Fabrication of Amperometric Electrodes

Carbon fiber electrodes are crucial for the detection of catecholamine release from vesicles in single cells for amperometry measurements.  Here, we ...

Yale University School of Medicine

&#x91CF;&#x5B50;&#x5047;&#x8BF4;&#x8BE5;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x5728;&#x79BB;&#x6563;&#x7684;&#x5305;&#xFF0C;&#x91CF;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4E3A;&#x6765;&#x8868;&#x793A;&#x5355;&#x4E2A;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x542B;&#x91CF;&#x3002;&#x5982;&#x679C;&#x4E3A; true&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x6CE1;&#x5927;&#x5C0F;&#x5E94;&#x8BE5;&#x5F71;&#x54CD;&#x91CF;&#x5B50;&#x5927;&#x5C0F;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x5E38;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x6709;&#x5206;&#x6CCC;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5355;&#x4E00;&#x4EBA;&#x53E3;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7535;&#x955C;&#x5206;&#x6790;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E24;&#x4E2A;&#x79CD;&#x7FA4;&#x5927;&#x5C0F;&#x5206;&#x5E03;&#x662F;&#x6700;&#x6070;&#x5F53;&#x7684;&#x5F62;&#x5BB9;&#x4E24;&#x4E2A; Gaussians &#x7684;&#x603B;&#x548C;&#x3002;&#x5E73;&#x5747;&#x91CF;&#x7684;&#x5DEE;&#x522B;&#x662F; 5 &#x500D;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x662F;&#x5426;&#x5377;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5F71;&#x54CD;&#x91CF;&#x5B50;&#x5927;&#x5C0F;&#xFF0C;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x4ECE;&#x900F;&#x6027;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E; 100 microM Ca2 + &#x7528;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x5B89;&#x57F9;&#x3002;&#x91CF;&#x5B50;&#x5185;&#x5BB9;&#x5206;&#x5E03;&#x5206;&#x53D1;&#x4E0E;&#x5927;&#x578B;&#x548C;&#x5C0F;&#x578B;&#x7684;&#x4E8B;&#x4EF6; &#xFF1B;&#x9884;&#x6D4B;&#x7684;&#x5B89;&#x57F9;&#x7684;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5C3A;&#x5BF8;&#x7684;&#x5206;&#x5E03;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x7528;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x4EBA;&#x53E3;&#xFF0C;&#x5C55;&#x793A;&#x4E0D;&#x540C;&#x91CA;&#x653E;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5177;&#x6709;&#x5206;&#x6CCC;&#x6027;&#x8D28;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x81F4;&#x5BC6;&#x6838;&#x5FC3;&#x56CA;&#x6CE1; (DCV) &#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x79CD;&#x7FA4;&#x548C;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x9014;&#x5F84;&#x7684; DCV &#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x6216;&#x6216;&#x8005;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E0D;&#x540C;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x3002;

&#x9F20;&#x6807;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5177;&#x6709;&#x81F4;&#x5BC6;&#x6838;&#x5FC3;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7FA4;&#x4F53;&#x3002;

The quantal hypothesis states that neurotransmitter is released in discrete packages, quanta, thought to represent the neurotransmitter content of individual vesicles. If true, then vesicle size should influence quantal size. Although chromaffin cells are generally thought to have a single population of secretory vesicles, our electron microscopy analysis suggested two populations as the size distribution was best described as the sum of two Gaussians. The average volume difference was fivefold. To test whether this difference in volume affected quantal size, neurotransmitter release from permeabilized cells exposed to 100 microM Ca2+ was measured with amperometry. Quantal content was bimodally distributed with both large and small events; the distribution of vesicle sizes predicted by amperometry was extremely similar to those measured with electron microscopy. In addition, each population of events exhibited distinct release kinetics. These results suggest that chromaffin cells have two populations of dense core vesicles (DCV) with unique secretory properties and which may represent two distinct synthetic pathways for DCV biogenesis or alternatively they may represent different stages of biosynthesis.

Mouse chromaffin cells have two populations of dense core vesicles.

L&#39;hypoth&egrave;se quantique stipule que ce neurotransmetteur est lib&eacute;r&eacute; en paquets discrets, quanta, cens&eacute;s repr&eacute;senter le contenu de neurotransmetteur des v&eacute;sicules individuels. Si true, taille de la v&eacute;sicule doit influencer taille quantique. Bien que les cellules chromaffines sont g&eacute;n&eacute;ralement consid&eacute;r&eacute;s comme ayant une seule population de v&eacute;sicules s&eacute;cr&eacute;trices, notre analyse au microscope &eacute;lectronique a sugg&eacute;r&eacute; deux populations que la distribution de la taille a &eacute;t&eacute; d&eacute;crite comme la somme de deux gaussiennes. La diff&eacute;rence de volume moyen a &eacute;t&eacute; cinq fois. Pour v&eacute;rifier que cette diff&eacute;rence de volume affect&eacute; taille quantique, neurotransmetteur lib&eacute;ration de cellules perm&eacute;abilis&eacute;es expos&eacute;s &agrave; 100 microM Ca2 + a &eacute;t&eacute; mesur&eacute;e avec l&#39;amp&eacute;rom&eacute;trie. Contenu quantique &eacute;tait bimodale avec petits et grands &eacute;v&eacute;nements ; la distribution des tailles de v&eacute;sicule pr&eacute;vues par amp&eacute;rom&eacute;trie &eacute;tait extr&ecirc;mement semblable &agrave; ceux mesur&eacute;s au microscope &eacute;lectronique. En outre, chaque population d&#39;&eacute;v&eacute;nements une cin&eacute;tique de la lib&eacute;ration distincts. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que les cellules chromaffines ont deux populations de v&eacute;sicules de noyau dense (DCV) ayant des propri&eacute;t&eacute;s uniques de s&eacute;cr&eacute;tion et qui peut repr&eacute;senter deux voies distinctes de synth&eacute;tiques pour la biogen&egrave;se DCV ou sinon ils peuvent repr&eacute;senter les diff&eacute;rentes &eacute;tapes de la biosynth&egrave;se.

Les cellules chromaffines de souris ont deux populations de v&eacute;sicules de noyau dense.

Maus chromaffinen Zellen haben zwei Populationen von dense core vesicles.

L&#39;ipotesi quantal afferma che tale neurotrasmettitore &egrave; pubblicato in pacchetti discreti, quanta, pensati per rappresentare il contenuto di neurotrasmettitore delle vescicole singole. Se true, dimensione della vescicola dovrebbe influenzare la dimensione quantal. Sebbene le cellule cromaffini sono generalmente pensate per avere una singola popolazione di vescicole secretorie, la nostra analisi di microscopia elettronica suggerito due popolazioni come la distribuzione delle dimensioni &egrave; meglio descritta come la somma di due gaussiane. La differenza di volume medio era quintuplicato. Per verificare se questa differenza di volume interessato quantal dimensione, neurotrasmettitore rilascio da celle permeabilized esposte a 100 microM Ca2 + &egrave; stata misurata con amperometria. Quantal contenuto &egrave; stata distribuita bimodally con piccoli e grandi eventi; la distribuzione delle dimensioni della vescicola previsto da amperometria era estremamente simile a quelli misurati con microscopia elettronica. Inoltre, ogni popolazione degli eventi esposti cinetica di rilascio distinti. Questi risultati suggeriscono che le cellule cromaffini sono due popolazioni di vescicole nucleo denso (DCV) con propriet&agrave; uniche secretiva e che possono rappresentare due distinti percorsi sintetici per la biogenesi DCV o in alternativa possono rappresentare diverse fasi della biosintesi.

Le cellule cromaffini del mouse hanno due popolazioni di vescicole nucleo denso.

&#x7D20;&#x91CF;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x304C;&#x96E2;&#x6563;&#x30D1;&#x30C3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3001;&#x30AF;&#x30A9;&#x30F3;&#x30BF;&#x30E0;&#x3001;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x5185;&#x5BB9;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3067;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;True &#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x7D20;&#x91CF;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x5206;&#x6CCC;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3068;&#x601D;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x5206;&#x5E03;&#x306F; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30AC;&#x30A6;&#x30B9;&#x5206;&#x5E03;&#x306E;&#x548C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6700;&#x9AD8;&#x8AAC;&#x660E;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x3067;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x89E3;&#x6790; 2 &#x3064;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;.&#x5E73;&#x5747;&#x97F3;&#x91CF;&#x5DEE;&#x306F; 5 &#x500D;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x7D20;&#x91CF;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x3092;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9; ca 2 + &#x3057;&#x305F;&#x96FB;&#x6D41;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 100 &#x306E; microM &#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x3002;&#x7D20;&#x91CF;&#x30D0;&#x30A4;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C0;&#x30EB;&#x5927;&#x3068;&#x5C0F;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x914D;&#x5E03;&#x3055;&#x308C;&#x305F;;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x305F;&#x96FB;&#x6D41;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x306F;&#x304D;&#x308F;&#x3081;&#x3066;&#x8FD1;&#x3044;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x6CD5;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5404;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x653E;&#x51FA;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3002;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x7279;&#x6027;&#x3068;&#x82AF;&#x9846;&#x7C92; (DCV) &#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x306F; DCV &#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x660E;&#x77AD;&#x306A;&#x5408;&#x6210;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304B;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;&#x5F7C;&#x3089;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x6BB5;&#x968E;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x5834;&#x5408;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x82AF;&#x9846;&#x7C92;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Quantal &#xAC00;&#xC124; &#xADF8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xD328;&#xD0A4;&#xC9C0;, &#xCF74; &#xD0C0;, &#xAC1C;&#xBCC4; vesicles&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD;&#xAC01;&#xC5D0; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;. True &#xC778; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC18C;&#xD3EC; &#xD06C;&#xAE30; quantal &#xD06C;&#xAE30;&#xB97C; &#xC88C;&#xC6B0; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84; vesicles&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB418; &#xACE0;, &#xBE44;&#xB85D; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBD84;&#xC11D; &#xC81C;&#xC548; &#xD06C;&#xAE30; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB294; &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xB450; Gaussians&#xC758; &#xD569;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xBA85; &#xB450; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD3C9;&#xADE0; &#xBCFC;&#xB968; &#xCC28;&#xC774; &#xC624;&#xBD80;. &#xBCFC;&#xB968;&#xC774; &#xCC28;&#xC774; quantal &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; permeabilized &#xC140; 100 microM Ca2 + amperometry&#xB85C; &#xCE21;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD9C;&#xC2DC;. Quantal &#xCF58;&#xD150;&#xCE20;&#xB294; &#xBAA8;&#xB450; &#xD06C;&#xACE0; &#xC791;&#xC740; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;; &#xD568;&#xAED8; &#xBC30;&#xD3EC; bimodally amperometry&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC608;&#xCE21; &#xD55C; &#xC18C;&#xD3EC; &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE21;&#xC815;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xAC01; &#xC778;&#xAD6C; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC;&#xAC00; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC778;&#xAD6C; &#xC870;&#xBC00; &#xCF54;&#xC5B4; &#xC18C;&#xD3EC; (DCV) &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xBD84; &#xC18D;&#xC131;&#xC758; DCV &#xC18D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD569;&#xC131; &#xACBD;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB610;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB610;&#xB294; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC; &#xC870;&#xBC00; &#xCF54;&#xC5B4; vesicles&#xC758; &#xB450; &#xC778;&#xAD6C;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;.

La hip&oacute;tesis cu&aacute;ntico afirma que ese neurotransmisor se libera en paquetes discretos, quanta, pensados para representar el contenido de neurotransmisores de las ves&iacute;culas individuales. Si es true, tama&ntilde;o de la ves&iacute;cula debe influir tama&ntilde;o cu&aacute;ntico. Aunque las c&eacute;lulas cromafines generalmente se cree que tienen una sola poblaci&oacute;n de ves&iacute;culas secretoras, nuestro an&aacute;lisis de microscop&iacute;a electr&oacute;nica sugiri&oacute; dos poblaciones como la distribuci&oacute;n de tama&ntilde;o se describe mejor como la suma de dos Gaussianas. La diferencia de volumen promedio fue cinco veces. Para comprobar que esa diferencia de volumen afectado tama&ntilde;o cu&aacute;ntico, neurotransmisor liberarse c&eacute;lulas permeabilized expuestas a 100 microM Ca2 + se midi&oacute; con Amperometr&iacute;a. Contenido cu&aacute;ntico bimodally fue distribuido con eventos grandes y peque&ntilde;os; la distribuci&oacute;n de tama&ntilde;os de ves&iacute;cula predicha por Amperometr&iacute;a fue muy similar a los medidos con microscopia electr&oacute;nica. Adem&aacute;s, cada poblaci&oacute;n de eventos exhibi&oacute; cin&eacute;ticas de liberaci&oacute;n distinto. Estos resultados sugieren que c&eacute;lulas cromafines tienen dos poblaciones de ves&iacute;culas de n&uacute;cleo denso (DCV) con propiedades secretoras &uacute;nicas y que pueden representar dos distintas v&iacute;as sint&eacute;ticas para la biog&eacute;nesis DCV o alternativamente pueden representar diferentes etapas de la bios&iacute;ntesis.

Las c&eacute;lulas cromafines de rat&oacute;n tienen dos poblaciones de ves&iacute;culas de n&uacute;cleo denso.

&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D; 3 &#xFF08;AP-3&#xFF09; &#x662F;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5916;&#x5957;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x6784;&#x6210;&#x590D;&#x6742;&#x7684; heterotetrameric&#x3002;&#x4E24;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684; AP 3 &#x4E9A;&#x57FA;&#x662F;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x673A;&#x6784;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5927;&#x8111;&#x7684;&#x8868;&#x793A;&#x4E9A;&#x57FA; AP 3 &#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x6709;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x4E3A;&#x7279;&#x5B9A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5982;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; AP 3 &#x4E9A;&#x57FA;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BE5;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684; AP 3 &#x7ED3;&#x679C;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x9F20;&#x6807;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x542B;&#x91CF;&#x663E;&#x8457;&#x4E0B;&#x964D;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x56CA;&#x6CE1; &#xFF08;&#x91CF;&#x5B50;&#x5927;&#x5C0F;&#xFF09;&#xFF0C;&#x800C;&#x5220;&#x9664;&#x7684;&#x6240;&#x6709; AP 3 &#x4EA7;&#x751F;&#x6025;&#x5267;&#x589E;&#x52A0;&#x91CF;&#x5B50;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F; &#xFF1B;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D8;&#x5316;&#x90FD;&#x4E0E;&#x81F4;&#x5BC6;&#x6838;&#x5FC3;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5927;&#x5C0F;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x76F8;&#x5173;&#x3002;AP 3 &#x663E;&#x793A;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7F51;&#x7EDC;&#x548C;&#x5206;&#x6CCC;&#x56CA;&#x6CE1;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0D;&#x6210;&#x719F;&#xFF0C;&#x5B83;&#x53EF;&#x80FD;&#x53C2;&#x4E0E;&#x795E;&#x7ECF;&#x5206;&#x6CCC;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;

&#x5927;&#x81F4;&#x5BC6;&#x6838;&#x5FC3;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5377;&#x53CA;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x542B;&#x91CF;&#x7684;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D; 3 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;

Adaptor protein 3 (AP-3) is a vesicle-coat protein that forms a heterotetrameric complex. Two types of AP-3 subunits are found in mammalian cells. Ubiquitous AP-3 subunits are expressed in all tissues of the body, including the brain. In addition, there are neuronal AP-3 subunits that are thought to serve neuron-specific functions such as neurotransmitter release. In this study, we show that overexpression of neuronal AP-3 in mouse chromaffin cells results in a striking decrease in the neurotransmitter content of individual vesicles (quantal size), whereas deletion of all AP-3 produces a dramatic increase in quantal size; these changes were correlated with alterations in dense-core vesicle size. AP-3 appears to localize in the trans-Golgi network and possibly immature secretory vesicles, where it may be involved in the formation of neurosecretory vesicles.

Regulation of large dense-core vesicle volume and neurotransmitter content mediated by adaptor protein 3.

Prot&eacute;ine adaptatrice 3 (AP-3) est une prot&eacute;ine de manteau-v&eacute;sicule qui forme un h&eacute;t&eacute;rot&eacute;tram&egrave;re complexe. Deux types de sous-unit&eacute;s AP-3 sont trouvent dans les cellules de mammif&egrave;res. Omnipr&eacute;sentes AP-3 sous-unit&eacute;s sont exprim&eacute;es dans tous les tissus du corps, y compris le cerveau. En outre, il y a des neurones AP-3 sous-unit&eacute;s qui sont cens&eacute;es servir de neurone-sp&eacute;cifique fonctions telles que la lib&eacute;ration des neurotransmetteurs. Dans cette &eacute;tude, nous montrons que la surexpression de neurones AP-3 dans les r&eacute;sultats de cellules chromaffines de souris une diminution frappante dans le contenu de neurotransmetteur des v&eacute;sicules individuels (taille quantique), consid&eacute;rant que la suppression de tous les AP-3 produit une augmentation dramatique de taille quantique ; ces changements sont en corr&eacute;lation avec des changements dans la taille de la v&eacute;sicule de noyau dense. AP-3 appara&icirc;t &agrave; localiser dans le r&eacute;seau trans-Golgi et v&eacute;sicules s&eacute;cr&eacute;trices peut-&ecirc;tre immatures, o&ugrave; elle pourrait &ecirc;tre impliqu&eacute;e dans la formation de v&eacute;sicules neuros&eacute;cr&eacute;trices.

R&egrave;glement du volume de grandes v&eacute;sicules noyau dense et neurotransmetteur contenu m&eacute;di&eacute;e par la prot&eacute;ine adaptatrice 3.

Adapterprotein 3 (AP-3) ist ein Vesikel-Mantel-Protein, das eine komplexe Heterotetrameric bildet. Zwei Arten von AP-3 Untereinheiten sind in den S&auml;ugetier-Zellen gefunden. Allgegenw&auml;rtige AP-3 Untereinheiten werden in allen Geweben des K&ouml;rpers, einschlie&szlig;lich des Gehirns ausgedr&uuml;ckt. Dar&uuml;ber hinaus gibt es neuronale AP-3 Untereinheiten, die man Neuron-spezifische Funktionen wie Neurotransmitter-Freisetzung zu dienen. In dieser Studie zeigen wir, dass eine &Uuml;berexpression von neuronalen AP-3 in der Maus chromaffin Zellen f&uuml;hrt einen markanten R&uuml;ckgang der Neurotransmitter-Inhalt der einzelnen Bl&auml;schen (quantal Gr&ouml;&szlig;e), w&auml;hrend die L&ouml;schung aller AP-3 einen dramatischen Anstieg der quantal Gr&ouml;&szlig;e produziert; Diese &Auml;nderungen wurden mit &Auml;nderungen in der dichten Kern Vesikel Gr&ouml;&szlig;e korreliert. AP-3 erscheint im Trans-Golgi-Netzwerk und m&ouml;glicherweise unreifen sekretorischen Vesikeln, lokalisieren, wo kann es zur Bildung von neurosecretory Vesikeln beteiligt sein.

Verordnung des gro&szlig;en dichten Kern Vesikel Volumen und Neurotransmitter Inhalt von Adapterprotein 3 vermittelt.

Proteina dell&#39;adattatore 3 (3-AP) &egrave; una proteina di vescicola-cappotto che forma un complesso heterotetrameric. Due tipi di subunit&agrave; AP-3 si trovano nelle cellule dei mammiferi. Onnipresente AP-3 subunit&agrave; sono espresse in tutti i tessuti del corpo, compreso il cervello. Inoltre, ci sono un neurone AP-3 subunit&agrave; che sono pensate per servire le funzioni specifiche del neurone come rilascio di neurotrasmettitore. In questo studio, mostriamo che sovraespressione di un neurone AP-3 in mouse cellule cromaffini determina una diminuzione notevole nel contenuto del neurotrasmettitore delle vescicole singole (dimensione quantal), considerando che la soppressione di tutte le AP-3 produce un aumento drammatico nella dimensione quantal; questi cambiamenti sono stati correlati con alterazioni nella dimensione della vescicola nucleo denso. AP-3 sembra localizzare nella rete trans-Golgi e possibilmente immature vescicole secretorie, dove possono essere coinvolti nella formazione di vescicole neurosecretorie.

Regolazione del volume grande vescicola nucleo denso e neurotrasmettitore contenuto mediato dalla proteina dell&#39;adattatore 3.

&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 3 &#xFF08;ap &#x901A;&#x4FE1;-3) &#x8907;&#x96D1;&#x306A; heterotetrameric &#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AP 3 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E; 2 &#x7A2E;&#x985E;&#x306F;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9; AP 3 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x8133;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x4F53;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x653E;&#x51FA;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; AP 3 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x524A;&#x9664;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; AP 3 &#x751F;&#x6210;&#x7D20;&#x91CF;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x795E;&#x7D4C; AP 3 &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x500B;&#x3005; &#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB; (&#x7D20;&#x91CF;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;) &#x3067;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x306E;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3067;&#x7D50;&#x679C;;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x5BC6;&#x306A;&#x30B3;&#x30A2; &#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;AP 3 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3068;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x672A;&#x719F;&#x306A;&#x5206;&#x6CCC;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3067;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x6240;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x795E;&#x7D4C;&#x5206;&#x6CCC;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5927;&#x5BC6;&#x306A;&#x30B3;&#x30A2; &#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB; &#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 3 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3002;

&#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 3 (AP 3) &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; heterotetrameric&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xAE30; &#xC678; &#xD22C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xC774;&#xB2E4;. AP 3 subunits&#xC758; &#xB450; &#xC885;&#xB958;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xB1CC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC2E0;&#xCCB4;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xB294; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; AP 3 subunits &#xD45C;&#xD604; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C; &#xB4F1; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAD00;&#xB828; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB418;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; AP 3 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB294;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC2E0;&#xACBD; AP 3&#xC758; &#xADF8; overexpression &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xAC10;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC18C;&#xD3EC; (quantal &#xD06C;&#xAE30;)&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; AP 3&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C; quantal &#xD06C;&#xAE30;;&#xC5D0; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC00; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xC870;&#xBC00; &#xCF54;&#xC5B4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xD06C;&#xAE30; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; &#xBBF8;&#xC219;&#xD55C; &#xBD84; &#xC18C;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; AP 3 &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4; neurosecretory vesicles&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD070; &#xC870;&#xBC00; &#xCF54;&#xC5B4; &#xAE30; &#xBCFC;&#xB968; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 3 &#xC911;&#xC7AC; &#xADDC;&#xC815;.

Prote&iacute;na adaptadora 3 (AP-3) es una prote&iacute;na de ves&iacute;cula-capa que se forma un complejo de heterotetram&eacute;rico. Dos tipos de subunidades de AP-3 se encuentran en c&eacute;lulas de mam&iacute;feros. Ubicuas AP-3 subunidades se expresan en todos los tejidos del cuerpo, incluyendo el cerebro. Adem&aacute;s, hay neuronales subunidades AP-3 que se cree que sirven enolase funciones tales como la liberaci&oacute;n de neurotransmisores. En este estudio demostramos que la sobreexpresi&oacute;n de neuronal AP-3 en resultados de c&eacute;lulas cromafines de rat&oacute;n en una notable disminuci&oacute;n en el contenido de neurotransmisores de las ves&iacute;culas individuales (tama&ntilde;o cu&aacute;ntico), mientras que la eliminaci&oacute;n de los AP-3 produce un aumento espectacular en tama&ntilde;o cu&aacute;ntico; Estos cambios fueron correlacionados con alteraciones en el tama&ntilde;o de la ves&iacute;cula de n&uacute;cleo denso. AP-3 parece localizar en la red de trans-Golgi y ves&iacute;culas secretoras posiblemente inmaduras, donde puede estar implicado en la formaci&oacute;n de ves&iacute;culas neurosecretores.

Regulaci&oacute;n del volumen de grandes ves&iacute;culas de n&uacute;cleo denso y neurotransmisor contenido mediada por la prote&iacute;na adaptadora 3.

&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x662F;&#x9661;&#x5CED;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x6D53;&#x5EA6; &#xFF08;&#x91CA;&#x653E;&#x5730;&#x70B9; [Ca(2+)](i))&#x3002;&#x7ECF;&#x632F;&#x5E45;&#x548C;&#x65F6;&#x95F4;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x6307;&#x5B9A;&#x3002;&#x7ECF;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#xFF0C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x56CA;&#x6CE1; exocytosed &#x6BCF;&#x4E2A;&#x4E2A;&#x522B;&#x7684;&#x56CA;&#x6CE1;&#x91CA;&#x653E;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x7684;&#x6B3E;&#x9879;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x3002;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x523A;&#x6FC0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6765;&#x6539;&#x53D8;&#x7ECF;&#x6F14;&#x793A;&#x6587;&#x7A3F;&#x5728;&#x91CA;&#x653E;&#x5730;&#x70B9;&#x3002;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;digitonin &#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x589E;&#x9AD8;&#x8DDF;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x7ECF;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x7684;&#x5927;&#x7EDF;&#x4E00;&#x5168;&#x7403;&#x9AD8;&#x7A0B;&#x4E3A; [Ca(2+)](i)&#xFF0C;&#x800C;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x5C3C;&#x53E4;&#x4E01;&#xFF0C;depolarizes &#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x7ECF;&#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x4EA7;&#x751F;&#x66F4;&#x591A;&#x9636;&#x6BB5;&#x6027;&#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x53D8;&#x5316; [Ca(2+)](i)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B89;&#x57F9;&#x6765;&#x76D1;&#x89C6;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x4E24;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x5F15;&#x8D77;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x6BCF;&#x5927;&#x81F4;&#x5BC6;&#x6838;&#x5FC3;&#x56CA;&#x6CE1; (LDCVs) &#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x80DE;&#x3002;&#x5373;&#x4FBF;&#x5982;&#x6B64;&#xFF0C;&#x53D1;&#x5E03;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x662F;&#x5F88;&#x4E0D;&#x4E00;&#x6837;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x523A;&#x6FC0; &#xFF1B;&#x70DF;&#x78B1;&#x8BF1;&#x53D1;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x5F88;&#x5C0F;&#xFF0C;&#x901F;&#x5EA6;&#x6162;&#xFF0C;&#x800C; digitonin &#x4E8B;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x5728;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5927;&#x548C;&#x5FEB;&#x901F;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x77AC;&#x53D8;&#x5F00;&#x653E;&#x878D;&#x5408;&#x6BDB;&#x5B54;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A;&quot;&#x811A;&quot;&#xFF0C;&#x662F;&#x57FA;&#x672C;&#x4E0A;&#x4E0D;&#x5B58;&#x5728; digitonin &#x523A;&#x6FC0;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#x76F8;&#x5F53;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x5C3C;&#x53E4;&#x4E01;&#x523A;&#x6FC0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x5373;&#x4F7F;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5F3A;&#x523A;&#x6FC0;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x5B83;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x7ECF;&#x5404;&#x7EA7;&#x53D1;&#x5E03;&#x7F51;&#x7AD9;&#x878D;&#x5408;&#x4E86;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x6709;&#x5F88;&#x591A;&#x6C34;&#x6CE1;&#x548C;&#x4E2A;&#x522B;&#x56CA;&#x6CE1;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;

&#x91CF;&#x5B50;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

Neurotransmitter release is a steep function of the intracellular calcium ion concentration ([Ca(2+)](i)) at the release sites. Both the Ca(2+) amplitude and the time course appear to be important for specifying neurotransmitter release. Ca(2+) influx regulates the number of vesicles exocytosed as well as the amount of neurotransmitter each individual vesicle releases. In our study we stimulated mouse chromaffin cells in two different ways to alter Ca(2+) presentation at the release sites. One method, digitonin permeabilization followed by exposure to Ca(2+), allows for a large uniform global elevation of [Ca(2+)](i), whereas the second method, application of nicotine, depolarizes chromaffin cells and activates voltage-dependent Ca(2+) channels, thereby producing more phasic and localized changes in [Ca(2+)](i). Using amperometry to monitor catecholamine release, we show that both kinds of stimuli elicit the exocytosis of similar quantities of neurotransmitter per large dense core vesicles (LDCVs) released. Even so, the release process was quite different for each stimulus; nicotine-elicited events were small and slow, whereas digitonin events were, in comparison, large and fast. In addition, the transient opening of the fusion pore, called the "foot," was essentially absent in digitonin-stimulated cells, but was quite common in nicotine-stimulated cells. Thus even though both strong stimuli used in this study elicited the release of many vesicles it appears that the differences in the Ca(2+) levels at the release sites were key determinants for the fusion and release of individual vesicles.

Stimulus-dependent alterations in quantal neurotransmitter release.

La lib&eacute;ration des neurotransmetteurs raide d&eacute;pend de la concentration en ions calcium intracellulaire ([Ca(2+)](i)) dans les sites. Fois l&#39;amplitude de le Ca(2+) et le d&eacute;cours temporel semblent &ecirc;tre importants pour la sp&eacute;cification de la lib&eacute;ration des neurotransmetteurs. Ca(2+) afflux r&eacute;gule le nombre de v&eacute;sicules exocytosed ainsi que la quantit&eacute; de neurotransmetteur que lib&egrave;re chaque v&eacute;sicule individuel. Dans notre &eacute;tude, nous avons stimul&eacute; les cellules chromaffines de souris de deux mani&egrave;res diff&eacute;rentes de modifier la pr&eacute;sentation de Ca(2+) dans les sites. Une seule m&eacute;thode, perm&eacute;abilisation digitonine suivie d&#39;une exposition &agrave; Ca(2+), permet une grande &eacute;l&eacute;vation globale uniforme de [Ca(2+)](i), tandis que la seconde m&eacute;thode, application de nicotine, d&eacute;polarise les cellules chromaffines et active les canaux Ca(2+) voltage-d&eacute;pendants, produisant ainsi des changements plus phasiques et localis&eacute;es dans [Ca(2+)](i). Utilisation amp&eacute;rom&eacute;trie pour surveiller la lib&eacute;ration de cat&eacute;cholamines, nous montrons que les deux types de stimuli provoquer l&#39;exocytose des quantit&eacute;s similaires de neurotransmetteur par des v&eacute;sicules de grand noyau dense (LDCVs) lib&eacute;r&eacute;. Malgr&eacute; cela, le processus de lib&eacute;ration &eacute;tait tr&egrave;s diff&eacute;rent pour chaque stimulus ; la nicotine-suscit&eacute; des &eacute;v&eacute;nements &eacute;taient petits et lents, alors que digitonine &eacute;v&eacute;nements ont &eacute;t&eacute;, &agrave; titre de comparaison, grand et rapide. En outre, l&#39;ouverture transitoire du pore de fusion, appel&eacute; le &laquo; pied &raquo;, a &eacute;t&eacute; essentiellement absente dans les cellules stimul&eacute;es par la digitonine, mais &eacute;tait assez fr&eacute;quent dans les cellules stimul&eacute;es par la nicotine. Donc m&ecirc;me si les deux stimuli forts utilis&eacute;es dans cette &eacute;tude a suscit&eacute; la publication de nombreuses v&eacute;sicules, qu&#39;il appara&icirc;t que les diff&eacute;rences dans les Ca(2+) les niveaux dans les sites ont &eacute;t&eacute; des facteurs d&eacute;terminants pour la fusion et la lib&eacute;ration des v&eacute;sicules individuels.

Alt&eacute;rations li&eacute;es &agrave; la stimulation de la lib&eacute;ration des neurotransmetteurs quantique.

Neurotransmitter-Release ist eine steile Funktion des intrazellul&auml;ren Calcium-Konzentration ([Ca(2+)](i)) an den Standorten der Freigabe. Die Amplitude der Ca(2+) und den zeitlichen Verlauf anscheinend wichtig f&uuml;r die Angabe der Neurotransmitter-Freisetzung. Ca(2+) Zustrom regelt die Anzahl der Bl&auml;schen exocytosed sowie die Menge der Neurotransmitter, die jede einzelne Vesikel freigibt. In unserer Studie befl&uuml;gelt wir Maus chromaffin Zellen auf zwei verschiedene Arten, Ca(2+) Pr&auml;sentation an den Standorten der Ver&ouml;ffentlichung zu &auml;ndern. Eine Methode, Digitonin Permeabilization gefolgt von Exposition gegen&uuml;ber Ca(2+), erm&ouml;glicht eine gro&szlig;e einheitliche globale Erh&ouml;hung von [Ca(2+)](i), w&auml;hrend die zweite Methode, Anwendung von Nikotin, chromaffin Zellen depolarizes und Spannung-abh&auml;ngigen Ca(2+) Kan&auml;le aktiviert, damit produzieren phasische und lokalisierte &Auml;nderungen in [Ca(2+)](i). Verwenden Amperometry zum &Uuml;berwachen von Katecholamin-Freisetzung, zeigen wir, dass beide Arten von Reize die Exozytose &auml;hnliche Mengen von Neurotransmitter pro gro&szlig;em dichten Kern Bl&auml;schen (LDCVs entlocken) ver&ouml;ffentlicht. Trotzdem war der Release-Prozess f&uuml;r jede Anregung ganz anders; Nikotin-entlockt Ereignisse waren klein und langsam, w&auml;hrend Digitonin Ereignisse, im Vergleich, stark und schnell waren. Dar&uuml;ber hinaus war die vor&uuml;bergehende &Ouml;ffnung der Verschmelzung Pore, genannt &quot;Fu&szlig;&quot;, im wesentlichen abwesend in Digitonin stimuliert Zellen, wurde aber durchaus &uuml;blich in Nikotin stimuliert Zellen. So l&ouml;ste, obwohl beide starke Reize, die in dieser Studie verwendet, die Freisetzung von vielen Bl&auml;schen, scheint es, dass die Unterschiede in den Ca(2+) Ebenen an den Standorten der Ver&ouml;ffentlichung wurden wichtige Determinanten f&uuml;r die Fusion und die Freigabe von einzelnen Bl&auml;schen.

Reiz-abh&auml;ngige &Auml;nderungen in quantal Neurotransmitter-Version.

Rilascio di neurotrasmettitore &egrave; una ripida funzione della concentrazione di ioni di calcio intracellulare ([Ca(2+)](i)) presso i siti di rilascio. Sia l&#39;ampiezza di Ca(2+) e il corso del tempo sembrano essere importanti per la specifica di rilascio del neurotrasmettitore. Afflusso CA(2+) regola il numero di vescicole exocytosed cos&igrave; come la quantit&agrave; di neurotrasmettitore che rilascia ogni vescicola individuo. Nel nostro studio abbiamo stimolato le cellule cromaffini del mouse in due modi diversi di alter Ca(2+) presentazione presso i siti di rilascio. Un metodo, digitonin permeabilization seguita da esposizione a Ca(2+), permette una grande elevazione uniforme globale di [Ca(2+)](i), mentre il secondo metodo, applicazione di nicotina, depolarizes cellule cromaffini e attiva i canali Ca(2+) voltaggio-dipendenti, producendo cos&igrave; pi&ugrave; modifiche fasiche e localizzate in [Ca(2+)](i). Utilizzando amperometria per monitorare il rilascio delle catecolamine, mostriamo che entrambi i tipi di stimoli suscitano l&#39;esocitosi di simili quantit&agrave; di neurotrasmettitore per vescicole grande nucleo denso (LDCVs) rilasciato. Anche cos&igrave;, il processo di rilascio &egrave; stata abbastanza diverso per ogni stimolo; eventi ha suscitato nicotina erano piccole e lenta, mentre gli eventi digitonin erano, in confronto, grande e veloce. Inoltre, l&#39;apertura transitoria del poro di fusione, chiamato il &quot;piede&quot;, era essenzialmente assente nelle cellule digitonin-stimolata, ma era abbastanza comune nelle cellule stimolate da nicotina. Cos&igrave; anche se entrambi forti stimoli utilizzati in questo studio suscitato il rilascio di numerose vescicole, che sembra che le differenze tra i Ca(2+) livelli presso i siti di rilascio sono stati determinanti per la fusione e il rilascio di vescicole singole.

Stimolo-dipendenti da alterazioni nel rilascio di neurotrasmettitore quantal.

&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x653E;&#x51FA;&#x3067;&#x3059;&#x6025;&#x306A;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x6FC3;&#x5EA6; ([Ca(2+)](i)) &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x3068;&#x6642;&#x9593;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x306F;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3092;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x91CF;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;exocytosed &#x5C0F;&#x80DE;&#x6570;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x30D7;&#x30EC;&#x30BC;&#x30F3;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;1 &#x3064;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x30B8;&#x30AE;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x900F;&#x904E;&#x53EF;&#x80FD;&#x3001;&#x5927;&#x578B;&#x306E;&#x5747;&#x4E00;&#x306A;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x6A19;&#x9AD8;&#x3092;&#x7528; [&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3001;2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x3057;&#x3001;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3088;&#x308A;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3002;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3057;&#x305F;&#x96FB;&#x6D41;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x5927;&#x82AF;&#x9846;&#x7C92; (LDCVs) &#x3042;&#x305F;&#x308A;&#x306E;&#x4F3C;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x91CF;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x51FA;&#x3059;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x3046;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x3066;&#x3082;&#x3001;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9; &#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x5404;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;;&#x30B8;&#x30AE;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3; &#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x304B;&#x3064;&#x9AD8;&#x901F;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x8A98;&#x767A;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x3068;&#x9045;&#x3044;&#x3001;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x300C;&#x8DB3;&#x300D;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x878D;&#x5408;&#x7D30;&#x5B54;&#x306E;&#x904E;&#x6E21;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x4F11;&#x3093;&#x3060;&#x30B8;&#x30AE;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x523A;&#x6FC0;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x523A;&#x6FC0;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5F37;&#x3044;&#x523A;&#x6FC0;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x30AD;&#x30FC;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x8A98;&#x767A;&#x3002;

&#x7D20;&#x91CF;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x5909;&#x5316;&#x3002;

&#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC740; &#xAC00;&#xD30C;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xC774;&#xC628; &#xB18D;&#xB3C4; ([Ca(2+)](i)) &#xC790;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C;. Ca(2+) &#xC9C4;&#xD3ED; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC04; &#xCF54;&#xC2A4; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83; &#xAC19;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ca(2+) &#xC720;&#xC785; &#xC870;&#xC808; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C;, &#xAC01; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xAE30;&#xB97C; &#xD574;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xC591;&#xC744; exocytosed &#xC18C;&#xD3EC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Ca(2+) &#xD504;&#xB808; &#xC820; &#xD14C;&#xC774; &#xC158; &#xC790;&#xB8CC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC; &#xC790;&#xADF9;. &#xD55C; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740;, &#xB4A4;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; Ca(2+), digitonin permeabilization&#xC758; &#xD070; &#xADE0;&#xC77C; &#xD55C; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xC0C1;&#xC2B9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218; [Ca(2+)](i), &#xBC18;&#xBA74; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;, &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC; depolarizes &#xBC0F; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, [ca(2+)](i)&#xC5D0;&#xC11C; &#xB354; phasic &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368;. Amperometry&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE74; &#xD14C; &#xCF5C; &#xC544;&#xBBFC; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xB450; &#xC885;&#xB958; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD558; &#xC5EC; &#xD070; &#xC870;&#xBC00; &#xCF54;&#xC5B4; &#xC18C;&#xD3EC; (LDCVs) &#xB2F9; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC591;&#xC758; exocytosis &#xC720;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC5EC;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, &#xAC01; &#xC790;&#xADF9;;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB2EC;&#xB790;&#xB2E4; digitonin &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD06C;&#xACE0; &#xBE60;&#xB978; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBA74; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4; elicited &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xC791;&#xACE0; &#xB290;&#xB9B0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &quot;&#xBC1C;&quot; &#xC774;&#xB77C;&#xB294; &#xD4E8;&#xC804; &#xAE30; &#xACF5;&#xC758; &#xC784;&#xC2DC; &#xAC1C;&#xBC29; &#xD588;&#xB2E4; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0; &#xC11D; &#xC140; digitonin &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xC788;&#xC5C8;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAF64; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4; &#xC790;&#xADF9; &#xC140;&#xC5D0;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBE44;&#xB85D; &#xBAA8;&#xB450; &#xAC15;&#xD55C; &#xC790;&#xADF9;&#xC744;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xB9CE;&#xC740; &#xC18C;&#xD3EC;&#xB294; ca(2+)&#xC758; &#xCC28;&#xC774;&#xC810; &#xC735;&#xD569;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB808;&#xBCA8; &#xD45C;&#xC2DC;&#xC758; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; elicited.

Quantal &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC790;&#xADF9; &#xC885;&#xC18D; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Liberaci&oacute;n de neurotransmisores es una funci&oacute;n escarpada de la concentraci&oacute;n de iones de calcio intracelular ([Ca(2+)](i)) en los sitios de liberaci&oacute;n. Tanto la amplitud de la CA y el curso del tiempo parecen ser importantes para especificar la liberaci&oacute;n de neurotransmisores. CA afluencia regula el n&uacute;mero de ves&iacute;culas exocytosed as&iacute; como la cantidad de neurotransmisor que libera cada ves&iacute;cula individual. En nuestro estudio nos estimula las c&eacute;lulas cromafines de rat&oacute;n de dos maneras diferentes para modificar la presentaci&oacute;n de CA en los sitios de lanzamiento. Un m&eacute;todo, permeabilizaci&oacute;n de digitonin seguida por la exposici&oacute;n a CA, permite una gran elevaci&oacute;n global uniforme de [Ca(2+)](i), mientras que el segundo m&eacute;todo, aplicaci&oacute;n de la nicotina, despolarizan las c&eacute;lulas cromafines y activa los canales de CA voltaje dependientes, produciendo m&aacute;s cambios f&aacute;sicos y localizados en [Ca(2+)](i). Con Amperometr&iacute;a para supervisar la liberaci&oacute;n de catecolaminas, mostramos que ambos tipos de est&iacute;mulos provocan la exocitosis de cantidades similares de neurotransmisor por las ves&iacute;culas de n&uacute;cleo denso grande (LDCVs) lanzado. A&uacute;n as&iacute;, el proceso de liberaci&oacute;n fue diferente para cada est&iacute;mulo; nicotina-sacados de eventos eran peque&ntilde;os y lentos, mientras que digitonin eventos eran, en comparaci&oacute;n, grande y r&aacute;pido. Adem&aacute;s, la apertura transitoria del poro de la fusi&oacute;n, llamado el &quot;pie&quot;, fue esencialmente ausente en las c&eacute;lulas digitonin-estimulado, pero fue bastante com&uacute;n en c&eacute;lulas de nicotina-estimulado. As&iacute; aunque ambos fuertes est&iacute;mulos utilizados en este estudio produce la liberaci&oacute;n de ves&iacute;culas muchos parece ser que las diferencias en la CA los niveles en los sitios de lanzamiento fueron determinantes para la fusi&oacute;n y la liberaci&oacute;n de ves&iacute;culas individuales.

Est&iacute;mulo dependiente alteraciones en la liberaci&oacute;n de neurotransmisores cu&aacute;ntico.

&#x80DE;&#x540E;, &#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x901A;&#x8FC7;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x5730;&#x68C0;&#x7D22;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x5728;&#x5C06;&#x6765;&#x91CD;&#x7528;&#x8F6E;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x7A81;&#x89E6;&#x7801;&#x5934;&#x53E6;&#x5916;&#x6267;&#x884C;&#x6279;&#x91CF;&#x5927;&#x819C;&#x56CA;&#x5185;&#x7684;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5927;&#x5BB9;&#x91CF;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x6BD4;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x5C11;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x52A0;&#x4EE5;&#x901A;&#x5E38;&#x9488;&#x5BF9;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5982;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x4E00;&#x4E9B;&#x8865;&#x836F;&#x529F;&#x80FD;&#x533A;&#x7C7B;&#x578B;&#x7A81;&#x89E6;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x91CA;&#x653E;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x5C55;&#x793A;&#x5927; endosomes &#x5F62;&#x6210;&#x540E;&#x5F3A;&#x548C;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x63A5;&#x53D7;&#x523A;&#x6FC0;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7684;&#x53CC;&#x6781;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x80DE;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5982;&#x4F55;&#x53EF;&#x80FD;&#x5C06;&#x8BEF;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x8FD4;&#x56DE;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6F14;&#x793A;&#x7A81;&#x89E6;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x4E0D;&#x662F;&#x53EA;&#x6709;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x7684;&#x82EF;&#x4E59;&#x70EF;&#x67D3;&#x6599;&#x67D3;&#x8272;&#x548C;&#x7ECF;&#x5386;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x80DE;&#x3002;

Endosomes &#x91D1;&#x9C7C;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7684;&#x53CC;&#x6781;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x523A;&#x6FC0;&#x80DE;&#x5410;&#x3002;

After exocytosis, synaptic vesicle components are selectively retrieved by clathrin-mediated endocytosis and then re-used in future rounds of transmitter release. Under some conditions, synaptic terminals in addition perform bulk endocytosis of large membranous sacs. Bulk endocytosis is less selective than clathrin-mediated endocytosis and probably internalizes components normally targeted to the plasma membrane. Nonetheless, this process plays a major role in some tonic ribbon-type synapses, which release neurotransmitter for prolonged periods of time. We show here, that large endosomes formed after strong and prolonged stimulation undergo stimulated exocytosis in retinal bipolar neurons. The result suggests how cells might return erroneously internalized components to the plasma membrane, and also demonstrates that synaptic vesicles are not the only neuronal organelle that stains with styryl dyes and undergoes stimulated exocytosis.

Stimulated exocytosis of endosomes in goldfish retinal bipolar neurons.

Apr&egrave;s exocytose, composants de v&eacute;sicules synaptiques sont s&eacute;lectivement r&eacute;cup&eacute;r&eacute;s par endocytose clathrine et alors r&eacute;utilis&eacute; &agrave; l&#39;avenir des s&eacute;ries de sortie de l&#39;&eacute;metteur. Sous certaines conditions, les terminaux synaptiques en outre effectuer endocytose en vrac de gros sacs membraneux. L&#39;endocytose en vrac est moins s&eacute;lectif que l&#39;endocytose clathrine et probablement int&eacute;riorise composants normalement destin&eacute;s &agrave; la membrane plasmique. N&eacute;anmoins, ce processus joue un r&ocirc;le majeur dans certaines synapses de ruban de type tonique, qui lib&egrave;rent des neurotransmetteurs pendant de longues p&eacute;riodes de temps. Nous montrons ici, que des endosomes grands form&eacute; apr&egrave;s une stimulation forte et prolong&eacute;e subissent une exocytose stimul&eacute;e dans les neurones bipolaires r&eacute;tiniennes. Le r&eacute;sultat sugg&egrave;re comment les cellules peuvent retourner des composants int&eacute;rioris&eacute;es par erreur vers la membrane plasmique et montre &eacute;galement que les v&eacute;sicules synaptiques ne sont pas l&#39;organite seulement neuronal qui se colore avec des colorants styryl et subit une exocytose stimul&eacute;e.

Stimul&eacute;e d&#39;exocytose des endosomes en neurones bipolaires r&eacute;tiniennes de poisson rouge.

Nach Exozytose synaptische Vesikel-Komponenten werden durch Clathrin-vermittelte Endozytose selektiv abgerufen und dann wiederverwendet in Zukunft runden Sender Release. Unter bestimmten Bedingungen ausf&uuml;hren synaptische Klemmen zus&auml;tzlich lose Endozytose des gro&szlig;en membran&ouml;se T&uuml;ten. Lose Endozytose ist weniger selektiv als Clathrin-vermittelte Endozytose und wahrscheinlich internalisieren Komponenten, die normalerweise auf der Plasmamembran ausgerichtet. Dennoch Rolle dabei eine gro&szlig;e in einigen Tonikum Multifunktionsleisten-Typ Synapsen, die Neurotransmitter f&uuml;r l&auml;ngeren Zeitraum freigeben. Hier zeigen wir, dass gro&szlig;e Endosomen gebildet, nachdem starke und anhaltende Stimulation unterziehen stimulierte Exozytose in retinalen bipolare Neuronen. Das Ergebnis legt nahe, wie Zellen f&auml;lschlicherweise verinnerlichte Komponenten an die Plasmamembran zur&uuml;ckgibt, und zeigt auch, dass synaptische Vesikel nicht nur neuronale Organelle sind Flecken mit Styryl Farbstoffen und stimulierte Exozytose erf&auml;hrt.

Stimulierte Exozytose von Endosomen in Goldfisch retinale bipolare Neuronen.

Dopo esocitosi, componenti della vescicola sinaptica sono selettivamente estratto tramite endocitosi Clatrina-mediata e poi riutilizzato in futuro cicli di rilascio del trasmettitore. In alcune condizioni, terminali sinaptici inoltre eseguono endocitosi di massa di grandi sacche membranose. Bulk endocitosi sono meno selettivi di endocitosi clatrina-mediata e probabilmente interiorizza componenti normalmente mirati alla membrana del plasma. Tuttavia, questo processo gioca un ruolo importante in alcune sinapsi nastro-tipo tonico, che rilasciano il neurotrasmettitore per periodi di tempo prolungati. Vi mostriamo qui, che grande endosomes formata dopo stimolazione forte e prolungata subiscono esocitosi stimolata nei neuroni bipolari della retina. Il risultato suggerisce come cellule potrebbero tornare erroneamente interiorizzate componenti la membrana plasmatica e dimostra anche che le vescicole sinaptiche non sono il solo neurone organello che colora con coloranti styryl e subisce esocitosi stimolata.

Stimolato esocitosi dei endosomes nei neuroni bipolari della retina goldfish.

&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;, &#x5F8C;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x4ECB;&#x5728;&#x578B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x53D6;&#x5F97;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x518D;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x7AEF;&#x672B;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5927;&#x578B;&#x306E;&#x819C;&#x8CEA;&#x306E;&#x56A2;&#x306E;&#x4E00;&#x62EC;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x62EC;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x4ECB;&#x5728;&#x578B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3088;&#x308A;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x3067;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x901A;&#x5E38;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x5185;&#x90E8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x9577;&#x671F;&#x9593;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5F37;&#x58EE;&#x5264;&#x30EA;&#x30DC;&#x30F3;&#x578B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x9054;&#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5F37;&#x529B;&#x304B;&#x3064;&#x9577;&#x671F;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x5F8C;&#x3067;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x53CC;&#x6975;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x523A;&#x6FC0;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x5927;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x8AA4;&#x3063;&#x3066;&#x5185;&#x9762;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8FD4;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306F;&#x8102;&#x6027;&#x306E; styryl &#x306E;&#x67D3;&#x6599;&#x3067;&#x6C5A;&#x308C;&#x3001;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5668;&#x5B98;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x523A;&#x6FC0;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30AD;&#x30F3;&#x30AE;&#x30E7;&#x7DB2;&#x819C;&#x53CC;&#x6975;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x306E;&#x3002;

Exocytosis, &#xD6C4; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; endocytosis clathrin &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xBBF8;&#xB798;&#xC5D0; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xC758; &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC;. &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xD070; &#xB9C9; &#xB0AD;&#xC758; &#xB300;&#xB7C9; endocytosis&#xB97C; &#xC218;&#xD589;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xB7C9; endocytosis clathrin &#xC911;&#xC7AC; endocytosis &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB35C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC774;&#xBA70; &#xC544;&#xB9C8; &#xC720;&#xC785; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xC0C1; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;,&#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC758; &#xC5F0;&#xC7A5;&#xB41C; &#xAE30;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC744; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD558;&#xB294; &#xD1A0; &#xB2C9; &#xB9AC;&#xBCF8; &#xD615; &#xB0C5; &#xC77C;&#xBD80; &#xC8FC;&#xC694; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30;, &#xD070; endosomes &#xD615;&#xC131; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xAC15;&#xD558;&#xACE0; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04; &#xC790;&#xADF9; &#xBC1B; &#xB2E4; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC591;&#xADF9;&#xC131; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; exocytosis &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC798;&#xBABB; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC18;&#xD658;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC;&#xB294; styryl &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC640; &#xC5BC;&#xB8E9; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; exocytosis&#xB97C; &#xACAA; &#xC2B5;&#xB9CC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD2B8;&#xB294; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAE08;&#xBD95;&#xC5B4; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC591;&#xADF9; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; endosomes&#xC758; exocytosis&#xB97C; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C;.

Despu&eacute;s de exocitosis, componentes de la ves&iacute;cula sin&aacute;ptica se recuperan selectivamente por endocitosis mediada por clatrina y luego reutilizaron en el futuro rondas de liberaci&oacute;n del transmisor. Bajo ciertas condiciones, terminales sin&aacute;pticos adem&aacute;s realizan endocitosis a granel de grandes sacos membranosos. Endocitosis a granel es menos selectivo que endocitosis mediada por clatrina y probablemente interiorizan componentes normalmente dirigidos a la membrana plasm&aacute;tica. Sin embargo, este proceso desempe&ntilde;a un papel importante en algunas sinapsis de cinta tipo t&oacute;nico, que liberan el neurotransmisor durante per&iacute;odos prolongados de tiempo. Aqu&iacute;, demostramos que grandes endosomas forman despu&eacute;s de estimulaci&oacute;n fuerte y prolongada se someten a la exocitosis estimulado en retinales neuronas bipolares. El resultado sugiere c&oacute;mo las c&eacute;lulas podr&iacute;an devolver componentes err&oacute;neamente internalizados a la membrana plasm&aacute;tica y tambi&eacute;n demuestra que las ves&iacute;culas sin&aacute;pticas no son el org&aacute;nulo s&oacute;lo neuronal que se ti&ntilde;e con tintes styryl y experimenta la exocitosis estimulado.

Exocitosis estimulada de endosomas en neuronas bipolares retinianas de peces de colores.

&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#x7684;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x4F20;&#x9012;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4E3B;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x79BB;&#x5B50;&#x578B;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53; (AMPA&#xFF0C;&#x6D77;&#x4EBA;&#x9178;&#xFF0C;NMDA&#xFF09;&#xFF0C;&#x9664; AMPA &#x53D7;&#x4F53;&#x8C03;&#x89E3;&#x5FEB;&#x901F;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x548C;&#x9700;&#x8981; TARP &#x8F85;&#x52A9;&#x4E9A;&#x57FA;&#x3002;NMDA &#x53D7;&#x4F53;&#x548C;&#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#xFF0C;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x79BB;&#x5B50;&#x578B;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E5F;&#x6709;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5C4F;&#x5E55;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A; NETO2&#xFF0C;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#xFF0C;&#x5927;&#x8111;&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x4E3A;&#x4EA4;&#x4E92;&#x65B9;&#x4E0E;&#x6D77;&#x4EBA;&#x9178;&#x578B;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;NETO2 &#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x548C;&#x672C;&#x673A;&#x53D7;&#x4F53;&#x901A;&#x9053;&#x5C5E;&#x6027;&#x800C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x8D29;&#x5356;&#x4EBA;&#x53E3;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x8C03;&#x8282;&#x6D77;&#x4EBA;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; mEPSCs&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x53D7;&#x4F53;&#x8C03;&#x8282;&#x8868;&#x9762;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; NETO2 &#x7684; NETO2 &#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x51CF;&#x5C11;&#x7F3A;&#x4E4F; GluR6 &#x6D77;&#x4EBA;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A; NETO2 &#x662F;&#x6D77;&#x4EBA;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#x578B;&#x4E0E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x673A;&#x5236;&#x5728;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#x7684;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x8C03;&#x8282;&#x6D77;&#x4EBA;&#x9178;&#x578B;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x8DE8;&#x819C;&#x914D;&#x4EF6;&#x4E9A;&#x3002;

Glutamate receptors play major roles in excitatory transmission in the vertebrate brain. Among ionotropic glutamate receptors (AMPA, kainate, NMDA), AMPA receptors mediate fast synaptic transmission and require TARP auxiliary subunits. NMDA receptors and kainate receptors play roles in synaptic transmission, but it remains uncertain whether these ionotropic glutamate receptors also have essential subunits. Using a proteomic screen, we have identified NETO2, a brain-specific protein of unknown function, as an interactor with kainate-type glutamate receptors. NETO2 modulates the channel properties of recombinant and native kainate receptors without affecting trafficking of the receptors and also modulates kainate-receptor-mediated mEPSCs. Furthermore, we found that kainate receptors regulate the surface expression of NETO2 and that NETO2 protein levels and surface expression are decreased in mice lacking the kainate receptor GluR6. The results show that NETO2 is a kainate receptor subunit with significant effects on glutamate signaling mechanisms in brain.

A transmembrane accessory subunit that modulates kainate-type glutamate receptors.

Les r&eacute;cepteurs de glutamate jouent un r&ocirc;le majeur dans la transmission excitatrice dans le cerveau des vert&eacute;br&eacute;s. Entre les r&eacute;cepteurs de glutamate ionotropiques (AMPA, kainate, NMDA), r&eacute;cepteurs AMPA m&eacute;dient la transmission synaptique rapide et n&eacute;cessitent des sous-unit&eacute;s auxiliaires TARP. Les r&eacute;cepteurs NMDA et r&eacute;cepteurs ka&iuml;nate jouent un r&ocirc;le dans la transmission synaptique, mais il demeure incertain si ces r&eacute;cepteurs ionotropiques du glutamate ont &eacute;galement essentielles sous-unit&eacute;s. &Agrave; l&#39;aide d&#39;un &eacute;cran de prot&eacute;omique, nous avons identifi&eacute; des NETO2, une prot&eacute;ine du cerveau-sp&eacute;cifique de fonction inconnue, comme un interacteur avec r&eacute;cepteurs de glutamate de type ka&iuml;nate. NETO2 module les propri&eacute;t&eacute;s de canal des r&eacute;cepteurs ka&iuml;nate recombinante et natif sans affecter le trafic des r&eacute;cepteurs et module &eacute;galement m&eacute;di&eacute;e par les r&eacute;cepteurs ka&iuml;nate mEPSCs. En outre, nous avons constat&eacute; que les r&eacute;cepteurs ka&iuml;nate r&eacute;gulent l&#39;expression en surface de NETO2 et ce taux de prot&eacute;ines NETO2 et l&#39;expression en surface sont diminu&eacute;s chez les souris d&eacute;pourvues du r&eacute;cepteur ka&iuml;nate GluR6. Les r&eacute;sultats montrent que la NETO2 est une sous-unit&eacute; de r&eacute;cepteurs ka&iuml;nate ayant des effets significatifs sur le glutamate dans le cerveau des m&eacute;canismes de signalisation.

Une sous-unit&eacute; transmembranaire accessoire qui module les r&eacute;cepteurs du glutamate de type ka&iuml;nate.

Glutamat-Rezeptoren spielen wichtige Rollen in exzitatorischen &Uuml;bertragung in das Wirbeltier-Gehirn. Unter ionotrope Glutamatrezeptoren (AMPA, Kainate, NMDA) AMPA-Rezeptoren vermitteln schnellen synaptischen &Uuml;bertragung und erfordern TARP-Hilfs-Untereinheiten. NMDA-Rezeptoren und Kainate Rezeptoren spielen eine Rolle in der synaptischen &Uuml;bertragung, aber es bleibt ungewiss, ob diese ionotrope Glutamatrezeptoren auch wesentliche Untereinheiten haben. Einen Proteomic-Bildschirm verwenden, haben wir NETO2, ein Gehirn-spezifische Protein unbekannter Funktion, als ein Interactor mit Kainate-Typ-Glutamat-Rezeptoren identifiziert. NETO2 Channeleigenschaften rekombinanten und nativen Kainate Rezeptoren ohne Auswirkungen auf Handel mit den Rezeptoren moduliert und auch Kainate-Rezeptor-vermittelten mEPSCs moduliert. Dar&uuml;ber hinaus fanden wir, dass die Kainate Rezeptoren regulieren des Oberfl&auml;chen Ausdrucks von NETO2 und das NETO2-Protein-Ebene und Oberfl&auml;che Ausdruck in M&auml;usen fehlt den Kainate-Rezeptor GluR6 zur&uuml;ckgegangen sind. Die Ergebnisse zeigen, dass NETO2 eine Kainate-Rezeptor-Untereinheit mit erheblichen Auswirkungen auf Glutamat Signalisierung Mechanismen im Gehirn.

Eine Transmembran Zubeh&ouml;r-Untereinheit, die Kainate-Typ-Glutamat-Rezeptoren moduliert.

Recettori del glutammato svolgono un ruolo importante nella trasmissione eccitatoria nel cervello vertebrato. Tra i recettori di glutammato ionotropici (AMPA, Kainato, NMDA), i recettori AMPA mediano la trasmissione sinaptica veloce e richiedono le subunit&agrave; ausiliarie TARP. I recettori NMDA e recettori Kainato giocano un ruolo nella trasmissione sinaptica, ma resta incerto se questi recettori del glutammato ionotropici hanno anche subunit&agrave; essenziali. Usando uno schermo proteomic, abbiamo identificato NETO2, una proteina del cervello-specifiche di funzione sconosciuta, come un&#39;interazione con i recettori del glutammato Kainato-tipo. NETO2 modula le propriet&agrave; del canale dei recettori Kainato ricombinante e nativo senza influire sul traffico dei recettori e modula anche mediata da recettori Kainato mEPSCs. Inoltre, abbiamo scoperto che i recettori Kainato regolano l&#39;espressione superficiale dei NETO2 e dei livelli di proteina che NETO2 ed espressione superficiale sono diminuiti in topi privi del recettore Kainato GluR6. I risultati mostrano che il NETO2 &egrave; una subunit&agrave; del recettore Kainato con effetti significativi sul glutammato segnalazione meccanismi nel cervello.

Un&#39;accessoria subunit&agrave; transmembrana che modula i recettori del glutammato Kainato-tipo.

&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x8133;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x4F1D;&#x9001;&#x3067;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30AA;&#x30CE;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (NMDA &#x30AB;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178; AMPA) &#x306E;&#x9593;&#x3067; AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x901F;&#x3044;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9632;&#x6C34;&#x30B7;&#x30FC;&#x30C8;&#x88DC;&#x52A9;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NMDA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x30AB;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30A4;&#x30AA;&#x30CE;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x304C;&#x307E;&#x305F;&#x5FC5;&#x9808;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x4E0D;&#x900F;&#x660E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x3001;interactor &#x30AB;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178;&#x578B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066; NETO2, &#x6A5F;&#x80FD;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x8133;&#x7279;&#x7570;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;NETO2 &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305A;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3068;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x30AB;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3066;&#x307E;&#x305F;&#x30AB;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F; mEPSCs &#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30AB;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; NETO2 &#x3068;&#x305D;&#x306E; NETO2 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x30AB;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; GluR6 &#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;NETO2 &#x30AB;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x982D;&#x8133;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x91CD;&#x5927;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178;&#x578B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B5;&#x30EA;&#x30FC; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;

&#xC0B0; &#xC5FC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xCC99;&#xCD94; &#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD765;&#xBD84; &#xC131;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1; &#xC911;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC694; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. Ionotropic glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (kainate, NMDA AMPA) &#xC911;&#xC5D0;&#xC11C; AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC911;&#xC7AC; &#xBE60;&#xB978; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; &#xBC29;&#xC218; &#xBCF4;&#xC870; subunits &#xD544;&#xC694;. NMDA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; kainate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740;&#xC774; ionotropic glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB3C4; &#xD544;&#xC218; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xBD88;&#xD655;&#xC2E4;. Proteomic &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; kainate &#xD615; glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; interactor&#xB85C; NETO2, &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xD568;&#xC218;, &#xB1CC; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. NETO2 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xBC0F; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; kainate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xCC44;&#xB110; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xBCC0;&#xC870; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; mEPSCs kainate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;-&#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCC0;&#xC870; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, kainate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC870;&#xC808; neto2&#xC640; NETO2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900; &#xADF8; &#xD45C;&#xBA74; &#xD45C;&#xD604; &#xBC0F; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD; kainate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; GluR6 &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; NETO2 kainate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC; &#xB1CC;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC774;&#xB2E4;.

Kainate &#xD615; glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBCC0;&#xC870; &#xD558;&#xB294; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;

Receptores de glutamato desempe&ntilde;an un papel importante en la transmisi&oacute;n excitatoria en el cerebro de vertebrados. Entre los receptores ionotr&oacute;picos de glutamato (AMPA, kainato, NMDA), receptores AMPA median la transmisi&oacute;n sin&aacute;ptica r&aacute;pida y requieren subunidades auxiliares de lona. Receptores NMDA y los receptores de kainato papel en la transmisi&oacute;n sin&aacute;ptica, pero sigue siendo incierto si estos receptores ionotr&oacute;picos de glutamato tambi&eacute;n tienen subunidades esenciales. Utilizando una pantalla prote&oacute;micos, hemos identificado NETO2, una prote&iacute;na del cerebro espec&iacute;ficas de funci&oacute;n desconocida, como un interactor con receptores de glutamato de tipo kainato. NETO2 modula las propiedades del canal de los receptores de kainato nativa y recombinante sin afectar el tr&aacute;fico de los receptores y tambi&eacute;n modula mEPSCs mediada por el receptor de kainato. Adem&aacute;s, encontramos que los receptores de kainato regulan la expresi&oacute;n superficial de NETO2 y que los niveles de prote&iacute;na NETO2 y expresi&oacute;n superficial est&aacute;n disminuidas en ratones que carecen de los receptores de kainato GluR6. Los resultados muestran que NETO2 es una subunidad del receptor de kainato con efectos significativos sobre el glutamato en el cerebro los mecanismos de se&ntilde;alizaci&oacute;n.

Una subunidad accesoria transmembrana que modula los receptores de glutamato tipo kainato.

&#x4E86;&#x89E3;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; NSF &#x9644;&#x4EF6;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53; (&#x9677;&#x9631;) &#x590D;&#x5408;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x77E5;&#x8BC6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x8457;&#x8FF0; (cplx)&#x3001; &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x80DE;&#x6D46;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC4;&#x88C5;&#x7F51;&#x7F57;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A; exocytic &#x4E8B;&#x4EF6;&#x671F;&#x95F4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9; cplx &#x51FA;&#x73B0;&#x77ED;&#x6682;&#x671F;&#x95F4;&#x5145;&#x5206;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5305;&#x542B;&#x4EC5;&#x7F51;&#x7F57;&#x590D;&#x6742;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x533A;&#x57DF; cplx &#x7684;&#x5220;&#x51CF;&#x7684;&#x7248;&#x672C;&#x79D2;&#x878D;&#x5408;&#x5730;&#x70B9;&#x4FDD;&#x6301;&#x548C;&#x9020;&#x6210;&#x878D;&#x5408;&#x662F;&#x6682;&#x65F6;&#x7684;&#x3002;&#x53EA;&#x662F;&#x90E8;&#x5206;&#x5F00;&#x62C6;&#x4E0E;&#x7A81;&#x53D8; cplx &#x6BDB;&#x5B54;&#x91CA;&#x653E;&#x53D1;&#x5C04;&#x5668;&#x548C;&#x8102;&#x8D28;&#x7684;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x7684;&#x6BDB;&#x5B54;&#x90FD;&#x88AB;&#x72ED;&#x9698;&#x548C;&#x4E0D;&#x7EAF;&#x7CB9;&#x662F;&#x6CB9;&#x8102;&#x5728;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D;&#x3002;Cplx &#x6D88;&#x8017;&#x540C;&#x6837;&#x5F15;&#x8D77;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x8D27;&#x7269;&#x4E88;&#x4EE5;&#x4FDD;&#x7559;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5; cplx &#x80DE;&#x5728;&#x665A;&#x6B65;&#x62DB;&#x8058;&#x548C;&#x8C03;&#x8282;&#x878D;&#x5408;&#x6BDB;&#x5B54;&#x7F51;&#x7F57;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;

&#x8457;&#x8FF0;&#x7684;&#x5355;&#x4E00; exocytic &#x4E8B;&#x4EF6;&#x671F;&#x95F4;&#x7684;&#x5B9E;&#x65F6;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x3002;

Understanding the fundamental role of soluble NSF attachment protein receptor (SNARE) complexes in membrane fusion requires knowledge of the spatiotemporal dynamics of their assembly. We visualized complexin (cplx), a cytosolic protein that binds assembled SNARE complexes, during single exocytic events in live cells. We found that cplx appeared briefly during full fusion. However, a truncated version of cplx containing only the SNARE-complex binding region persisted at fusion sites for seconds and caused fusion to be transient. Resealing pores with the mutant cplx only partially released transmitter and lipid probes, indicating that the pores are narrow and not purely lipidic in structure. Depletion of cplx similarly caused secretory cargo to be retained. These data suggest that cplx is recruited at a late step in exocytosis and modulates fusion pores composed of SNARE complexes.

Real-time visualization of complexin during single exocytic events.

Comprendre le r&ocirc;le fondamental de la NSF fixation prot&eacute;ique du r&eacute;cepteur (SNARE) complexes solubles dans la fusion membranaire n&eacute;cessite la connaissance de la dynamique spatio-temporelle de leur Assembl&eacute;e. Nous avons visualis&eacute; complexin (cplx), une prot&eacute;ine cytosolique qui lie assembl&eacute; complexes SNARE, lors des &eacute;v&eacute;nements de s&eacute;cr&eacute;tion unique dans des cellules vivantes. Nous avons trouv&eacute; que cplx est apparu bri&egrave;vement au cours de la fusion compl&egrave;te. Cependant, une version tronqu&eacute;e de cplx contenant uniquement la r&eacute;gion de liaison complexe SNARE persistante au sites de fusion pour les secondes et provoqu&eacute; la fusion toujours fugace. Refermer les pores avec le mutant cplx que partiellement lib&eacute;r&eacute; sondes &eacute;metteur et lipidique, indiquant que les pores sont &eacute;troites et non purement lipidiques dans la structure. Appauvrissement de la couche de cplx caus&eacute;s de m&ecirc;me cargaison s&eacute;cr&eacute;toire &agrave; conserver. Ces donn&eacute;es sugg&egrave;rent que cplx est recrut&eacute; &agrave; une &eacute;tape tardive dans l&#39;exocytose et module de pores de fusion compos&eacute;es de complexes SNARE.

Visualisation en temps r&eacute;el des complexin lors des &eacute;v&eacute;nements de s&eacute;cr&eacute;tion unique.

Verst&auml;ndnis der grundlegenden Rolle der l&ouml;slichen NSF Anlage Rezeptor (SNARE) Proteinkomplexe Membrane Fusion erfordert Kenntnisse &uuml;ber die raumzeitliche Dynamik ihrer Baugruppe. Wir visualisieren Complexin (Cplx), ein cytosolisches Protein, das bindet montiert SNARE-komplexe, w&auml;hrend einzelne Exocytic Ereignisse in lebenden Zellen. Wir fanden, dass dieses Cplx kurz w&auml;hrend der vollst&auml;ndigen Verschmelzung erschienen. Jedoch eine verk&uuml;rzte Version von Cplx, enth&auml;lt nur die SNARE-Komplex-Bindung-Region beibehalten bei Fusion-Websites f&uuml;r Sekunden und verursacht Fusion zum vor&uuml;bergehend. Neuversiegeln Poren mit der mutant Cplx nur teilweise freigegeben Sender und Lipid-Sonden, die darauf hinweist, dass die Poren eng und nicht rein lipidischen Struktur sind. Ersch&ouml;pfung der Cplx verursacht ebenso sekretorischen Ladung beibehalten werden. Diese Daten legen nahe, dass Cplx ist in einer sp&auml;ten Phase Exozytose rekrutiert und moduliert Verschmelzung Poren bestehend aus SNARE-komplexe.

Echtzeit-Visualisierung der Complexin bei einzelnen Exocytic Veranstaltungen.

Comprensione del ruolo fondamentale della NSF attachment proteina recettore (rullante) complessi solubili nella fusione della membrana richiede la conoscenza delle dinamiche spatiotemporal della loro Assemblea. Abbiamo visualizzato complexin (cplx), una proteina citosolica che lega assemblati complessi SNARE, durante gli eventi di singolo exocytic in cellule vive. Abbiamo trovato che cplx apparve brevemente durante la fusione completa. Tuttavia, una versione troncata di cplx contenenti solo regioni di legame del complesso SNARE permanenti presso i siti di fusione per secondi e causato la fusione di essere transitori. Richiudere i pori con il mutante cplx solo parzialmente pubblicato sonde trasmettitore e lipidi, che indica che i pori sono strette e non puramente lipidico nella struttura. Deplezione di cplx causato similmente secretiva cargo essere mantenuto. Questi dati suggeriscono che cplx &egrave; reclutato in una fase tardiva del esocitosi e modula i pori di fusione composti da complessi SNARE.

Visualizzazione in tempo reale di complexin durante gli eventi exocytic singolo.

&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; NSF &#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#xFF09; &#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x77E5;&#x8B58;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x8FD1;&#x5E74; (&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#xFF08;&#x548C;&#xFF09;&#xFF09; &#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3001;SNARE &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3001;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5358;&#x4E00; exocytic &#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x4E2D;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#xFF08;&#x548C;&#xFF09; &#x7C21;&#x6F54;&#x306B;&#x5B8C;&#x5168;&#x878D;&#x5408;&#x4E2D;&#x306B;&#x767B;&#x5834;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3; SNARE &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x307F;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#xFF08;&#x548C;&#xFF09; &#x306E;&#x79D2;&#x9593;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x6C38;&#x7D9A;&#x5316;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x30D5;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5909;&#x7570;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#xFF08;&#x548C;&#xFF09; &#x6BDB;&#x7A74;&#x3092;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x306E;&#x307F;&#x518D;&#x5C01;&#x9396;&#x3001;&#x6BDB;&#x7A74;&#x3092;&#x72ED;&#x3044;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x306A;&#x3044;&#x7D14;&#x7C8B;&#x306B;&#x8102;&#x8CEA;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30BF;&#x3068;&#x8102;&#x8CEA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#xFF08;&#x548C;&#xFF09; &#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x4FDD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x8CA8;&#x7269;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#xFF08;&#x548C;&#xFF09; &#x5F8C;&#x534A;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7; &#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3067;&#x52DF;&#x96C6;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3001;SNARE &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x878D;&#x5408;&#x5B54;&#x3092;&#x5909;&#x8ABF;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xB2E8;&#xC77C; exocytic &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; complexin&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Entender el papel fundamental de los complejos del receptor (trampa) prote&iacute;nas solubles NSF de accesorio en la fusi&oacute;n de la membrana requiere el conocimiento de la din&aacute;mica espacio-temporal de su montaje. Visualizamos complexin (cplx), una prote&iacute;na citos&oacute;lica que une reunidos complejos SNARE, durante eventos exoc&iacute;ticas solo en c&eacute;lulas vivas. Encontramos que CPLX apareci&oacute; brevemente durante la fusi&oacute;n completa. Sin embargo, una versi&oacute;n truncada de Inmunocomplejo que contiene solamente la regi&oacute;n de la Uni&oacute;n del complejo SNARE persisti&oacute; en sitios de fusi&oacute;n por segundos y caus&oacute; la fusi&oacute;n a ser transitoria. Volver a sellar los poros con el Inmunocomplejo mutante s&oacute;lo parcialmente hab&iacute;a lanzado sondas transmisor y l&iacute;pidos, indicando que los poros son estrechos y no puramente lip&iacute;dica en la estructura. Agotamiento de Inmunocomplejo semejantemente causado secretor carga a conservarse. Estos datos sugieren cplx es reclutado en un &uacute;ltimo paso en la exocitosis y modula los poros de la fusi&oacute;n compuestos por complejos SNARE.

Chad P. Grabner

Yale University School of Medicine

Fabrication of Amperometric Electrodes