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Live Cell Cycle Analysis of <em>Drosophila</em> Tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer and Vybrant DyeCycle Violet DNA Stain

Flow cytometry has  been widely used to obtain information about DNA content in a population of  cells, to infer relative percentages in different cell ...

University of Michigan 

WNT &#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x5927;&#x4F5C;&#x7528;&#x9635;&#x5217; dermomyotome &#x7684; somitic &#x7684;&#x4E2D;&#x80DA;&#x5C42;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4E0B;&#x6E38;&#x9776;&#x57FA;&#x56E0;&#x53CA;&#x5176;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x77E5;&#x8BC6;&#x662F;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x3002;&#x5BFB;&#x627E;&#x65B0;&#x57FA;&#x56E0;&#x53C2;&#x4E0E;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x65E9;&#x671F;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x4F53;&#x8282;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7531;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x7814;&#x7A76; presomitic &#x4E2D;&#x80DA;&#x5C42;&#x548C;&#x9F20;&#x6807;&#x7684; 5 &#x6700;&#x6700;&#x8FD1;&#x6210;&#x7ACB;&#x7684; somites &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x82AF;&#x7247;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x5929; 9.5&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A; 207 &#x57FA;&#x56E0;&#x4E0A;&#x8C03;&#x53CA;&#x5728;&#x4F53;&#x8282;&#x5F62;&#x6210; 120 &#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x7C7B;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x662F;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6C60;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x4F53;&#x8282;&#x53D1;&#x5C55;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B9D;&#x8D35;&#x7684;&#x8D44;&#x6E90;&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E09;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E2D;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x4F53;&#x8282; dermomyotome &#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x76EE;&#x6807; WNT &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4F46;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; WNTs &#x663E;&#x793A;&#x5DEE;&#x522B;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8BC1;&#x660E;&#x8BE5; 1 &#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7279;&#x6D1B;&#x4F0A;&#x57CE;&#xFF0C;&#x662F;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684; WNT &#x4FE1;&#x53F7;&#x89C4;&#x8303;&#xFF0C;&#x800C;&#x5176;&#x4ED6; 2 &#x57FA;&#x56E0;&#x79CD;&#x548C; Arl4&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0D;&#x662F;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x95F4;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5168;&#x7403;&#x4FE1;&#x606F;&#x5BF9;&#x4F53;&#x8282;&#x53D1;&#x80B2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x5B83;&#x8FD8;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x65B0;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x611F;&#x5E94;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8BE5;&#x76F4;&#x63A5;&#x4F53;&#x8282;&#x7F16;&#x7EC4;&#x3002;

&#x52A8;&#x7269;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x4E0D;&#x540C; WNT &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x5728; somitic &#x4E2D;&#x80DA;&#x5C42;&#x7684;&#x65B0;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

WNT signaling plays a major role in patterning the dermomyotome of the somitic mesoderm. However, knowledge of downstream target genes and their regulation is limited. To identify new genes involved in the development and early patterning of the somite, we performed a comparison of gene expression by microarray between the presomitic mesoderm and the 5 most recently formed somites of the mouse at embryonic day 9.5. We identified 207 genes upregulated and 120 genes downregulated in somite formation. Expression analysis and functional categorization of these genes demonstrate this to be a diverse pool that provides a valuable resource for studying somite development. Thus far, we have found three genes expressed in the dermomyotome of the early somite. Consistent with their expression patterns, these genes are transcriptional targets of WNT signals, but display differential activation by different WNTs. We further demonstrate that 1 of these genes, Troy, is a direct target of canonical WNT signaling, while the other 2 genes, Selp and Arl4, are not. Thus, our microarray study using microdissected tissues not only provides global information on gene expression during somite development, it also provides novel targets to study the inductive signaling pathways that direct somite patterning.

Microarray analysis of somitogenesis reveals novel targets of different WNT signaling pathways in the somitic mesoderm.

La signalisation WNT joue un r&ocirc;le majeur dans la structuration de la dermomyotome du m&eacute;soderme somitique. Cependant, la connaissance des g&egrave;nes cibles en aval et de leur r&eacute;gulation est limit&eacute;e. Afin d&#39;identifier de nouveaux g&egrave;nes impliqu&eacute;s dans le d&eacute;veloppement et la structuration au d&eacute;but de la somite, nous r&eacute;alis&eacute; une comparaison de l&#39;expression g&eacute;nique par microarray entre le m&eacute;soderme ont et les 5 somites plus r&eacute;cemment form&eacute;s de la souris &agrave; jour embryonnaire 9.5. Nous avons identifi&eacute; 207 g&egrave;nes surexprim&eacute;s et 120 g&egrave;nes sous-exprim&eacute;s dans formation somite. Analyse de l&#39;expression et la cat&eacute;gorisation fonctionnelle de ces g&egrave;nes montrent il s&#39;agit d&#39;un bassin diversifi&eacute; qui fournit une aide pr&eacute;cieuse pour l&#39;&eacute;tude de d&eacute;veloppement somite. Jusqu&#39;ici, nous avons identifi&eacute; trois g&egrave;nes exprim&eacute;s dans le dermomyotome du d&eacute;but somite. Conform&eacute;ment &agrave; leurs profils d&#39;expression, ces g&egrave;nes sont des cibles transcriptionnelles des signaux WNT, mais affichent activation diff&eacute;rentielle par WNTs diff&eacute;rents. Nous d&eacute;montrons que 1 de ces g&egrave;nes, Troy, est une cible directe de canonique SIGNALISATION WNT, tandis que les 2 autres g&egrave;nes, Selp et Arl4, ne le sont pas. Ainsi, notre &eacute;tude sur puces &agrave; l&#39;aide de tissus microdiss&eacute;qu&eacute;s non seulement fournit des informations globales sur l&#39;expression des g&egrave;nes au cours du d&eacute;veloppement du somite, il fournit &eacute;galement des nouvelles cibles pour &eacute;tudier les voies de signalisation inductives cette structuration somite direct.

Analyse de microarray d&#39;engendrent r&eacute;v&egrave;le de nouvelles cibles de WNT diff&eacute;rente voies dans le m&eacute;soderme somitique de signalisation.

Microarray-Analyse von Somitogenese enth&#xFC;llt neue Targets verschiedener WNT Signalwege in der somitic Mesoderm.

Segnalazione WNT gioca un ruolo importante nella creazione di una serie dermomyotome del mesoderma somitic. Tuttavia, conoscenza dei geni bersaglio a valle e il loro regolamento &egrave; limitato. Per identificare nuovi geni coinvolti nello sviluppo e nella precoce patterning del somite, abbiamo eseguito un confronto dell&#39;espressione di gene di microarray tra il mesoderm presomitic e 5 somiti pi&ugrave; recentemente formate del mouse al giorno embrionale 9.5. Abbiamo identificato 207 geni sovraregolati e downregolata 120 geni nella formazione somite. Analisi di espressione e categorizzazione funzionale di questi geni dimostrare questo per essere un pool diversificato che fornisce una risorsa preziosa per lo studio di sviluppo somite. Finora, abbiamo trovato tre geni espressi in dermomyotome dell&#39;inizio del somite. Coerenti con i loro modelli di espressione, questi geni sono obiettivi di transcriptional di WNT segnali, ma visualizzare attivazione differenziale di WNTs diversi. Abbiamo ulteriormente dimostrare che 1 di questi geni, Troy, &egrave; un obiettivo diretto della canonica segnalazione WNT, mentre gli altri 2 geni, Selp e Arl4, non sono. Cos&igrave;, il nostro studio di microarray utilizzando tessuti microdissected non solo fornisce informazioni globali sulla espressione genica durante lo sviluppo del somite, fornisce anche nuovi bersagli per studiare i percorsi di segnalazione induttivi che patterning somite diretto.

Analisi di Microarray di somitogenesis rivelano nuovi bersagli di WNT diverse vie nel mesoderma somitic di segnalazione.

Wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x76AE;&#x7B4B;&#x677F;&#x3059;&#x308B;&#x4F53;&#x7BC0;&#x4E2D;&#x80DA;&#x8449;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x4E0B;&#x6D41;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x77E5;&#x8B58;&#x306F;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3084;&#x3001;&#x4F53;&#x7BC0;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x6211;&#x3005; &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03; presomitic &#x4E2D;&#x80DA;&#x8449;&#x3068;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x4F53; 5 &#x6700;&#x3082;&#x6700;&#x8FD1;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7BC0;&#x3068;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x80DA;&#x4E00;&#x65E5; 9.5 &#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; 207 &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x4EA2;&#x9032;&#x3068; 120 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; downregulated &#x306E;&#x4F53;&#x7BC0;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x3002;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5206;&#x985E;&#x4F53;&#x7BC0;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x3068;&#x3053;&#x308D;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x7B4B;&#x7BC0;&#x306E;&#x76AE;&#x7B4B;&#x677F;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 3 &#x3064;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x72EC;&#x81EA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x69D8;&#x5F0F;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19; WNT &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5DEE;&#x52D5;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x8A8D;&#x8A3C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308B; WNTs &#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x305D;&#x306E; 1 &#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30C8;&#x30ED;&#x30A4;&#x3001;&#x3067;&#x3059;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E; 2 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;Selp &#x3068; Arl4 &#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x6B63;&#x898F;&#x3001;wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;microdissected &#x7D44;&#x7E54;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x4F53;&#x7BC0;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x305D;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x4F53;&#x7BC0;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6A19;&#x7684;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4F53;&#x7BC0;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B; WNT &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3059;&#x308B;&#x4F53;&#x7BC0;&#x4E2D;&#x306E;&#x4E2D;&#x80DA;&#x8449;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6A19;&#x7684;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

WNT &#xC2E0;&#xD638; somitic mesoderm dermomyotome &#xD328;&#xD134;&#xD654;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC758; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC740; &#xD55C;&#xC815; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xACFC; somite, &#xCD08;&#xAE30; &#xD328;&#xD134;&#xD654;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC218;&#xD589;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC758; 5 &#xAC00;&#xC7A5; &#xCD5C;&#xADFC; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; somites&#xC640; presomitic mesoderm microarray &#xBC30;&#xC544; &#xD558;&#xB8E8; 9.5&#xC5D0;&#xC11C;. 207 &#xC720;&#xC804;&#xC790; upregulated &#xBC0F; 120 &#xC720;&#xC804;&#xC790; downregulated somite &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xD30C;&#xC545;. &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xBD84;&#xB958;&#xAC00; somite &#xAC1C;&#xBC1C; &#xACF5;&#xBD80;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xC790;&#xC6D0;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD480;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCD08;&#xAE30; somite dermomyotome &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134; &#xC77C;&#xCE58;,&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; WNT &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; transcriptional &#xB300;&#xC0C1; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E4;&#xB978; Wnts&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB3D9; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xCD94;&#xAC00; 1 &#xC2DC;&#xC5F0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD2B8;&#xB85C;&#xC774;, &#xC815;&#xC2DD; WNT &#xC2E0;&#xD638;, &#xBC18;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; 2 &#xC720;&#xC804;&#xC790;, Selp &#xBC0F; Arl4, &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xC0C1; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; microarray &#xC5F0;&#xAD6C; microdissected &#xC870;&#xC9C1; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; somite &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xADF8; &#xC9C1;&#xC811; somite &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xC720;&#xB3C4; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC18C;&#xC124; &#xB300;&#xC0C1;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;.

Microarray &#xBD84;&#xC11D; somitogenesis&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; WNT &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C; somitic mesoderm&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18C;&#xC124; &#xB300;&#xC0C1;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

Se&ntilde;alizaci&oacute;n de WNT desempe&ntilde;a un papel importante en el dibujo de la dermomyotome del mesodermo somitic. Sin embargo, el conocimiento de genes diana y su regulaci&oacute;n es limitado. Para identificar nuevos genes implicados en el desarrollo y los patrones tempranos de las somitas, realizamos una comparaci&oacute;n de la expresi&oacute;n g&eacute;nica por microarray entre el mesodermo de la presomitic y las 5 somitas recientemente formados del rat&oacute;n en el d&iacute;a embrionario 9.5. Se identificaron 207 alza de genes y 120 genes o en formaci&oacute;n de somitas. An&aacute;lisis de la expresi&oacute;n y categorizaci&oacute;n funcional de estos genes demostraron esto para ser una piscina diversa que proporciona un valioso recurso para el estudio de desarrollo de somitas. Hasta el momento, hemos encontrado tres genes expresados en la dermomyotome de las somitas temprano. De acuerdo con sus patrones de expresi&oacute;n, estos genes son dianas transcripcionales de se&ntilde;ales WNT, pero muestran activaci&oacute;n diferencial por diferentes WNTs. Adem&aacute;s, demostramos que 1 de estos genes, Troy, es un objetivo directo de se&ntilde;alizaci&oacute;n de WNT can&oacute;nica, mientras que los otros 2 genes, Selp y Arl4, no. Por lo tanto, nuestro estudio de microarray utilizando tejidos microdissected no s&oacute;lo proporciona informaci&oacute;n global sobre la expresi&oacute;n g&eacute;nica durante el desarrollo de somitas, tambi&eacute;n proporciona nuevas dianas para estudiar las v&iacute;as de se&ntilde;alizaci&oacute;n inductivas patrones de somitas directa.

An&aacute;lisis de microarrays de somitogenesis revelan nuevas dianas de WNT diferente rutas en el mesodermo somitic de se&ntilde;alizaci&oacute;n.

Sonic hedgehog (Shh) signaling is essential for sclerotome development in the mouse. Gli2 and Gli3 are thought to be the primary transcriptional mediators of Shh signaling; however, their roles in Shh induction of sclerotomal genes have not been investigated. Using a combination of mutant analysis and in vitro explant assays, we demonstrate that Gli2 and Gli3 are required for Shh-dependent sclerotome induction. Gli2(-/-)Gli3(-/-) embryos exhibit a severe loss of sclerotomal gene expression, and somitic mesoderm from these embryos cannot activate sclerotomal genes in response to exogenous Shh. We find that one copy of either Gli2 or Gli3 is required to mediate Shh induction of sclerotomal markers Pax1 and Pax9 in vivo and in vitro. Although Gli2 is generally considered an activator and Gli3 a repressor, our results also reveal a repressor function for Gli2 and an activator function for Gli3 in the developing somite. To further dissect the function of each Gli, we used adenovirus to overexpress Gli1, Gli2 and Gli3 in presomitic mesoderm explants. We find that each Gli preferentially activates a distinct set of Shh target genes, suggesting that the functions of Shh in patterning, growth and negative feedback are divided preferentially between different Gli proteins in the somite.

Interplays of Gli2 and Gli3 and their requirement in mediating Shh-dependent sclerotome induction.

Signalisation de Sonic hedgehog (Shh) est essentiel pour le d&eacute;veloppement de scl&eacute;rotome chez la souris. Gli2 et g&egrave;ne Gli3 sont consid&eacute;r&eacute;s comme les m&eacute;diateurs transcriptionnelles primaires de Shh de signalisation ; Cependant, leurs r&ocirc;les dans Shh induction de g&egrave;nes de sclerotomal n&#39;ont pas &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;s. En utilisant une combinaison de mutant analyse et des essais in vitro explant, nous d&eacute;montrons que Gli2 et g&egrave;ne Gli3 sont requis pour l&#39;induction scl&eacute;rotome Shh-d&eacute;pendante. Gli2(-/-)GLI3(-/-) embryons montrent une perte s&eacute;v&egrave;re de l&#39;expression des g&egrave;nes sclerotomal et m&eacute;soderme somitique de ces embryons ne peut pas activer des g&egrave;nes sclerotomal en r&eacute;ponse &agrave; Shh exog&egrave;ne. Nous trouvons qu&#39;une seule copie du g&egrave;ne Gli3 ou Gli2 s&#39;impose pour m&eacute;dier Shh induction de sclerotomal marqueurs Pax1 et Pax9 in vivo et in vitro. Bien que Gli2 est g&eacute;n&eacute;ralement consid&eacute;r&eacute; comme un activateur et un g&egrave;ne Gli3 un r&eacute;presseur, nos r&eacute;sultats r&eacute;v&egrave;lent aussi une fonction de r&eacute;presseur pour Gli2 et une fonction de l&#39;activateur pour le g&egrave;ne Gli3 dans le pays en d&eacute;veloppement somite. Pour plus amples diss&eacute;quer la fonction de chaque Gli, nous avons utilis&eacute; des ad&eacute;novirus pour surexprimer Gli1, Gli2 et g&egrave;ne Gli3 somitiques m&eacute;soderme des explants. Nous trouvons que chaque Gli active pr&eacute;f&eacute;rentiellement un ensemble distinct de g&egrave;nes cibles de Shh, sugg&eacute;rant que les fonctions de Shh dans la structuration, de croissance et de r&eacute;troaction n&eacute;gative sont divis&eacute;es pr&eacute;f&eacute;rentiellement entre diff&eacute;rentes prot&eacute;ines Gli dans le somite.

Interactions de Gli2 et g&egrave;ne Gli3 et son exigence dans la m&eacute;diation de l&#39;induction scl&eacute;rotome Shh-d&eacute;pendante.

Sonic hedgehog (Shh) segnalazione &egrave; essenziale per lo sviluppo di sclerotomo nel topo. GLI2 e Gli3 si pensa siano i mediatori primari transcriptional di Shh segnalazione; Tuttavia, non sono stati indagati loro ruoli in Shh induzione dei geni sclerotomal. Utilizzando una combinazione di analisi di mutanti e saggi in vitro espianto, dimostreremo che Gli2 e Gli3 sono necessari per l&#39;induzione sclerotomo Shh-dipendente. GLI2(-/-)Gli3(-/-) embrioni presentano una grave perdita di espressione del gene sclerotomal, e somitic mesoderma da questi embrioni non pu&ograve; attivare sclerotomal geni in risposta a Shh esogeno. Troviamo che una copia di Gli2 o Gli3 &egrave; necessaria mediare Shh induzione dei marcatori sclerotomal Pax1 e Pax9 in vivo e in vitro. Sebbene Gli2 &egrave; generalmente considerato un attivatore e Gli3 un repressore, i nostri risultati rivelano anche una funzione repressor per Gli2 e una funzione di attivatore per Gli3 nel somite in via di sviluppo. Per sezionare ulteriormente la funzione di ogni Gli, abbiamo utilizzato dell&#39;adenovirus iperesprimono Gli1 e Gli2 Gli3 in mesoderm presomitic espianti. Troviamo che ogni Gli preferenzialmente attiva un insieme distinto di geni bersaglio di Shh, suggerendo che le funzioni di Shh in patterning, crescita e feedback negativo sono divisi preferenzialmente tra diverse proteine Gli il somite.

Giochi di Gli2 e Gli3 e loro requisito nella mediazione induzione sclerotomo Shh-dipendente.

Terminal differentiation is often coupled with permanent exit from the cell cycle, yet it is unclear how cell proliferation is blocked in differentiated tissues. We examined the process of cell cycle exit in Drosophila wings and eyes and discovered that cell cycle exit can be prevented or even reversed in terminally differentiating cells by the simultaneous activation of E2F1 and either Cyclin E/Cdk2 or Cyclin D/Cdk4. Enforcing both E2F and Cyclin/Cdk activities is required to bypass exit because feedback between E2F and Cyclin E/Cdk2 is inhibited after cells differentiate, ensuring that cell cycle exit is robust. In some differentiating cell types (e.g., neurons), known inhibitors including the retinoblastoma homolog Rbf and the p27 homolog Dacapo contribute to parallel repression of E2F and Cyclin E/Cdk2. In other cell types, however (e.g., wing epithelial cells), unknown mechanisms inhibit E2F and Cyclin/Cdk activity in parallel to enforce permanent cell cycle exit upon terminal differentiation.

A double-assurance mechanism controls cell cycle exit upon terminal differentiation in Drosophila.

Diff&eacute;renciation terminale est souvent coupl&eacute;e avec sortie permanente du cycle cellulaire, mais on ne sait pas comment la prolif&eacute;ration cellulaire est bloqu&eacute;e dans les tissus diff&eacute;renci&eacute;s. Nous avons examin&eacute; le processus de sortie du cycle cellulaire dans les ailes de la drosophile et les yeux et d&eacute;couvrit que la sortie cycle cellulaire peut &ecirc;tre emp&ecirc;ch&eacute;e ou m&ecirc;me invers&eacute;e dans la diff&eacute;renciation terminale des cellules par l&#39;activation simultan&eacute;e de E2F1 et la cycline E/Cdk2 ou cycline D / Cdk4. application fois E2F et cycline/Cdk activit&eacute;s est n&eacute;cessaire afin de contourner la sortie parce que la r&eacute;troaction entre E2F et cycline E/Cdk2 est inhib&eacute;e apr&egrave;s les cellules se diff&eacute;rencient, veiller &agrave; ce que la sortie cycle cellulaire est robuste. Dans certains types de cellules (par exemple, les neurones), diff&eacute;renciation connue inhibiteurs dont l&#39;homologue de r&eacute;tinoblastome Rbf et l&#39;homologue p27 Dacapo contribuent &agrave; une r&eacute;pression parall&egrave;le de E2F et cycline E/Cdk2. Dans d&#39;autres types, de cellules cependant (par exemple, les cellules &eacute;pith&eacute;liales d&#39;aile), m&eacute;canismes inconnus inhibent l&#39;activit&eacute; E2F et cycline/Cdk en parall&egrave;le pour faire appliquer la sortie permanente cycle cellulaire &agrave; la diff&eacute;renciation terminale.

Un m&eacute;canisme de double-assurance contr&ocirc;le sortie du cycle cellulaire lors de la diff&eacute;renciation terminale chez la drosophile.

Differenziazione terminale &egrave; spesso accoppiato con permanente uscita dal ciclo cellulare, ancora non &egrave; chiaro come la proliferazione cellulare &egrave; bloccata nei tessuti differenziati. Abbiamo esaminato il processo di uscita del ciclo cellulare in drosofila ali e gli occhi e scoperto che uscita del ciclo delle cellule pu&ograve; essere impedito o addirittura invertito nel terminalmente differenziare cellule dall&#39;attivazione simultanea di E2F1 e ciclina E/Cdk2 o ciclina D / Cdk4. far rispettare sia E2F e ciclina/Cdk attivit&agrave; &egrave; necessario bypassare uscita perch&eacute; feedback tra E2F e ciclina E/Cdk2 &egrave; inibito dopo che le cellule si differenziano, assicurando che uscita del ciclo cellulare &egrave; robusto. In alcuni tipi di cellule differenziazione (ad esempio, i neuroni), noti inibitori incluso l&#39;omologo di retinoblastoma Rbf e l&#39;omologo p27 Dacapo contribuire alla repressione parallela di E2F e ciclina E/Cdk2. In altre celle tipi, tuttavia (ad esempio, ala cellule epiteliali), meccanismi sconosciuti inibiscono E2F e ciclina/Cdk attivit&agrave; in parallelo per far rispettare il ciclo cellulare permanente uscita su differenziazione terminale.

Un meccanismo di doppio-assicurazione controlla uscita ciclo cellulare sulla differenziazione terminale in drosofila.

How size is controlled: from Hippos to Yorkies.

Comment contr&ocirc;le-t-on le taille : d&#39;hippopotames de Yorkies.

Come viene controllata la dimensione: da ippopotami a Yorkies.

Coordinating terminal differentiation with permanent exit from the cell cycle is crucial for proper organogenesis, yet how the cell cycle is blocked in differentiated tissues remains unclear. Important roles for retinoblastoma family proteins and Cyclin-dependent kinase inhibitors have been delineated, but in many cases it remains unclear what triggers cell cycle exit. This review focuses on describing recent advances in deciphering how terminal differentiation and exit from the cell cycle are coordinated.

Mechanisms controlling cell cycle exit upon terminal differentiation.

Coordination diff&eacute;renciation terminale avec sortie permanente du cycle cellulaire est crucial pour l&#39;organogen&egrave;se bon, mais comment le cycle cellulaire est bloqu&eacute; diff&eacute;renci&eacute;es des tissus est incertaine. Un r&ocirc;le important pour les prot&eacute;ines de la famille r&eacute;tinoblastome et inhibiteurs de kinases cycline-d&eacute;pendantes ont &eacute;t&eacute; d&eacute;limit&eacute;, mais dans bien des cas on ne sait ce qui d&eacute;clenche la sortie du cycle cellulaire. Cet article s&#39;int&eacute;resse &agrave; d&eacute;crire les progr&egrave;s r&eacute;cents de d&eacute;chiffrer comment terminal diff&eacute;renciation et la sortie du cycle cellulaire sont coordonn&eacute;s.

M&eacute;canismes de contr&ocirc;le de cycle cellulaire sortie sur la diff&eacute;renciation terminale.

Coordinamento differenziazione terminale con uscita permanente dal ciclo cellulare &egrave; fondamentale per la corretta organogenesi, ancora come il ciclo cellulare &egrave; bloccato differenziati tessuti rimane poco chiari. Sono stati delineati i ruoli importanti per il retinoblastoma familiare proteine e inibitori della chinasi ciclina-dipendente, ma in molti casi non &egrave; chiaro che cosa innesca l&#39;uscita del ciclo cellulare. Questa recensione si concentra su descrivendo i recenti progressi nella decifrazione come terminale differenziazione e uscita dal ciclo cellulare sono coordinati.

Meccanismi di controllo ciclo cellulare uscita su differenziazione terminale.

Terminally differentiated cells in Drosophila melanogaster wings and eyes are largely resistant to proliferation upon deregulation of either E2F or cyclin E (CycE), but exogenous expression of both factors together can bypass cell cycle exit. In this study, we show this is the result of cooperation of cell cycle control mechanisms that limit E2F-CycE positive feedback and prevent cycling after terminal differentiation. Aberrant CycE activity after differentiation leads to the degradation of E2F activator complexes, which increases the proportion of CycE-resistant E2F repressor complexes, resulting in stable E2F target gene repression. If E2F-dependent repression is lost after differentiation, high anaphase-promoting complex/cyclosome (APC/C) activity degrades key E2F targets to limit cell cycle reentry. Providing both CycE and E2F activities bypasses exit by simultaneously inhibiting the APC/C and inducing a group of E2F target genes essential for cell cycle reentry after differentiation. These mechanisms are essential for proper development, as evading them leads to tissue outgrowths composed of dividing but terminally differentiated cells.

A robust cell cycle control mechanism limits E2F-induced proliferation of terminally differentiated cells in vivo.

Terminalement diff&eacute;renci&eacute;es des cellules dans les ailes de Drosophila melanogaster et les yeux sont en grande partie r&eacute;sistants &agrave; la prolif&eacute;ration sur la d&eacute;r&eacute;glementation de E2F ou cycline E (CycE), mais expression exog&egrave;ne de ces deux facteurs ensemble peut contourner la sortie du cycle cellulaire. Dans cette &eacute;tude, nous montrons que c&#39;est le r&eacute;sultat de la coop&eacute;ration des m&eacute;canismes de contr&ocirc;le de cycle cellulaire qui limitent E2F-CycE r&eacute;troaction positive et emp&ecirc;cher le cyclisme apr&egrave;s la diff&eacute;renciation terminale. Aberrante CycE activit&eacute; apr&egrave;s diff&eacute;renciation conduit &agrave; la d&eacute;gradation des complexes d&#39;activateur E2F, ce qui augmente la proportion de complexes de r&eacute;presseur E2F CycE-r&eacute;sistant, ayant pour r&eacute;sultat stable r&eacute;pression g&eacute;nique de cible E2F. Si la r&eacute;pression E2F-d&eacute;pendante est perdue apr&egrave;s diff&eacute;renciation, forte favorisant l&#39;anaphase complexe/cyclosome (APC/C) activit&eacute; d&eacute;grade E2F cibles afin de limiter la rentr&eacute;e du cycle cellulaire. Offrir des activit&eacute;s de CycE tant E2F contourne sortie en simultan&eacute;ment inhibant l&#39;APC/C et induisant un groupe de g&egrave;nes cibles de E2F essentielles pour la rentr&eacute;e du cycle cellulaire apr&egrave;s diff&eacute;renciation. Ces m&eacute;canismes sont essentiels au bon d&eacute;veloppement, car leur &eacute;chapper conduit &agrave; excroissances de tissu compos&eacute;s de diviser, mais en phase terminale cellules diff&eacute;renci&eacute;es.

Un m&eacute;canisme de contr&ocirc;le robuste cell cycle limite la prolif&eacute;ration E2F-induite de cellules en phase terminale diff&eacute;renci&eacute;es in vivo.

Terminalmente differenziate cellule in Drosophila melanogaster ali e gli occhi sono in gran parte resistente alla proliferazione sulla deregolamentazione di E2F o di cyclin E (CycE), ma espressione esogena di entrambi i fattori insieme pu&ograve; bypassare uscita del ciclo cellulare. In questo studio, vi mostriamo che questo &egrave; il risultato della cooperazione di meccanismi di controllo del ciclo cellulare che limitano E2F-CycE un feedback positivo e prevenire la bici dopo la differenziazione terminale. Aberrante attivit&agrave; CycE dopo la differenziazione conduce alla degradazione dei complessi attivatore E2F, che aumenta la percentuale di complessi di repressore E2F CycE-resistente, con conseguente stabile repressione di E2F destinazione gene. Se repressione E2F-dipendente &egrave; perso dopo la differenziazione, ad alta attivit&agrave; (APC/C) complesso/cyclosome anafase-promozione degrada obiettivi E2F chiave per limitare il rientro del ciclo cellulare. Fornire attivit&agrave; di CycE e di E2F bypassa uscita contemporaneamente inibendo l&#39;APC/C e indurre un gruppo di geni bersaglio E2F essenziale per il ciclo cellulare rientro dopo la differenziazione. Questi meccanismi sono essenziali per lo sviluppo corretto, come eludere li conduce a escrescenze di tessuto composti di dividere ma terminalmente cellule differenziate.

Un meccanismo di controllo del ciclo cellulare robusto limita la proliferazione di E2F-indotta delle cellule terminalmente differenziate in vivo.

The transformation of a developing epithelium into an adult structure is a complex process, which often involves coordinated changes in cell proliferation, metabolism, adhesion, and shape. To identify genetic mechanisms that control epithelial differentiation, we analyzed the temporal patterns of gene expression during metamorphosis of the Drosophila wing.

Combinatorial control of temporal gene expression in the Drosophila wing by enhancers and core promoters.

La transformation d&#39;un &eacute;pith&eacute;lium en d&eacute;veloppement dans une structure adulte est un processus complexe, qui implique souvent des changements coordonn&eacute;s dans la prolif&eacute;ration cellulaire, m&eacute;tabolisme, adh&eacute;rence et la forme. Pour identifier les m&eacute;canismes g&eacute;n&eacute;tiques qui contr&ocirc;lent la diff&eacute;renciation &eacute;pith&eacute;liale, nous avons analys&eacute; les tendances temporelles de l&#39;expression g&eacute;nique au cours de la m&eacute;tamorphose de l&#39;aile de la drosophile.

Combinatoire control of temporal gene expression dans l&#39;aile de la drosophile par Embellisseurs et promoteurs de la base.

La trasformazione di un epitelio in via di sviluppo in una struttura adulti &egrave; un processo complesso, che spesso comporta modifiche coordinate nella proliferazione delle cellule, metabolismo, adesione e forma. Per identificare i meccanismi genetici che controllano la differenziazione epiteliale, abbiamo analizzato il pattern temporale dell&#39;espressione genica durante la metamorfosi dell&#39;ala della drosofila.

Laura Buttitta

Molecular,
Cellular and Developmental Biology,
Molecular, Cellular and Developmental Biology

University of Michigan

Live Cell Cycle Analysis of Drosophila Tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer and Vybrant DyeCycle Violet DNA Stain

Laura Buttitta

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University of Michigan

Live Cell Cycle Analysis of Drosophila Tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer and Vybrant DyeCycle Violet DNA Stain

Molecular,
Cellular and Developmental Biology,
Molecular, Cellular and Developmental Biology