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<em>In Vivo</em> Modeling of the Morbid Human Genome using <em>Danio rerio</em>

Here,  we present methods for the development of assays to query potentially clinically  significant nonsynonymous changes using in  vivo complementation ...

Duke University Medical Center

The expression level of human thymidine kinase (hTK) is regulated in a cell-cycle-dependent manner. One of the mechanisms responsible for the fluctuation of TK expression in the cell cycle can be attributed to protein degradation during mitosis. Given the facts that cell-cycle-dependent proteolysis is highly conserved in all eukaryotes and yeast cells are an excellent model system for protein-degradation study, here we report on the use of Saccharomyces cerevisiae and Schizosaccharomyces pombe to investigate the degradation signal and mechanism required for hTK degradation. We found that the stability of hTK is significantly reduced in mitotic yeasts. Previously, we have observed that Ser-13 is the site of mitotic phosphorylation of hTK in HeLa cells [Chang, Huang and Chi (1998) J. Biol. Chem. 273, 12095-12100]. Here, we further provide evidence that the replacement of Ser-13 by Ala (S13A) renders hTK stable in S. pombe and S. cerevisiae. Most interestingly, we demonstrated that degradation of hTK is impaired in S. cerevisiae carrying a temperature-sensitive mutation in the proteasomal gene pre1-1 or the Skp1-Cullin-1/CDC53-F-box (SCF) complex gene cdc34 or cdc53, suggesting the contribution of the SCF-mediated pathway in hTK degradation. As phosphorylation is a prerequisite signal for SCF recognition, our results implied that phosphorylation of Ser-13 probably contributes to the degradation signal for hTK via the SCF-mediated proteolytic pathway.

Degradation of human thymidine kinase is dependent on serine-13 phosphorylation: involvement of the SCF-mediated pathway.

&#x8FDE;&#x73AF; Wnt/&beta;-&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x764C;&#x75C7;&#x3002;&#x916A;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Iepsilon (CKIepsilon) &#x662F;&#x5178;&#x578B;&#x7684; wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x79EF;&#x6781;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x3002;CKIepsilon &#x672C;&#x8EAB;&#x53EF;&#x4EE5;&#x53D7;&#x4F53;&#x5916;&#x6291;&#x5236;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x548C;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x53EF;&#x4EE5;&#x53D7;&#x80DE;&#x5916;&#x523A;&#x6FC0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x548C;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; CKIepsilon &#x76F4;&#x63A5;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684; Wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; XWnt-8 &#x6216;&#x53E6;&#x5916;&#x7684;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; Wnt-3a &#x914D;&#x4F53;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; CKIepsilon &#x91CD;&#x5927;&#x548C;&#x8FC5;&#x901F;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;CKIepsilon &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x662F;&#x4E0B;&#x964D;&#x6291;&#x5236;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x7531; preincubation immunoprecipitated &#x6FC0;&#x9176;&#x4E0E; ATP &#x7684;&#x5E9F;&#x9664;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; CKIepsilon &#x6291;&#x5236;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x521B;&#x5EFA;&#x79F0;&#x4E3A; CKIepsilon(MM2)&#xFF0C;&#x662F;&#x660E;&#x663E;&#x6BD4; CKIepsilon &#x66F4;&#x6D3B;&#x8DC3;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176;&#x540E; Wnt &#x523A;&#x6FC0;&#x3002;Autoinhibition CKIepsilon &#x662F;&#x751F;&#x7269;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x56E0;&#x4E3A; CKIepsilon(MM2) &#x662F;&#x6BD4;&#x5728;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4ECE; Lef1 &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x8F6C;&#x5F55; CKIepsilon &#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#x7684; CKIepsilon(MM2) &#x8868;&#x8FBE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8F74;&#x91CD;&#x590D;&#x548C;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x53D1;&#x80B2;&#x5F02;&#x5E38;&#x3002;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; Wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x9020;&#x6210;&#x77AC;&#x6001;&#x9664;&#x78F7;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x6291;&#x5236;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E2D;&#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x7FA7;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x5B58;&#x5728;&#x6FC0;&#x6D3B; CKIepsilon&#x3002;&#x7ECF;&#x5178; wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x53EF;&#x80FD;&#x56E0;&#x6B64;&#x523A;&#x6FC0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x4F7F;&#x5176;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B; CKIepsilon

&#x916A;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x6211; &epsilon; &#x6D3B;&#x52A8;&#x7531; Wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

The Wnt/beta-catenin signaling pathway is important in both development and cancer. Casein kinase Iepsilon (CKIepsilon) is a positive regulator of the canonical Wnt pathway. CKIepsilon itself can be regulated in vitro by inhibitory autophosphorylation, and recent data suggest that in vivo kinase activity can be regulated by extracellular stimuli. We show here that the phosphorylation state and kinase activity of CKIepsilon are directly regulated by Wnt signaling. Coexpression of XWnt-8 or addition of soluble Wnt-3a ligand led to a significant and rapid increase in the activity of endogenous CKIepsilon. The increase in CKIepsilon activity is the result of decreased inhibitory autophosphorylation because it is abolished by preincubation of immunoprecipitated kinase with ATP. Furthermore, mutation of CKIepsilon inhibitory autophosphorylation sites creates a kinase termed CKIepsilon(MM2) that is significantly more active than CKIepsilon and is not activated further upon Wnt stimulation. Autoinhibition of CKIepsilon is biologically relevant because CKIepsilon(MM2) is more effective than CKIepsilon at activating transcription from a Lef1-dependent promoter. Finally, CKIepsilon(MM2) expression in Xenopus embryos induces both axis duplication and additional developmental abnormalities. The data suggest that Wnt signaling activates CKIepsilon by causing transient dephosphorylation of critical inhibitory sites present in the carboxyl-terminal domain of the kinase. Activation of the Wnt pathway may therefore stimulate a cellular phosphatase to dephosphorylate and activate CKIepsilon

Regulation of casein kinase I epsilon activity by Wnt signaling.

La voie de signalisation Wnt/b&ecirc;ta-cat&eacute;nine est importante dans le d&eacute;veloppement et le cancer. Cas&eacute;ine kinase Iepsilon (CKIepsilon) est un r&eacute;gulateur positif de la voie Wnt canonique. CKIepsilon elle-m&ecirc;me peut &ecirc;tre r&eacute;gl&eacute;e in vitro par autophosphorylation inhibitrice, et des donn&eacute;es r&eacute;centes sugg&egrave;rent que l&#39;activit&eacute; kinase in vivo peut &ecirc;tre r&eacute;gl&eacute;e par des stimuli extracellulaires. Nous montrons ici que l&#39;activit&eacute; kinase et de l&#39;&eacute;tat de phosphorylation de CKIepsilon sont r&eacute;gl&eacute;s directement par la signalisation Wnt. Coexpression de XWnt-8 ou de l&#39;adjonction de ligand soluble de Wnt-3 a entra&icirc;n&eacute; une augmentation significative et rapide dans l&#39;activit&eacute; de CKIepsilon endog&egrave;ne. L&#39;augmentation de l&#39;activit&eacute; CKIepsilon est le r&eacute;sultat d&#39;une diminution autophosphorylation inhibitrice parce qu&#39;elle est abolie par la pr&eacute;incubation de kinase d&#39;immunopr&eacute;cipit&eacute;e avec l&#39;ATP. En outre, mutation de CKIepsilon inhibiteur autophosphorylation sites cr&eacute;e une kinase appel&eacute;e CKIepsilon(MM2) qui est beaucoup plus active que CKIepsilon et n&#39;est pas encore activ&eacute; lors de la stimulation de Wnt. Auto-inhibition de CKIepsilon est biologiquement pertinente parce que CKIepsilon(MM2) est plus efficace que le CKIepsilon &agrave; l&#39;activation de la transcription d&#39;un promoteur d&eacute;pendant de Lef1. Enfin, CKIepsilon(MM2) expression dans des embryons de Xenopus induit fois duplication d&#39;axe et des anomalies de d&eacute;veloppement suppl&eacute;mentaires. Les donn&eacute;es sugg&egrave;rent que la signalisation Wnt active CKIepsilon en provoquant une d&eacute;phosphorylation transitoire de critiques sites inhibiteurs pr&eacute;sents dans le domaine c-terminal de la kinase. Activation de la voie Wnt pourrait donc stimuler une phosphatase cellulaire pour d&eacute;phosphorylent et activer CKIepsilon

R&egrave;glement de cas&eacute;ine kinase j&#39;ai activit&eacute; epsilon de signalisation Wnt.

Il signaling pathway Wnt/beta-catenina &egrave; importante per lo sviluppo e il cancro. Caseina chinasi Iepsilon (CKIepsilon) &egrave; un regolatore positivo del pathway canonico di Wnt. CKIepsilon stessa pu&ograve; essere regolato in vitro di autophosphorylation inibitorio, e dati recenti suggeriscono che l&#39;attivit&agrave; della chinasi in vivo pu&ograve; essere regolata da stimoli extracellulari. Mostriamo qui che l&#39;attivit&agrave; di stato e della chinasi fosforilazione della CKIepsilon sono regolati direttamente dalla segnalazione Wnt. Coexpression di XWnt-8 o l&#39;aggiunta di legante solubile di Wnt-3a ha portato a un significativo e rapido aumento dell&#39;attivit&agrave; del CKIepsilon endogena. L&#39;aumento dell&#39;attivit&agrave; CKIepsilon &egrave; il risultato di autophosphorylation inibitoria &egrave; diminuito, perch&eacute; si &egrave; abolito dalla preincubazione delle chinasi immunoprecipitated con ATP. Inoltre, la mutazione CKIepsilon inibitorio autophosphorylation siti crea una chinasi chiamata CKIepsilon(MM2) che &egrave; significativamente pi&ugrave; attivo che CKIepsilon e non interviene ulteriormente dopo stimolazione Wnt. Autoinhibition di CKIepsilon &egrave; biologicamente rilevanti perch&eacute; CKIepsilon(MM2) &egrave; pi&ugrave; efficace di CKIepsilon di attivare la trascrizione dal promotore Lef1-dipendente. Infine, CKIepsilon(MM2) espressione in embrioni di Xenopus induce sia asse duplicazione e ulteriori anomalie dello sviluppo. I dati suggeriscono che la segnalazione Wnt attiva CKIepsilon provocando transitoria defosforilazione di siti critici inibitori presente nel dominio carbossi-terminale della chinasi di. Attivazione del pathway Wnt pu&ograve; quindi stimolare una cellulare fosfatasi dephosphorylate e attivare CKIepsilon

Regolazione della chinasi della caseina sono attivit&agrave; epsilon di segnalazione Wnt.

&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF; Wnt/&beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x304C;&#x3093;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30BC;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; Iepsilon (CKIepsilon) &#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A; wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x80AF;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;CKIepsilon &#x81EA;&#x4F53;&#x4F53;&#x5916;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; in vivo &#x6D3B;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CKIepsilon &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x76F4;&#x63A5;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066; wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3002;XWnt 8 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3084;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027; Wnt 3a &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306F;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; CKIepsilon &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3068;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x9031;&#x9593; ATP &#x3068;&#x6C88;&#x6FB1;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x306E;&#x3067; CKIepsilon &#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x6291;&#x5236;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E; CKIepsilon &#x963B;&#x5BB3;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E; CKIepsilon &#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044; CKIepsilon(MM2) &#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x308B; wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3002;CKIepsilon(MM2) Lef1 &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3067; CKIepsilon &#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x6A19;&#x672C;&#x306E; CKIepsilon &#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; CKIepsilon(MM2) &#x5F0F;&#x8EF8;&#x91CD;&#x8907;&#x3084;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054; CKIepsilon &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6291;&#x5236;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066; dephosphorylate CKIepsilon &#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30BC;&#x30A4;&#x30F3; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F; wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3002;

Wnt/&#xBCA0;&#xD0C0;-catenin &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xACBD;&#xB85C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xC554;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xCE74; &#xC138; &#xC778; &#xB2C8; Iepsilon (CKIepsilon) &#xC815;&#xC2DD; Wnt &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xB2E4;. CKIepsilon &#xC790;&#xCCB4; &#xAE08;&#xC9C0; autophosphorylation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD1B5;&#xC81C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xACE0; &#xCD5C;&#xADFC; &#xB370;&#xC774;&#xD130; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD1B5;&#xC81C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; Ckiepsilon&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xC9C1;&#xC811; &#xADDC;&#xC81C; &#xD45C;&#xC2DC; Wnt &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;. XWnt 8 coexpression &#xB610;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; Wnt 3a ligand&#xC758; &#xB0B4; &#xC778; &#xC131; Ckiepsilon&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC774;&#xB04C;&#xC5B4; &#xB0C8;&#xB2E4;. CKIepsilon &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xAC10;&#xC18C; &#xAE08;&#xC9C0; autophosphorylation&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; ATP&#xC640; immunoprecipitated kinase&#xC758; preincubation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xB54C;&#xBB38;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, CKIepsilon &#xC5B5;&#xC81C; autophosphorylation &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC131; CKIepsilon &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xC801;&#xADF9;&#xC801; &#xC774;&#xBA70; &#xB354; &#xC774;&#xC0C1; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; CKIepsilon(MM2) &#xB418; &#xB098; &#xB2C8; Wnt &#xC790;&#xADF9; &#xC2DC;. CKIepsilon Autoinhibition CKIepsilon(MM2) CKIepsilon Lef1 &#xC885;&#xC18D; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC0AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801; &#xC774;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, CKIepsilon(MM2) &#xC2DD; Xenopus &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD95; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xCD94;&#xAC00; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC774;&#xC0C1;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE08;&#xC9C0; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; &#xD0A4;&#xC758; carboxyl &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC784;&#xC2DC; dephosphorylation&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558; &#xC5EC; CKIepsilon Wnt &#xC2E0;&#xD638; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Wnt &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; dephosphorylate&#xC640; Ckiepsilon&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xC790;&#xADF9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCE74; &#xC138; &#xC778; &#xB2C8;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xB098; Wnt &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860; &#xD65C;&#xB3D9;.

Wnt/beta-catenina v&iacute;a de se&ntilde;alizaci&oacute;n es importante en el desarrollo y c&aacute;ncer. Case&iacute;na quinasa Iepsilon (CKIepsilon) es un regulador positivo de la v&iacute;a de Wnt can&oacute;nica. CKIepsilon s&iacute; mismo puede ser regulado in vitro por autophosphorylation inhibitoria, y los datos recientes sugieren que la actividad quinasa in vivo puede ser regulada por est&iacute;mulos extracelulares. Aqu&iacute; mostramos que la actividad del estado y la quinasa de fosforilaci&oacute;n de CKIepsilon est&aacute;n reguladas directamente por la se&ntilde;alizaci&oacute;n de Wnt. Coexpresi&oacute;n de XWnt-8 o la adici&oacute;n de ligando soluble de Wnt-3a condujo a un aumento r&aacute;pido y significativo en la actividad de CKIepsilon end&oacute;geno. El incremento de la actividad CKIepsilon es el resultado de la disminuci&oacute;n autophosphorylation inhibitorio porque queda abolida por preincubaci&oacute;n de immunoprecipitated quinasa con ATP. Adem&aacute;s, mutaci&oacute;n CKIepsilon inhibitorio autophosphorylation sitios web crea una quinasa llamada CKIepsilon(MM2) que es significativamente m&aacute;s activa que CKIepsilon y no se activa m&aacute;s sobre el est&iacute;mulo de Wnt. AUTOINHIBICI&Oacute;N de CKIepsilon es biol&oacute;gicamente relevante porque CKIepsilon(MM2) es m&aacute;s eficaz que la CKIepsilon en la activaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n de un promotor dependiente de la Lef1. Finalmente, la expresi&oacute;n CKIepsilon(MM2) en embriones de Xenopus induce la duplicaci&oacute;n de eje y anormalidades de desarrollo adicionales. Los datos sugieren que la se&ntilde;alizaci&oacute;n de Wnt activa CKIepsilon haciendo transitoria desfosforilaci&oacute;n de sitios inhibitorios cr&iacute;ticos presentes en el dominio carboxilo terminal de la cinasa. Activaci&oacute;n de la v&iacute;a de Wnt por lo tanto puede estimular una fosfatasa celular para dephosphorylate y activar CKIepsilon

Regulaci&oacute;n de la case&iacute;na quinasa actividad &Eacute;psilon de se&ntilde;alizaci&oacute;n de Wnt.

Wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x662F;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#xFF0C;&#x662F;&#x5728;&#x591A;&#x4E2A;&#x764C;&#x75C7;&#x6C34;&#x5E73;&#x53CA;&#x3002;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x7684;&#x916A;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; &#xFF08;CKIdelta &#x548C; &epsilon;&#xFF09; &#x662F;&#x6B64;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x79EF;&#x6781;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A8;&#x6D4B;&#x7A81;&#x53D8; autoinhibitory &#x57DF;&#x4E2D;&#x7684; CKIdelta/&epsilon; &#x53EF;&#x80FD;&#x957F;&#x671F; CKIdelta/&epsilon; &#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x56E0;&#x6B64; Wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x817A;&#x7624;&#x6027;&#x606F;&#x8089;&#x548C;&#x60A3;&#x7ED3;&#x80A0;&#x764C;&#x7684;&#x98CE;&#x9669;&#x3002;&#x5916;&#x663E;&#x5B50;&#x7F16;&#x7801;&#x7684; CKIepsilon &#x548C; CKIdelta &#x7684;&#x7BA1;&#x7406;&#x57DF;&#x88AB;&#x4ECE;&#x4ECE;&#x6709;&#x817A;&#x7624;&#x6027;&#x606F;&#x8089;&#x7684;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x548C;&#x5BB6;&#x65CF;&#x53F2;&#x7684;&#x7ED3;&#x80A0;&#x764C;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6027;&#x817A;&#x7624;&#x6027;&#x606F;&#x8089;&#x75C5;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x6216;&#x9057;&#x4F20;&#x6027;&#x975E;&#x606F;&#x8089;&#x75C5;&#x6027;&#x7ED3;&#x76F4;&#x80A0;&#x764C; &#xFF08;HNPCC) &#x83B7;&#x5F97;&#x7684; DNA &#x6D4B;&#x5E8F;&#x3002;CKIdelta &#x9519;&#x4E49;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x66F4;&#x6539;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#xFF0C;Arg324&#xFF0C;&#x4E3A;&#x4ED6; &#xFF08;R324H&#xFF09;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x4E0E;&#x5927;&#x578B;&#x53CA;&#x591A;&#x53D1;&#x6027;&#x606F;&#x8089;&#x8BCA;&#x65AD;&#x5E74;&#x9F84;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x5C0F;&#x3002;&#x4E24;&#x9879;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x662F;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E00;&#x3001; &#x5F02;&#x4F4D;&#x8179;&#x4FA7;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684; CKIdelta(R324H) &#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x80DA;&#x80CE;&#x5728;&#x6B21;&#x5750;&#x6807;&#x8F74;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x4E0E;&#x8868;&#x9644;&#x52A0;&#x7279;&#x8272;&#x578B; (&#x6539;&#x53D8;&#x5F62;&#x6001;&#x8FD0;&#x52A8;) &#x4E0E;&#x4E0D;&#x53D7;&#x7BA1;&#x5236;&#x7684; CKIepsilon &#x89C1;&#x5230;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#xFF0C;CKIdelta(R324H) &#x662F;&#x6BD4; wildtype CKIdelta RKO &#x7ED3;&#x80A0;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x578B;&#x4E2D;&#x7684;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x3002;&#x867D;&#x7136; R324H &#x7A81;&#x53D8;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x663E;&#x8457;&#x66F4;&#x6539; CKIdelta &#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F53;&#x5916;&#x6FC0;&#x9176;&#x542B;&#x91CF;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x6216; Wnt/&beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x6240;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD; &beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8BB0;&#x8005;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4F1A;&#x6539;&#x53D8;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x8FD0;&#x52A8;&#x901A;&#x8FC7;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x65E9;&#x671F;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x7684; &beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x86CB;&#x767D;-&#x72EC;&#x7ACB;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; CKIdelta &#x7A81;&#x53D8;&#x53EF;&#x80FD;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x52A0;&#x5F3A; CKIdelta &#x901A;&#x8FC7; Wnt &#x8FDE;&#x73AF;&#x72EC;&#x7ACB;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x8F6C;&#x578B;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E86;&#x7ED3;&#x80A0;&#x817A;&#x7624;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

&#x75BE;&#x75C5;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x916A;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6211;&#x4E09;&#x89D2;&#x6D32;&#x7A81;&#x53D8;&#x53EF;&#x80FD;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x6027;&#x817A;&#x7624;&#x6027;&#x606F;&#x8089;&#x5F62;&#x6210;&#x901A;&#x8FC7; Wnt &#x8FDE;&#x73AF;&#x72EC;&#x7ACB;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

The Wnt signaling pathway is critical for embryonic development and is dysregulated in multiple cancers. Two closely related isoforms of casein kinase I (CKIdelta and epsilon) are positive regulators of this pathway. We speculated that mutations in the autoinhibitory domain of CKIdelta/epsilon might upregulate CKIdelta/epsilon activity and hence Wnt signaling and increase the risk of adenomatous polyps and colon cancer. Exons encoding the CKIepsilon and CKIdelta regulatory domains were sequenced from DNA obtained from individuals with adenomatous polyps and a family history of colon cancer unaffected by familial adenomatous polyposis or hereditary nonpolyposis colorectal cancer (HNPCC). A CKIdelta missense mutation, changing a highly conserved residue, Arg324, to His (R324H), was found in an individual with large and multiple polyps diagnosed at a relatively young age. Two findings indicate that this mutation is biologically active. First, ectopic ventral expression of CKIdelta(R324H) in Xenopus embryos results in secondary axis formation with an additional distinctive phenotype (altered morphological movements) similar to that seen with unregulated CKIepsilon. Second, CKIdelta(R324H) is more potent than wildtype CKIdelta in transformation of RKO colon cancer cells. Although the R324H mutation does not significantly change CKIdelta kinase activity in an in vitro kinase assay or Wnt/beta-catenin signal transduction as assessed by a beta-catenin reporter assay, it alters morphogenetic movements via a beta-catenin-independent mechanism in early Xenopus development. This novel human CKIdelta mutation may alter the physiological role and enhance the transforming ability of CKIdelta through a Wnt/beta-catenin independent mechanism and thereby influence colonic adenoma development.

Disease-associated casein kinase I delta mutation may promote adenomatous polyps formation via a Wnt/beta-catenin independent mechanism.

La v&iacute;a de se&ntilde;alizaci&oacute;n de Wnt es esencial para el desarrollo embrionario y dysregulated en varios tipos de c&aacute;ncer. Dos estrechamente relacionadas con isoformas de la case&iacute;na quinasa I (CKIdelta y epsilon) son reguladores positivos de esta v&iacute;a. Especulamos que mutaciones en el dominio de autoinhibitory de CKIdelta/epsilon podr&iacute;an actividad CKIdelta/epsilon de alza y por lo tanto Wnt signaling y aumentar el riesgo de p&oacute;lipos adenomatosos y c&aacute;ncer de colon. Exones codificaci&oacute;n los dominios CKIepsilon y CKIdelta del reguladoras fueron ordenados de ADN obtenido de individuos con p&oacute;lipos adenomatosos y antecedentes familiares de c&aacute;ncer de colon afectado por poliposis adenomatosa familiar o c&aacute;ncer colorrectal hereditario sin poliposis (HNPCC). Una mutaci&oacute;n sin sentido de CKIdelta, cambiando un residuo altamente conservado, Arg324, a su (R324H), fue encontrada en un individuo con grandes y m&uacute;ltiples p&oacute;lipos diagnosticados a una edad relativamente joven. Dos hallazgos indican que esta mutaci&oacute;n es biol&oacute;gicamente activa. En primer lugar, ect&oacute;pico expresi&oacute;n ventral de CKIdelta(R324H) en embriones de Xenopus da lugar a formaci&oacute;n de eje secundario con un fenotipo distintivo adicional (alteraci&oacute;n morfol&oacute;gicos movimientos) similar al que se observa con CKIepsilon no reglamentada. En segundo lugar, CKIdelta(R324H) es m&aacute;s potente que el wildtype CKIdelta en la transformaci&oacute;n de las c&eacute;lulas de c&aacute;ncer de colon RKO. Aunque la mutaci&oacute;n de R324H no cambia significativamente CKIdelta quinasa en un ensayo in vitro de la cinasa o Wnt/beta-catenina transduction de la se&ntilde;al seg&uacute;n lo determinado por un an&aacute;lisis de reportero de beta-catenina, altera los movimientos morfogen&eacute;ticos mediante un mecanismo independiente de la beta-catenina en el desarrollo temprano de Xenopus. Esta mutaci&oacute;n de CKIdelta humana puede alterar el papel fisiol&oacute;gico y mejorar la capacidad transformadora de CKIdelta a trav&eacute;s de un mecanismo independiente de Wnt/beta-catenina y as&iacute; influir en el desarrollo de adenoma col&oacute;nico.

Asociada a la enfermedad de la case&iacute;na quinasa mutaci&oacute;n delta puede promover la formaci&oacute;n de p&oacute;lipos adenomatosos mediante un mecanismo independiente de Wnt/beta-catenina.

Le Wnt voie de signalisation est critique pour le d&eacute;veloppement embryonnaire et dysr&eacute;gulation dans divers types de cancer. Deux proches d&#39;isoformes de cas&eacute;ine kinase I (CKIdelta et epsilon) sont les r&eacute;gulateurs positifs de cette voie. Nous avons suppos&eacute; que les mutations dans le domaine auto-inhibiteur de CKIdelta/epsilon pourraient r&eacute;guler positivement l&#39;activit&eacute; CKIdelta/epsilon et donc Wnt signaling et augmenter le risque de cancer du c&ocirc;lon et de polypes ad&eacute;nomateux. Exons codant les domaines r&eacute;glementaires, CKIepsilon et CKIdelta ont &eacute;t&eacute; s&eacute;quenc&eacute;s &agrave; partir d&#39;ADN provenant de personnes ayant des polypes ad&eacute;nomateux et des ant&eacute;c&eacute;dents familiaux de cancer du c&ocirc;lon pas affect&eacute; par la polypose ad&eacute;nomateuse familiale ou cancer colorectal h&eacute;r&eacute;ditaire sans polypose (HNPCC). Une mutation faux-sens CKIdelta, changeant un r&eacute;sidu hautement conserv&eacute;, Arg324, &agrave; son (R324H), a &eacute;t&eacute; trouv&eacute;e dans un individu avec de grandes et multiples polypes diagnostiqu&eacute;s &agrave; un &acirc;ge relativement jeune. Deux constatations indiquent que cette mutation est biologiquement active. Tout d&#39;abord, ectopique expression ventrale du CKIdelta(R324H) chez les embryons de Xenopus entra&icirc;ne formation axe secondaire avec un ph&eacute;notype distinctif suppl&eacute;mentaire (alt&eacute;ration morphologiques mouvements), similaire &agrave; celle observ&eacute;e avec les CKIepsilon non r&eacute;glement&eacute;e. Deuxi&egrave;mement, CKIdelta(R324H) est plus puissant que le type sauvage CKIdelta dans la transformation de cellules de cancer du c&ocirc;lon RKO. Bien que la mutation de R324H ne change pas significativement l&#39;activit&eacute; kinase CKIdelta dans un test in vitro kinase ou Wnt/b&ecirc;ta-cat&eacute;nine transduction du signal tel qu&#39;&eacute;valu&eacute; par un test de journaliste de b&ecirc;ta-cat&eacute;nine, il modifie les mouvements morphog&eacute;n&eacute;tiques via un m&eacute;canisme ind&eacute;pendant du b&ecirc;ta-cat&eacute;nine dans le d&eacute;veloppement pr&eacute;coce de Xenopus. Cette mutation originale de CKIdelta humaine peut-&ecirc;tre modifier le r&ocirc;le physiologique et accro&icirc;tre la capacit&eacute; de transformation de CKIdelta gr&acirc;ce &agrave; un m&eacute;canisme ind&eacute;pendant de Wnt/b&ecirc;ta-cat&eacute;nine et ainsi influencer le d&eacute;veloppement de l&#39;ad&eacute;nome colique.

Associ&eacute;s &agrave; la maladie de cas&eacute;ine kinase je mutation delta peut favoriser la formation de polypes ad&eacute;nomateux via un m&eacute;canisme ind&eacute;pendant de Wnt/b&ecirc;ta-cat&eacute;nine.

Il signaling pathway Wnt &egrave; fondamentale per lo sviluppo embrionale e in tumori multipli. Due strettamente isoforme della chinasi della caseina (CKIdelta ed epsilon) sono regolatori positivi di questo percorso. Abbiamo ipotizzato che le mutazioni nel dominio automatico CKIdelta/Epsilon potrebbero potenziamento attivit&agrave; CKIdelta/epsilon e quindi Wnt segnalazione e aumentare il rischio di polipi adenomatosi e cancro del colon. Esoni, codifica i domini CKIepsilon e CKIdelta normativi sono stati sequenziati da DNA ottenuto da individui con polipi adenomatosi e una storia familiare di cancro al colon inalterato da poliposi adenomatosa familiare o cancro colorettale ereditario non poliposico (HNPCC). Una mutazione missenso CKIdelta, cambiando un residuo altamente conservato, Arg324, al suo (R324H), &egrave; stata trovata in un individuo con grandi e multipli polipi diagnosticati ad un&#39;et&agrave; relativamente giovane. Due scoperte indicano che questa mutazione &egrave; biologicamente attiva. Primo, ectopica ventrale espressione di CKIdelta(R324H) in embrioni di Xenopus risultati nella formazione di asse secondario con un ulteriore fenotipo caratteristico (movimenti morfologici alterati) simile a quello visto con CKIepsilon non regolamentata. In secondo luogo, CKIdelta(R324H) &egrave; pi&ugrave; potente di wildtype CKIdelta della trasformazione delle cellule di cancro del colon RKO. Anche se la mutazione R324H non cambia in modo significativo l&#39;attivit&agrave; della chinasi CKIdelta in un&#39;analisi in vitro della chinasi o trasduzione di segnale Wnt/beta-catenina come valutato da un dosaggio di beta-catenina reporter, altera movimenti morfogenetici tramite un meccanismo di beta-catenina-indipendente nello sviluppo iniziale di Xenopus. Questa romanzo umana CKIdelta mutazione pu&ograve; alterare il ruolo fisiologico e migliorare la capacit&agrave; trasformante di CKIdelta attraverso un meccanismo indipendente di Wnt/beta-catenina e quindi influenzare lo sviluppo di adenoma del colon.

Chinasi associata a malattia di caseina mutazione delta pu&ograve; promuovere la formazione di polipi adenomatosi attraverso un meccanismo indipendente di Wnt/beta-catenina.

Wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x840C;&#x82BD;&#x671F;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3042;&#x308A;&#x591A;&#x767A;&#x764C;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x4E0D;&#x5168;&#x3002;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30AB;&#x30BC;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;CKIdelta &#x30FB; &#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;&#xFF09; &#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6B63;&#x51FA;&#x529B;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570; autoinhibitory &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; CKIdelta/&#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x4EA2;&#x9032; CKIdelta/&#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;&#x6D3B;&#x52D5;&#x304C;&#x63A8;&#x6E2C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3086;&#x3048; Wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3068;&#x817A;&#x816B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D7;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x30EA;&#x30B9;&#x30AF;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CKIepsilon &#x3068; CKIdelta &#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9; &#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30F3;&#x817A;&#x816B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x500B;&#x4EBA;&#x3068;&#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6027;&#x5927;&#x8178;&#x817A;&#x816B;&#x75C7;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x6027;&#x975E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DD;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x5927;&#x8178;&#x304C;&#x3093; (HNPCC) &#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x53F2;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F; DNA &#x304B;&#x3089;&#x5869;&#x57FA;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x7BC0;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3001;Arg324&#x3001;&#x5F7C; (R324H) &#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B; CKIdelta &#x306E;&#x30DF;&#x30B9;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x500B;&#x4EBA;&#x3067;&#x306F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x82E5;&#x3044;&#x5E74;&#x9F62;&#x3067;&#x8A3A;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D7;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;2 &#x3064;&#x3053;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x521D;&#x306B;&#x3001;&#x7570;&#x6240;&#x6027;&#x8179;&#x5074;&#x306E;&#x8868;&#x73FE; CKIdelta(R324H) &#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x80DA;&#x8EF8;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x8FFD;&#x52A0;&#x7279;&#x5FB4;&#x7684;&#x306A;&#x8868;&#x73FE; &#xFF08;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#xFF09; &#x898F;&#x5236; CKIepsilon &#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306B;&#x3001;CKIdelta(R324H) &#x306F;&#x3088;&#x308A;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x3082;&#x306E;&#x306A;&#x3057;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; CKIdelta RKO &#x7D50;&#x8178;&#x764C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5909;&#x5F62;&#x3067;&#x3059;&#x3002;R324H &#x5909;&#x7570;&#x304C; CKIdelta &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E; in vitro &#x3067;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x8A66;&#x91D1;&#x307E;&#x305F;&#x306F; &beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E; Wnt/&beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x521D;&#x671F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; &beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5F62;&#x614B;&#x5F62;&#x6210;&#x904B;&#x52D5;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593; CKIdelta &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x3066; CKIdelta &#x306E;&#x5909;&#x63DB;&#x80FD;&#x529B; Wnt/&beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x8178;&#x817A;&#x816B;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x75BE;&#x60A3;&#x95A2;&#x9023;&#x30AB;&#x30BC;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x79C1;&#x306F;&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570; Wnt/&beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30DD;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D7; () &#x3088;&#x308A;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Wnt &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xACBD;&#xB85C; &#xBC30;&#xC544; &#xBC1C;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC774;&#xBA70;, &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC554;&#xC5D0; dysregulated&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. 2 &#xBC00;&#xC811; isoforms &#xCE74; &#xC81C;&#xC778; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; (CKIdelta &#xBC0F; &#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860;)&#xB294;&#xC774; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xADDC;&#xC81C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; autoinhibitory &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; CKIdelta/&#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; upregulate CKIdelta/&#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCD94;&#xCE21; &#xD588;&#xB2E4; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; Wnt &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC6A9; &#xD3F4;&#xB9BD;&#xACFC; &#xB300; &#xC7A5; &#xC554;&#xC758; &#xC704;&#xD5D8;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0;. CKIepsilon &#xBC0F; CKIdelta &#xADDC;&#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; exons &#xC6A9; &#xD3F4;&#xB9BD;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC1C;&#xC778;&#xACFC; &#xAC00;&#xC871; &#xC6A9; &#xB300;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xACB0; &#xC7A5; &#xC554;&#xC774; &#xB098; &#xC720;&#xC804; nonpolyposis &#xB300; &#xC7A5; &#xC554; (HNPCC)&#xC758; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC5ED;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; DNA&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874; &#xB41C; &#xCC0C; &#xAEBC; &#xAE30;, Arg324, &#xADF8;&#xC758; (R324H)&#xC5D0; &#xBCC0;&#xACBD; CKIdelta missense &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD070; &#xAC1C;&#xC778; &#xBC0F; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC758; &#xD3F4;&#xB9BD; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC80A;&#xC740; &#xB098;&#xC774;&#xC5D0; &#xC9C4;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xD65C;&#xC131;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Xenopus &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; Ckidelta(r324h)&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8;, &#xC18C;&#xC131; &#xBCF5; &#xBD80; &#xC2DD;&#xC774; &#xBCF4;&#xC870; &#xCD95; &#xD615;&#xC131;&#xC740; &#xCD94;&#xAC00; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xD615; (&#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xC801; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;) &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xAD00;&#xACC4;&#xAC00; &#xC5C6;&#xB294; Ckiepsilon&#xB85C; &#xBCF8; &#xACB0;&#xACFC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB458;&#xC9F8;, Ckidelta(r324h)&#xC740; wildtype CKIdelta RKO &#xACB0; &#xC7A5; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xAC15;&#xB825; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. R324H &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xC678; &#xB2C8; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xC774;&#xB098; Wnt/&#xBCA0;&#xD0C0;-catenin &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658; &#xBCA0;&#xD0C0;-catenin &#xAE30;&#xC790; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3C9;&#xAC00;&#xC5D0;&#xC11C; CKIdelta &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xBE44;&#xB85D; &#xC804;&#xCCB4;&#xC801; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784; Xenopus &#xAC1C;&#xBC1C; &#xCD08;&#xAE30;&#xC5D0; &#xBCA0;&#xD0C0;-catenin&#xC5D0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC18C;&#xC124;&#xC740; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; CKIdelta &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xBC0F; Wnt/&#xBCA0;&#xD0C0;-catenin &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Ckidelta&#xC758; &#xBCC0;&#xD615; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xACE0; &#xADF8;&#xB85C; &#xC778;&#xD558;&#xC5EC; &#xC800; &#xC2B9; adenoma &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC9C8;&#xBCD1; &#xAD00;&#xB828; &#xCE74; &#xC81C;&#xC778; &#xB2C8; &#xB098; &#xB378;&#xD0C0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Wnt/&#xBCA0;&#xD0C0;-catenin &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC6A9; &#xD3F4;&#xB9BD; &#xD615;&#xC131; &#xCD09;&#xC9C4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x975E;&#x7ECF;&#x5178; Wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269; gastrulation &#x671F;&#x95F4;&#x63A7;&#x5236;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3002;&#x916A;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6211; &epsilon; (CKIvarepsilon) &#x662F; Wnt &#x6FC0;&#x9176;&#x8C03;&#x63A7; Wnt/&beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5E76;&#x5177;&#x6709; &beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x86CB;&#x767D;-&#x72EC;&#x7ACB;&#x89D2;&#x8272;&#x4E2D;&#x4E86;&#x89E3;&#x5F97;&#x5F88;&#x5C11;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684; CKIvarepsilon &#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6807;&#x8BC6;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#xFF0C;SIPA1L1/E6TP1&#xFF0C;&#x8BF4;&#x5531;&#x5C0F;&#x86CB;&#x767D;&#x5BB6;&#x65CF;&#x7684;&#x5DEE;&#x8DDD; (&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A; CKIvarepsilon phosphorylates SIPA1L1&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x5B83;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x589E;&#x52A0; Rap1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;Wnt-8&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B; CKIvarepsilon&#xFF0C;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86;&#x7684; CKIvarepsilon &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x964D;&#x89E3;&#x7684; SIPA1L1&#x3002;&#x5728;&#x65E9;&#x671F;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x6216;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x706D;&#x6D3B; Rap1 &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x5F02;&#x5E38; gastrulation &#x548C;&#x7F29;&#x77ED;&#x7684;&#x524D;&#x540E;&#x8F74;&#x3002;&#x867D;&#x7136; CKIvarepsilon &#x8FD8;&#x4F20;&#x611F;&#x5668; Wnt/&beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#xFF0C;Rap1 &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x6539;&#x53D8; &beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8C03;&#x63A7;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x5728;&#x89C4;&#x8303;&#x5316; Wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x4E3A; CKIvarepsilon &#x793A;&#x8303;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x660E; Wnt &#x8C03;&#x63A7;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x90E8;&#x5206;&#x901A;&#x8FC7;&#x4ECB;&#x5BFC; CKIvarepsilon Rap1 &#x4FE1;&#x53F7;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;

Wnt-CKIvarepsilon-Rap1 &#x901A;&#x8DEF;&#x8C03;&#x63A7; gastrulation &#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282; SIPA1L1&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x7684; Rap &#x86CB;&#x767D;&#x3002;

Noncanonical Wnt signals control morphogenetic movements during vertebrate gastrulation. Casein kinase I epsilon (CKIvarepsilon) is a Wnt-regulated kinase that regulates Wnt/beta-catenin signaling and has a beta-catenin-independent role(s) in morphogenesis that is poorly understood. Here we report the identification of a CKIvarepsilon binding partner, SIPA1L1/E6TP1, a GAP (GTPase activating protein) of the Rap small GTPase family. We show that CKIvarepsilon phosphorylates SIPA1L1 to reduce its stability and thereby increase Rap1 activation. Wnt-8, which activates CKIvarepsilon, enhances the CKIvarepsilon-dependent phosphorylation and degradation of SIPA1L1. In early Xenopus or zebrafish development, inactivation of the Rap1 pathway results in abnormal gastrulation and a shortened anterior-posterior axis. Although CKIvarepsilon also transduces Wnt/beta-catenin signaling, inhibition of Rap1 does not alter beta-catenin-regulated gene expression. Our data demonstrate a role for CKIvarepsilon in noncanonical Wnt signaling and indicate that Wnt regulates morphogenesis in part through CKIvarepsilon-mediated control of Rap1 signaling.

A Wnt-CKIvarepsilon-Rap1 pathway regulates gastrulation by modulating SIPA1L1, a Rap GTPase activating protein.

Non canonique Wnt signaux contr&ocirc;lent les mouvements morphog&eacute;n&eacute;tiques au cours de la gastrulation vert&eacute;br&eacute;e. Cas&eacute;ine kinase j&#39;epsilon (CKIvarepsilon) est une kinase r&eacute;gul&eacute;e Wnt qui r&eacute;glemente la signalisation Wnt/b&ecirc;ta-cat&eacute;nine et a un r&ocirc;le ind&eacute;pendant du b&ecirc;ta-cat&eacute;nine dans la morphogen&egrave;se qui est mal comprise. Nous rapportons ici l&#39;identification d&#39;une liaison CKIvarepsilon partenaire, SIPA1L1/E6TP1, un GAP (GTPase prot&eacute;ine activant) de la famille de GTPase petite Rap. Nous montrons que CKIvarepsilon phosphoryle SIPA1L1 pour r&eacute;duire sa stabilit&eacute; et augmenter ainsi l&#39;activation de Rap1. Wnt-8, qui s&#39;active CKIvarepsilon, am&eacute;liore la phosphorylation d&eacute;pendante du CKIvarepsilon et la d&eacute;gradation des SIPA1L1. Dans Xenopus pr&eacute;coce ou d&eacute;veloppement du poisson z&egrave;bre, inactivation de la voie Rap1 entra&icirc;ne la gastrulation anormale et un axe ant&eacute;ro-post&eacute;rieur raccourci. Bien que CKIvarepsilon aussi transduit de signalisation Wnt/b&ecirc;ta-cat&eacute;nine, inhibition de Rap1 ne modifie pas l&#39;expression des g&egrave;nes b&ecirc;ta-cat&eacute;nine-r&eacute;gl&eacute;es. Nos donn&eacute;es d&eacute;montrent un r&ocirc;le de CKIvarepsilon dans la signalisation Wnt non canonique et indiquent que Wnt r&eacute;gule la morphogen&egrave;se en partie gr&acirc;ce au contr&ocirc;le CKIvarepsilon-m&eacute;diation de Rap1 signalisation.

Une voie de signalisation Wnt-CKIvarepsilon-Rap1 r&eacute;glemente la gastrulation en modulant SIPA1L1, lancement d&#39;un Rap GTPase.

Canonica Wnt segnali di controllo movimenti morfogenetici durante la gastrulazione vertebrati. Chinasi della caseina epsilon (CKIvarepsilon) &egrave; una chinasi Wnt-regolato che regola la segnalazione Wnt/beta-catenina e ha un ruoli di beta-catenina-indipendenti nella morfogenesi che sono capita male. Qui riportiamo l&#39;identificazione di un&#39;associazione di CKIvarepsilon partner, SIPA1L1/E6TP1, un GAP (proteina d&#39;attivazione GTPase) della famiglia di GTPasi piccola Rap. Mostriamo che CKIvarepsilon tirosine SIPA1L1 per ridurre la sua stabilit&agrave; e quindi aumentare Rap1 attivazione. WNT-8, che si attiva CKIvarepsilon, migliora la fosforilazione CKIvarepsilon-dipendente e la degradazione di SIPA1L1. In Xenopus precoce o lo sviluppo dello zebrafish, inattivazione del percorso Rap1 risultati nella gastrulazione anormale e un asse antero-posteriore accorciato. Anche se CKIvarepsilon anche transduces segnalazione Wnt/beta-catenina, inibizione di Rap1 non altera l&#39;espressione di gene beta-catenina-regolato. I nostri dati dimostrano un ruolo per CKIvarepsilon nella segnalazione Wnt canonica e indicano che Wnt regola la morfogenesi in parte tramite il controllo CKIvarepsilon-mediato del Rap1 segnalazione.

Un pathway Wnt-CKIvarepsilon-Rap1 regola gastrulazione modulando SIPA1L1, un Rap d&#39;attivazione di GTPase.

&#x30AB;&#x30CE;&#x30CB;&#x30AB;&#x30EB; Wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x9020;&#x5730;&#x5F62;&#x904B;&#x52D5;&#x4E2D;&#x306B;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x80DA;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30BC;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; I &epsilon; (CKIvarepsilon) &#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F; &beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3; &#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5F62;&#x6210;&#x3068; Wnt/&beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B; wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CKIvarepsilon &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3001;SIPA1L1/E6TP1 &#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A; GTPase &#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30AE;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7; &#xFF08;gtp &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF09;&#x3002;&#x79C1;&#x9054;&#x306F; CKIvarepsilon &#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; Rap1 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B; SIPA1L1 &#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;-8&#x3001;CKIvarepsilon &#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;, CKIvarepsilon &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068; SIPA1L1 &#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x304C;&#x5411;&#x4E0A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x521D;&#x671F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Rap1 &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x7570;&#x5E38;&#x539F;&#x8178;&#x9665;&#x5165;&#x3068;&#x77ED;&#x7E2E;&#x524D;&#x5F8C;&#x8EF8;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Wnt/&beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB; CKIvarepsilon &#x3092;&#x307E;&#x305F;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x3001;Rap1 &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F; &beta; &#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x898F;&#x5236;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x30AB;&#x30CE;&#x30CB;&#x30AB;&#x30EB; Wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B; CKIvarepsilon &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3057;&#x3001;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0; Wnt &#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8; Rap1 &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB; CKIvarepsilon &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB; CKIvarepsilon Rap1 &#x7D4C;&#x8DEF;&#x539F;&#x8178;&#x9665;&#x5165; SIPA1L1&#x3001;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7; GTPase &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x6574;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBE44;&#xC815;&#xADDC; Wnt &#xC2E0;&#xD638; &#xCC99; &#xCD94;&#xAC00; gastrulation &#xB3D9;&#xC548; &#xC804;&#xCCB4;&#xC801; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCE74; &#xC138; &#xC778; &#xB2C8; &#xB098; &#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860; (CKIvarepsilon)&#xB294; Wnt &#xADDC;&#xC81C; &#xB2C8; Wnt/&#xBCA0;&#xD0C0;-catenin &#xC2E0;&#xD638; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xACE0; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC774;&#xD574; morphogenesis&#xC5D0; &#xBCA0;&#xD0C0;-catenin&#xC5D0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; CKIvarepsilon &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;, SIPA1L1/E6TP1, &#xB7A9; &#xC791;&#xC740; GTPase &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xACA9;&#xCC28; (GTPase &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;). &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; CKIvarepsilon phosphorylates SIPA1L1 &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xACE0; &#xADF8;&#xB85C; &#xC778;&#xD558;&#xC5EC; Rap1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC99D;&#xAC00;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Wnt-8, Ckivarepsilon&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, CKIvarepsilon &#xC885;&#xC18D; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC640; sipa1l1&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD08;&#xAE30; Xenopus &#xB610;&#xB294; zebrafish &#xAC1C;&#xBC1C; Rap1 &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xACB0;&#xACFC; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; gastrulation&#xC640; &#xB2E8;&#xCD95;&#xB41C; &#xC55E;&#xCABD; &#xD6C4;&#xBD80; &#xCD95;. Ckivarepsilon&#xB294; &#xB610;&#xD55C; Wnt/&#xBCA0;&#xD0C0;-catenin &#xC2E0;&#xD638; transduces, &#xBE44;&#xB85D; Rap1 &#xC5B5;&#xC81C; &#xBCA0;&#xD0C0;-catenin &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBE44;&#xC815;&#xADDC; Wnt &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; Ckivarepsilon&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC785;&#xC99D; &#xD558; &#xACE0;&#xB294; Wnt &#xC870;&#xC808; morphogenesis &#xC77C;&#xBD80; Rap1 &#xC2E0;&#xD638; &#xC81C;&#xC5B4; CKIvarepsilon &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Wnt CKIvarepsilon Rap1 &#xD1B5;&#xB85C; SIPA1L1, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB7A9; GTPase &#xBCC0;&#xC870; &#xD558; &#xC5EC; gastrulation&#xB97C; &#xD1B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

Noncanonical se&ntilde;ales de Wnt controlan movimientos morfogen&eacute;ticos durante la gastrulaci&oacute;n vertebrado. Case&iacute;na quinasa epsilon (CKIvarepsilon) es una quinasa regulada por Wnt que regula la se&ntilde;alizaci&oacute;n de Wnt/beta-catenina y tiene un rol de beta-catenina-independiente en la morfog&eacute;nesis que es mal entendida. Aqu&iacute; divulgamos la identificaci&oacute;n de un atascamiento de CKIvarepsilon socio, SIPA1L1/E6TP1, una brecha (prote&iacute;na activadora de GTPasa) de la familia peque&ntilde;a de GTPasa de Rap. Mostramos que CKIvarepsilon fosforila SIPA1L1 para reducir su estabilidad y as&iacute; aumentar la activaci&oacute;n de Rap1. WNT-8, que activa el CKIvarepsilon, aumenta la fosforilaci&oacute;n dependiente de la CKIvarepsilon y la degradaci&oacute;n del SIPA1L1. En Xenopus temprano o desarrollo del pez cebra, inactivaci&oacute;n de la v&iacute;a de Rap1 resultado gastrulaci&oacute;n anormal y un eje anterior-posterior acortado. Aunque CKIvarepsilon tambi&eacute;n transmite la se&ntilde;alizaci&oacute;n de Wnt/beta-catenina, inhibici&oacute;n de Rap1 no altera la expresi&oacute;n de genes regulados por beta-catenina. Nuestros datos demuestran un papel para CKIvarepsilon en la noncanonical de la se&ntilde;alizaci&oacute;n de Wnt e indican que Wnt regula la morfog&eacute;nesis en parte a trav&eacute;s del control de CKIvarepsilon-mediado de Rap1 se&ntilde;alizaci&oacute;n.

Una v&iacute;a de Wnt-CKIvarepsilon-Rap1 regula gastrulaci&oacute;n modulando SIPA1L1, una GTPasa de Rap prote&iacute;na activadora.

1. The aim of the present study was to investigate the molecular mechanisms by which pipoxolan exerts its inhibitory effects and apoptotic activity in human leukaemia HL-60 cells. 2. The effects of pipoxolan on the proliferation of HL-60 cells and on the distribution of cells within different phases of the cell cycle were investigated indirectly using a Trypan blue assay and a flow cytometer, respectively. The effects of pipoxolan on the apoptosis of HL-60 cells was investigated using DNA fragmentation and flow cytometer. The expression of factors affecting the cell cycle and apoptosis, including p53, p21, Bax, Bcl2, cytochrome c, caspase 3 and caspase 9, was examined by western blotting. 3. At 6.25 microg/mL, pipoxolan significantly induced apoptosis in human leukaemia HL-60 cells after 24 h exposure. In addition, HL-60 cells were arrested in the G(0)/G(1) phase via the induction of p53/p21 by pipoxolan. Apoptosis was associated with an increased Bax/Bcl-2 ratio, cytochrome c release, cleavage of procaspases-9 and -3 and hydrolysis of poly(ADP-ribose) polymerase. Intracellular reactive oxygen species (ROS) seem to play a key role in the pipoxolan-induced apoptosis, because high levels of ROS were produced early in the drug treatment. Apoptosis was significantly abrogated by the free radical scavenger N-acetylcysteine (NAC).

Pipoxolan inhibits proliferation of HL-60 human leukaemia cancer cells by arresting the cell cycle at the G0/G1 phase.

The established antiplatelet and anticoagulant agents show beneficial effects in the treatment of thromboembolic diseases; however, these drugs still have considerable limitations. The effects of NP-184, a synthetic compound, on platelet functions, plasma coagulant activity, and mesenteric venule thrombosis in mice were investigated. NP-184 concentration-dependently inhibited the human platelet aggregation induced by collagen, arachidonic acid (AA), and U46619, a thromboxane (TX)A(2) mimic, with IC(50) values of 4.5 +/- 0.2, 3.9 +/- 0.1, and 9.3 +/- 0.5 microM, respectively. Moreover, NP-184 concentration-dependently suppressed TXA(2) formations caused by collagen and AA. In exploring effects of NP-184 on enzymes involved in TXA(2) synthesis, we found that NP-184 selectively inhibited TXA(2) synthase activity with an IC(50) value of 4.3 +/- 0.2 microM. Furthermore, NP-184 produced a right shift of the concentration-response curve of U46619, indicating a competitive antagonism on TXA(2)/prostaglandin H(2) receptor. Intriguingly, NP-184 also caused a concentration-dependent prolongation of the activated partial thromboplastin time (aPTT) with no changes in the prothrombin and thrombin time, indicating that it selectively impairs the intrinsic coagulation pathway. Oral administration of NP-184 significantly inhibited thrombus formation of the irradiated mesenteric venules in fluorescein sodium-treated mice without affecting the bleeding time induced by tail transection. However, after oral administration, NP-184 inhibited the ex vivo mouse platelet aggregation triggered by collagen and U46619 and also prolonged aPTT. Taken together, the dual antiplatelet and anticoagulant activities of NP-184 may have therapeutic potential as an oral antithrombotic agent in the treatment of thromboembolic disorders.

NP-184[2-(5-methyl-2-furyl) benzimidazole], a novel orally active antithrombotic agent with dual antiplatelet and anticoagulant activities.

A cDNA fragment (FaPR4) encoding a class I pathogenesis-related protein 4 (PR-4) from Ficus awkeotsang was obtained by PCR cloning. Plant PR-4s were grouped into class I and II, differing by the presence of ChtBD and hinge. The predicted mature FaPR4 comprises N-terminal chitin-binding domain (ChtBD), hinge, Barwin domain and C-terminal extension. FaPR4-C, an N-terminal truncated form of FaPR4, was designed to mimic the structural feature of class II PR-4s. FaPR4 and FaPR4-C were over-expressed in yeast Pichia pastoris, and both recombinants exhibited RNase and anti-fungal activities. To our knowledge, it is the first report that FaPR4, a member of class I PR-4s has RNase activity as class II. FaPR4 possesses better anti-fungal activities toward Fusarium oxysporum and Sclerotium rolfsii than FaPR4-C. Heat-treated FaPR4 remained RNase and anti-fungal activities; while heat-treated FaPR4-C lost those activities. Therefore, ChtBD of FaPR4 may not only contribute to its anti-fungal but also improve the thermal stability of protein. It also implied the correlation of RNase activity with anti-fungal activity of FaPR4-C. Furthermore, FaPR4 was detected to have weak but significant chitinase activity, and its chitinase activity was reduced after heat treatment. The chitinase activity by FaPR4-C was much lower than FaPR4.

Cloning and expression of pathogenesis-related protein 4 from jelly fig (Ficus awkeotsang Makino) achenes associated with ribonuclease, chitinase and anti-fungal activities.

Cilia are evolutionarily conserved microtubule-based organelles that are crucial for diverse biological functions, including motility, cell signaling and sensory perception. In humans, alterations in the formation and function of cilia manifest clinically as ciliopathies, a growing class of pleiotropic genetic disorders. Despite the substantial progress that has been made in identifying genes that cause ciliopathies, therapies for these disorders are not yet available to patients. Although mice with a hypomorphic mutation in the intraflagellar transport protein IFT88 (Ift88Tg737Rpw mice, also known as ORPK mice)5 have been well studied, the relevance of IFT88 mutations to human pathology is unknown. We show that a mutation in IFT88 causes a hitherto unknown human ciliopathy. In vivo complementation assays in zebrafish and mIMCD3 cells show the pathogenicity of this newly discovered allele. We further show that ORPK mice are functionally anosmic as a result of the loss of cilia on their olfactory sensory neurons (OSNs). Notably, adenoviral-mediated expression of IFT88 in mature, fully differentiated OSNs of ORPK mice is sufficient to restore ciliary structures and rescue olfactory function. These studies are the first to use in vivo therapeutic treatment to reestablish cilia in a mammalian ciliopathy. More broadly, our studies indicate that gene therapy is a viable option for cellular and functional rescue of the complex ciliary organelle in established differentiated cells.

I-Chun Tsai

Center for Human Disease Modeling,
Department of Cell Biology,
Center for Human Disease Modeling, Department of Cell Biology

Duke University Medical Center

In Vivo Modeling of the Morbid Human Genome using Danio rerio

I-Chun Tsai

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Center for Human Disease Modeling,Department of Cell Biology,Center for Human Disease Modeling, Department of Cell Biology

Duke University Medical Center

In Vivo Modeling of the Morbid Human Genome using Danio rerio

Center for Human Disease Modeling,
Department of Cell Biology,
Center for Human Disease Modeling, Department of Cell Biology