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Genome-wide Screen for miRNA Targets Using the MISSION Target ID Library

The Target ID Library is designed to assist in discovery and identification of microRNA (miRNA) targets. The Target ID Library is a plasmid-based, ...

Sigma-Aldrich

&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x5206;&#x79BB;&#x514B;&#x9686;&#x8868;&#x793A;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6838;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x7C97;&#x7CD9;&#x8109;&#x5B62;&#x9709;&#x7684;&#x7B5B;&#x9009;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x6297;&#x8840;&#x6E05;&#x7684; lambda gt11 cDNA &#x6587;&#x5E93;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A; m p &#x2171;-3&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x3002;MRP3 &#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x514D;&#x75AB;&#x4EB2;&#x548C;&#x8272;&#x8C31;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x63A2;&#x9488;&#xFF0C;&#x548C;&#x906D;&#x53D7;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x627E;&#x51FA;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9;&#x548C;&#x524D;&#x77BB;&#x6027;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x9776;&#x5411; presequence &#x7EAF;&#x5316;&#x3002;MRP3 &#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x5DF2;&#x6D17;&#x76D0;&#x5E76;&#x5BF9;&#x8517;&#x7CD6;&#x68AF;&#x5EA6;&#x5206;&#x5272;&#x7684;&#x5C0F;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4ECE;&#x89C4;&#x6A21;&#x6700;&#x5927;&#x3001; &#x6700;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0; mrp 3 &#x7684; mRNA &#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x4EA7;&#x54C1;&#x5728;&#x573A;&#x4E2D;&#x8D85;&#x8FC7;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5176;&#x4ED6; N.&#x9709; mitoribosomal &#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x6742;&#x4EA4;/S1 &#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x6D4B;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0; mrp-3 &#x6BD4;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A; mito &#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0; mRNA &#x4E09;&#x500D;&#x591A;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;30 &#x5230; 50 &#x500D;&#x8FC7;&#x91CF;&#x7684;&#x975E;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53; MRP3 &#x86CB;&#x767D;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x88AB;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E2D;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x819C;&#x7EC4;&#x5206; &#xFF1B;&#x65E0;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x77E9;&#x9635;&#x5206;&#x6570;&#x7684;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x4F53;&#x4E2D;&#x79FB;&#x9664;&#x4E4B;&#x540E;&#x3002;&#x4ECE;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x548C;&#x819C;&#x90E8;&#x4F4D;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x514D;&#x75AB;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x8FD9;&#x53CC;&#x91CD;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x610F;&#x4E49;&#x4ECD;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8C1C;&#x3002;

&#x4ECE;&#x5B62;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x4E0A;&#x548C;&#x819C;&#x998F;&#x5206;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x6D88;&#x606F;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

We have isolated clones representing at least three nuclear genes for mitochondrial ribosomal proteins from Neurospora crassa by screening a lambda gt11 cDNA library with an antiserum against a mixture of these proteins. The cDNA and genomic DNA sequence for one of these genes, mrp-3, was determined. The MRP3 protein was purified by immune-affinity chromatography, using a monoclonal antibody probe, and subjected to amino acid sequence analysis to identify the mature amino terminus and a prospective mitochondrial-targeting presequence. MRP3 was identified as the largest, least basic protein detected from the small subunit of ribosomes which had been salt-washed and fractionated on sucrose gradients. However, the mRNA and protein products of mrp-3 were found to be present in excess over those of other N. crassa mitoribosomal protein genes. Using a solution hybridization/S1 nuclease assay, we found three-fold- more mRNA for mrp-3 than for another mito-ribosomal protein gene. In addition, a 30- to 50-fold excess of non-ribosomal MRP3 protein was discovered. The additional protein was localized in mitochondrial membrane fractions; none was detected in matrix fractions after removal of the ribosomes. An immunologically related protein was detected in ribosome and membrane fractions of mitochondria from Saccharomyces cerevisiae. The functional significance of this dual localization remains an enigma.

A mitochondrial protein from Neurospora crassa detected both on ribosomes and in membrane fractions. Analysis of the gene, the message, and the protein.

Nous avons isol&eacute; des clones repr&eacute;sentant au moins trois g&egrave;nes nucl&eacute;aires pour des prot&eacute;ines ribosomales mitochondrique de Neurospora crassa par criblage d&#39;une banque d&#39;ADNc gt11 lambda avec un antis&eacute;rum contre un m&eacute;lange de ces prot&eacute;ines. L&#39;ADNc et la s&eacute;quence de l&#39;ADN g&eacute;nomique pour l&#39;un de ces g&egrave;nes, mrp-3, a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;e. Les prot&eacute;ines MRP3 a &eacute;t&eacute; purifi&eacute;e par chromatographie d&#39;affinit&eacute; immunitaire, &agrave; l&#39;aide d&#39;une sonde d&#39;anticorps monoclonal et soumis &agrave; l&#39;analyse de s&eacute;quence des acides amin&eacute;s pour identifier l&#39;extr&eacute;mit&eacute; amin&eacute;e mature et une prospective pr&eacute;s&eacute;quence mitochondriale de ciblage. MRP3 a &eacute;t&eacute; identifi&eacute; comme la prot&eacute;ine plus grande, moins base d&eacute;tect&eacute;e de la petite sous-unit&eacute; de ribosomes qui avait &eacute;t&eacute; lav&eacute;e par le sel et fractionn&eacute;s sur des gradients de sucrose. Toutefois, les produits de l&#39;ARNm et de prot&eacute;ines de mrp-3 ont &eacute;t&eacute; trouv&eacute;s &agrave; &ecirc;tre pr&eacute;sent en exc&eacute;dent par rapport &agrave; ceux des autres g&egrave;nes de prot&eacute;ines de mitoribosomal de N. crassa. Utilisant une solution hybridation/S1 nucl&eacute;ase analyse, nous avons trouv&eacute; trois fois d&#39;autres ARNm mrp-3 que pour un autre g&egrave;ne de la prot&eacute;ine ribosomale mito. En outre, un exc&egrave;s de prot&eacute;ine de MRP3 non ribosomale 30 &agrave; 50 fois a &eacute;t&eacute; d&eacute;couvert. La prot&eacute;ine suppl&eacute;mentaire a &eacute;t&eacute; localis&eacute;e dans les fractions de la membrane mitochondriale ; None a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;e dans les fractions de matrice apr&egrave;s l&#39;enl&egrave;vement des ribosomes. Une prot&eacute;ine immunologiquement apparent&eacute;e a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;e dans les fractions de ribosomes et membranes des mitochondries de Saccharomyces cerevisiae. L&#39;importance fonctionnelle de cette double localisation reste une &eacute;nigme.

Une prot&eacute;ine mitochondriale de Neurospora crassa d&eacute;tect&eacute; sur les ribosomes et dans les fractions membranaires. Analyse du g&egrave;ne, le message et la prot&eacute;ine.

Wir haben Klone, die mindestens drei nukle&#xE4;re Gene f&#xFC;r mitochondriale ribosomale Proteine &#x200B;&#x200B;aus Neurospora crassa durch Screening einer Lambda gt11-cDNA-Bibliothek mit einem Antiserum gegen eine Mischung aus diesen Proteinen isoliert. Die cDNA und genomische DNA-Sequenz f&#xFC;r eines dieser Gene, MRP-3, wurde bestimmt. Die MRP3 Protein wurde durch Immun-Affinit&#xE4;ts-Chromatographie unter Verwendung eines monoklonalen Antik&#xF6;rpers Sonde und einer Aminos&#xE4;uresequenz-Analyse, um das reife Aminoterminus und eine prospektive mitochondrialen Targeting-Pr&#xE4;sequenz identifizieren. MRP3 wurde als die gr&#xF6;&#xDF;te, mindestens basisches Protein aus der kleinen Untereinheit der Ribosomen, die bereits Salz gewaschen und fraktioniert auf Saccharosegradienten hatte aufgesp&#xFC;rt. Jedoch wurden die mRNA-und Protein-Produkte von MRP-3 gefunden, um im &#xDC;berma&#xDF; vorhanden sein gegen&#xFC;ber denen anderer N. crassa mitoribosomal Protein-Gene. Mit einer L&#xF6;sung hybridization/S1 Nuklease-Assay, fanden wir das Dreifache mehr-mRNA f&#xFC;r MRP-3 als f&#xFC;r einen anderen mito-ribosomalen Protein-Gen. Dar&#xFC;ber hinaus wurde eine 30 - bis 50-fachen &#xDC;berschuss an nicht-ribosomalen Proteins MRP3 entdeckt wurde. Das zus&#xE4;tzliche Protein wurde in der mitochondrialen Membran-Fraktionen lokalisiert, keiner wurde in der Matrix Fraktionen nach der Entfernung der Ribosomen erkannt. Eine immunologisch verwandtes Protein wurde im Ribosom und Membranfraktionen von Mitochondrien aus Saccharomyces cerevisiae nachgewiesen werden. Die funktionelle Bedeutung dieser dualen Lokalisation bleibt ein R&#xE4;tsel.

Eine mitochondriale Protein aus Neurospora crassa erkannt sowohl an Ribosomen und in Membranfraktionen. Analyse des Gens, der Nachricht, und dem Protein.

Abbiamo isolato cloni che rappresenta almeno tre geni nucleari per le proteine ribosomiali mitocondriale da Neurospora crassa di screening di una libreria di cDNA lambda gt11 con un antisiero contro una miscela di queste proteine. Il cDNA e sequenze di DNA genomica per uno di questi geni, mrp-3, &egrave; stato determinato. La proteina MRP3 &egrave; stata purificata mediante cromatografia di affinit&agrave; immunitaria, utilizzando una sonda di anticorpi monoclonali e sottoposti ad analisi di sequenza dell&#39;amminoacido per identificare il terminus amminico maturo e un potenziale mitocondriale-targeting presequence. MRP3 &egrave; stato identificato come il pi&ugrave; grande, almeno di base proteica rilevata dalla piccola subunit&agrave; dei ribosomi che era stato lavato dal sale e frazionato su gradiente di saccarosio. Tuttavia, i prodotti mRNA e proteina mrp-3 sono stati trovati per essere presenti in eccesso rispetto a quelli di altri geni di proteina mitoribosomal di N. crassa. Usando una soluzione ibridazione/S1 nucleasi analisi, abbiamo trovato tre volte di pi&ugrave; mRNA per mrp-3 rispetto per un altro gene della proteina ribosomiale-mito. Inoltre, un eccesso di 30 a 50 volte di non-ribosomal proteina MRP3 &egrave; stato scoperto. La proteina supplementare &egrave; stata localizzata nelle frazioni di membrana mitocondriale; nessuno &egrave; stato rilevato nelle frazioni di matrix dopo la rimozione dei ribosomi. Una proteina immunologicamente correlata &egrave; stata rilevata in frazioni ribosoma e membrana dei mitocondri da Saccharomyces cerevisiae. Il significato funzionale di questa doppia localizzazione resta un enigma.

Una proteina mitocondriale da Neurospora crassa rilevato su ribosomi e nelle frazioni di membrana. Analisi del gene, il messaggio e la proteina.

&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x3068;&#x6297;&#x8840;&#x6E05;&#x3068;&#x30E9;&#x30E0;&#x30C0; gt11 cDNA &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A2;&#x30AB;&#x30D1;&#x30F3;&#x30AB;&#x30D3;&#x304B;&#x3089;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 3 &#x3064;&#x306E;&#x6838;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CDNA &#x3068;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; DNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; mrp 3 &#x3092;&#x5224;&#x65AD;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;MRP3 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x3068;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; presequence &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x514D;&#x75AB;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;.MRP3 &#x306E;&#x5869;&#x3092;&#x6D17;&#x3063;&#x305F;&#x3055;&#x308C;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x52FE;&#x914D;&#x306B;&#x5206;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5C0F;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;mrp 3 &#x306E; mRNA &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x88FD;&#x54C1;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x904E;&#x5270;&#x4ED6; N. &#x306E; crassa &#x306E; mitoribosomal &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4E0A;&#x3067;&#x3002;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4EA4;&#x914D;/S1 &#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x5225;&#x306E;&#x6C34;&#x6238;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; mrp 3 &#x3088;&#x308A; three &#x500D;&#x4EE5;&#x4E0A; mRNA &#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;30 &#x301C; 50 &#x500D;&#x306E;&#x975E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; MRP3 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x304C;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8FFD;&#x52A0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x819C;&#x753B;&#x5206;&#x306B;&#x9650;&#x5C40;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;;&#x3069;&#x308C;&#x3082;&#x9664;&#x53BB;&#x5F8C;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BE;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x753B;&#x5206;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x819C;&#x753B;&#x5206;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x610F;&#x7FA9;&#x3001;&#x8B0E;&#x304C;&#x6B8B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x4E0A;&#x306E;&#x819C;&#x753B;&#x5206;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x691C;&#x51FA;&#x30A2;&#x30AB;&#x30D1;&#x30F3;&#x30AB;&#x30D3;&#x304B;&#x3089;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30FC;&#x30B8;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xC6D0;&#xC73C;&#xB85C; &#xD568;&#xAED8; &#xB78C;&#xB2E4; gt11 cDNA &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xD558; &#xC5EC; Neurospora crassa&#xC5D0;&#xC11C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; ribosomal &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xD575; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xD074;&#xB860; &#xD30C;&#xC545; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. CDNA &#xBC0F;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC8C;&#xB188; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; mrp-3 &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. MRP3 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBA74;&#xC5ED; &#xCE5C;&#xD654;&#xC131; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;, &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xB9D0;&#xB2E8; &#xBC0F; &#xC7A0;&#xC7AC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; presequence&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D; &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC815;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Mrp3&#xB294; &#xC18C;&#xAE08;&#xC744; &#xC53B;&#xC5B4; &#xACE0; &#xC790;&#xB2F9; &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8;&#xC5D0; fractionated&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB41C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD070;, &#xAC00;&#xC7A5; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, mrp-3&#xC758; Mrna&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC81C;&#xD488; &#xC788;&#xC5B4;&#xC57C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4; &#xB2E4;&#xB978; &#xBA85;. crassa mitoribosomal &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC774;&#xC0C1; &#xCD08;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB2E4;&#xB978; &#xBBF8;&#xD1A0; ribosomal &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xB2E4; mrp 3 three &#xBC30; &#xB354; mRNA &#xCC3E;&#xC740; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xAD50; &#xC7A1;/S1 nuclease &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xD55C; 30-&#xB97C; 50 &#xBC30; &#xCD08;&#xACFC; &#xBE44; ribosomal MRP3 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBD84;&#xC218;;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC544;&#xBB34;&#xB3C4; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70; &#xD6C4; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Immunologically &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; Saccharomyces cerevisiae&#xC5D0;&#xC11C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xACFC; &#xB9C9; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC911;&#xC694;&#xC131; &#xC218;&#xC218;&#xAED8;&#xB07C; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Neurospora crassa &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0; &#xACE0; &#xB9C9; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;. &#xC720;&#xC804;&#xC790;, &#xBA54;&#xC2DC;&#xC9C0;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;.

Hemos aislado clones que representa por lo menos tres genes nucleares para prote&iacute;nas ribosomales mitocondriales de Neurospora crassa con la detecci&oacute;n sistem&aacute;tica de una biblioteca de ADNc de lambda gt11 con un antisuero contra una mezcla de estas prote&iacute;nas. El cDNA y la secuencia de ADN gen&oacute;mico para uno de estos genes, mrp-3, se determin&oacute;. La prote&iacute;na MRP3 se purific&oacute; por cromatograf&iacute;a de afinidad inmune, utilizando una sonda de anticuerpo monoclonal y sometidos a an&aacute;lisis de la secuencia de amino&aacute;cidos para identificar el t&eacute;rmino amino maduro y un presequence mitocondrial metas posible. MRP3 fue identificado como la prote&iacute;na m&aacute;s grande, menos b&aacute;sica detectada de la subunidad peque&ntilde;a del ribosoma, que hab&iacute;a sido lavada con sal y fraccionado en gradientes de sacarosa. Sin embargo, los productos de mRNA y prote&iacute;na de mrp-3 fueron encontrados para estar presente en exceso sobre los de otros genes de prote&iacute;nas de mitoribosomal N. crassa. Usando un an&aacute;lisis de Nucleasa S1/hibridaci&oacute;n de soluci&oacute;n, encontramos tres veces-m&aacute;s mRNA para mrp-3 que para otro gen de mito-prote&iacute;nas. Adem&aacute;s, se descubri&oacute; un exceso de 30 a 50 veces de no-MRP3 prote&iacute;nas. La prote&iacute;na adicional fue localizada en fracciones de membrana mitocondrial; ninguno fue detectado en fracciones de la matriz despu&eacute;s del retiro de los ribosomas. Una prote&iacute;na inmunol&oacute;gicamente relacionada se detect&oacute; en fracciones ribosoma y membrana de las mitocondrias de Saccharomyces cerevisiae. La significaci&oacute;n funcional de esta localizaci&oacute;n dual sigue siendo un enigma.

Una prote&iacute;na mitocondrial de Neurospora crassa detectado en los ribosomas y en fracciones de membrana. An&aacute;lisis de la prote&iacute;na, el gen y el mensaje.

We have isolated and characterized a Neurospora crassa gene homologous to the yeast CYH2 gene encoding L29, a cycloheximide sensitivity-conferring protein of the cytoplasmic ribosome. The cloned Neurospora gene was isolated by cross-hybridization to CYH2. It was sequenced from both cDNA and genomic clones. The coding region is interrupted by seven intervening sequences. Its deduced amino acid sequence shows 70% homology to that of yeast ribosomal protein L29 and 60% homology to that of mammalian ribosomal protein L27', suggesting that the protein has an important role in ribosomal function. The pattern of codon usage is highly biased, consistent with high translation efficiency. There is a single copy of this gene in N. crassa, and R. Metzenberg and coworkers have mapped its genetic location to the vicinity of the cyh-2 locus.

Isolation and characterization of a Neurospora crassa ribosomal protein gene homologous to CYH2 of yeast.

&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x5B9A;&#x6027;&#x8109;&#x5B62;&#x9709;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801; L29&#x3001; &#x653E;&#x7EBF;&#x83CC;&#x916E;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x8D4B;&#x4E88;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD; CYH2 &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x3002;&#x514B;&#x9686;&#x7684;&#x7C97;&#x58EE;&#x8109;&#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x5B64;&#x7ACB;&#x4EA4;&#x53C9;&#x6742;&#x4EA4;&#x5230; CYH2&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x4ECE;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x3002;&#x7F16;&#x7801;&#x533A;&#x662F;&#x7531;&#x4E03;&#x4E2A;&#x4E2D;&#x95F4;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3002;&#x5176;&#x63A8;&#x5BFC;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x663E;&#x793A; 70%&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; L29 &#x548C; 60%&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; L27 &#x540C;&#x6E90; &#39;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x4F7F;&#x7528;&#x6A21;&#x5F0F;&#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x6709;&#x504F;&#x89C1;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x9AD8;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x6548;&#x7387;&#x3002;N.&#x9709;&#xFF0C;&#x6709;&#x8FD9;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x526F;&#x672C;&#x548C; R.Metzenberg &#x548C;&#x540C;&#x4E8B;&#x6620;&#x5C04;&#x5176;&#x9057;&#x4F20;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684; cyh-2 &#x8F68;&#x8FF9;&#x3002;

&#x5206;&#x79BB;&#x4E0E;&#x8868;&#x5F81;&#x7C97;&#x7CD9;&#x8109;&#x5B62;&#x9709;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x540C;&#x6E90;&#x5230; CYH2 &#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x3002;

Nous avons isol&eacute; et caract&eacute;ris&eacute; un g&egrave;ne de Neurospora crassa homologue au g&egrave;ne CYH2 levure encodage L29, une prot&eacute;ine de cycloheximide conf&eacute;rant &agrave; la sensibilit&eacute; des ribosomes cytoplasmiques. Le g&egrave;ne clon&eacute; de Neurospora a &eacute;t&eacute; isol&eacute; par hybridation crois&eacute;e &agrave; CYH2. Il a &eacute;t&eacute; s&eacute;quenc&eacute; de cDNA et de clones g&eacute;nomiques. La r&eacute;gion codante est interrompue par sept s&eacute;quences intercalaires. Sa s&eacute;quence d&#39;acides amin&eacute;s d&eacute;duite indique 70 % d&#39;homologie avec celui de l&#39;homologie de levure prot&eacute;ine ribosomique L29 et 60 % &agrave; celui des mammif&egrave;res prot&eacute;ine ribosomique L27 &quot;, ce qui sugg&egrave;re que la prot&eacute;ine joue un r&ocirc;le important dans la fonction ribosomale. Le mod&egrave;le des codons est tr&egrave;s biais&eacute;e, en conformit&eacute; avec l&#39;efficacit&eacute; &eacute;lev&eacute;e de traduction. Il y a une seule copie de ce g&egrave;ne chez N. crassa, et R. Metzenberg et ses collaborateurs ont cartographi&eacute; sa localisation g&eacute;n&eacute;tique &agrave; proximit&eacute; du locus cyh-2.

Isolement et caract&eacute;risation d&#39;un g&egrave;ne de prot&eacute;ine ribosomique Neurospora crassa homologue de CYH2 de la levure.

Wir haben uns isoliert und eine Neurospora crassa Gen charakterisiert homolog zu der Hefe CYH2 kodierenden Gen L29, eine Empfindlichkeit Cycloheximid-Protein verleiht der cytoplasmatischen Ribosomen. Das klonierte Gen Neurospora wurde durch Kreuzhybridisierung zu CYH2 isoliert. Es wurde von beiden cDNA und genomische Klone sequenziert. Die kodierende Region wird von sieben intervenierende Sequenzen unterbrochen. Die abgeleitete Aminos&#xE4;uresequenz zeigt 70% Homologie mit der von Hefe ribosomalen Protein L29 und 60% Homologie mit der von S&#xE4;uger-ribosomalen Protein L27 &#x26;quot;, was darauf hindeutet, dass das Protein eine wichtige Rolle bei der ribosomale Funktion hat. Das Muster der Codon-Nutzung ist stark verzerrt, im Einklang mit hoher &#xDC;bersetzung Effizienz. Es ist eine einzige Kopie dieses Gens in N. crassa, und R. Metzenberg und Mitarbeiter haben ihre genetischen Ort in die N&#xE4;he des CYH-2-Locus kartiert.

Isolierung und Charakterisierung eines Neurospora crassa ribosomalen Protein-Gens homolog zu CYH2 der Hefe.

Abbiamo isolato e caratterizzato un Neurospora crassa gene omologo al gene CYH2 lievito codifica L29, una proteina che conferisce sensibilit&agrave; cicloeximide dei ribosomi citoplasmatici. Da cross-ibridazione a CYH2 &egrave; stato isolato il gene clonato Neurospora. Esso &egrave; stato sequenziato da cDNA e cloni genomici. La regione codificante &egrave; interrotto da sette sequenze intermedie. La sequenza aminoacidica dedotta Mostra omologia di 70% a quello del lievito proteina ribosomiale L29 e 60% omologia a quella della proteina ribosomiale mammiferi L27&#39;, suggerendo che la proteina ha un ruolo importante nella funzione ribosomiale. Il modello di utilizzo del codone &egrave; altamente polarizzato, coerente con l&#39;efficienza alta traduzione. C&#39;&egrave; una sola copia del gene in N. crassa, e R. Metzenberg ed i colleghe hanno mappato la posizione genetica per la vicinanza del locus cyh-2.

Isolamento e caratterizzazione di un gene di proteina ribosomiale crassa della Neurospora omologo a CYH2 di lievito.

&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x3001;L29&#x3001;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6388;&#x4E0E;&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30DF;&#x30C9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x9175;&#x6BCD; CYH2 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x76F8;&#x540C;&#x306E;&#x30A2;&#x30AB;&#x30D1;&#x30F3;&#x30AB;&#x30D3;. &#x306E; crassa &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30AB;&#x30D1;&#x30F3;&#x30AB;&#x30D3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F; CYH2 &#x3078;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x4EA4;&#x914D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F; cDNA &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304B;&#x3089;&#x5869;&#x57FA;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x9818;&#x57DF;&#x4E03;&#x4ECB;&#x5728;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;70% &#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; L27 &#x9175;&#x6BCD;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; L29 &#x3068; 60 &#xFF05; &#x76F8;&#x540C;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059; &#39;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304C;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x95A2;&#x6570;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x504F;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x9AD8;&#x3044;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x3067;&#x3059;&#x3002;N. &#x306E; crassa &#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x304C;&#x3042;&#x308A; R. Metzenberg &#x3084;&#x540C;&#x50DA;&#x305D;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5834;&#x6240; cyh 2 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x5206;&#x96E2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30AB;&#x30D1;&#x30F3;&#x30AB;&#x30D3;. &#x306E; crassa &#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E; CYH2 &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xACE0;&#xB9BD; &#xD558; &#xACE0; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; L29, &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC758; cycloheximide &#xAC10;&#xB3C4; &#xBD80;&#xC5EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD6A8; &#xBAA8; CYH2 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB3D9;&#xC885; Neurospora crassa &#xC9C4; &#xAC83;&#xC774; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; Neurospora &#xC720;&#xC804;&#xC790; CYH2 &#xAC04; &#xAD50; &#xC7A1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cdna&#xB97C; &#xD074;&#xB860; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCF54;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED; 7 &#xAC1C;&#xC785; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xB2E8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xCD94;&#xB860;&#xB41C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; 70 %homology &#xD6A8; &#xBAA8; ribosomal &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; L29 &#xBC0F; 60 %homology &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; ribosomal &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; l27&#xC758;&#xC758; &#39;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; ribosomal &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC81C;&#xC548;. Codon &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD328;&#xD134;&#xC740; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD3B8; &#xD30C;, &#xB192;&#xC740; &#xBCC0;&#xD658; &#xD6A8;&#xC728;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C;. &#xBA85;. crassa&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8; &#xC774;&#xBA70; R. Metzenberg&#xC640; &#xB3D9;&#xB8CC; cyh 2 &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4; &#xBD80;&#xADFC;&#xC5D0;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xD551;&#xD55C;.

&#xACE0;&#xB9BD;&#xACFC; &#xD6A8; CYH2 &#xB3D9;&#xC885; Neurospora crassa ribosomal &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

Hemos aislado y caracterizado un Neurospora crassa gen hom&oacute;logo al gen de levadura CYH2 codificaci&oacute;n L29, una prote&iacute;na de cicloheximida que confieren la sensibilidad de los ribosomas citoplasm&aacute;ticos. El gen clonado de Neurospora fue aislado por Cruz-hibridaci&oacute;n a CYH2. Fue secuenciada de cDNA y clones gen&oacute;micos. La regi&oacute;n codificante es interrumpida por siete secuencias de intervenci&oacute;n. Su secuencia de amino&aacute;cidos deducida muestra homolog&iacute;a de 70% a la de homolog&iacute;a de L29 y 60% de prote&iacute;nas levadura a la de mam&iacute;feros prote&iacute;nas L27&#39;, sugiriendo que la prote&iacute;na tiene un papel importante en la funci&oacute;n ribosomal. El patr&oacute;n de utilizaci&oacute;n de codones es muy sesgada, de conformidad con la eficacia alta de la traducci&oacute;n. Hay una sola copia de este gen en N. crassa, y R. Metzenberg y compa&ntilde;eros de trabajo han trazado su ubicaci&oacute;n gen&eacute;tica a las proximidades del lugar geom&eacute;trico cyh-2.

Aislamiento y caracterizaci&oacute;n de un gen de prote&iacute;nas de Neurospora crassa hom&oacute;logo a CYH2 de levadura.

&#x56E0;&#x4E3A;&#x7C7B;&#x6746;&#x83CC;&#x83CC;&#x662F;&#x8D23;&#x6210;&#x538C;&#x6C27;&#x83CC;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x5BB0;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x690D;&#x7269;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x4E00;&#x4E9B;&#x7269;&#x79CD;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EC5;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80A0;&#x9053;&#x4E2D;&#x751F;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x83CC;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x7528;&#x6765;&#x533A;&#x5206;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4ECE;&#x975E;&#x4EBA;&#x7684;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x6C61;&#x67D3;&#x7684;&#x6765;&#x6E90;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x7C7B;&#x6746;&#x83CC; B.vulgatus B.thetaiotaomicron &#x548C; distasonis &#x7684; 16S rRNA &#x57FA;&#x56E0;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684; PCR &#x5F15;&#x7269;&#x3002;&#x5185;&#x90E8;&#x7269;&#x79CD;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x63A2;&#x9488;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x9884;&#x5B9A;&#x7684; PCR &#x4EA7;&#x7269;&#x3002;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269; 66 &#x5DF2;&#x77E5;&#x7C7B;&#x6746;&#x83CC;&#x83CC;&#x682A;&#xFF0C;&#x4EE3;&#x8868; 10 &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7269;&#x79CD;&#xFF0C;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x786E;&#x8BA4;&#x8FD9;&#x4E9B; PCR &#x6742;&#x4EA4;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5728;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x4E2D;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#xFF0C;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x88AB;&#x5F00;&#x53D1;&#x4F5C;&#x51C6;&#x5907;&#x8DB3;&#x591F;&#x7684;&#x7EAF;&#x5EA6; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x63D0;&#x53D6; 9 &#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C; 70 nonhumans (&#x732B;&#x3001; &#x72D7;&#x3001; &#x725B;&#x3001; &#x732A;&#x3001; &#x9A6C;&#x3001; &#x7EF5;&#x7F8A;&#x3001; &#x5C71;&#x7F8A;&#x548C;&#x9E21;) &#x662F;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5206;&#x6790;&#x4E0E;&#x5E76;&#x65E0;&#x5185;&#x90E8;&#x7684;&#x79EF;&#x6781;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x8BE5; PCR &#x6269;&#x589E;&#x4E0D;&#x6291;&#x5236;&#x4E2D;&#x63D0;&#x53D6;&#x7684;&#x7269;&#x8D28;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x9633;&#x6027;&#x7684;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E32;&#x884C;&#x7A00;&#x91CA;&#x5EA6;&#x5E76;&#x88AB;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4F30;&#x8BA1;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x7C7B;&#x6746;&#x83CC;&#x83CC;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5E95;&#x6F06;&#x63A2;&#x5934;&#x96C6;&#xFF0C;78 &#x6216;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x63D0;&#x53D6;&#x7684; 67%&#x4E86;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x76EE;&#x6807; DNA&#x3002;&#x53E6;&#x4E00;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709; 7 &#x5230; 11%&#x7684;&#x975E;&#x4EBA;&#x63D0;&#x53D6;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x540C;&#x6837;&#x6709;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x76EE;&#x6807; DNA&#x3002;&#x989D;&#x5916;&#x7684; 12 &#x5230; 20%&#x7684;&#x975E;&#x4EBA;&#x63D0;&#x53D6;&#x4E86;&#x7EA7;&#x522B;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F; 100 1,000 &#x500D;&#x7684; DNA &#x4F4E;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8EAB;&#x4E0A;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;(&#x6458;&#x8981;&#x622A;&#x65AD;&#x5728; 250 &#x4E2A;&#x5B57;)

&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x6C61;&#x67D3;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7C7B;&#x6746;&#x83CC; DNA &#x63A2;&#x9488;&#x3002;

Because Bacteroides spp. are obligate anaerobes that dominate the human fecal flora, and because some species may live only in the human intestine, these bacteria might be useful to distinguish human from nonhuman sources of fecal pollution. To test this hypothesis, PCR primers specific for 16S rRNA gene sequences of Bacteroides distasonis, B. thetaiotaomicron, and B. vulgatus were designed. Hybridization with species-specific internal probes was used to detect the intended PCR products. Extracts from 66 known Bacteroides strains, representing 10 related species, were used to confirm the specificity of these PCR-hybridization assays. To test for specificity in feces, procedures were developed to prepare DNA of sufficient purity for PCR. Extracts of feces from 9 humans and 70 nonhumans (cats, dogs, cattle, hogs, horses, sheep, goats, and chickens) were each analyzed with and without an internal positive control to verify that PCR amplification was not inhibited by substances in the extract. In addition, serial dilutions from each extract that tested positive were assayed to estimate the relative abundance of target Bacteroides spp. in the sample. Depending on the primer-probe set used, either 78 or 67% of the human fecal extracts tested had high levels of target DNA. On the other hand, only 7 to 11% of the nonhuman extracts tested had similarly high levels of target DNA. An additional 12 to 20% of the nonhuman extracts had levels of target DNA that were 100- to 1,000-fold lower than those found in humans.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)

Design and evaluation of Bacteroides DNA probes for the specific detection of human fecal pollution.

Parce que les bact&eacute;ries ana&eacute;robies qui dominent la flore f&eacute;cale humaine oblige les Bacteroides spp, et parce que certaines esp&egrave;ces peuvent vivre uniquement dans l&#39;intestin humain, ces bact&eacute;ries peuvent &ecirc;tre utiles pour distinguer des sources de pollution f&eacute;cale humaine. Pour tester cette hypoth&egrave;se, des amorces PCR sp&eacute;cifiques pour les s&eacute;quences de g&egrave;nes des ARNr 16 s de Bacteroides distasonis, b. thetaiotaomicron et b. vulgatus ont &eacute;t&eacute; con&ccedil;us. L&#39;hybridation avec des sondes internes sp&eacute;cifiques &agrave; l&#39;esp&egrave;ce a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour d&eacute;tecter les produits PCR pr&eacute;vus. Extraits de 66 souches connues de Bacteroides, repr&eacute;sentant 10 esp&egrave;ces apparent&eacute;es, ont servi &agrave; confirmer la sp&eacute;cificit&eacute; de ces tests de PCR-hybridation. Pour tester la sp&eacute;cificit&eacute; dans les selles, des proc&eacute;dures ont &eacute;t&eacute; &eacute;labor&eacute;es pour pr&eacute;parer l&#39;ADN de puret&eacute; suffisante pour l&#39;ACP. Extraits des excr&eacute;ments 9 humains, et dans 70 son (chats, chiens, bovins, porcs, chevaux, moutons, ch&egrave;vres et poulets) ont &eacute;t&eacute; chacun analys&eacute; avec et sans un contr&ocirc;le positif interne pour v&eacute;rifier que l&#39;amplification par PCR n&#39;est pas inhib&eacute;e par substances pr&eacute;sentes dans l&#39;extrait. En outre, des dilutions successives de chaque extrait test&eacute; positif ont &eacute;t&eacute; analys&eacute;es afin d&#39;estimer l&#39;abondance relative de cible Bacteroides spp dans l&#39;&eacute;chantillon. Selon le jeu d&#39;amorces-sondes utilis&eacute;, soit 78, soit 67 % des extraits dans les selles humaines test&eacute;es avaient des niveaux &eacute;lev&eacute;s d&#39;ADN cible. En revanche, seulement de 7 &agrave; 11 % des non humains extraits test&eacute;s &eacute;tait de m&ecirc;me des niveaux &eacute;lev&eacute;s d&#39;ADN cible. Un autre 12 &agrave; 20 % des extraits non humains avaient de cible ADN &eacute;taient de 100 &agrave; 1,000 fois inf&eacute;rieures &agrave; celles trouv&eacute;es chez l&#39;homme.(R&Eacute;SUM&Eacute; TRONQU&Eacute; &Agrave; 250 MOTS)

Conception et &eacute;valuation de Bacteroides sondes de d&eacute;tection sp&eacute;cifique de pollution f&eacute;cale humaine.

Da Bacteroides spp. sind obligate Anaerobier, die die menschliche f&#xE4;kale Flora dominieren, und weil einige Arten nur leben k&#xF6;nnen im menschlichen Darm, diese Bakterien k&#xF6;nnte sinnvoll sein, zu unterscheiden von nichtmenschlichen Quellen der f&#xE4;kale Verschmutzung menschlich. Um diese Hypothese zu testen, wurden PCR-Primer, die spezifisch f&#xFC;r 16S rRNA-Gensequenzen von Bacteroides distasonis, B. thetaiotaomicron, und B. vulgatus gestalten. Die Hybridisierung mit artspezifischen internen Sonden verwendet wurde, um die vorgesehenen PCR-Produkte zu erkennen. Ausz&#xFC;ge aus 66 bekannten Bacteroides-St&#xE4;mmen, was 10 verwandte Arten, wurden verwendet, um die Spezifit&#xE4;t dieser PCR-Hybridisierungsassays best&#xE4;tigen. Um f&#xFC;r die Spezifit&#xE4;t im Kot zu testen, wurden Verfahren entwickelt, um DNA mit ausreichender Reinheit f&#xFC;r die PCR vorbereiten. Ausz&#xFC;ge aus Kot von 9 und 70 Menschen Nichtmenschen (Katzen, Hunde, Rinder, Schweine, Pferde, Schafe, Ziegen und H&#xFC;hner) wurden jeweils mit und ohne interne positive Kontrolle, dass die PCR-Amplifikation zu &#xFC;berpr&#xFC;fen analysiert wurde nicht gehemmt durch Substanzen im Extrakt . Dar&#xFC;ber hinaus wurden serielle Verd&#xFC;nnungen von jedem Extrakt positiv getesteten untersucht, um die relative H&#xE4;ufigkeit von Ziel Bacteroides spp abzusch&#xE4;tzen. in der Probe. Abh&#xE4;ngig von der Primer-Sonden-Set verwendet werden, entweder 78 oder 67% der menschlichen Stuhlextrakten getestet hatte ein hohes Ma&#xDF; an Ziel-DNA. Auf der anderen Seite gab es nur 7 bis 11% der humanen Extrakten getestet &#xE4;hnlich hohen Ziel-DNA. Eine zus&#xE4;tzliche 12 bis 20% der nicht-menschlichen Extrakte hatten Ebenen der Ziel-DNA, die 100 waren -. Zu 1.000-fach geringer als die beim Menschen gefunden (Abstract 250 W&#xF6;rter TRUNCATED)

Gestaltung und Bewertung von Bacteroides DNA-Sonden f&#xFC;r den spezifischen Nachweis von humanem f&#xE4;kale Verschmutzung.

Perch&eacute; i Bacteroides spp sono obbligano anaerobi che dominano la flora fecale umana, e perch&eacute; alcune specie possono vivere solo nell&#39;intestino umano, questi batteri potrebbero essere utili distinguere umano da nonhuman fonti di inquinamento fecale. Per verificare questa ipotesi, gli iniettori di PCR specifici per sequenze di geni 16S rRNA di Bacteroides distasonis, b. thetaiotaomicron e b. vulgatus sono stati progettati. Ibridazione con sonde interne specie-&egrave; stato utilizzato per rilevare i prodotti di PCR previsti. Estratti da 66 noti ceppi di Bacteroides, che rappresenta 10 specie correlate, sono stati utilizzati per confermare la specificit&agrave; di queste analisi PCR-ibridazione. Per verificare la specificit&agrave; nelle feci, le procedure sono state sviluppate per preparare il DNA di purezza sufficiente per la PCR. Estratti di feci da 9 degli esseri umani e non 70 umani (gatti, cani, bovini, maiali, cavalli, pecore, capre e polli) erano ciascuno analizzato con e senza un controllo positivo interno per verificare che l&#39;amplificazione di PCR non era inibito da sostanze nell&#39;estratto. Inoltre, diluizioni seriali di ogni estratto che risultati positivi sono stati dosati per stimare l&#39;abbondanza relativa di destinazione Bacteroides spp. nel campione. A seconda del set di primer-sonda utilizzato, oppure 78 67% degli estratti fecali umani testati avevano alti livelli di DNA dell&#39;obiettivo. D&#39;altra parte, solo il 7-11% dei non umani estratti testati similmente avevano alti livelli di DNA dell&#39;obiettivo. Un 12-20% dei non umani estratti avevano livelli di target DNA che erano 100 - a 1,000 volte inferiori a quelli trovati in esseri umani.(ABSTRACT TRONCATO A 250 PAROLE)

Progettazione e valutazione di Bacteroides DNA sonde per il rilevamento specifico di inquinamento fecale umana.

&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C7;&#x30B9;&#x5C5E;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x7CDE;&#x4FBF;&#x5185;&#x7D30;&#x83CC;&#x53E2;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x5ACC;&#x6C17;&#x6027;&#x83CC;&#x3092;&#x7FA9;&#x52D9;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7A2E;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x8178;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x751F;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x7CDE;&#x4FBF;&#x6C5A;&#x67D3;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x4EBA;&#x9593;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x5F79;&#x306B;&#x7ACB;&#x3064;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C7;&#x30B9; distasonis&#x3001;B. thetaiotaomicron&#x3001;B. vulgatus &#x306E; 16S rRNA &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x914D;&#x5217;&#x306E; PCR &#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x304C;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7A2E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3068;&#x306E;&#x4EA4;&#x914D;&#x306F;&#x610F;&#x56F3;&#x3055;&#x308C;&#x305F; PCR &#x306E;&#x88FD;&#x54C1;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;10 &#x306E;&#x8FD1;&#x7E01;&#x7A2E;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3001;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E; 66 &#x306E;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C7;&#x30B9;&#x7CFB;&#x7D71;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089; PCR &#x4EA4;&#x914D;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7CDE;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;PCR &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x7D14;&#x5EA6;&#x306E; DNA &#x3092;&#x6E96;&#x5099;&#x3059;&#x308B;&#x624B;&#x9806;&#x304C;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7CDE;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x304B;&#x3089; 9 &#x4EBA;&#x9593;&#x304A;&#x3088;&#x3073; 70 &#x52D5;&#x7269; &#xFF08;&#x732B;&#x3001;&#x72AC;&#x3001;&#x725B;&#x3001;&#x8C5A;&#x3001;&#x99AC;&#x3001;&#x7F8A;&#x3001;&#x30E4;&#x30AE;&#x3001;&#x9D8F;) &#x5404;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x3001;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x80AF;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x5236;&#x5FA1;&#x306A;&#x3057;&#x3001;PCR &#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x306F;&#x3001;&#x7269;&#x8CEA;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;.&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30B7;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x5E0C;&#x8584;&#x967D;&#x6027;&#x5404;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x304B;&#x3089;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C7;&#x30B9;&#x5C5E;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x8C4A;&#x304B;&#x3055;&#x3092;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x8A66;&#x91D1;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC; &#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6; &#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; 78 &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x7CDE;&#x4FBF;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x306E; 67% &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; DNA &#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x4E00;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x4EE5;&#x5916;&#x306E; 7 &#x301C; 11 &#xFF05; &#x3060;&#x3051;&#x306F;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; DNA &#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0; 12 &#x306B; 20 &#xFF05; 100 &#xFF5E; 1,000 &#x500D;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F; DNA &#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3088;&#x308A;&#x4F4E;&#x3044;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;(&#x62BD;&#x8C61; 250 &#x306E;&#x8A00;&#x8449;&#x306B;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;)

&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x7CDE;&#x4FBF;&#x6C5A;&#x67D3;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x691C;&#x51FA;&#x7528;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C7;&#x30B9; DNA &#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3002;

Bacteroides &#xC885;&#xC740; &#xC758;&#xBB34;&#xC801; anaerobes &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC124;&#xBB3C;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC744; &#xC9C0;&#xBC30; &#xD558; &#xACE0; &#xC77C;&#xBD80; &#xC218; &#xC885;&#xB9CC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xCC3D; &#xC790;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B4; &#xC218; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xBD84; &#xBCC0; &#xC624;&#xC5FC; nonhuman &#xC18C;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAD6C;&#xBCC4; &#xC720;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB294; PCR &#xB1CC;&#xAD00; Bacteroides distasonis, B. thetaiotaomicron, B. vulgatus&#xC758; 16S rRNA &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC885;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xC640; &#xAD50; &#xC7A1; &#xAC80;&#xC0C9; &#xC758;&#xB3C4; PCR &#xC81C;&#xD488; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 10 &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xC885; &#xB300;&#xD45C; 66 &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; Bacteroides &#xC885;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; PCR &#xAD50; &#xC7A1; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC30;&#xC124;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC808;&#xCC28;&#xB294; PCR&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC21C;&#xB3C4;&#xC758; DNA&#xB97C; &#xC900;&#xBE44; &#xD558; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 9 &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; 70 nonhumans (&#xACE0;&#xC591;&#xC774;, &#xAC1C;, &#xC18C;, &#xB3FC;&#xC9C0;, &#xB9D0;, &#xC591;, &#xC5FC;&#xC18C;, &#xBC0F; &#xB2ED;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC30;&#xC124;&#xBB3C;&#xC758; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC744; &#xAC01;&#xAC01; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xACE0; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xB0B4;&#xBD80; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xC5C6;&#xC774; PCR &#xC99D;&#xD3ED; &#xADF8; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xCD94;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC591;&#xC131; &#xAC01; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xB82C; &#xD76C;&#xC11D;&#xC81C; &#xCD94;&#xC815; &#xB300;&#xC0C1; Bacteroides &#xC885; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC778; &#xD48D;&#xC694;&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xB1CC;&#xAD00;-&#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC138;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; 78 &#xB610;&#xB294; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC124;&#xBB3C;&#xB85C; &#xCD94;&#xCD9C;&#xC758; 67% &#xD45C;&#xC801; DNA&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xD55C;&#xD3B8;&#xC73C;&#xB85C;, &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; nonhuman &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xB9CC; 7 ~ 11% &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xD45C;&#xC801; DNA&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. Nonhuman &#xCD94;&#xCD9C;&#xC758; 12 ~ 20%&#xB97C; &#xCD94;&#xAC00;&#xB85C; &#xD588;&#xB2E4; 100-&#xD558; 1,000 &#xBC30; DNA &#xC778; &#xAC04;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB0AE;&#xC740; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;.(&#xCD08;&#xB85D; 250 &#xB2E8;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC798;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;)

&#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xACFC; Bacteroides DNA &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC124;&#xBB3C; &#xC624;&#xC5FC; &#xD2B9;&#xC815; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3C9;&#xAC00;.

Porque obliga a Bacteroides spp. son anaerobios que dominan la flora fecal humana, y porque algunas especies pueden vivir solamente en el intestino humano, estas bacterias pueden ser &uacute;tiles para distinguir los fuentes de contaminaci&oacute;n fecal humana. Para probar esta hip&oacute;tesis, se dise&ntilde;aron iniciadores PCR espec&iacute;ficas para las secuencias del gene del rRNA 16S de Bacteroides distasonis, B. thetaiotaomicron y B. vulgatus. Hibridaci&oacute;n con sondas internos propios de cada especie fue utilizado para detectar los productos PCR previstos. Extractos de cepas de Bacteroides 66 10 especies relacionadas, fueron utilizados para confirmar la especificidad de estos ensayos de PCR-hibridaci&oacute;n. Para probar de especificidad en las heces, se desarrollaron procedimientos para preparar el ADN de pureza suficiente para PCR. Extractos de las heces de seres 9 humanos y 70 no-humanos (gatos, perros, vacas, cerdos, caballos, ovejas, cabras y pollos) eran cada uno analiz&oacute; con y sin un control positivo interno para verificar esa amplificaci&oacute;n por PCR no fue inhibida por sustancias en el extracto. Adem&aacute;s, se ensayaron diluciones seriadas de cada extracto que probaron el positivo para estimar la abundancia relativa de destino Bacteroides spp en la muestra. Seg&uacute;n el conjunto de la cartilla-sonda utilizado, 78 o 67% de los extractos fecales humanos probados ten&iacute;an altos niveles de ADN diana. Por el contrario, s&oacute;lo 7 a 11% de los extractos no-humanos probados ten&iacute;a semejantemente altos niveles de ADN diana. Un 12 a 20% adicional de los extractos no humanos ten&iacute;an niveles de blanco de ADN que fueron 100 a 1.000 veces m&aacute;s bajos que los que se encuentran en los seres humanos.(EXTRACTO TRUNCADO EN 250 PALABRAS)

Dise&ntilde;o y evaluaci&oacute;n de sondas de ADN de Bacteroides para la detecci&oacute;n espec&iacute;fica de contaminaci&oacute;n fecal humana.

&#x725B;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;BSA&#xFF09; &#x6216; T4 &#x57FA;&#x56E0; 32 &#x86CB;&#x767D; (gp32) &#x6DFB;&#x52A0;&#x5230; PCR &#x7684;&#x597D;&#x5904;&#x4E0E;&#x53CD;&#x5E94;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x542B;&#x6709;&#x6291;&#x5236;&#x6269;&#x589E;&#x7684;&#x7269;&#x8D28;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x3002;&#x800C; 10 1,000 &#x500D;&#x66F4;&#x591A; FeCl3&#x3001; &#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x3001; &#x9EC4;&#x8150;&#x9178;&#x3001; &#x8150;&#x6B96;&#x9178;&#x3001; &#x5355;&#x5B81;&#x9178;&#x6216;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x7684;&#x7CAA;&#x4FBF;&#xFF0C;&#x6DE1;&#x6C34;&#x3001; &#x6216;&#x6D77;&#x6D0B;&#x6C34;&#x88AB;&#x5B89;&#x7F6E;&#x5728;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x65F6;&#x8981;&#x4E48; 400 &#x725B;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x6BCF;&#x4E2A; microl &#x6216; 150 &#x5434;&#x5434;&#x6BCF; microl gp32 &#x88AB;&#x5217;&#x5165;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x725B;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; gp32 &#x90FD;&#x4E0D;&#x653E;&#x5FC3;&#x7684;&#x5E72;&#x6270;&#x5927;&#x5927;&#x65F6;&#x6700;&#x4F4E;&#x6291;&#x5236;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x80C6;&#x76D0;&#xFF0C;&#x80C6;&#x7EA2;&#x7D20;EDTA&#x3001; &#x6C2F;&#x5316;&#x94A0;&#x3001; &#x5341;&#x4E8C;&#x70F7;&#x57FA;&#x786B;&#x9178;&#x94A0;&#x6216;&#x6D77;&#x536B; X 100 &#x5728;&#x573A;&#x3002;&#x5229;&#x7528;&#x725B;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E; gp32 &#x4E00;&#x8D77;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x6BD4;&#x6216;&#x8005;&#x6CA1;&#x6709;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x51CF;&#x514D;&#x72EC;&#x81EA;&#x5728;&#x6700;&#x4F18;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x65E2;&#x4E0D;&#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x4E86;&#x653E;&#x5927;&#x4EFB;&#x4F55;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x4E0E;&#x725B;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x6216; T4 32 &#x57FA;&#x56E0;&#x86CB;&#x767D;&#x5728; PCR &#x6269;&#x589E;&#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x6551;&#x6D4E;&#x3002;

The benefits of adding bovine serum albumin (BSA) or T4 gene 32 protein (gp32) to PCR were evaluated with reaction mixtures containing substances that inhibit amplification. Whereas 10- to 1,000-fold more FeCl3, hemin, fulvic acids, humic acids, tannic acids, or extracts from feces, freshwater, or marine water were accommodated in PCR when either 400 ng of BSA per microl or 150 ng of gp32 per microl was included in the reactions, neither BSA nor gp32 relieved interference significantly when minimum inhibitory levels of bile salts, bilirubin, EDTA, NaCl, sodium dodecyl sulfate, or Triton X-100 were present. Use of BSA and gp32 together offered no more relief of inhibition than either alone at its optimal level, and neither protein had any noticeable effect on amplification in the absence of inhibitors.

Relief of amplification inhibition in PCR with bovine serum albumin or T4 gene 32 protein.

Les avantages de l&#39;ajout d&#39;albumine s&eacute;rique bovine (BSA) ou T4 prot&eacute;ine du g&egrave;ne 32 (gp32) &agrave; PCR ont &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;s avec les m&eacute;langes r&eacute;actionnels contenant des substances qui inhibent l&#39;amplification. Alors que 10 &agrave; 1,000 fois plus FeCl3, h&eacute;mine, acides fulviques, acides humiques, acides tanniques ou extraits de l&#39;eau eau douce ou marins de f&egrave;ces, &eacute;taient log&eacute;s dans des PCR lorsque soit 400 ng de BSA par microl ou 150 ng de gp32 par microl a &eacute;t&eacute; inclus dans les r&eacute;actions, BSA ni gp32 interf&eacute;rence soulag&eacute; significativement quand des niveaux minimums inhibitrices de la bile sels, bilirubineEDTA, NaCl, dod&eacute;cyl sulfate de sodium ou Triton X-100 &eacute;taient pr&eacute;sents. Utilisation de BSA et gp32 ensemble n&#39;offert aucun all&eacute;gement plus d&#39;inhibition, que ce soit seul &agrave; son niveau optimal, et aucune prot&eacute;ine a eu aucun effet notable sur l&#39;amplification en l&#39;absence d&#39;inhibiteurs.

Soulagement de l&#39;inhibition de l&#39;amplification PCR avec l&#39;albumine s&eacute;rique bovine ou de la prot&eacute;ine du g&egrave;ne 32 T4.

Relief der Amplifizierungshemmung in der PCR mit Rinderserumalbumin oder T4-Gen 32-Protein.

I vantaggi dell&#39;aggiunta di albumina di siero bovino (BSA) o T4 gene proteina 32 (gp32) di PCR sono stati valutati con miscele di reazione contenenti sostanze che inibiscono l&#39;amplificazione. Considerando che FeCl3 pi&ugrave; a 10 - a 1,000 volte, Emina, fulvico acidi, acidi umici, acidi tannico o estratti dall&#39;acqua, acqua dolce o Marina di feci, sono stati accomodati nella PCR quando entrambi 400 ng di BSA per microl o 150 ng di gp32 per microl &egrave; stato incluso nelle reazioni, BSA n&eacute; gp32 interferenza alleviato significativamente quando livelli minimi inibitori della bile sali, bilirubinaErano presenti EDTA, NaCl, solfato dodecilico di sodio o Triton X-100. Uso di BSA e gp32 insieme non offerto alcun sollievo pi&ugrave; di inibizione rispetto sia solo al suo livello ottima, e n&eacute; proteine ha avuto alcun effetto notevole sull&#39;amplificazione in assenza di inibitori.

Rilievo di inibizione di amplificazione di PCR con albumina di siero bovino o della proteina del gene 32 T4.

&#x30A6;&#x30B7;&#x8840;&#x6E05;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3; (BSA) &#x307E;&#x305F;&#x306F; T4 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; 32 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; &#xFF08;gp32) PCR &#x306B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x3068;&#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x7269;&#x8CEA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;10 &#x301C; 1,000 &#x500D;&#x4EE5;&#x4E0A; FeCl3, &#x30D8;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x30D5;&#x30EB;&#x30DC;&#x9178;&#x3001;&#x30D5;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7CDE;&#x4FBF;&#x3001;&#x6DE1;&#x6C34;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6D77;&#x6D0B;&#x6C34;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306F; PCR &#x3067;&#x53CE;&#x5BB9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3068;&#x304D;&#x3069;&#x3061;&#x3089; 400 microl &#x307E;&#x305F;&#x306F; 150 &#x3042;&#x305F;&#x308A; BSA &#x306E; ng ng microl &#x3042;&#x305F;&#x308A; gp32 &#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;BSA &#x3082; gp32 &#x3082;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x30DB;&#x30C3;&#x3068;&#x306E;&#x5E72;&#x6E09;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x5869;&#x80C6;&#x6C41;&#x306E;&#x6700;&#x5C0F;&#x6291;&#x5236;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3001;&#x30D3;&#x30EA;&#x30EB;&#x30D3;&#x30F3;&#x3001;EDTA&#x3001;&#x5869;&#x5316;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x3001;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0; dodecyl &#x786B;&#x9178;&#x5869;&#x3001;&#x53C8;&#x306F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C8;&#x30F3; X 100 &#x3044;&#x305F;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;BSA &#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B; gp32 &#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x63D0;&#x4F9B;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x8EFD;&#x6E1B;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x3082;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5897;&#x5E45;&#x306B;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x306F;&#x3002;

&#x30A6;&#x30B7;&#x8840;&#x6E05;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F; T4 gene 32 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092; PCR &#x3067;&#x5897;&#x5E45;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x6551;&#x6E08;&#x3002;

&#xC18C; &#xD608; &#xCCAD; &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; (BSA) &#xB610;&#xB294; T4 &#xC720;&#xC804;&#xC790; 32 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (gp32) PCR&#xC744; &#xCD94;&#xAC00;&#xC758; &#xD61C;&#xD0DD; &#xD655;&#xB300;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xC751; &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. 10-&#xD558; 1,000 &#xBC30; &#xB354; FeCl3, hemin, fulvic &#xC0B0;, humic &#xC0B0;, &#xD0C0; &#xB2CC; &#xC0B0;, &#xB610;&#xB294; &#xB300;&#xBCC0;, &#xB2F4; &#xC218;, &#xB610;&#xB294; &#xD574;&#xC591; &#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD94;&#xCD9C; PCR&#xC5D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBA74; &#xB54C; &#xC5B4;&#xB290; 400 microl &#xB610;&#xB294; 150 BSA&#xC758; ng ng microl &#xB2F9; gp32&#xC758; BSA&#xB3C4; gp32 &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC548;&#xC2EC;&#xB41C; &#xAC04;&#xC12D;&#xC744; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB54C; &#xCD5C;&#xC18C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xB2F4; &#xC999; &#xC5FC;, &#xBE4C;&#xB9AC; &#xB8E8;&#xBE48;EDTA, NaCl, &#xB77C;&#xC6B0;&#xB9B4; &#xD669;&#xC0B0; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968;, &#xB610;&#xB294; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD1A4; x100 &#xCC38;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. BSA&#xC640; &#xD568;&#xAED8; gp32&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC800;&#xD574;&#xC758; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xAD6C;&#xD638;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD63C;&#xC790; &#xC5B4;&#xB290; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC5D0; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC18C; &#xD608; &#xCCAD; &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; &#xB610;&#xB294; T4 &#xC720;&#xC804;&#xC790; 32 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; PCR &#xC99D;&#xD3ED; &#xC800;&#xD574;&#xC758; &#xAD6C;&#xD638;.

Los beneficios de la adici&oacute;n de alb&uacute;mina s&eacute;rica bovina (BSA) o 32 (gp32) de la prote&iacute;na del gen T4 a la PCR fueron evaluados con mezclas de reacci&oacute;n que contiene sustancias que inhiben la amplificaci&oacute;n. Mientras que 10 a 1.000 veces m&aacute;s FeCl3, hemina, &aacute;cidos f&uacute;lvicos, &aacute;cidos h&uacute;micos, &aacute;cidos t&aacute;nico o extractos de agua de agua dulce o Marina de heces, fueron acomodados en PCR cuando sea 400 ng de BSA por microl o 150 ng de gp32 por microl figuraba en las reacciones, BSA ni gp32 interferencia aliviado significativamente cuando m&iacute;nimas inhibitorias de la bilis sales, bilirrubinaAsistieron EDTA, NaCl, dodecil sulfato de sodio o Triton X-100. Uso de BSA y gp32 juntos no ofrecidos m&aacute;s alivio de inhibici&oacute;n que cualquiera solo en su nivel &oacute;ptimo, y ninguna prote&iacute;na ten&iacute;a alg&uacute;n efecto notable en la amplificaci&oacute;n en la ausencia de inhibidores.

Alivio de inhibici&oacute;n de la amplificaci&oacute;n de PCR con T4 gen 32 prote&iacute;na o alb&uacute;mina de suero bovino.

Per valutare la persistenza della PCR-rilevabile Bacteroides distasonis nelle acque superficiali, feci tutta umane furono dispersi nell&#39;acqua dal fiume Ohio e incubate in beute in laboratorio o in camere di diffusione in situ. Ogni giorno sono stati prelevati campioni duplicati, e materiale che stabulato a 16.000 x g &egrave; stata analizzata mediante PCR. Persistenza del DNA PCR-rilevabili da questo anaerobe dipendeva dalla temperatura e predazione, due dei fattori mostrati da altri ad influenzare la sopravvivenza dei batteri aerobi rilevato dalla cultura. B. distasonis &egrave; stato rilevato mediante PCR per almeno 2 settimane a 4 gradi C, ma solo per 4-5 giorni a 14 gradi C, 1-2 giorni a 24 gradi C e 1 giorno a 30 gradi C. In acqua filtrata o in presenza di cicloeximide, un inibitore eucariotico, persistenza a 24 gradi C &egrave; stata estesa da almeno una settimana.

Persistenza di PCR-rilevabile Bacteroides distasonis da feci umane in acqua di fiume.

PCR &#x691C;&#x51FA;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C7;&#x30B9; distasonis &#x8868;&#x9762;&#x6C34;&#x306E;&#x6C38;&#x7D9A;&#x6027;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x7CDE;&#x304B;&#x3089;&#x30AA;&#x30CF;&#x30A4;&#x30AA;&#x5DDD;&#x306E;&#x6C34;&#x306B;&#x5206;&#x6563;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B9;&#x30B3;&#x3001;&#x5B9F;&#x9A13;&#x5BA4;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x62E1;&#x6563;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D0;&#x306E; in situ &#x3067;&#x5B75;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8907;&#x3057;&#x305F;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x6BCE;&#x65E5;&#x64AE;&#x5F71;&#x3055;&#x308C;&#x3001;16,000 x g &#x3067;&#x5C0F;&#x7403;&#x5F62;&#x7D20;&#x6750; PCR &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A66;&#x91D1;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5ACC;&#x6C17;&#x6027;&#x83CC;&#x304B;&#x3089;&#x306E; PCR &#x691C;&#x51FA; DNA &#x306E;&#x6C38;&#x7D9A;&#x6027;&#x306F;&#x6E29;&#x5EA6;&#x3084;&#x6355;&#x98DF;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x6587;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x597D;&#x6C17;&#x6027;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3059;&#x8981;&#x56E0;&#x306F;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;B. distasonis PCR &#x306B;&#x3088;&#x308B; 4 &#x2103; &#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 2 &#x9031;&#x9593;&#x306F; 14 &#x2103;&#x3001;1 &#x301C; 2 &#x65E5;&#x9593; 24 &#x2103; &#x304A;&#x3088;&#x3073; 30 &#x2103; &#x3067; 1 &#x65E5;&#x3067; 4 &#x301C; 5 &#x65E5;&#x306E;&#x307F;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x308D;&#x904E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6C34;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3001;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067; 24 &#x2103; &#x3067;&#x306E;&#x6C38;&#x7D9A;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 1 &#x9031;&#x9593;&#x5EF6;&#x9577;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

PCR &#x691C;&#x51FA;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C7;&#x30B9; distasonis &#x5DDD;&#x306E;&#x6C34;&#x3067;&#x3072;&#x3068;&#x7CDE;&#x4FBF;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6C38;&#x7D9A;&#x6027;&#x3002;

&#xBB3C; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; PCR &#xAC10;&#xC9C0; Bacteroides distasonis&#xC758; &#xC9C0; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558; &#xC804;&#xCCB4; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC124;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC624;&#xD558;&#xC774;&#xC624; &#xAC15; &#xBB3C;&#xC5D0; &#xBD84;&#xC0B0; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4; &#xB610;&#xB294; &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xAE09; &#xCC54;&#xBC84; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xD06C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xD050;&#xBCA0;&#xC774; &#xD305;. &#xC911;&#xBCF5; &#xC0D8;&#xD50C; &#xB9E4;&#xC77C;, &#xCD2C;&#xC601; &#xBC0F; &#xC790;&#xB8CC; 16000 x g&#xC5D0;&#xC11C; pelleted&#xB97C; PCR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD84;&#xC11D; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; anaerobe&#xC5D0;&#xC11C; PCR &#xAC10;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; DNA&#xC758; &#xC9C0; &#xC18D;&#xC131;&#xC740; &#xC628;&#xB3C4; &#xD3EC;&#xC2DD; &#xB450; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xD638; &#xAE30;&#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC758;&#xC874; &#xD55C;&#xB2E4;. B. distasonis &#xC12D;&#xC528; 4&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 2 &#xC8FC; &#xB3D9;&#xC548; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; 14&#xB3C4; C, 24&#xB3C4; C&#xC5D0;&#xC11C; 1 ~ 2 &#xC77C; &#xBC0F; 1 &#xC77C; 30&#xB3C4; c&#xC5D0;&#xC11C; 4 ~ 5 &#xC77C;&#xB9CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; PCR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD544;&#xD130;&#xB9C1; &#xB41C; &#xBB3C; &#xB610;&#xB294; cycloheximide, &#xC9C4; &#xD575; &#xBC18;&#xC751; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC9C0; &#xC18D;&#xC131; 24&#xB3C4; C&#xC5D0;&#xC11C; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xC77C;&#xC8FC;&#xC77C; &#xC5F0;&#xC7A5; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xAC15;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC124;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; PCR &#xAC10;&#xC9C0; Bacteroides distasonis&#xC758; &#xC9C0; &#xC18D;&#xC131;.

Para evaluar la persistencia de PCR-detectable de Bacteroides distasonis en aguas superficiales, heces humanas todo se dispersar en el agua del R&iacute;o Ohio y se incubaron en frascos en el laboratorio o en c&aacute;maras de difusi&oacute;n in situ. Todos los d&iacute;as se tomaron muestras de duplicados, y material que peleteado a 16.000 x g fue analizado mediante PCR. Persistencia de ADN PCR detectables de este anaerobio depend&iacute;a de la temperatura y la depredaci&oacute;n, dos de los factores que se muestra por otros para influir en la supervivencia de las bacterias aerobias detectados por la cultura. B. distasonis fue detectado por PCR durante al menos 2 semanas a 4 grados C, pero s&oacute;lo 4 a 5 d&iacute;as a 14 grados C, 1 a 2 d&iacute;as a 24 grados C y 1 d&iacute;a a 30 grados C. En el agua filtrada o en presencia de cicloheximida, un inhibidor de eucariota, persistencia a 24 grados C se extendi&oacute; por al menos una semana.

Persistencia de PCR-detectable de Bacteroides distasonis de heces humanas en el agua del r&iacute;o.

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To evaluate the persistence of PCR-detectable Bacteroides distasonis in surface water, whole human feces were dispersed into water from the Ohio River and incubated in flasks in the laboratory or in diffusion chambers in situ. Duplicate samples were taken daily, and material that pelleted at 16,000 x g was assayed by PCR. Persistence of PCR-detectable DNA from this anaerobe depended upon temperature and predation, two of the factors shown by others to influence the survival of aerobic bacteria detected by culture. B. distasonis was detected by PCR for at least 2 weeks at 4 degrees C but for only 4 to 5 days at 14 degrees C, 1 to 2 days at 24 degrees C, and 1 day at 30 degrees C. In filtered water or in the presence of cycloheximide, a eukaryotic inhibitor, persistence at 24 degrees C was extended by at least a week.

Persistence of PCR-detectable Bacteroides distasonis from human feces in river water.

Pour &eacute;valuer la persistance des PCR d&eacute;tectables Bacteroides distasonis dans les eaux de surface, mati&egrave;res f&eacute;cales humaines enti&egrave;re ont &eacute;t&eacute; dispers&eacute;es dans l&#39;eau de la rivi&egrave;re Ohio et incub&eacute;s dans des flacons en laboratoire ou dans des chambres de diffusion in situs. Deux &eacute;chantillons ont &eacute;t&eacute; pris quotidiennement et mati&egrave;re granul&eacute;e &agrave; 16 000 x g a &eacute;t&eacute; analys&eacute;e par PCR. Persistance de PCR-ADN de ce ana&eacute;robe d&eacute;pendait de la temp&eacute;rature et de la pr&eacute;dation, deux des facteurs illustr&eacute;s par d&#39;autres pour influer sur la survie des bact&eacute;ries a&eacute;robies d&eacute;tect&eacute; par la culture. B. distasonis a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute; par PCR au moins 2 semaines &agrave; 4 degr&eacute;s C, mais seulement 4 &agrave; 5 jours &agrave; 14 degr&eacute;s C, 1 &agrave; 2 jours &agrave; 24 degr&eacute;s C et 1 journ&eacute;e &agrave; 30 degr&eacute;s C. Dans l&#39;eau filtr&eacute;e ou en pr&eacute;sence de cycloheximide, un inhibiteur de l&#39;eucaryote, persistance &agrave; 24 degr&eacute;s C a &eacute;t&eacute; prolong&eacute;e d&#39;au moins une semaine.

Carol Kreader

Sigma-Aldrich

Genome-wide Screen for miRNA Targets Using the MISSION Target ID Library