xC810;&#xB41C; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC790;&#xB9AC;&#xB97C; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xC140;&#xC744; &#xD0D0;&#xC0C9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC01; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xC220; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xC140;&#xC744; &#xC190;&#xC0C1; &#xC2DC; &#xD0A4; &#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xB410;&#xB2E4;.

Nanosurgery ultrashort (&#xD3A8;) &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD384;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC140;: &#xB9C9; &#xC218;&#xC220; &#xBC0F; &#xC140; &#xC808;&#xC5F0; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;.

Aislamiento de membrana cirug&iacute;a y nanosurgical celular usando pulsos de l&aacute;ser femtosegundo de alta intensidad se divulga. Demostramos la aplicabilidad de la utilizaci&oacute;n de pulsos de l&aacute;ser ultracortos (femtosegundo) para realizar la cirug&iacute;a en c&eacute;lulas de mam&iacute;fero vivos. Cuando sub-10 femtosecond impulsos se centraron en la celda, incisiones quir&uacute;rgicas sub-micrones precisa se hicieron en la membrana biol&oacute;gica. Atravesar las c&eacute;lulas en relaci&oacute;n con el punto l&aacute;ser enfocado, Divulgamos sobre nanosurgical localizada ablaci&oacute;n de adhesi&oacute;n focal contigua a las c&eacute;lulas epiteliales. En cada estudio, la cirug&iacute;a se llev&oacute; a cabo sin comprometer morfol&oacute;gicamente las c&eacute;lulas.

C&eacute;lula nanocirug&iacute;a usando pulsos de l&aacute;ser ultracortos (femtosegundo): aplicaciones al aislamiento de cirug&iacute;a y de la c&eacute;lula de membrana.

&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x975E;&#x4FB5;&#x88AD;&#x6027;&#x64CD;&#x4F5C;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x7597;&#x6CD5;&#x3002;&#x6B64;&#x5904;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x4E3A;&#x53EF;&#x9006; permeabilizing &#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; biopreservation &#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x98DE;&#x79D2;&#x6FC0;&#x5149;&#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x6027;&#x3002;&#x5F53;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x6302;&#x8D77;&#x65F6;&#x9AD8;&#x6E17;&#x9632;&#x6E17;&#x6297;&#x51BB;&#x8517;&#x7CD6;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x98DE;&#x79D2;&#x6FC0;&#x5149;&#x8109;&#x51B2;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x6682;&#x6001; permeabilize &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6EB6;&#x8D28;&#x5438;&#x6536;&#x3002;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC6;&#x80DE;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E; 0.2&#x3001; 0.3&#x3001; 0.4&#x3001; 0.5 M &#x8517;&#x7CD6;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x7684;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x589E;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x89C6;&#x9891;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x8861;&#x91CF;&#x548C; post-permeabilization &#x751F;&#x5B58;&#x7531;&#x4E00;&#x53CC;&#x8367;&#x5149;&#x819C;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x5408;&#x9002;&#x7684;&#x6FC0;&#x5149;&#x53C2;&#x6570;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x6700;&#x9AD8;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x6D3B;&#x4E3A; 0.2 M &#x8517;&#x7CD6;&#x6EB6;&#x6DB2; &#xFF08;&gt; 90%)&#xFF0C;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x6D3B;&#x5B9E;&#x73B0;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x9010;&#x6E10;&#x4E0B;&#x964D;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6269;&#x6563;&#x65B9;&#x7A0B;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x6EB6;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5728;&#x819C;&#x7684;&#x5185;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x6E17;&#x900F;&#x538B;&#x8FD0;&#x8F93; (x = 10 nm&#xFF09; &#x548C;&#x6269;&#x6563;&#x957F;&#x5EA6;&#x4E3A; x = 10 microm &#x636E;&#x4F30;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x548C;&#x9AD8;&#x88C5;&#x8F7D;&#x6548;&#x7387; (&gt; 98 %x = 10 nm &#x548C; &gt; x 70%= 10 microm&#xFF09; &#x5BF9;&#x60AC;&#x6D6E;&#x5728; 0.2 M &#x8517;&#x7CD6;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8BA1;&#x7B97;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x5BF9; permeabilizing &#x7EC6;&#x80DE;&#x51B7;&#x51BB;&#x4FDD;&#x62A4;&#x5242; biopreservation &#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E0B;&#x4F7F;&#x7528;&#x98DE;&#x79D2;&#x6FC0;&#x5149;&#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x9996;&#x6B21;&#x62A5;&#x544A;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x98DE;&#x79D2;&#x6FC0;&#x5149;&#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x53EF;&#x9006;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x589E;&#x9AD8;&#xFF1A; biopreservation &#x4E2D;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;

Non-invasive manipulation of live cells is important for cell-based therapeutics. Herein we report on the uniqueness of using high-intensity femtosecond laser pulses for reversibly permeabilizing mammalian cells for biopreservation applications. When mammalian cells were suspended in a impermeable hyperosmotic cryoprotectant sucrose solution, femtosecond laser pulses were used to transiently permeabilize cells for cytoplasmic solute uptake. The kinetics of cells exposed to 0.2, 0.3, 0.4, and 0.5 M sucrose, following permeabilization, were measured using video microscopy, and post-permeabilization survival was determined by a dual fluorescence membrane integrity assay. Using appropriate laser parameters, we observed the highest cell survival for 0.2 M sucrose solution (>90%), with a progressive decline in cell survival towards higher concentrations. Using diffusion equations describing the transport of solutes, the intracellular osmolarity at the inner surface of the membrane (x = 10 nm) and to a diffusive length of x = 10 microm was estimated, and a high loading efficiency (>98% for x = 10 nm and >70% for x = 10 microm) was calculated for cells suspended in 0.2 M sucrose. This is the first report of using femtosecond laser pulses for permeabilizing cells in the presence of cryoprotectants for biopreservation applications.

Reversible permeabilization using high-intensity femtosecond laser pulses: applications to biopreservation.

Manipulation non invasifs de cellules vivantes est importante pour les th&eacute;rapies cellulaires. On rapporte la singularit&eacute; d&#39;utilisant des impulsions lasers femtosecondes de haute intensit&eacute; pour perm&eacute;abiliser r&eacute;versible des cellules de mammif&egrave;res pour applications biopr&eacute;servation. Lorsque les cellules de mammif&egrave;res ont &eacute;t&eacute; suspendues dans une solution de saccharose cryoprotecteurs hyperosmotique imperm&eacute;able, impulsions laser femtoseconde servaient &agrave; permeabilize transitoirement pour l&#39;absorption du solut&eacute; cytoplasmique des cellules. La cin&eacute;tique des cellules expos&eacute;es &agrave; 0,2, 0,3, 0,4 et 0,5 M de sucrose, perm&eacute;abilisation suivante, ont &eacute;t&eacute; mesur&eacute;s &agrave; l&#39;aide de la microscopie vid&eacute;o et survie de post-permeabilization a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;e par un test d&#39;int&eacute;grit&eacute; membranaire double fluorescence. En utilisant les param&egrave;tres appropri&eacute;s de laser, nous avons observ&eacute; la survie cellulaire plus &eacute;lev&eacute;e pour la solution de saccharose de 0,2 M (&amp;gt; 90 %), avec une diminution progressive de la survie cellulaire &agrave; des concentrations plus &eacute;lev&eacute;es. &Agrave; l&#39;aide des &eacute;quations de diffusion d&eacute;crivant le transport des solut&eacute;s, l&#39;osmolarit&eacute; intracellulaire &agrave; la surface interne de la membrane (x = 10 nm) et &agrave; une longueur de diffusion de x = 10 microm estimait, et une haute efficacit&eacute; de chargement (&gt; 98 % pour x = 10 nm et &gt; 70 % pour x = 10 microm) a &eacute;t&eacute; calcul&eacute; pour les cellules suspendues dans 0,2 M de sucrose. Il s&#39;agit du premier rapport de l&#39;utilisation des impulsions laser femtoseconde pour perm&eacute;abilisant cellules en pr&eacute;sence de cryoprotecteurs pour applications biopr&eacute;servation.

Perm&eacute;abilisation r&eacute;versible &agrave; l&#39;aide d&#39;impulsions laser femtosecondes de haute intensit&eacute; : applications &agrave; la biopr&eacute;servation.

Nicht-invasive Manipulation von lebenden Zellen ist wichtig f&uuml;r zellbasierte Therapien. Hier berichten wir &uuml;ber die Einzigartigkeit des mit hoher Intensit&auml;t Femtosekunden-Laserpulsen f&uuml;r umkehrbar Permeabilisierung S&auml;ugetier-Zellen f&uuml;r Biopreservation Anwendungen. Wenn S&auml;ugetier-Zellen in einer undurchl&auml;ssigen Hyperosmotic cryoprotektive Saccharose-L&ouml;sung ausgesetzt wurden, dienten Femtosekunden-Laserpulsen vor&uuml;bergehend permeabilize Zellen f&uuml;r zytoplasmatischen gel&ouml;sten Aufnahme. Die Kinetik der Zellen, 0.2, 0.3 und 0.4 0.5 M Saccharose, folgende Permeabilization ausgesetzt wurden mit Videomikroskopie vermessen und Post-permeabilization &uuml;berleben wurde durch ein dual Fluoreszenz-Membran-Integrit&auml;t-Assay bestimmt. Mit entsprechenden Laserparametern, beobachteten wir das h&ouml;chste Zelle &Uuml;berleben von 0,2 M Saccharose-L&ouml;sung (&gt; 90 %), mit einer progressiven Abnahme Zelle &Uuml;berleben gegen&uuml;ber h&ouml;heren Konzentrationen. Mit DIFFUSIONSGLEICHUNGEN, beschreibt den Transport von Analyten, die intrazellul&auml;re Osmolarit&auml;t an der inneren Oberfl&auml;che der Membran (X = 10 nm) und zu einer diffusiven L&auml;nge x = 10 Microm wurde gesch&auml;tzt, und eine hohe Effizienz (&gt; 98 % f&uuml;r X = 10 nm und &gt; 70 % f&uuml;r X = 10 Microm) wurde berechnet f&uuml;r Zellen in 0,2 M Saccharose ausgesetzt. Dies ist der erste Bericht mit Femtosekunden-Laserpulsen f&uuml;r permeabilizing Zellen in Anwesenheit von Kryoprotektanten f&uuml;r Biopreservation Anwendungen.

Reversible Permeabilization mit hoher Intensit&auml;t Femtosekunden-Laserpulsen: Biopreservation-Anwendungen.

Manipolazione non invasiva di cellule vive &egrave; importante per terapie cell-based. Qui riportiamo sull&#39;unicit&agrave; del utilizzando impulsi laser di femtosecondo ad alta intensit&agrave; per permeabilizing reversibilmente le cellule di mammiferi per applicazioni di biopreservation. Quando le cellule di mammiferi sono stati sospesi in una soluzione di saccarosio cryoprotectant iperosmotico impermeabile, impulsi laser di femtosecondo sono stati utilizzati per transitoriamente permeabilizzare le cellule per assorbimento soluto citoplasmatica. La cinetica delle cellule esposte a 0,2, 0,3 e 0,4 0,5 M saccarosio, seguenti permeabilization, sono stati misurati utilizzando video microscopia e sopravvivenza post-permeabilization &egrave; stato determinato da un test di integrit&agrave; di membrana doppia fluorescenza. Utilizzando parametri laser appropriato, abbiamo osservato la sopravvivenza delle cellule pi&ugrave; alta per la soluzione di saccarosio 0,2 M (&amp;gt; 90%), con un progressivo declino nella sopravvivenza delle cellule verso concentrazioni pi&ugrave; elevate. Utilizzando le equazioni di diffusione che descrive il trasporto di soluti, l&#39;osmolarit&agrave; intracellulare presso la superficie interna della membrana (x = 10 nm) e ad una lunghezza diffusiva di x = 10 microm &egrave; stato stimato, e il caricamento di un&#39;alta efficienza (&amp;gt; 98% per x = 10 nm e &amp;gt; 70% per x = 10 microm) &egrave; stata calcolata per le cellule sospese in 0,2 M saccarosio. Questo &egrave; il primo rapporto dell&#39;utilizzo di impulsi laser di femtosecondo per permeabilizing cellule in presenza di crioprotettori per applicazioni di biopreservation.

Permeabilization reversibili utilizzando impulsi di alta intensit&agrave; femtosecond laser: applicazioni di biopreservation.

&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x975E;&#x4FB5;&#x8972;&#x7684;&#x306A;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x8A18;&#x8F09;&#x306E; biopreservation &#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x5143;&#x306B;&#x623B;&#x305B;&#x308B;&#x72B6;&#x614B;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x7528;&#x9AD8;&#x5F37;&#x5EA6;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E0;&#x30C8;&#x79D2;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x4E00;&#x610F;&#x6027;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306F;&#x4E0D;&#x6D78;&#x900F;&#x6027;&#x9AD8;&#x6D78;&#x900F;&#x5727; cryoprotectant &#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x3067;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E0;&#x30C8;&#x79D2;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x6EB6;&#x8CEA;&#x5438;&#x53CE;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092; permeabilize &#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;0.3&#x3001;0.4, 0.5 M &#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x3001;&#x6B21;&#x900F;&#x904E;&#x3001;0.2 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x30D3;&#x30C7;&#x30AA;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x3068; post-permeabilization &#x751F;&#x5B58;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x86CD;&#x5149;&#x819C;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58; 0.2 M &#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x89B3;&#x5BDF; (&#x76EE; 90%)&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x7684;&#x306A;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3068;&#x3002;&#x6EB6;&#x8CEA;&#x3001;&#x5185;&#x5074;&#x8868;&#x9762;&#x819C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3059;&#x308B;&#x62E1;&#x6563;&#x65B9;&#x7A0B;&#x5F0F;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; (x = 10 nm) &#x3068; x &#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x9577;&#x3092; = 10 microm &#x3068;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F; (&#x76EE; 98 %x &#x7528; = 10 nm &#x3068;&#x76EE; x 70% = 10 microm) 0.2 M &#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x306E;&#x4E2D;&#x65AD;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x8A08;&#x7B97;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F; permeabilizing &#x7D30;&#x80DE;&#x51CD;&#x7D50;&#x4FDD;&#x8B77;&#x5264;&#x306E; biopreservation &#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E0;&#x30C8;&#x79D2;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x9AD8;&#x5F37;&#x5EA6;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E0;&#x30C8;&#x79D2;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC; &#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x53EF;&#x9006;&#x900F;&#x904E;: biopreservation &#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7528;&#x3002;

&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140;&#xC758; &#xBE44; &#xCE68; &#xC2B5; &#xC801; &#xC870;&#xC791; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC5ED; permeabilizing biopreservation &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xB3C4; &#xB192;&#xC740; &#xD3A8; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD384;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACE0;&#xC720;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;. &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2A4;&#xBA70;&#xB4E4; &#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; hyperosmotic cryoprotectant &#xC790;&#xB2F9; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0; &#xC911;&#xB2E8; &#xD588;&#xB2E4;, &#xD3A8; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD384;&#xC2A4; transiently &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;&#xC5D0; &#xC6A9; &#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; permeabilize &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 M &#xC790;&#xB2F9;, &#xB2E4;&#xC74C; permeabilization&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xBE44;&#xB514;&#xC624; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE21;&#xC815; &#xBC0F; post-permeabilization &#xC0DD;&#xC874; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xD615;&#xAD11; &#xB9C9; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 0.2 M &#xC790;&#xB2F9; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xAD00;&#xCC30; (&amp;gt; 90%), &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xC9C4;&#xBCF4;&#xC801;&#xC778; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;. Solutes, &#xB9C9;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; osmolarity &#xC804;&#xC1A1; &#xAE30;&#xC220; &#xD655;&#xC0B0; &#xBC29;&#xC815;&#xC2DD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; (x = 10 nm)&#xC640; x&#xC758; &#xD37C;&#xC9C0;&#xB294; &#xAE38;&#xC774; = 10 microm &#xCD94;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xB192;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728;&#xC744; &#xB85C;&#xB4DC; &#xD558; &#xACE0; (&amp;gt; x 98% = 10 nm&#xC640; &amp;gt; x 70% = 10 microm) &#xC140; 0.2 M &#xC790;&#xB2F9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xC2DC; &#xC911;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACC4;&#xC0B0;. Permeabilizing &#xC140; cryoprotectants biopreservation &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3A8; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD384;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB192;&#xC740; &#xAC15;&#xB3C4;&#xC758; &#xD3A8; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD384;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB418;&#xB3CC;&#xB9B4; &#xC218; permeabilization: biopreservation &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;.

Manipulaci&oacute;n no invasiva de c&eacute;lulas vivas es importante para terapias basadas en c&eacute;lulas. Adjunto divulgamos sobre la singularidad de la utilizaci&oacute;n de pulsos de l&aacute;ser de femtosegundo de alta intensidad para reversible permeabilizing c&eacute;lulas mam&iacute;feras para aplicaciones de bioconservaci&oacute;n. Cuando las c&eacute;lulas mam&iacute;feras fueron suspendidas en una soluci&oacute;n de sacarosa crioprotector hiperosmolares impermeable, pulsos de l&aacute;ser de femtosegundo se sol&iacute;an transitoriamente permeabilizar c&eacute;lulas para la absorci&oacute;n de soluto citopl&aacute;smica. La cin&eacute;tica de las c&eacute;lulas expuestas a 0.2, 0.3, 0.4 y 0.5 M sacarosa, permeabilizaci&oacute;n siguiente, fueron medidos usando microscopia video y supervivencia post-permeabilization fue determinada por un an&aacute;lisis de integridad de membrana doble fluorescencia. Usando el laser adecuado par&aacute;metros, observamos la mayor supervivencia de la c&eacute;lula para la soluci&oacute;n de sacarosa de 0,2 M (&gt; 90%), con una progresiva disminuci&oacute;n en la supervivencia de la c&eacute;lula a concentraciones m&aacute;s altas. Utilizando ecuaciones de difusi&oacute;n que describen el transporte de solutos, la osmolaridad intracelular en la superficie interna de la membrana (x = 10 nm) y a una longitud difusiva de x = 10 microm estim&oacute;, y una alta eficiencia de carga (&gt; 98% para x = 10 nm y &gt; 70% para x = 10 microm) se calcul&oacute; para las c&eacute;lulas suspendidas en 0,2 M sacarosa. Este es el primer informe del uso de pulsos de l&aacute;ser de femtosegundo para permeabilizing las c&eacute;lulas en presencia de crioprotectores para aplicaciones de bioconservaci&oacute;n.

Permeabilizaci&oacute;n reversible usando pulsos de l&aacute;ser femtosegundo de alta intensidad: aplicaciones a bioconservaci&oacute;n.

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&#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x5916;&#x6E90;&#x7269;&#x8D28;&#x66FF;&#x4EE3;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

Non-invasive manipulation of multicellular systems is important for medical and biological research. The ability to introduce, remove, or modify molecules in the intracellular environment is pivotal to our understanding of cellular structure and function. Herein, we report on an alternative method for introducing foreign material into developing embryos using the application of femtosecond (fs) laser pulses. When intense fs laser pulses are focused to a sub-micron spot, transient pores are formed, providing a transport pathway for the delivery of exogenous material into embryonic cells. In this study, zebrafish embryos were used as a model system to demonstrate the non-invasiveness of this applied delivery tool. Utilizing optically induced transient pores chorionated and dechorionated zebrafish embryos were successfully loaded with a fluorescent reporter molecule (fluorescein isothiocyanate), Streptavidin-conjugated quantum dots or DNA (Simian-CMV-EGFP). Pore formation was independent of the targeted location, with both blastomere-yolk interface and blastomere pores competent for delivery. Long-term survival of laser manipulated embryos to pec-fin stage was 89% and 100% for dechorionated and chorionated embryos, respectively. To our knowledge, this is the first report of DNA delivery into zebrafish embryos utilizing fs laser pulses.

An alternative method for delivering exogenous material into developing zebrafish embryos.

Manipulation non invasive des syst&egrave;mes multicellulaires est importante pour la recherche m&eacute;dicale et biologique. La capacit&eacute; d&#39;introduire, supprimer ou modifier les mol&eacute;cules dans l&#39;intracellulaire environnement est essentielle &agrave; notre compr&eacute;hension de la structure cellulaire et la fonction. Ici, nous pr&eacute;sentons une m&eacute;thode alternative pour l&#39;introduction de corps &eacute;trangers dans le d&eacute;veloppement des embryons &agrave; l&#39;aide de l&#39;application des impulsions laser femtoseconde (fs). Quand des impulsions lasers fs intense sont concentrent sur un endroit de sub-micronique, pores transitoires sont forment, fournissant une voie de transport pour la livraison de mat&eacute;riel exog&egrave;ne sur les cellules embryonnaires. Dans cette &eacute;tude, des embryons de poisson-z&egrave;bre ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s comme syst&egrave;me mod&egrave;le pour d&eacute;montrer le caract&egrave;re non invasif de cet outil de livraison appliqu&eacute;s. Utilisant optiquement chorion&eacute;s les pores transitoires induits et les embryons de poisson-z&egrave;bre de d&eacute;chorion&eacute;s ont &eacute;t&eacute; charg&eacute;s avec succ&egrave;s avec une mol&eacute;cule fluorescente journaliste (isothiocyanate de fluoresc&eacute;ine), points quantiques conjugu&eacute; streptavidine ou ADN (Simian-CMV-EGFP). La formation de pores &eacute;tait ind&eacute;pendante de l&#39;endroit cibl&eacute;, avec les deux interface blastom&egrave;re-jaune d&#39;oeuf et blastom&egrave;re pores comp&eacute;tente pour la livraison. La survie &agrave; long terme des embryons de laser manipul&eacute; au stade de pec-aileron &eacute;tait de 89 % et 100 % pour les embryons de d&eacute;chorion&eacute;s et chorion&eacute;s, respectivement. &Agrave; notre connaissance, c&#39;est le premier rapport de livraison d&#39;ADN dans des embryons de poisson-z&egrave;bre utilisant des impulsions lasers fs.

Une m&eacute;thode alternative pour la livraison de mat&eacute;riel exog&egrave;ne dans le d&eacute;veloppement des embryons de poisson-z&egrave;bre.

Nicht-invasive Manipulation Vielzellige Systeme ist wichtig f&uuml;r die biologischen und medizinischen Forschung. Die F&auml;higkeit, einf&uuml;hren, entfernen oder &Auml;ndern von Molek&uuml;len in der intrazellul&auml;ren Umgebung ist von zentraler Bedeutung f&uuml;r unser Verst&auml;ndnis der zellul&auml;ren Struktur und Funktion. Hier berichten wir &uuml;ber eine alternative Methode f&uuml;r die Einf&uuml;hrung von Fremdk&ouml;rpern in die Entwicklung von Embryonen, die mit der Anwendung von Femtosekunden (fs)-Laserpulse. Beim intensiven fs-Laserpulsen mit einem Sub-Mikron-Spot konzentrieren, werden transiente Poren gebildet, die einen Transport-Weg f&uuml;r die Anlieferung der exogenen Material in embryonalen Zellen. In dieser Studie wurden Zebrafisch-Embryonen als Modellsystem verwendet, um die nicht-Invasivit&auml;t dieses angewandte Lieferung-Tools zu demonstrieren. Optisch induzierte vor&uuml;bergehende Poren Chorionated und Dechorionated Zebrafisch-Embryonen wurden erfolgreich mit einem fluoreszierenden Reporter-Molek&uuml;l (Fluoreszein-Isothiocyanat), Streptavidin-konjugierten Quantenpunkte oder DNA (Simian-CMV-EGFP) geladen. Porenbildung war unabh&auml;ngig von der gezielten Lage, mit beiden Blastomer-Eigelb-Schnittstelle und Blastomer Poren zust&auml;ndigen f&uuml;r die Lieferung. Langfristiges &Uuml;berleben Laser manipuliert Embryonen Pec-Fin-B&uuml;hne war 89 % und 100 % f&uuml;r Dechorionated und Chorionated Embryonen, beziehungsweise. Unseres Wissens ist dies der erste Bericht des DNA-Zustellung in Zebrafisch-Embryonen, die Verwendung von fs-Laserpulsen.

Eine alternative Methode f&uuml;r die Bereitstellung von exogenen Material in die Entwicklung von Zebrafisch-Embryonen.

Manipolazione non-invasiva dei sistemi multicellulari &egrave; importante per la ricerca medica e biologica. La possibilit&agrave; di introdurre, rimuovere o modificare le molecole nell&#39;intracellulare ambiente &egrave; fondamentale per la nostra comprensione della struttura cellulare e la funzione. Riportiamo qui, su un metodo alternativo per l&#39;introduzione di materiale estraneo in sviluppo di embrioni mediante l&#39;applicazione di impulsi laser di femtosecondo (fs). Quando fs intensi impulsi laser sono focalizzati in un punto del sub-micron, si formano pori transitori, fornendo un percorso di trasporto per la consegna di materiale esogeno nelle cellule embrionali. In questo studio, zebrafish embrioni sono stati utilizzati come sistema di modello per dimostrare la non invasivit&agrave; di questo strumento di consegna applicata. Utilizzando otticamente transitorio indotto i pori chorionated e dechorionated zebrafish embrioni sono stati caricati correttamente con una molecola reporter fluorescente (isotiocianato di fluoresceina), punti quantici streptavidina coniugata o DNA (Simian-CMV-EGFP). Formazione dei pori &egrave; stato indipendente del percorso mirato, con entrambi interfaccia blastomeri-tuorlo e blastomeri pori competente per la consegna. Sopravvivenza a lungo termine degli embrioni laser manipolato al palco pec-pinna era 89% e il 100% di embrioni dechorionated e chorionated, rispettivamente. A nostra conoscenza, questo &egrave; il primo rapporto di consegna di DNA negli embrioni di zebrafish utilizzando impulsi laser fs.

Un metodo alternativo per la consegna di materiale esogeno nello sviluppo di embrioni di zebrafish.

&#x591A;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x975E;&#x4FB5;&#x8972;&#x7684;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306F;&#x3001;&#x533B;&#x5B66;&#x30FB;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3001;&#x524A;&#x9664;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x74B0;&#x5883;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306B;&#x6975;&#x3081;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x660E;&#x7D30;&#x66F8;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#xFF08;fs&#xFF09; &#x30D5;&#x30A7;&#x30E0;&#x30C8;&#x79D2;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x521D;&#x671F;&#x80DA;&#x306B;&#x7570;&#x7269;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x5225;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6FC0;&#x3057;&#x3044;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E0;&#x30C8;&#x79D2;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC; &#x30B5;&#x30D6;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30F3; &#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AB;&#x30B9;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x6750;&#x6599;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x80DA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x904B;&#x642C;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x6C17;&#x5B54;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x975E;&#x4FB5;&#x8972;&#x6027;&#x3053;&#x306E;&#x5FDC;&#x7528;&#x914D;&#x4FE1;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5149;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x305F; chorionated &#x306E;&#x8A98;&#x8D77;&#x904E;&#x6E21;&#x306E;&#x6BDB;&#x7A74;&#x3084;&#x86CD;&#x5149;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x5206;&#x5B50; (&#x304B;&#x306B;)&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30D7;&#x30C8;&#x30A2;&#x30D3;&#x30B8;&#x30F3;&#x5171;&#x5F79;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F; DNA (Simian CMV EGFP) dechorionated zebrafish &#x306E;&#x80DA;&#x304C;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x5B54;&#x5F62;&#x6210;&#x4E21;&#x65B9;&#x5272;&#x7403;&#x5375;&#x9EC4;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x5834;&#x6240;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x5272;&#x7403;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6709;&#x80FD;&#x306A;&#x6BDB;&#x7A74;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x64CD;&#x4F5C;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x80DA; pec &#x30D5;&#x30A3;&#x30F3; &#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x3078;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x751F;&#x5B58;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C; 89 &#xFF05; &#x3068; 100 &#xFF05; dechorionated chorionated &#x80DA;&#x306E;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x77E5;&#x8B58;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E0;&#x30C8;&#x79D2;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x3078;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5C0E;&#x5165;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x521D;&#x671F;&#x80DA;&#x306B;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x6750;&#x6599;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x5225;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#xB2E4;&#xC138;&#xD3EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xBE44; &#xCE68; &#xC2B5; &#xC801; &#xC870;&#xC791; &#xC758;&#xB8CC; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC18C;&#xAC1C;, &#xC81C;&#xAC70;, &#xB610;&#xB294; &#xC218;&#xC815; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC218; &#xD658;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBC30;&#xC544; &#xD3A8; (fs) &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD384;&#xC2A4;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xB85C; &#xC678;&#xAD6D; &#xBB3C;&#xC790; &#xB3C4;&#xC785;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;. &#xAC15;&#xB82C;&#xD55C; fs &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD384;&#xC2A4;&#xB294; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB860; &#xC790;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD94;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4; &#xB54C; &#xBC30;&#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; exogenous &#xC790;&#xB8CC; &#xBC30;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xC1A1; &#xACBD;&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xC228; &#xAD6C;&#xBA4D; &#xD615;&#xC131; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC785;&#xC99D;&#xC774; &#xC801;&#xC6A9; &#xB41C; &#xBC30;&#xB2EC; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC758; &#xBE44; &#xCE68;&#xC785; zebrafish &#xD0DC;&#xC544; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD11;&#xD559; &#xC720;&#xB3C4; &#xACFC;&#xB3C4; &#xC138;&#xACF5; chorionated &#xBC0F; dechorionated zebrafish &#xD0DC;&#xC544; &#xD615;&#xAD11; &#xAE30;&#xC790; &#xBD84;&#xC790; (fluorescein isothiocyanate), Streptavidin conjugated &#xC591;&#xC790; &#xC810; &#xB610;&#xB294; DNA (Simian-CMV-EGFP)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30; &#xACF5; &#xD615;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4; &#xB450; blastomere &#xB178; &#xB978; &#xC790; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC640; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xBC0F; blastomere &#xC138;&#xACF5; &#xBC30;&#xB2EC; &#xAD00;&#xD560;. Pec-&#xC9C0; &#xB290; &#xB7EC; &#xBBF8; &#xBB34;&#xB300; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC870;&#xC791; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xC874;&#xC740; &#xAC01;&#xAC01; 89%, dechorionated &#xBC0F; chorionated &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 100%. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC744; &#xD558;&#xB824;&#xBA74;&#xC774; fs &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD384;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC774;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; zebrafish &#xD0DC;&#xC544;&#xC5D0; DNA &#xBC30;&#xD3EC;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Zebrafish &#xD0DC;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xB85C; &#xC138; &#xC790;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xBC95;.

Manipulaci&oacute;n no invasiva de sistemas multicelulares es importante para la investigaci&oacute;n m&eacute;dica y biol&oacute;gica. La capacidad de introducir, eliminar o modificar las mol&eacute;culas en el intracelular medio ambiente es fundamental para nuestra comprensi&oacute;n de la estructura celular y funci&oacute;n. Adjunto, Divulgamos sobre un m&eacute;todo alternativo para la introducci&oacute;n de material extra&ntilde;o en el desarrollo de embriones mediante la aplicaci&oacute;n de pulsos de l&aacute;ser de femtosegundo (fs). Cuando fs intensos pulsos de l&aacute;ser est&aacute;n enfocados a un punto de sub-micrones, se forman poros transitorios, proporcionando una v&iacute;a de transporte para la entrega de material ex&oacute;geno en c&eacute;lulas embrionarias. En este estudio, se utilizaron embriones de pez cebra como modelo para demostrar la no invasi&oacute;n de esta herramienta aplicada entrega. Utilizando &oacute;pticamente transitorio inducido poros chorionated y embriones de pez cebra de dechorionated fueron cargados con &eacute;xito con una mol&eacute;cula fluorescente reportero (isotiocianato de fluoresce&iacute;na), puntos cu&aacute;nticos conjugado estreptavidina o ADN (Simian-CMV-EGFP). Formaci&oacute;n de poros era independiente de la ubicaci&oacute;n espec&iacute;fica, con ambos interfaz blast&oacute;mero yema y blast&oacute;mero poros competente para la entrega. Supervivencia a largo plazo de embriones de l&aacute;ser manipulado hasta pec-aleta etapa fue de 89% y 100% para embriones de dechorionated y chorionated, respectivamente. A nuestro conocimiento, &eacute;ste es el primer informe de entrega de ADN en embriones de pez cebra utilizando pulsos de l&aacute;ser de fs.

Un m&eacute;todo alternativo para la entrega de material ex&oacute;geno en embriones de pez cebra en desarrollo.

(Fs) &#x98DE;&#x79D2;&#x6FC0;&#x5149;&#x8109;&#x51B2;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x64CD;&#x7EB5;&#x751F;&#x6D3B;&#x751F;&#x7269;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x66FF;&#x4EE3;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x6536;&#x5230;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x5174;&#x8DA3;&#x3002;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x6A21;&#x578B;&#x751F;&#x7269;&#x5DF2;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x5206;&#x5207;&#x9664;&#x548C;&#x5916;&#x56FD;&#x7684;&#x5916;&#x6E90;&#x7269;&#x8D28;&#x80DE;&#x5185;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x80FD;&#x529B;&#x548C;&#x53D1;&#x5C55;&#x5E94;&#x7528;&#x7684; fs &#x6FC0;&#x5149;&#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5C1A;&#x672A;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6211;&#x4EEC;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4F7F;&#x7528;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C; (&#x8868;&#x8FBE;&#x5E8F;&#x5217;&#x6807;&#x7B7E;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#xFF09;&#xFF0C;&#x89E3;&#x51B3;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x957F;&#x671F;&#x548C;&#x77ED;&#x671F;&#x53D1;&#x5C55;&#x53D8;&#x5316;&#x6FC0;&#x5149;&#x624B;&#x672F;&#x540E;&#x5BF9;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

&#x6FC0;&#x5149;&#x624B;&#x672F;&#x7528;&#x98DE;&#x79D2;&#x6FC0;&#x5149;&#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C; (&#x8868;&#x8FBE;&#x5E8F;&#x5217;&#x6807;&#x7B7E;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#xFF09; &#x80DA;&#x80CE;&#xFF1A; &#x4F18;&#x5316;&#x53C2;&#x6570;&#x5916;&#x6E90;&#x7684;&#x7269;&#x6599;&#x8F93;&#x9001;&#x3001; &#x4EE5;&#x53CA;&#x6FC0;&#x5149;&#x5BF9;&#x77ED;&#x671F;&#x548C;&#x957F;&#x671F;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Femtosecond (fs) laser pulses have recently received wide interest as an alternative tool for manipulating living biological systems. In various model organisms the excision of cellular components and the intracellular delivery of foreign exogenous materials have been reported. However, the effect of the applied fs laser pulses on cell viability and development has yet to be determined. Using the zebrafish (Danio rerio) as our animal model system, we address both the short- and long-term developmental changes following laser surgery on zebrafish embryonic cells.

Laser surgery of zebrafish (Danio rerio) embryos using femtosecond laser pulses: optimal parameters for exogenous material delivery, and the laser's effect on short- and long-term development.

Impulsions de laser femtoseconde (fs) ont r&eacute;cemment re&ccedil;u de grand int&eacute;r&ecirc;t comme un autre outil pour manipuler les syst&egrave;mes biologiques vivants. Dans divers organismes mod&egrave;les, l&#39;excision des composants cellulaires et la d&eacute;livrance intracellulaire des mat&eacute;riaux exog&egrave;nes &eacute;trangers ont &eacute;t&eacute; signal&eacute;s. Cependant, l&#39;effet des impulsions laser fs appliqu&eacute;e sur la viabilit&eacute; cellulaire et le d&eacute;veloppement doit encore &ecirc;tre d&eacute;termin&eacute;e. En utilisant le poisson z&egrave;bre (Danio rerio) comme notre syst&egrave;me de mod&egrave;le animal, nous abordons les court - et &agrave; long terme du d&eacute;veloppement changements suite &agrave; la chirurgie au laser sur les cellules embryonnaires de poisson-z&egrave;bre.

Chirurgie des embryons de poisson z&egrave;bre (Danio rerio) utilisant des impulsions laser femtoseconde laser : les param&egrave;tres optimaux pour livraison mat&eacute;riaux exog&egrave;ne et effet laser sur le d&eacute;veloppement &agrave; court et long terme.

Femtosekunden (fs)-Laserpulse erhielten k&uuml;rzlich breites Interesse als alternatives Werkzeug zum Bearbeiten von lebenden biologischen Systemen. In verschiedenen Modellorganismen der Exzision von Zellbestandteilen und die intrazellul&auml;re Lieferung von exogenen Fremdmaterialien wurden beschrieben. Allerdings hat die Wirkung der angewandten fs-Laserpulsen auf Zelle Entwicklungsf&auml;higkeit und Entwicklung noch bestimmt werden. Der Zebrab&auml;rbling (Danio Rerio) als unser Tiermodell-System verwendet wird, wenden wir uns sowohl die kurz- und langfristigen entwicklungsbedingte Ver&auml;nderungen nach Laserchirurgie an Zebrafish embryonale Zellen.

Laserchirurgie der Zebrab&auml;rbling (Danio Rerio) Embryonen mit Femtosekunden-Laserpulsen: optimale Parameter f&uuml;r exogene materielle Auslieferung und den Laser-Effekt auf kurz- und langfristige Entwicklung.

Impulsi laser di femtosecondo (fs) hanno recentemente ricevuto ampio interesse come strumento alternativo per la manipolazione di sistemi biologici viventi. Sono stati segnalati l&#39;escissione delle componenti cellulari e intracellulare consegna di materiali esogeni estranei in vari organismi modello. Tuttavia, l&#39;effetto degli impulsi laser fs applicata sulla vitalit&agrave; delle cellule e lo sviluppo deve ancora essere determinato. Utilizzando il Danio zebrato (Danio rerio) come il nostro sistema modello animale, ci rivolgiamo sia a breve e lungo termine dello sviluppo modifiche dopo chirurgia laser su cellule embrionali di zebrafish.

Chirurgia di embrioni di zebrafish (Danio rerio) utilizzando impulsi laser femtosecond laser: parametri ottimali per consegna materiale esogeno e l&#39;effetto del laser sullo sviluppo a breve e a lungo termine.

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Pulsos de l&aacute;ser de femtosegundo (fs) han recibido recientemente gran inter&eacute;s como una herramienta alternativa para manipular sistemas biol&oacute;gicos vivos. En varios organismos modelo han divulgado la supresi&oacute;n de componentes celulares y el transporte intracelular de materiales extra&ntilde;os ex&oacute;genos. Sin embargo, el efecto de los pulsos del l&aacute;ser aplicada fs en la viabilidad celular y desarrollo a&uacute;n por determinar. Utilizando el pez cebra (Danio rerio) como nuestro sistema de modelo animal, nos dirigimos a ambos los corto y largo plazo cambios de desarrollo despu&eacute;s de la cirug&iacute;a l&aacute;ser sobre c&eacute;lulas embrionarias de pez cebra.

Cirug&iacute;a de embriones de pez cebra (Danio rerio) usando pulsos de l&aacute;ser femtosecond l&aacute;ser: par&aacute;metros &oacute;ptimos para la entrega de material ex&oacute;geno y efecto del l&aacute;ser en el desarrollo de corto y largo plazo.

Recentemente, ci &egrave; stato aumento interesse per l&#39;applicazione di impulsi laser di femtosecondo (fs) per lo studio delle cellule, i tessuti e gli embrioni. Questa recensione Esplora gli sviluppi che si sono verificati negli ultimi anni diversi nei campi di nanosurgery delle cellule e degli embrioni. Ciascuno dei singoli studi presentati in questa recensione dimostra chiaramente il nondestructiveness di impulsi laser fs, che vengono utilizzati per modificare siti subcellulari e cellulari all&#39;interno di semplici cellule ed embrioni multicompartmental pi&ugrave; complicati. La capacit&agrave; di manipolare questi sistemi modello non invasivo fa applicata fs laser impulsi uno strumento prezioso per lo sviluppo biologi, genetisti, cryobiologists e zoologi. Stiamo cominciando a vedere l&#39;integrazione di questo strumento in scienze della vita, stabilendo il suo status tra i metodi di manipolazione genetica e molecolare delle cellule. Ancora pi&ugrave; importante, diversi studi che dimostrano la versatilit&agrave; di impulsi laser applicata fs hanno stabilito nuove collaborazioni tra fisici, ingegneri e biologi con l&#39;intento comune di risolvere i problemi biologici.

Prospettive e sviluppi in cella ed embrione laser nanosurgery.

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&#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0;, &#xAC70;&#xAE30; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; &#xD3A8; (fs) &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD384;&#xC2A4;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;, &#xC870;&#xC9C1; &#xBC0F; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xC2EC;. &#xC774; &#xAC80;&#xD1A0; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xBC30;&#xC544; nanosurgery &#xBD84;&#xC57C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xB09C; &#xBA87; &#xB144; &#xC774;&#xB0B4;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD55C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC01; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xAC00;&#xC774; &#xAC80;&#xD1A0;&#xC5D0; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC140; &#xBC0F; &#xB354; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; multicompartmental &#xBC30;&#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; subcellular &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; fs &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD384;&#xC2A4;&#xC758; nondestructiveness&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Noninvasively&#xC774; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC870;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB355;&#xBD84;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB41C; fs &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD384;&#xC2A4;&#xB294; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xAC00; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;, &#xC720;&#xC804;&#xD559;, cryobiologists, &#xBC0F; zoologists. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0DD;&#xBA85; &#xACFC;&#xD559;&#xC774;&#xC774; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xD1B5;&#xD569; &#xBCF4;&#xACE0; &#xBD84;&#xC790; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC801; &#xC140; &#xC870;&#xC791; &#xBC29;&#xBC95; &#xC911;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC124;&#xC815; &#xC2DC;&#xC791;. &#xB354; &#xC911;&#xC694; &#xD558; &#xAC8C; &#xC801;&#xC6A9; &#xB41C; fs &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD384;&#xC2A4;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xD559;&#xC790;, &#xC5D4;&#xC9C0;&#xB2C8;&#xC5B4;, &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xBB38;&#xC81C; &#xD574;&#xACB0;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC758;&#xB3C4; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD611;&#xB825;&#xC744; &#xC124;&#xB9BD; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC7A0;&#xC7AC; &#xACE0;&#xAC1D; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xBC30;&#xC544; &#xB808;&#xC774;&#xC800; nanosurgery&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBC1C;.

&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x4EEC;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3; (fs) &#x98DE;&#x79D2;&#x6FC0;&#x5149;&#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x80DA;&#x80CE;&#x7814;&#x7A76;&#x5411;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x68C0;&#x8BA8;&#x63A2;&#x8BA8;&#x4E86;&#x5728;&#x8FC7;&#x53BB;&#x7684;&#x51E0;&#x5E74;&#x4E2D;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684; nanosurgery &#x5B57;&#x6BB5;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E8B;&#x6001;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5728;&#x8FD9;&#x6B21;&#x68C0;&#x8BA8;&#x4E2D;&#x63D0;&#x51FA;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x7814;&#x7A76;&#x6E05;&#x695A;&#x5730;&#x8868;&#x660E; fs &#x6FC0;&#x5149;&#x8109;&#x51B2;&#xFF0C;&#x53EF;&#x7528;&#x6765;&#x6539;&#x53D8;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x66F4;&#x590D;&#x6742;&#x7684; multicompartmental &#x80DA;&#x80CE;&#x5185;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7F51;&#x7AD9; nondestructiveness&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x64CD;&#x4F5C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6A21;&#x578B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x4F7F;&#x5F97;&#x5E94;&#x7528;&#x7684; fs &#x6FC0;&#x5149;&#x8109;&#x51B2;&#x4E3A;&#x53D1;&#x80B2;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3001; &#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x3001; cryobiologists &#x548C;&#x52A8;&#x7269;&#x5B66;&#x5BB6;&#x7684;&#x5B9D;&#x8D35;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x59CB;&#x770B;&#x5230;&#x6B64;&#x5DE5;&#x5177;&#x878D;&#x5165;&#x751F;&#x547D;&#x79D1;&#x5B66;&#x3001; &#x5206;&#x5B50;&#x548C;&#x9057;&#x4F20;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x64CD;&#x4F5C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E4B;&#x95F4;&#x5176;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x786E;&#x7ACB;&#x3002;&#x66F4;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x51E0;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x5E94;&#x7528;&#x7684; fs &#x6FC0;&#x5149;&#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x65B0;&#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x5BB6;&#x3001; &#x5DE5;&#x7A0B;&#x5E08;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x5BB6;&#xFF0C;&#x5171;&#x540C;&#x89E3;&#x51B3;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x95EE;&#x9898;&#x7684;&#x610F;&#x56FE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x534F;&#x4F5C;&#x3002;

Nanosurgery &#x6FC0;&#x5149;&#x524D;&#x666F;&#x53CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x4E8B;&#x6001;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

Recently, there has been increasing interest in the application of femtosecond (fs) laser pulses to the study of cells, tissues and embryos. This review explores the developments that have occurred within the last several years in the fields of cell and embryo nanosurgery. Each of the individual studies presented in this review clearly demonstrates the nondestructiveness of fs laser pulses, which are used to alter both cellular and subcellular sites within simple cells and more complicated multicompartmental embryos. The ability to manipulate these model systems noninvasively makes applied fs laser pulses an invaluable tool for developmental biologists, geneticists, cryobiologists, and zoologists. We are beginning to see the integration of this tool into life sciences, establishing its status among molecular and genetic cell manipulation methods. More importantly, several studies demonstrating the versatility of applied fs laser pulses have established new collaborations among physicists, engineers, and biologists with the common intent of solving biological problems.

Prospects and developments in cell and embryo laser nanosurgery.

R&eacute;cemment, il a augment&eacute; l&#39;int&eacute;r&ecirc;t dans l&#39;application des impulsions laser femtoseconde (fs) &agrave; l&#39;&eacute;tude des cellules, des tissus et des embryons. Cette &eacute;tude explore les d&eacute;veloppements survenus au sein de ces derni&egrave;res ann&eacute;es dans les domaines de la nanochirurgie cellulaire et l&#39;embryon. Chacune des &eacute;tudes individuelles pr&eacute;sent&eacute;es dans la pr&eacute;sente analyse montre clairement la nondestructiveness des impulsions laser fs, qui servent &agrave; modifier les sites cellulaires et subcellulaires au sein des cellules simples et des embryons de compartiments plus compliqu&eacute;s. La possibilit&eacute; de manipuler ces syst&egrave;mes mod&egrave;les non invasive rend fs appliqu&eacute;es des impulsions laser un outil inestimable pour les biologistes du d&eacute;veloppement, des g&eacute;n&eacute;ticiens, des cryobiologists et des zoologistes. Nous commen&ccedil;ons &agrave; voir l&#39;int&eacute;gration de cet outil dans les sciences de la vie, fixant son statut parmi les m&eacute;thodes de manipulation des cellules mol&eacute;culaires et g&eacute;n&eacute;tiques. Plus important encore, plusieurs &eacute;tudes d&eacute;montrant la versatilit&eacute; des impulsions laser appliqu&eacute;e fs ont &eacute;tabli de nouvelles collaborations entre physiciens, ing&eacute;nieurs et biologistes dans l&#39;intention commune des probl&egrave;mes biologiques.

Perspectives et d&eacute;veloppements dans l&#39;embryon et les cellules laser nanochirurgie.

Vor kurzem hat es Interesse an der Anwendung der Femtosekunden (fs)-Laserpulse auf der Studie von Zellen, Geweben und Embryonen erh&ouml;ht. Diesen Bericht untersucht die Entwicklungen, die innerhalb der letzten Jahre auf den Gebieten der Zell- und Embryo-Nanochirurgie aufgetreten sind. Jedes der einzelnen Studien dargestellt in diesen Bericht zeigt deutlich die Nondestructiveness der fs-Laserpulsen, die sowohl zellul&auml;re und subzellul&auml;re Seiten innerhalb des einfachen Zellen und komplizierter multicompartmental Embryonen zu &auml;ndern verwendet werden. Die F&auml;higkeit, diese Modellsysteme Bauteilqualit&auml;t zu manipulieren macht angewandte fs Laser pulsiert ein unsch&auml;tzbares Werkzeug f&uuml;r Entwicklungsbiologie Biologen, Genetiker, Cryobiologists und Zoologen. Wir beginnen zu sehen, die Integration dieses Tool in Biowissenschaften, &uuml;ber seinen Status unter den Methoden der molekularen und genetischen Zelle-Manipulation. Noch wichtiger ist, haben mehrere Studien, die die Vielseitigkeit der angewandten fs-Laserpulsen neue Kooperationen unter Physikern, Ingenieuren und Biologen mit der gemeinsamen Absicht biologische Probleme zu l&ouml;sen etabliert.

Perspektiven und Entwicklungen in der Zelle und Embryo-Laser-Nanochirurgie.

Recientemente, se ha aumentado el inter&eacute;s en la aplicaci&oacute;n de pulsos de l&aacute;ser de femtosegundo (fs) para el estudio de las c&eacute;lulas, tejidos y embriones. Esta revisi&oacute;n explora los acontecimientos que han ocurrido en los &uacute;ltimos a&ntilde;os en los campos de nanocirug&iacute;a c&eacute;lulas y embriones. Cada uno de los estudios individuales presentados en este informe claramente demuestra el nondestructiveness de pulsos de l&aacute;ser de fs, que se utilizan para alterar sitios tanto a nivel celulares y subcelulares dentro de c&eacute;lulas simples y m&aacute;s complicados embriones multicompartmental. La habilidad de manipular estos sistemas modelo no invasor hace aplicadas fs l&aacute;ser impulsos una herramienta valiosa para los bi&oacute;logos del desarrollo, los genetistas, criobi&oacute;logos y zo&oacute;logos. Estamos empezando a ver la integraci&oacute;n de esta herramienta en Ciencias de la vida, establecer su estatus entre los m&eacute;todos de manipulaci&oacute;n gen&eacute;tica y molecular de la c&eacute;lula. M&aacute;s importante a&uacute;n, varios estudios que demuestran la versatilidad de pulsos de l&aacute;ser aplicada fs han establecido nuevas colaboraciones entre los f&iacute;sicos, ingenieros y bi&oacute;logos con la intenci&oacute;n com&uacute;n de problemas biol&oacute;gicos.

Perspectivas y desarrollos en c&eacute;lulas y embriones nanocirug&iacute;a l&aacute;ser.

&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8868;&#x660E;&#x80DA;&#x80CE;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x548C;&#x5FC3;&#x808C;&#x8840;&#x7EDF;&#x6E90;&#x81EA;&#x591A;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x8FA9;&#x8BBA;&#x548C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x89C4;&#x683C;&#x4E0D;&#x540C;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x8C31;&#x7CFB;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x4E86;&#x89E3;&#x5F97;&#x5F88;&#x5C11;&#x3002;&#x7535;&#x5B50;&#x6295;&#x6807;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x57DF;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; Etv2/Etsrp/ER71 &#x6700;&#x8FD1;&#x6210;&#x4E3A;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x3001; &#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x8FC7;&#x7A0B; etsrp &#x8868;&#x793A;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x819C;/&#x5185;&#x76AE;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; Etsrp &#x51FD;&#x6570;&#x6CA1;&#x6709;&#x3002;&#x591A;&#x4E2A;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7279;&#x5B9A;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x662F;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x6216; Etsrp &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x6216;&#x7A81;&#x53D8;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#x5927;&#x5927;&#x964D;&#x4F4E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; Etsrp &#x76F4;&#x63A5;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C; nfatc1 &#x8868;&#x8FBE;&#x8C03;&#x8282;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Etsrp &#x51FD;&#x6570;&#x9700;&#x8981;&#x6291;&#x5236;&#x5FC3;&#x808C;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709; Etsrp &#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;etsrp &#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CA;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x542F;&#x52A8;&#x5FC3;&#x808C;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269; hand2 &#x548C; cmlc2 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Foxc1a &#x51FD;&#x6570;&#x548C; Foxc1a &#x548C; Etsrp &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x9700;&#x8981;&#x542F;&#x52A8;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#x53EF;&#x6709;&#x53EF;&#x65E0;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BA4;&#x4E3A; Etsrp &#x542F;&#x52A8;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CA;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6291;&#x5236;&#x5FC3;&#x808C;&#xFF0C;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x9014;&#x5F84;&#x63A7;&#x5236;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x5206;&#x5316;&#x5728;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x65E8;&#x5728;&#x518D;&#x751F;&#x5FC3;&#x810F;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;

&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CA;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; Etsrp/Etv2 &#x51FD;&#x6570;&#x6CA1;&#x6709;&#x3002;

Previous studies have suggested that embryonic vascular endothelial, endocardial and myocardial lineages originate from multipotential cardiovascular progenitors. However, their existence in vivo has been debated and molecular mechanisms that regulate specification of different cardiovascular lineages are poorly understood. An ETS domain transcription factor Etv2/Etsrp/ER71 has been recently established as a crucial regulator of vascular endothelial differentiation in zebrafish and mouse embryos. In this study, we show that etsrp-expressing vascular endothelial/endocardial progenitors differentiate as cardiomyocytes in the absence of Etsrp function during zebrafish embryonic development. Expression of multiple endocardial specific markers is absent or greatly reduced in Etsrp knockdown or mutant embryos. We show that Etsrp regulates endocardial differentiation by directly inducing endocardial nfatc1 expression. In addition, Etsrp function is required to inhibit myocardial differentiation. In the absence of Etsrp function, etsrp-expressing endothelial and endocardial progenitors initiate myocardial marker hand2 and cmlc2 expression. Furthermore, Foxc1a function and interaction between Foxc1a and Etsrp is required to initiate endocardial development, but is dispensable for the inhibition of myocardial differentiation. These results argue that Etsrp initiates endothelial and endocardial, and inhibits myocardial, differentiation by two distinct mechanisms. Our findings are important for the understanding of genetic pathways that control cardiovascular differentiation during normal vertebrate development and will also greatly contribute to the stem cell research aimed at regenerating heart tissues.

Vascular endothelial and endocardial progenitors differentiate as cardiomyocytes in the absence of Etsrp/Etv2 function.

Des &#xE9;tudes ant&#xE9;rieures ont sugg&#xE9;r&#xE9; que embryonnaires endoth&#xE9;liales vasculaires, les lignages et endocardiques du myocarde proviennent de prog&#xE9;niteurs multipotentielles cardio-vasculaires. Toutefois, leur existence in vivo a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;battue et les m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires qui r&#xE9;gulent la sp&#xE9;cification des diff&#xE9;rents lignages cardiovasculaires sont mal comprises. Un domaine ETS transcription Etv2/Etsrp/ER71 facteur a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;cemment mis en place en tant que r&#xE9;gulateur essentiel de la diff&#xE9;renciation endoth&#xE9;liale vasculaire chez le poisson z&#xE8;bre et d&#x26;#39;embryons de souris. Dans cette &#xE9;tude, nous montrons que etsrp-vasculaires exprimant prog&#xE9;niteurs endoth&#xE9;liaux / endocardique diff&#xE9;rencier comme les cardiomyocytes en l&#x26;#39;absence de la fonction Etsrp au cours du d&#xE9;veloppement embryonnaire du poisson z&#xE8;bre. L&#x26;#39;expression de plusieurs marqueurs sp&#xE9;cifiques endocardiques est absent ou grandement r&#xE9;duit dans knockdown Etsrp ou embryons mutants. Nous montrons que Etsrp r&#xE9;gule la diff&#xE9;renciation par l&#x26;#39;endocarde directement induire l&#x26;#39;expression NFATc1 endocardique. En outre, la fonction Etsrp est n&#xE9;cessaire pour inhiber la diff&#xE9;renciation du myocarde. En l&#x26;#39;absence de la fonction Etsrp, etsrp exprimant prog&#xE9;niteurs endoth&#xE9;liaux et endocardique engager marqueur du myocarde et hand2 cmlc2 expression. En outre, la fonction et l&#x26;#39;interaction entre Foxc1a Foxc1a et Etsrp est n&#xE9;cessaire pour amorcer le d&#xE9;veloppement endocardiaque, mais n&#x26;#39;est pas indispensable pour l&#x26;#39;inhibition de la diff&#xE9;renciation du myocarde. Ces r&#xE9;sultats soutiennent que Etsrp initie endoth&#xE9;liale et l&#x26;#39;endocarde, myocarde et inhibe la diff&#xE9;renciation par deux m&#xE9;canismes distincts. Nos r&#xE9;sultats sont importants pour la compr&#xE9;hension des voies g&#xE9;n&#xE9;tiques qui contr&#xF4;lent la diff&#xE9;renciation cardiovasculaire au cours du d&#xE9;veloppement des vert&#xE9;br&#xE9;s normal et aussi grandement contribuer &#xE0; la recherche sur les cellules souches visant &#xE0; r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;rer les tissus cardiaques.

Vasculaires prog&#xE9;niteurs endoth&#xE9;liaux et endocardique Diff&#xE9;rencier Comme cardiomyocytes en l&#x26;#39;absence de Etsrp/Etv2 Fonction

Fr&uuml;here Studien haben vorgeschlagen, embryonale vaskul&auml;re endotheliale, Endokard und Myokard-Linien vom multipotenzielle Herz-Kreislauf-Vorfahren stammen. Allerdings hat ihre Existenz in-vivo diskutiert worden und Molekulare Mechanismen, die Spezifikation der verschiedenen Herz-Kreislauf-&Uuml;bertragungslinien zu regulieren sind oft missverstanden. Als entscheidender Regulator des vaskul&auml;ren endothelialen Differenzierung im Zebrafisch und Maus Embryonen wurde vor kurzem ein ETS-Dom&auml;ne-Transkriptionsfaktor Etv2/Etsrp/ER71 eingerichtet. In dieser Studie zeigen wir, dass Etsrp-Ausdruck vaskul&auml;ren endothelialen/Endokard Vorfahre als Cardiomyocytes keine Etsrp Funktion w&auml;hrend der Embryonalentwicklung Zebrab&auml;rbling unterscheiden. Ausdruck mehrerer Endokard spezifische Marker fehlt oder stark reduzierten Etsrp Niederschlag oder mutant Embryonen. Wir zeigen, dass Etsrp Endokard Differenzierung regelt durch direkt induzieren Endokard nfatc1 Ausdruck. Dar&uuml;ber hinaus wird Etsrp-Funktion ben&ouml;tigt, myokardiale Differenzierung zu hemmen. Keine Etsrp Funktion initiieren Etsrp Ausdr&uuml;cken endotheliale und Endokard Vorl&auml;uferzellen myokardialen Markierung hand2 und cmlc2 Ausdruck. Dar&uuml;ber hinaus Foxc1a Funktion und Interaktion zwischen Foxc1a und Etsrp ist erforderlich, um Endokard Entwicklung zu initiieren, aber ist f&uuml;r die Hemmung der myokardialen Differenzierung entbehrlich. Diese Ergebnisse argumentieren, dass die Etsrp initiiert endothelial und Endokard und hemmt myokardialen, Differenzierung durch zwei verschiedene Mechanismen. Unsere Ergebnisse sind wichtig f&uuml;r das Verst&auml;ndnis der genetischen Wege, die Herz-Kreislauf-Differenzierung w&auml;hrend der normalen vertebrate Entwicklung und tr&auml;gt auch erheblich zur Stammzellenforschung, die darauf abzielen, regenerierende Herzen Gewebe.

Vaskul&auml;re endotheliale und Endokard Vorl&auml;uferzellen differenzieren als Cardiomyocytes ohne Etsrp/Etv2 Funktion.

Precedenti studi hanno suggerito che embrionale vascolare endoteliale, dell&#39;endocardio e miocardio lignaggi provengono da progenitori multipotenziale cardiovascolare. Tuttavia, &egrave; stata discussa la loro esistenza in vivo e meccanismi molecolari che regolano la specifica di diversi lignaggi cardiovascolari sono capiti male. Un fattore di trascrizione di dominio ETS Etv2/Etsrp/ER71 &egrave; stato recentemente istituito come un regolatore fondamentale di differenziazione endoteliale vascolare in embrioni di zebrafish e mouse. In questo studio, mostriamo che esprimendo etsrp vascolare endoteliale/endocardica progenitori differenziano come cardiomyocytes in assenza della funzione Etsrp durante lo sviluppo embrionale di Danio rerio. Espressione di pi&ugrave; marcatori specifici dell&#39;endocardio &egrave; assente o notevolmente ridotto in Etsrp atterramento o embrioni mutanti. Mostriamo che Etsrp regola la differenziazione endocardica inducendo direttamente espressione nfatc1 endocardica. Inoltre, Etsrp funzione &egrave; necessaria per inibire la differenziazione del miocardio. In assenza della funzione Etsrp, etsrp-esprimendo progenitori endoteliali ed endocardica avviano marcatore del miocardio hand2 e cmlc2 espressione. Inoltre, Foxc1a funzione e l&#39;interazione tra Foxc1a ed Etsrp per avviare lo sviluppo dell&#39;endocardio &egrave; necessaria, ma &egrave; superflui per l&#39;inibizione della differenziazione del miocardio. Questi risultati sostengono Etsrp avvia endoteliali e dell&#39;endocardio che inibisce del miocardio, differenziazione di due distinti meccanismi. I nostri risultati sono importanti per la comprensione dei percorsi genetici che controllano la differenziazione cardiovascolare durante lo sviluppo normale di vertebrati e contribuir&agrave; notevolmente alla ricerca sulle cellule staminali finalizzata alla rigenerazione dei tessuti del cuore.

Vascolare endoteliale ed endocardica progenitori differenziano come cardiomyocytes in assenza della funzione Etsrp/Etv2.

&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x80DA;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x3068;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x7531;&#x6765;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x304C;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x4ED5;&#x69D8;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002; ETS&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;Etv2/Etsrp/ER71&#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x3068;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;etsrp&#x767A;&#x73FE;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;/&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x767A;&#x751F;&#x6642;&#x306E;Etsrp&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5206;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;Etsrp&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x80DA;&#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;Etsrp&#x76F4;&#x63A5;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;nfatc1&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Etsrp&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Etsrp&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;etsrp&#x767A;&#x73FE;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;HAND2&#x3068;cmlc2&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Foxc1a&#x3068;Etsrp&#x306E;&#x9593;&#x306B;Foxc1a&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x4E0D;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;Etsrp&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4E3B;&#x5F35;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x3066;&#x3082;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x518D;&#x751F;&#x5FC3;&#x81D3;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x76EE;&#x6307;&#x3057;&#x305F;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5185;&#x819C;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;Etsrp/Etv2&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5DEE;&#x5225;&#x5316;

&#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xBC30;&#xC544; &#xD608;&#xAD00; &#xB0B4; &#xD53C;, endocardial &#xBC0F; &#xC2EC;&#xADFC; lineages multipotential &#xC2EC;&#xD608; &#xAD00; progenitors&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC791; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xB17C;&#xC7C1; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xD608;&#xAD00; &#xACC4;&#xBCF4;&#xC758; &#xC0AC;&#xC591;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC774;&#xD574;. ETS &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; Etv2/Etsrp/ER71 &#xCD5C;&#xADFC; &#xD608;&#xAD00; &#xB0B4; &#xD53C; &#xBD84;&#xD654; zebrafish &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB85C; &#xC11C; &#xC124;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD608;&#xAD00; &#xB0B4; &#xD53C;/endocardial progenitors etsrp &#xD45C;&#xD604; zebrafish &#xBC30;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; cardiomyocytes Etsrp &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB85C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xC815; &#xB9C8;&#xCEE4; &#xC5EC;&#xB7EC; endocardial&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC740; &#xACB0; &#xC11D; &#xB610;&#xB294; Etsrp &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xB610;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; Etsrp endocardial &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xC9C1;&#xC811; endocardial nfatc1 &#xC2DD;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Etsrp &#xD568;&#xC218; &#xC2EC;&#xADFC; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Etsrp &#xD568;&#xC218;&#xAC00; &#xC5C6;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; etsrp&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xB0B4; &#xD53C; &#xBC0F; endocardial progenitors &#xC2EC;&#xADFC; &#xB9C8;&#xCEE4; hand2&#xACFC; cmlc2 &#xC2DD; &#xC2DC;&#xC791;. &#xB610;&#xD55C;, Foxc1a &#xD568;&#xC218;&#xC640; foxc1a&#xC640; Etsrp &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; endocardial &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC2EC;&#xADFC; &#xBD84;&#xD654;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xBD88;&#xAC00;&#xACB0; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; Etsrp &#xB0B4; &#xD53C;&#xC640; endocardial, &#xC2DC;&#xC791; &#xD558; &#xACE0; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC2EC;&#xADFC;, &#xC8FC;&#xC7A5; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC720;&#xC804; &#xACBD;&#xB85C; &#xC815;&#xC0C1; &#xCC99;&#xCD94; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xD608;&#xAD00; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558; &#xACE0; &#xACA8;&#xB0E5; &#xD55C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC870;&#xC9C1;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC774;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD608;&#xAD00; &#xB0B4; &#xD53C;&#xC640; endocardial progenitors Etsrp/Etv2 &#xD568;&#xC218; &#xC5C6;&#xC774; cardiomyocytes&#xB85C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;.

Estudios previos han sugerido que los linajes embrionarios vasculares endoteliales, endoc&#xE1;rdicas y mioc&#xE1;rdicas proceden de progenitores multipotenciales cardiovasculares. Sin embargo, su existencia en vivo ha sido objeto de debate y de los mecanismos moleculares que regulan la especificaci&#xF3;n de los diferentes linajes cardiovasculares son poco conocidos. Un dominio de la transcripci&#xF3;n ETS Etv2/Etsrp/ER71 factor se ha establecido recientemente como un regulador clave de la diferenciaci&#xF3;n del endotelio vascular en el pez cebra y de embriones de rat&#xF3;n. En este estudio, mostramos que etsrp-que expresan las c&#xE9;lulas progenitoras endoteliales vasculares / endocardial diferenciarse como cardiomiocitos en la ausencia de la funci&#xF3;n durante el desarrollo del pez cebra Etsrp embrionario. La expresi&#xF3;n de varios marcadores espec&#xED;ficos endoc&#xE1;rdicos est&#xE1; ausente o reducido en gran medida en la ca&#xED;da Etsrp o embriones mutantes. Se demuestra que regula la diferenciaci&#xF3;n Etsrp endoc&#xE1;rdica directamente inducir la expresi&#xF3;n de nfatc1 endoc&#xE1;rdico. Adem&#xE1;s, la funci&#xF3;n Etsrp se requiere para inhibir la diferenciaci&#xF3;n de miocardio. En ausencia de la funci&#xF3;n Etsrp, etsrp que expresan progenitores endoteliales y endoc&#xE1;rdicas iniciar marcador de miocardio y de expresi&#xF3;n Hand2 cmlc2. Adem&#xE1;s, la funci&#xF3;n y la interacci&#xF3;n entre Foxc1a Foxc1a y Etsrp se requiere para iniciar el desarrollo del endocardio, pero es prescindible para la inhibici&#xF3;n de la diferenciaci&#xF3;n de miocardio. Estos resultados sostienen que Etsrp inicia endotelial y endocardio, miocardio e inhibe la diferenciaci&#xF3;n, por dos mecanismos distintos. Nuestros hallazgos son importantes para la comprensi&#xF3;n de los mecanismos gen&#xE9;ticos que controlan la diferenciaci&#xF3;n cardiovascular durante el desarrollo de los vertebrados normales y tambi&#xE9;n contribuyen en gran medida a la investigaci&#xF3;n con c&#xE9;lulas madre destinadas a la regeneraci&#xF3;n de los tejidos del coraz&#xF3;n.

Vasculares progenitores endoteliales y endoc&#xE1;rdicas Diferenciar como cardiomiocitos en ausencia de la funci&#xF3;n Etsrp/Etv2

&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6210;&#x5FC3;&#x7BA1;&#x3001; &#x5305;&#x56F4;&#x5FC3;&#x808C;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7684;&#x5185;&#x5C42;&#x3002;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x89C4;&#x8303;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x672A;&#x77E5;&#x4E0E;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8D77;&#x6E90;&#x4ECD;&#x6B63;&#x5728;&#x8FDB;&#x884C;&#x8FA9;&#x8BBA;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x6A21;&#x578B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x8C03;&#x8282;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C; NFATc1 &#x540C;&#x6E90;&#x662F;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8BC1;&#x660E; Hedgehog (Hh) &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; VegfA &#x6216;&#x51F9;&#x53E3;&#x4FE1;&#x53F7;&#x662F;&#x65E9;&#x671F;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;Hh cyclopamine &#x5904;&#x7406;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x6807;&#x8BB0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x5168;&#x4E27;&#x5931;&#x3002;&#x540C;&#x65F6;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x97F3;&#x901F;&#x523A;&#x732C;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#xFF0C;&#x5618; twhh &#x6216; Hh co-receptor &#x548C; smoothened (smo) &#x5BFC;&#x81F4;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x6291;&#x5236;&#x9020;&#x6210;&#x65E9;&#x5728; 10-&#x4F53;&#x8282;&#x821E;&#x53F0;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x89C4;&#x8303;&#x7684;&#x6700;&#x65E9;&#x9636;&#x6BB5;&#x63A8;&#x5B9A;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D; (fn1) &#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42;&#x4E2D;&#x8FC1;&#x79FB;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x89C4;&#x8303;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6216;&#x540C;&#x65F6;&#x6E90;&#x6027;&#x810A;&#x7D22; Hh &#x7684;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x662F;&#x89C4;&#x8303;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x9A6C;&#x8D5B;&#x514B;&#x4F7F;&#x7528; Smo &#x51FD;&#x6570;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7EC6;&#x80DE;&#x81EA;&#x4E3B;&#x5728;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BA4;&#x4E3A; Hh &#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x89C4;&#x8303;&#x4E0E;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x3002;

&#x523A;&#x732C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x3002;

Endocardial cells form the inner endothelial layer of the heart tube, surrounded by the myocardium. Signaling pathways that regulate endocardial cell specification and differentiation are largely unknown and the origin of endocardial progenitors is still being debated. To study pathways that regulate endocardial differentiation in a zebrafish model system, we isolated zebrafish NFATc1 homolog which is expressed in endocardial but not vascular endothelial cells. We further demonstrate that Hedgehog (Hh) but not VegfA or Notch signaling is required for early endocardial morphogenesis. Pharmacological inhibition of Hh signaling with cyclopamine treatment resulted in nearly complete loss of the endocardial marker expression. Simultaneous knockdown of the two zebrafish sonic hedgehog homologs, shh and twhh or Hh co-receptor smoothened (smo) resulted in similar defects in endocardial morphogenesis. Inhibition of Hh signaling resulted in the loss of fibronectin (fn1) expression in the presumptive endocardial progenitors as early as the 10-somite stage which suggests that Hh signaling is required for the earliest stages of endocardial specification. We further show that the endoderm plays a critical role in migration but not specification or differentiation of the endocardial progenitors while notochord-derived Hh is a likely source for the specification and differentiation signal. Mosaic analysis using cell transplantation shows that Smo function is required cell-autonomously within endocardial progenitor cells. Our results argue that Hh provides a critical signal to induce the specification and differentiation of endocardial progenitors.

Hedgehog signaling is required for differentiation of endocardial progenitors in zebrafish.

Cellules endocavitaires former la couche int&#xE9;rieure du tube endoth&#xE9;lial coeur, entour&#xE9; par le myocarde. Voies de signalisation qui r&#xE9;gulent la sp&#xE9;cification des cellules endocardiques et la diff&#xE9;renciation sont en grande partie inconnue et l&#x26;#39;origine des prog&#xE9;niteurs endocardiques est encore en discussion. Pour &#xE9;tudier les voies qui r&#xE9;gulent la diff&#xE9;renciation endocardique dans un syst&#xE8;me mod&#xE8;le de poisson z&#xE8;bre, nous avons isol&#xE9; le poisson-z&#xE8;bre NFATc1 homologue qui est exprim&#xE9;e dans l&#x26;#39;endocarde, mais pas les cellules endoth&#xE9;liales vasculaires. Nous avons en outre d&#xE9;montrer que Hedgehog (Hh), mais pas VEGFA ou la signalisation Notch est n&#xE9;cessaire pour la morphogen&#xE8;se endocardique pr&#xE9;coce. Inhibition pharmacologique de la signalisation Hh avec un traitement cyclopamine a entra&#xEE;n&#xE9; la perte presque compl&#xE8;te de l&#x26;#39;expression marqueur endocardique. Knockdown simultan&#xE9;e des deux homologues de poisson z&#xE8;bre Sonic Hedgehog, Shh et twhh ou Hh co-r&#xE9;cepteur smoothened (SMO) a entra&#xEE;n&#xE9; des d&#xE9;fauts similaires dans la morphogen&#xE8;se endocardique. L&#x26;#39;inhibition de la signalisation Hh a entra&#xEE;n&#xE9; la perte de la fibronectine (FN1) expression dans les prog&#xE9;niteurs pr&#xE9;sum&#xE9;s endocardiques d&#xE8;s le stade 10 somites qui sugg&#xE8;re que Hh signalisation est n&#xE9;cessaire pour les premi&#xE8;res &#xE9;tapes de sp&#xE9;cification endocardique. Nous montrons en outre que l&#x26;#39;endoderme joue un r&#xF4;le essentiel dans la migration, mais pas les sp&#xE9;cifications ou la diff&#xE9;renciation des prog&#xE9;niteurs endocardiques tout notocorde d&#xE9;riv&#xE9; Hh est une source probable de la sp&#xE9;cification et le signal de diff&#xE9;renciation. Analyse mosa&#xEF;que en utilisant la transplantation de cellules montre que la fonction Smo est n&#xE9;cessaire de cellules-autonome au sein des cellules prog&#xE9;nitrices endocardiques. Nos r&#xE9;sultats soutiennent que Hh fournit un signal essentiel pour induire la sp&#xE9;cification et la diff&#xE9;renciation des prog&#xE9;niteurs endocardiques.

De signalisation Hedgehog est requise pour la diff&#xE9;renciation des prog&#xE9;niteurs endocardiques chez le poisson z&#xE8;bre

Endokard Zellen bilden die endotheliale Innenschicht der Herz-R&ouml;hre, umgeben von Myokard. Signalisieren, dass die Bahnen, die Endokard Zelle Spezifikation und Differenzierung zu regulieren sind weitgehend unbekannt und die Herkunft der Endokard Vorl&auml;uferzellen wird noch debattiert. Um Wege zu erforschen, die Endokard Differenzierung im Zebrafisch Modellsystem zu regulieren, isoliert wir Zebrafisch NFATc1 Homolog dem Endokard aber nicht vaskul&auml;ren endothelialen Zellen ausgedr&uuml;ckt wird. Weiter zeigen wir, dass Igel (Hh) aber nicht VegfA oder Notch Signalisierung wird ben&ouml;tigt f&uuml;r die fr&uuml;hen Endokard Morphogenese. Pharmakologische Hemmung der Hh Signalisierung mit Cyclopamine Behandlung ergab fast v&ouml;lligen Verlust des Ausdrucks Endokard Markierung. Gleichzeitige Niederschlag von die zwei Zebrafisch sonic Hedgehog UCP1, shh und Twhh oder Hh Co-receptor gespachtelten (Smo) ergab &auml;hnliche Defekte bei Endokard Morphogenese. Hemmung der Signalisierung Hh f&uuml;hrte zum Verlust von Fibronektin (fn1) Ausdruck in die vermutliche Endokard Vorl&auml;ufer bereits in der 10-Somiten was darauf hindeutet, dass Hh Signalisierung f&uuml;r den fr&uuml;hesten Stadien der Endokard Spezifikation erforderlich ist. Weiter zeigen wir, dass die Endodermis eine wichtige Rolle in Migration aber keine Spezifikation spielt oder Differenzierung der Endokard Vorreiter bei der Chorda dorsalis abgeleitete Hh wahrscheinlich Quelle f&uuml;r die Spezifikation und Differenzierung-Signal ist. Mosaik-Analyse mit Zelle Transplantation zeigt, dass Smo-Funktion Zelle-autonom innerhalb Endokard Vorl&auml;uferzellen erforderlich ist. Unsere Ergebnisse argumentieren, dass Hh eine kritische Signal stellt an die Spezifikation und die Differenzierung der Endokard Vorl&auml;uferzellen induzieren.

Igel Signalisierung ist erforderlich zur Differenzierung von Endokard Vorl&auml;uferzellen im Zebrafisch.

Endocardica cellule formano lo strato endoteliale interno del tubo cuore, circondato da miocardio. Signaling pathways che regolano la differenziazione ed endocardica cella specifica sono in gran parte sconosciuto e l&#39;origine dei progenitori dell&#39;endocardio si sta ancora discutendo. Per studiare i percorsi che regolano la differenziazione dell&#39;endocardio in un sistema modello zebrafish, abbiamo isolato zebrafish dell&#39;omologo di NFATc1 che &egrave; espressa nelle cellule endoteliali endocardica ma non vascolare. Noi dimostrare ulteriormente che Hedgehog (Hh), ma non VegfA o tacca di segnalazione &egrave; necessaria per primi morfogenesi endocardica. Inibizione farmacologica di segnalazione con trattamento cyclopamine Hh ha provocato perdita quasi completa dell&#39;espressione marcatore endocardica. Simultanea atterramento dei due omologhi di sonic hedgehog zebrafish, shh e twhh o Hh corecettore lisciato (smo) portato a simili difetti nella morfogenesi dell&#39;endocardio. Inibizione di segnalazione Hh ha provocato la perdita di fibronectina (fn1) espressione in progenitori endocardio presunti pi&ugrave; presto la fase 10-somite che suggerisce che Hh segnalazione &egrave; necessaria per i primi stadi della specifica dell&#39;endocardio. Mostriamo ulteriormente che l&#39;endoderma svolge un ruolo critico nella migrazione ma non specifica o differenziazione dei progenitori endocardio mentre Hh notocorda-derivato &egrave; una probabile fonte del segnale specifica e differenziazione. Mosaico analisi utilizzando cellule trapianto spettacoli che Smo funzione &egrave; necessaria cella-autonomamente all&#39;interno di cellule progenitrici endocardica. I nostri risultati sostengono che Hh fornisce un segnale critico per indurre la specificazione e la differenziazione dei progenitori dell&#39;endocardio.

Hedgehog signaling &egrave; necessaria per la differenziazione dei progenitori endocardica nello zebrafish.

&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x306B;&#x56F2;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x5FC3;&#x7BA1;&#x306E;&#x5185;&#x5074;&#x306E;&#x5185;&#x76AE;&#x5C64;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4ED5;&#x69D8;&#x3084;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x306A;&#x70B9;&#x304C;&#x591A;&#x3044;&#x3068;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8D77;&#x6E90;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x7CFB;&#x3067;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x304C;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x306A;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;NFATc1&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x3092;&#x5358;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0;&#xFF08;Hh&#xFF09;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;VegfA&#x307E;&#x305F;&#x306F;Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3092;&#x65E9;&#x671F;&#x306B;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x6CBB;&#x7642;Hh&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x307B;&#x307C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 2&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30BD;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B6;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0;&#x306E;&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;SHH&#x3068;twhh&#x307E;&#x305F;&#x306F;HH&#x5171;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x5E73;&#x6ED1;&#x5316;&#xFF08;SMO&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x305F;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Hh&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;Hh&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x4ED5;&#x69D8;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x6BB5;&#x968E;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;10&#x4F53;&#x7BC0;&#x6BB5;&#x968E;&#x65E9;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#x63A8;&#x5B9A;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#xFF08;FN1&#xFF09;&#x5F0F;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x79FB;&#x884C;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x4ED5;&#x69D8;&#x3084;&#x5DEE;&#x5225;&#x5316;&#x304C;&#x810A;&#x7D22;&#x7531;&#x6765;&#x306E;HH&#x306F;&#x4ED5;&#x69D8;&#x3068;&#x5DEE;&#x5225;&#x5316;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30E2;&#x30B6;&#x30A4;&#x30AF;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;SMO&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x81EA;&#x5F8B;&#x7684;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;HH&#x306F;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x306E;&#x4ED5;&#x69D8;&#x3068;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x4E3B;&#x5F35;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5FC3;&#x5185;&#x819C;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;

Endocardial &#xC140; &#xC2EC;&#xADFC;&#xC73C;&#xB85C; &#xB458;&#xB7EC;&#xC2F8;&#xC5EC; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xD29C;&#xBE0C;&#xC758; &#xC548;&#xCABD; &#xB0B4; &#xD53C; &#xCE35;&#xC744; &#xD615;&#xC131;. Endocardial &#xC140; &#xC0AC;&#xC591; &#xBC0F; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xB85C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6; &#xBC0F; endocardial progenitors &#xCD9C;&#xCC98; &#xC2E0;&#xD638; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xB17C;&#xC758; &#xB418; &#xACE0;&#xB294;. Zebrafish &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; endocardial &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xB85C; &#xC5F0;&#xAD6C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; endocardial &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xD608;&#xAD00; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; zebrafish NFATc1 &#xCCB4; &#xACE0;&#xB9BD;. &#xB354; &#xD5E4; &#xC9C0; &#xD638; &#xADF8; (Hh) &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; VegfA &#xB610;&#xB294; &#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xCD08;&#xAE30; endocardial morphogenesis&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cyclopamine &#xCE58;&#xB8CC;&#xC640; &#xC2E0;&#xD638; Hh&#xC758; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC800;&#xD574; endocardial &#xB9C8;&#xCEE4; &#xC2DD;&#xC758; &#xAC70;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC190;&#xC2E4; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xB450; zebrafish &#xC18C;&#xB2C9; &#xD5E4; &#xC9C0; &#xD638; &#xADF8; homologs&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xC26C;&#xC774; &#xC787; &#xD558; &#xACE0; twhh &#xB610;&#xB294; Hh co-receptor endocardial morphogenesis &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xACB0;&#xD568; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; smoothened (smo). Hh &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xC800;&#xD574; fibronectin (fn1) &#xC2DD; &#xCD94;&#xC815; endocardial progenitors&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xBA74; Hh &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; endocardial &#xC0AC;&#xC591;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548; 10 somite &#xBB34;&#xB300;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; endoderm &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC0AC;&#xC591;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4; &#xB610;&#xB294; notochord&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; Hh &#xB3D9;&#xC548; endocardial progenitors&#xC758; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xB294; &#xC0AC;&#xC591;&#xACFC; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC18C;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Smo &#xD568;&#xC218;&#xB294; endocardial &#xC870;&#xC0C1; &#xC140; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xC790;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xC2DD; &#xC1FC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xBAA8;&#xC790;&#xC774;&#xD06C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB17C;&#xC7C1; Hh &#xC0AC;&#xC591;&#xACFC; endocardial progenitors&#xC758; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; zebrafish endocardial progenitors&#xC758; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;.

Endocardial c&#xE9;lulas formar la capa interna del tubo endotelial coraz&#xF3;n, rodeado por el miocardio. V&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n que regulan la diferenciaci&#xF3;n celular endoc&#xE1;rdica y la diferenciaci&#xF3;n son en gran parte desconocida y el origen de los progenitores endoc&#xE1;rdicos se sigue sometido a debate. Para el estudio de las v&#xED;as que regulan la diferenciaci&#xF3;n del endocardio en un sistema modelo de pez cebra, se aisl&#xF3; el pez cebra hom&#xF3;logo NFATc1 que se expresa en las c&#xE9;lulas endoteliales vasculares, pero no endoc&#xE1;rdicos. Adem&#xE1;s, demuestran que Hedgehog (Hh), pero no VEGF o la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de Notch se requiere para la morfog&#xE9;nesis temprana del endocardio. La inhibici&#xF3;n farmacol&#xF3;gica de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n Hh con el tratamiento con ciclopamina como resultado la p&#xE9;rdida casi completa de la expresi&#xF3;n de los marcadores del endocardio. Ca&#xED;da simult&#xE1;nea de los dos hom&#xF3;logos de pez cebra Sonic Hedgehog, shh, y twhh o HH co-receptor smoothened (SMO) dio lugar a defectos similares en la morfog&#xE9;nesis del endocardio. La inhibici&#xF3;n de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n Hh resultado en la p&#xE9;rdida de la fibronectina (FN1) expresi&#xF3;n en los progenitores como presuntos endoc&#xE1;rdicos desde la etapa de 10 somite lo que sugiere que la se&#xF1;alizaci&#xF3;n Hh es necesaria para las etapas m&#xE1;s tempranas de la especificaci&#xF3;n del endocardio. Adem&#xE1;s, muestran que el endodermo desempe&#xF1;a un papel fundamental en la migraci&#xF3;n pero no la especificaci&#xF3;n o la diferenciaci&#xF3;n de los progenitores, mientras que endoc&#xE1;rdicos notocorda derivado de Hh es una fuente probable de la especificaci&#xF3;n y diferenciaci&#xF3;n de la se&#xF1;al. El an&#xE1;lisis del mosaico utilizando el trasplante de c&#xE9;lulas que muestra la funci&#xF3;n SMO es requerido por c&#xE9;lulas de forma aut&#xF3;noma dentro de las c&#xE9;lulas progenitoras endoc&#xE1;rdicos. Nuestros resultados sostienen que Hh proporciona una se&#xF1;al cr&#xED;tica para inducir la especificaci&#xF3;n y diferenciaci&#xF3;n de los progenitores endoc&#xE1;rdicos.

Vikram Kohli

Division of Developmental Biology

Cincinnati Children's Hospital Medical Center

Single Cell Fate Mapping in Zebrafish

Vikram Kohli

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Cincinnati Children's Hospital Medical Center

Single Cell Fate Mapping in Zebrafish

Division of Developmental Biology