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Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging

Cardiac myocytes isolated from adult hearts are widely accepted as a model somewhere half way between embryonic and neonatal muscle cells on one side and ...

Universty of Saarland

cdc25C &#x662F;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x8BE5;&#x6CD5;&#x89C4;&#x5B9A;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x56E0;&#x5B50;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; B/cdk1 &#x7684;&#x8131;&#x6C2E;&#x9664;&#x78F7;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x89E6;&#x53D1; G (2) /M &#x8FC7;&#x6E21;&#x3002;Cdc25C &#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x88AB;&#x53D7;&#x5B83;&#x672C;&#x8EAB;&#x7275;&#x8FDE;&#x5728;&#x89C4;&#x7BA1;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x53EF;&#x63A5;&#x53D7;&#x7684; cdc25C &#x5DF2;&#x8F93;&#x5165;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; B/cdk1 G (2) /M &#x8FC7;&#x6E21;&#x65F6;&#x671F;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5; cdc25C &#x4F4D;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5728;&#x5DF2;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x81F4;&#x5BC6;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x7531;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x751F;&#x5316; subfractionation &#x539F;&#x6765;&#x662F;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x3002;&#x5B83;&#x5C06;&#x4F1A;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;cdc25C &#x5728;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x5206;&#x6570;&#x662F;&#x6D3B;&#x8DC3;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x6697;&#x793A;&#x5728;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA; cdc25C &#x989D;&#x5916;&#x548C;&#x65B0;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x5728;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7684;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; cdc25C&#x3002;

cdc25C is a phosphatase which regulates the activity of the mitosis promoting factor cyclin B/cdk1 by dephosphorylation, thus triggering G(2)/M transition. The activity of cdc25C is regulated by phosphorylation which by itself is implicated in regulating the subcellular localization. It is well accepted that cdc25C has to enter the nucleus to activate the cyclin B/cdk1 complex at G(2)/M transition. Here, we will show that cdc25C is located in the cytoplasm at defined dense structures which by immunofluorescence analysis as well as by biochemical subfractionation turned out to be the Golgi apparatus. It will be further shown that cdc25C at the Golgi fraction is an active phosphatase suggesting an additional and new role of cdc25C at the Golgi apparatus.

The mitotic phosphatase cdc25C at the Golgi apparatus.

cdc25C est une phosphatase qui r&eacute;glemente l&#39;activit&eacute; de la promotion de la mitose facteur cycline B/cdk1 par d&eacute;phosphorylation, ce qui a d&eacute;clench&eacute; transition/m G (2). L&#39;activit&eacute; de cdc25C est r&eacute;glement&eacute;e par la phosphorylation qui, en soi, est impliqu&eacute;e dans la r&eacute;gulation de la localisation subcellulaire. Il est bien reconnu que cdc25C doit p&eacute;n&eacute;trer dans le noyau pour activer la cycline B/cdk1 complexe de transition/m G (2). Ici, nous allons montrer que cdc25C se trouve dans le cytoplasme des structures denses d&eacute;finies qui, par l&#39;analyse de l&#39;immunofluorescence, ainsi que par sous-fractionnement biochimique, s&#39;est av&eacute;r&eacute; &ecirc;tre l&#39;appareil de Golgi. Il sera d&eacute;montr&eacute; plus loin que cdc25C &agrave; l&#39;appareil de Golgi fraction est une phosphatase active, ce qui sugg&egrave;re un r&ocirc;le suppl&eacute;mentaire et nouveau de cdc25C &agrave; l&#39;appareil de Golgi.

La phosphatase mitotique cdc25C &agrave; l&#39;appareil de Golgi.

cdc25C ist eine Phosphatase, die die Aktivit&auml;t der Mitose zur F&ouml;rderung regelt Faktor cyclin B/cdk1 durch Dephosphorylierung, somit Triggerung G (2) / m &Uuml;bergang. Die T&auml;tigkeit des cdc25C wird durch Phosphorylierung reguliert, die selbst darin verwickelt ist, bei der Regulierung der subzellularen Lokalisation. Es wird gut angenommen, dass dieser cdc25C ist den Kern um die cyclin B/cdk1 komplexe bei G (2) / m &Uuml;bergang zu aktivieren. Hier zeigen wir, dass dieses cdc25C befindet sich im Zytoplasma an definierten dichten Strukturen die durch Immunfluoreszenz-Analyse sowie biochemische Subfractionation erwies sich als Golgi-Apparat. Es wird weiter gezeigt werden, dass cdc25C bei der Golgi-Bruch ist eine aktive Phosphatase schl&auml;gt eine zus&auml;tzliche und neue Rolle von cdc25C an den Golgi-Apparat.

Die mitotische Phosphatase-cdc25C am Golgi-Apparat.

cdc25C &egrave; una fosfatasi che regola l&#39;attivit&agrave; di promozione della mitosi fattore cyclin B/cdk1 di defosforilazione, provocando la transizione G (2) m. L&#39;attivit&agrave; di cdc25C &egrave; regolata dalla fosforilazione che di per s&eacute; &egrave; implicata nella regolazione della localizzazione sottocellulare. &Egrave; ben accettato che cdc25C deve entrare il nucleo per attivare il cyclin B/cdk1 complesso alla transizione G (2) m. Qui, ci mostrer&agrave; che cdc25C si trova nel citoplasma a definite strutture dense che da analisi immunofluorescenza nonch&eacute; da subfractionation biochimica si rivel&ograve; per essere l&#39;apparato del Golgi. Verr&agrave; inoltre mostrato che cdc25C presso il Golgi frazione &egrave; una fosfatasi attiva, suggerendo un ruolo ulteriore e nuovo di cdc25C all&#39;apparato di Golgi.

La fosfatasi mitotica cdc25C all&#39;apparato di Golgi.

cdc25C &#x306E;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x4FC3;&#x9032;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x8981;&#x56E0;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3; B/cdk1 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5F93;&#x3063;&#x3066; G (2)/M &#x306E;&#x9077;&#x79FB;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Cdc25C &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306F;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x4E0B;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x305D;&#x306E; cdc25C cdk1 &#x306F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3; B/&#x306B;&#x3088;&#x308B; G (2)/M &#x9077;&#x79FB;&#x3067;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x6838;&#x306B;&#x5165;&#x529B;&#x3057;&#x3066;&#x3082;&#x53D7;&#x3051;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E; cdc25C &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306F;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684; subfractionation &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x86CD;&#x5149;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x88C5;&#x7F6E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x306E;&#x5BC6;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E; cdc25C &#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3067;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x5206;&#x6570;&#x3001;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x88C5;&#x7F6E;&#x3067; cdc25C &#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x3068;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC; cdc25C &#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x88C5;&#x7F6E;&#x3067;&#x3002;

cdc25C &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; dephosphorylation, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; G (2) /M &#xC804;&#xD658; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xB9C1;&#xC73C;&#xB85C; cyclin B/cdk1 &#xC694;&#xC18C; &#xC774;&#xB2E4;. Cdc25c&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC790;&#xCCB4; &#xC870;&#xC808; subcellular &#xC9C0; &#xBC29;&#xD654;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8;&#xB294; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC798; &#xADF8; cdc25C G (2) /M &#xC804;&#xD658;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC5D0;&#xC11C; cyclin B/cdk1&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD575;&#xC744; &#xC785;&#xB825; &#xD558;&#xB294; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; cdc25C &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xC870;&#xBC00;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xBD84;&#xC11D; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; subfractionation Golgi &#xAE30;&#xAD6C; &#xC784;&#xC774; &#xBC1D;&#xD600;&#xC84C;&#xB2E4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB354; &#xADF8; cdc25C &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xB97C; Golgi &#xBD84;&#xC218;&#xB294; Golgi &#xAE30;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; cdc25c&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD65C;&#xC131; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;.

Golgi &#xAE30;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; mitotic &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; cdc25c&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

cdc25C es una fosfatasa que regula la actividad de la promoci&oacute;n de la mitosis factor Ciclina B/cdk1 por desfosforilaci&oacute;n, desencadenando as&iacute; transici&oacute;n/m G (2). La actividad de cdc25C es regulada por fosforilaci&oacute;n que por s&iacute; mismo est&aacute; implicada en la regulaci&oacute;n de la localizaci&oacute;n subcelular. Es bien aceptado que cdc25c tiene que entrar en el n&uacute;cleo para activar la Ciclina B/cdk1 complejo en transici&oacute;n/m G (2). Aqu&iacute;, mostramos que cdc25c se encuentra en el citoplasma en estructuras densas definidas que por an&aacute;lisis de la inmunofluorescencia y bioqu&iacute;mico subfractionation result&oacute; para ser el aparato de Golgi. Se mostrar&aacute;n m&aacute;s que cdc25C en el Golgi fracci&oacute;n es una fosfatasa activa, sugiriendo un papel nuevo y adicional de cdc25C en el aparato de Golgi.

La mitosis fosfatasa cdc25C en el aparato de Golgi.

&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x88AB;&#x53D7;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#xFF0C;&#x5728;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x751F;&#x957F;&#x6291;&#x5236; p53 &#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7F51;&#x7EDC;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8C03;&#x63A7;&#x662F;&#x4ECE;&#x9175;&#x6BCD;&#x5F88;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x4EBA;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x4EBA;&#x7C7B; p53 &#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x540C;&#x65F6;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; cdc25C&#xFF0C;&#x8C03;&#x8282;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x8FDB;&#x5165;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x589E;&#x957F;&#x62D8;&#x6355;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x8868;&#x8FBE;&#x6709;&#x65E0;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; p53&#x3002;&#x672C;&#x6587;&#x6240;&#x8FF0;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; cdc25C &#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x6291;&#x5236; p53 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x751F;&#x957F;&#x902E;&#x6355;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A; p53 &#x662F; co immunoprecipitated &#x4E0E; cdc25C &#x548C; p53 &#x4EE5;&#x5242;&#x91CF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6291;&#x5236; cdc25C &#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x50CF; cdc25C&#xFF0C;&#x5176;&#x4ED6;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F19;&#x4F34;&#x7684; p53 &#x89C4;&#x7BA1;&#x8FDB;&#x5165;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; cdc25C&#x3002;

P53 &#x548C; cdc25C &#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8C03;&#x63A7;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5E72;&#x6270;&#x3002;

The eukaryotic cell cycle is regulated by a network of different protein kinases and phosphatases which are by various mechanisms linked to the growth suppressor p53. Cell cycle regulation is quite similar from yeast to man. Although there is no endogenous p53 in yeast expression of human p53 led to growth arrest of yeast cells which can be suppressed by simultaneous overexpression of cdc25C, a phosphatase regulating entry into mitosis. Herein, we show that overexpression of cdc25C in mammalian cells is insufficient in suppressing a p53 induced growth arrest. We further show that p53 is co-immunoprecipitated with cdc25C and p53 inhibits the cdc25C phosphatase activity in a dose-dependent manner. Thus, our data show that p53 like other binding partners of cdc25C, regulates entry into mitosis by binding to cdc25C.

Interference between p53 and cdc25C in cell cycle regulation.

Le cycle cellulaire eucaryote est r&eacute;glement&eacute; par un r&eacute;seau de diff&eacute;rentes prot&eacute;ines kinases et phosphatases qui constituent par divers m&eacute;canismes li&eacute;s &agrave; la croissance suppresseur p53. R&eacute;gulation du cycle cellulaire est assez semblable &agrave; de la levure &agrave; l&#39;homme. Bien qu&#39;il n&#39;y a aucun p53 endog&egrave;ne dans l&#39;expression de la levure de p53 humaine a conduit &agrave; l&#39;arr&ecirc;t de la croissance des cellules de levure qui peut &ecirc;tre supprim&eacute; par une surexpression simultan&eacute;e de cdc25C, une phosphatase r&eacute;glementant l&#39;entr&eacute;e en mitose. Ici, nous montrons que la surexpression de cdc25C en mammif&egrave;res cellules ne suffit pas &agrave; r&eacute;primer un arr&ecirc;t de croissance induite de p53. De plus, nous montrons que p53 est co-immunopr&eacute;cipit&eacute;e avec cdc25C et p53 inhibe l&#39;activit&eacute; de la phosphatase cdc25C de mani&egrave;re dose-d&eacute;pendante. Ainsi, nos r&eacute;sultats montrent que p53 comme les autres partenaires de liaison de cdc25C, r&eacute;glemente entr&eacute;e en mitose en se liant &agrave; cdc25C.

Interf&eacute;rence entre p53 et cdc25C dans la r&eacute;gulation du cycle cellulaire.

Der eukaryotischen Zelle Zyklus wird durch ein Netzwerk von verschiedenen Proteinkinasen und Phosphatasen, die durch verschiedene Mechanismen, die mit dem Wachstum Tumorsuppressor p53 verkn&uuml;pft sind. Zellzykluskontrolle ist ziemlich &auml;hnlich aus Hefe, Mann. Zwar es keine endogenen p53 in Hefe Ausdruck der menschlichen p53 f&uuml;hrte zur Verhaftung von Wachstum der Hefezellen, die durch eine simultane &Uuml;berexpression von cdc25C, eine Phosphatase, die Regulierung der Mitoseeintritts unterdr&uuml;ckt werden kann gibt. Hier zeigen wir, dass eine &Uuml;berexpression von cdc25C in S&auml;uger Zellen reicht bei der Unterdr&uuml;ckung einer p53-induzierte Wachstumanhalten. Wir zeigen weiter, dass p53 co-Immunoprecipitated mit cdc25C ist und p53 die cdc25C Phosphatase-Aktivit&auml;t in einer Dosis-abh&auml;ngigen Weise hemmt. Damit unsere Daten zeigen, dass p53 wie andere Bindung-Partner von cdc25C, Mitoseeintritts durch Bindung an cdc25C regelt.

Interferenzen zwischen p53 und cdc25C in Zellzykluskontrolle.

Il ciclo cellulare eucariotico &egrave; regolato da una rete di differenti della proteina chinasi e fosfatasi che vengono da vari meccanismi legati alla crescita soppressore p53. Regolazione del ciclo cellulare &egrave; abbastanza simile dal lievito all&#39;uomo. Anche se non non c&#39;&egrave; nessun p53 endogeni nell&#39;espressione lievito di p53 umana ha portato all&#39;arresto di crescita delle cellule di lievito che pu&ograve; essere soppressa dal simultaneo sovraespressione di cdc25C, una fosfatasi regolazione entrata in mitosi. Nel presente documento, mostriamo che sovraespressione di cdc25C nei mammiferi le cellule &egrave; insufficiente nel sopprimere un arresto della crescita indotta da p53. Mostriamo ulteriormente che p53 &egrave; co-immunoprecipitated con cdc25C e p53 inibisce l&#39;attivit&agrave; della fosfatasi cdc25C in modo dose-dipendente. Cos&igrave;, i nostri dati mostrano che p53 come altri partner di associazione di cdc25C, regola entrata in mitosi legandosi a cdc25C.

Interferenza tra p53 e cdc25C nella regolazione del ciclo cellulare.

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P53 &#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; cdc25C &#x9593;&#x306E;&#x5E72;&#x6E09;&#x3002;

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P53 &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0;&#xC11C; cdc25C &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xAC04;&#xC12D;.

Ciclo celular eucari&oacute;tico est&aacute; regulado por una red de diferentes prote&iacute;nas quinasas y fosfatasas que por diversos mecanismos que se relaciona el crecimiento supresor p53. Regulaci&oacute;n del ciclo celular es bastante similar de levadura al hombre. Aunque no hay end&oacute;gena p53 en la expresi&oacute;n de la levadura de p53 humano conducido a la detenci&oacute;n del crecimiento de las c&eacute;lulas de levadura que pueden ser suprimidas por la simult&aacute;nea sobreexpresi&oacute;n de cdc25C, una fosfatasa regula el ingreso en la mitosis. Aqu&iacute;, demostramos que la sobreexpresi&oacute;n de cdc25C en mam&iacute;feros c&eacute;lulas es insuficiente en la supresi&oacute;n de una detenci&oacute;n del crecimiento de p53 inducida. Adem&aacute;s, demostramos que p53 es co-immunoprecipitated con cdc25C y p53 inhibe la actividad de la fosfatasa cdc25C en forma dosis dependiente. As&iacute;, nuestros datos muestran p53 como otros socios de la Uni&oacute;n de cdc25C, regula la entrada en mitosis atando a cdc25C.

Interferencia entre p53 y cdc25C en la regulaci&oacute;n del ciclo celular.

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&#x6301;&#x7EED;&#x8868;&#x8FBE;&#x4FDD;&#x7559;&#x7684;&#x6210;&#x5E74;&#x5927;&#x9F20;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x9499;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x5B66;&#x6587;&#x5316;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;

For studying heart pathologies on the cellular level, cultured adult cardiac myocytes represent an important approach. We aimed to explore a novel adult rat ventricular myocyte culture system with minimised dedifferentiation allowing extended experimental manipulation of the cells such as expression of exogenous proteins. Various culture conditions were investigated including medium supplement, substrate coating and electrical pacing for one week. Adult myocytes were probed for (i) viability, (ii) morphology, (iii) frequency dependence of contractions, (iv) Ca(2+) transients, and (v) their tolerance towards adenovirus-mediated expression of the Ca(2+) sensor "inverse pericam". Conventionally, in either serum supplemented or serum-free medium, myocytes dedifferentiated into flat cells within 3 days or cell physiology and morphology were impaired, respectively. In contrast, myocytes cultured in medium supplemented with an insulin-transferrin-selenite mixture on substrates coated with extracellular matrix proteins showed an increased cell attachment and a conserved cross-striation. Moreover, these myocytes displayed optimised preservation of their contractile behaviour and Ca(2+) signalling even under conditions of continuous electrical pacing. Sustained expression of inverse pericam did not alter myocyte function and allowed long lasting high speed Ca(2+) imaging of electrically driven adult myocytes. Our single-cell model thus provides a new advance for high-content screening of these highly specialised cells.

A primary culture system for sustained expression of a calcium sensor in preserved adult rat ventricular myocytes.

Pour &#xE9;tudier les pathologies cardiaques au niveau cellulaire, culture myocytes cardiaques adultes repr&#xE9;sentent une approche importante. Nous avons cherch&#xE9; &#xE0; explorer un rat adulte roman ventriculaire syst&#xE8;me de culture des myocytes avec d&#xE9;diff&#xE9;renciation minimis&#xE9; permettant prolong&#xE9;e manipulation exp&#xE9;rimentale des cellules telles que l&#x26;#39;expression de prot&#xE9;ines exog&#xE8;nes. Diff&#xE9;rentes conditions de culture ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;es, y compris suppl&#xE9;ment de milieu, rev&#xEA;tement de substrat et de la stimulation &#xE9;lectrique pour une semaine. Myocytes adultes ont &#xE9;t&#xE9; sond&#xE9;es pour (i) la viabilit&#xE9;, (ii) la morphologie, la d&#xE9;pendance en fr&#xE9;quence (iii) des contractions, (iv) Ca (2 +) transitoires, et (v) leur tol&#xE9;rance envers les ad&#xE9;novirus expression de la Ca (2 + ) du capteur &#x26;quot;inverse PERICAM&#x26;quot;. Classiquement, soit milieu sans s&#xE9;rum compl&#xE9;t&#xE9; ou sans s&#xE9;rum, myocytes d&#xE9;diff&#xE9;renci&#xE9;s dans les cellules plates dans les 3 jours ou la physiologie des cellules et la morphologie ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;pr&#xE9;ci&#xE9;s, respectivement. En revanche, les myocytes en culture dans un milieu suppl&#xE9;ment&#xE9; avec un m&#xE9;lange d&#x26;#39;insuline &#xE0; la transferrine s&#xE9;l&#xE9;nite sur les substrats rev&#xEA;tus avec des prot&#xE9;ines de la matrice extracellulaire ont montr&#xE9; un attachement cellulaire accrue et une croix conserv&#xE9;e-stries. En outre, ces myocytes affich&#xE9; la pr&#xE9;servation optimale de leur comportement contractile et Ca (2 +) de signalisation, m&#xEA;me dans des conditions de stimulation &#xE9;lectrique continue. L&#x26;#39;expression soutenue de PERICAM inverse n&#x26;#39;a pas modifi&#xE9; la fonction des myocytes et a permis de longue dur&#xE9;e &#xE0; haute vitesse Ca (2 +) d&#x26;#39;imagerie des myocytes adultes aliment&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;lectricit&#xE9;. Notre seule cellule mod&#xE8;le fournit donc une nouvelle avanc&#xE9;e pour le d&#xE9;pistage &#xE0; haut contenu de ces cellules hautement sp&#xE9;cialis&#xE9;es.

Un syst&#xE8;me de culture primaire pour l&#x26;#39;expression soutenue d&#x26;#39;un capteur de calcium dans les myocytes ventriculaires de rats adultes en conserve

F&uuml;r die Untersuchung Herz Pathologien auf zellul&auml;rer Ebene, darstellen kultivierte Erwachsene kardiale Myozyten einen wichtigen Ansatz. Wir wollten eine neuartige Erwachsene Ratte ventrikul&auml;re Muskelfaser-Kultursystem mit minimiertem Entdifferenzierung erm&ouml;glicht erweiterte experimentelle Manipulation von Zellen wie beispielsweise Ausdruck der exogene Proteine zu erkunden. Verschiedenen Kulturbedingungen wurden untersucht, einschlie&szlig;lich mittlere Zuschlag, Substrat-Beschichtung und elektrische Stimulation f&uuml;r eine Woche. Erwachsener Myocytes wurden f&uuml;r Lebensf&auml;higkeit (i), (Ii) Morphologie, (Iii) Frequenz Abh&auml;ngigkeit der Kontraktionen, (iv) Ca(2+) Transienten und (V) ihre Toleranz gegen&uuml;ber Adenovirus-vermittelten Expression von der Ca(2+)-Sensor &quot;inverse Pericam&quot; sondiert. Konventionell, in Serum erg&auml;nzt oder serumfreien Medium, Myocytes entdifferenzierten in flachen Zellen innerhalb von 3 Tagen oder Zelle Physiologie und Morphologie wurden bzw. beeintr&auml;chtigt. Im Gegensatz dazu erg&auml;nzt Myocytes kultiviert im Medium mit einer Insulin-Transferrin-Selenit-Mischung auf Substraten beschichtet mit Proteinen der extrazellul&auml;ren Matrix zeigte eine verst&auml;rkte Zelle-Anlage und einem konservierten Kreuz-Rasterung. Dar&uuml;ber hinaus angezeigt diese Myocytes optimierte Erhaltung ihrer kontraktilen Verhalten und Ca(2+) signalisieren auch unter Bedingungen von kontinuierlichen elektrischen schreiten. Nachhaltig Ausdruck der inverse Pericam Muskelfaser-Funktion nicht ver&auml;ndern und langanhaltendes high-Speed Ca(2+) Bildgebung der elektrisch angetriebene Erwachsener Myocytes erlaubt. Unsere einzellige-Modell bietet somit einen neuen Fortschritt f&uuml;r High-Content Screening dieser hochspezialisierten Zellen.

Prim&auml;rkultur System zur nachhaltigen Ausdruck eines Kalzium-Sensors in erhaltenen Erwachsene Ratte ventrikul&auml;ren Myozyten.

Per lo studio delle patologie del cuore a livello cellulare, colte adulti miociti cardiaci rappresentano un importante approccio. Abbiamo l&#39;obiettivo di esplorare un sistema di coltura del miocita ventricolare romanzo ratto adulto con indifferenziazione ridotti al minimo, permettendo la manipolazione sperimentale esteso delle cellule come espressione delle proteine esogene. Diverse condizioni di coltura sono state investigate integratore medio, rivestimento di substrato e la stimolazione elettrica per una settimana. Miociti adulti sono stati sondati per redditivit&agrave; (i), (ii) morfologia, dipendenza (iii) la frequenza delle contrazioni, (iv) Ca(2+) transitori e (v) la loro tolleranza nei confronti dell&#39;adenovirus-mediata espressione del sensore Ca(2+) &quot;pericam inversa&quot;. Convenzionalmente, in siero integrato o media serum-free, miociti dedifferentiated nelle celle piane entro 3 giorni o morfologia e fisiologia cellulare sono stati alterati, rispettivamente. Al contrario, miociti coltivate in mezzo completato con una miscela di insulina-Transferrina-selenite su substrati rivestiti con proteine della matrice extracellulare ha dimostrate un attaccamento cellula aumentata e una striatura di croce conservata. Inoltre, questi miociti visualizzato ottimale conservazione del loro comportamento contrattile e Ca(2+) segnalazione anche in condizioni di stimolazione elettrica continua. Espressione sostenuta della pericam inversa non ha modificato la funzione del miocita e consentito imaging Ca(2+) ad alta velocit&agrave; dei miociti adulti elettricamente guidato a lunga durata. Il nostro modello di cella singola fornisce quindi una nuova avanzata per lo screening ad alto contenuto di queste cellule altamente specializzate.

Un sistema di coltura primaria per espressione sostenuta di un sensore di calcio nei miociti ventricolari conservati ratto adulto.

&#x7D30;&#x80DE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x5FC3;&#x306E;&#x75C5;&#x7406;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x57F9;&#x990A;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306A;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306B;&#x6291;&#x3048;&#x308B;&#x8131;&#x5206;&#x5316;&#x3068;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x7CFB;&#x3092;&#x63A2;&#x7D22;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x76EE;&#x7684;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7A2E;&#x3005;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x6761;&#x4EF6;&#x306F;&#x57F9;&#x5730;&#x30B5;&#x30D7;&#x30EA;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x57FA;&#x677F;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x4E00;&#x9031;&#x9593;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x542B;&#x3081;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x53CE;&#x7E2E;&#x306E;&#xFF08;i&#xFF09;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3068;&#x3001;&#xFF08;ii&#xFF09;&#x5F62;&#x614B;&#x3001;&#xFF08;iii&#xFF09;&#x306E;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3001;&#xFF08;&#x2173;&#xFF09;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x904E;&#x6E21;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#xFF08;v&#xFF09;&#x306E;Ca&#x306E;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6027;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#xFF08;2 +&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x81EA;&#x5206;&#x306E;&#x8A31;&#x5BB9;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x63A2;&#x7D22;&#x3057;&#x305F;&#xFF09;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5; &#x26;quot;&#x9006;pericam&#x26;quot;&#x3002;&#x5F93;&#x6765;&#x3001;&#x88DC;&#x8DB3;&#x8840;&#x6E05;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7121;&#x8840;&#x6E05;&#x57F9;&#x5730;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;&#x3001;3&#x65E5;&#x9593;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x5E73;&#x3089;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x8131;&#x5206;&#x5316;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x640D;&#x306A;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4ED8;&#x7740;&#x3084;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A4;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x3067;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3; - &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30F3; - &#x4E9C;&#x30BB;&#x30EC;&#x30F3;&#x9178;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x3092;&#x6DFB;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x57F9;&#x5730;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7B4B;&#x306F;&#x3001;&#x53CE;&#x7E2E;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3068;&#x9023;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x96FB;&#x6C17;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x3082;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;Ca&#xFF08;&#x200B;&#x200B;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4FDD;&#x5168;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9006;pericam&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3068;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x9AD8;&#x901F;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x306B;&#x99C6;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x7279;&#x6B8A;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9AD8;&#x542B;&#x6709;&#x91CF;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x9032;&#x6B69;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D7;&#x30EA;&#x30B6;&#x30FC;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A2;&#x30C0;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;

&#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBCD1; &#xB9AC; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0;, &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; &#xC131;&#xC778; &#xC2EC;&#xC7A5; myocytes &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654; dedifferentiation exogenous &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xB4F1; &#xC140;&#xC758; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC870;&#xC791; &#xD5C8;&#xC6A9;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xC18C;&#xC124; &#xC131;&#xC778; &#xC950; &#xC2EC; &#xC2E4; myocyte &#xBB38;&#xD654; &#xC81C;&#xB3C4; &#xBAA9;&#xC801;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBB38;&#xD654; &#xC870;&#xAC74; &#xC911;&#xAC04; &#xBCF4;&#xCDA9;, &#xAE30;&#xD310; &#xCF54;&#xD305; &#xBC0F; &#xC804;&#xAE30; &#xC11C; &#xC131; 1 &#xC8FC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC131;&#xC778; myocytes &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825; (i), (ii) &#xD615;&#xD0DC;, (iii) &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xC758;&#xC874;&#xC131; &#xC218;&#xCD95;, (iv) Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; &#xBC0F; Ca(2+) &#xC13C;&#xC11C; &quot;&#xC5ED; pericam&quot;&#xC758; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC911;&#xC7AC; &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; (v) &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAD00;&#xC6A9;&#xC758; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xBCF4;&#xC644; &#xD558;&#xB294; &#xD608; &#xCCAD; &#xB610;&#xB294; &#xD608; &#xCCAD; &#xBB34;&#xB8CC; &#xB9E4;&#xCCB4; myocytes &#xD50C;&#xB7AB; &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; 3 &#xC77C; &#xC774;&#xB0B4;&#xC5D0; dedifferentiated &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559;&#xACFC; &#xD615;&#xD0DC;&#xB294; &#xC7A5;&#xC560;&#xC778;, &#xAC01;&#xAC01;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xC911;&#xAC04;&#xC5D0; &#xAD50;&#xC591; myocytes &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC99D;&#xAC00; &#xC140; &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; &#xC904;&#xBB34;&#xB2AC;&#xC640; &#xCF54;&#xD305; &#xB41C; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; transferrin selenite &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC644;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; myocytes &#xC218;&#xCD95; &#xC131; &#xD589;&#xB3D9;&#xACFC; Ca(2+) &#xC5F0;&#xC18D; &#xC804;&#xAE30; &#xC11C; &#xC131;&#xC758; &#xC870;&#xAC74; &#xC5D0;&#xC11C;&#xB3C4; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xBCF4;&#xC874; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xC2DD; &#xC5ED; pericam&#xC758; myocyte &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC624;&#xB798; &#xC9C0;&#xC18D; &#xB418;&#xB294; &#xC804;&#xAE30;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xB3D9;&#xB41C; &#xC131;&#xC778; myocytes&#xC758; &#xACE0;&#xC18D; Ca(2+) &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xBAA8;&#xB378;&#xC774; &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC804;&#xBB38;&#xD654; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC0AC;&#xC804; &#xC81C;&#xACF5;.

&#xBCF4;&#xC874; &#xB41C; &#xC131;&#xC778; &#xC950; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE7C;&#xC298; &#xC13C;&#xC11C;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xD45C;&#xD604; &#xC704;&#xD55C; &#xC8FC; &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;.

Para el estudio de patolog&#xED;as cardiacas en el nivel celular, cultivo de cardiomiocitos adultos representan un enfoque importante. El objetivo de explorar una rata novela para adultos de miocitos del ventr&#xED;culo sistema de cultivo con la desdiferenciaci&#xF3;n m&#xED;nimo que permite la manipulaci&#xF3;n prolongada experimental de las c&#xE9;lulas, como expresi&#xF3;n de prote&#xED;nas ex&#xF3;genas. Varias condiciones de cultivo fueron investigados incluyendo el suplemento de medio, revestimiento sustrato y la estimulaci&#xF3;n el&#xE9;ctrica durante una semana. Miocitos adultos se probaron para (i) la viabilidad, la morfolog&#xED;a (ii), (iii) dependencia de la frecuencia de las contracciones, (iv) de Ca (2 +) transitorios, y (v) su tolerancia hacia adenovirus mediada por la expresi&#xF3;n de la Ca (2 + ) del sensor &#x26;quot;pericam inversa&#x26;quot;. Convencionalmente, en cualquier medio suplementado con suero libre de suero, los miocitos indiferenciadas en c&#xE9;lulas planas dentro de 3 d&#xED;as o la fisiolog&#xED;a celular y la morfolog&#xED;a fueron deteriorados, respectivamente. En contraste, los miocitos cultivaron en medio suplementado con una mezcla de insulina-transferrina-selenio sobre sustratos revestidos con prote&#xED;nas de matriz extracelular mostr&#xF3; un aumento de la adhesi&#xF3;n celular y una conservada transversal estriaci&#xF3;n. Adem&#xE1;s, estos miocitos muestra preservaci&#xF3;n optimizado de su comportamiento contr&#xE1;ctil y Ca (2 +) de se&#xF1;alizaci&#xF3;n, incluso bajo condiciones de estimulaci&#xF3;n el&#xE9;ctrica continua. Expresi&#xF3;n sostenida de pericam inversa no alterar la funci&#xF3;n del miocito y se deja de alta velocidad de larga duraci&#xF3;n Ca (2 +) de im&#xE1;genes de los miocitos adultos accionados el&#xE9;ctricamente. Nuestra sola c&#xE9;lula modelo proporciona as&#xED; un nuevo avance de alta contenido de detecci&#xF3;n de estas c&#xE9;lulas altamente especializados.

Un sistema de cultivo primario de expresi&#xF3;n sostenida de un sensor de calcio en los miocitos ventriculares conserva ratas adultas

&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x4F7F;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x6539;&#x9020;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8F66;&#x53A2;&#x4E0E;&#x5149;&#x5B66;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x5982;&#x91C7;&#x7528;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x5149;&#x6F02;&#x767D;&#x540E;&#x7684;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x91CD;&#x65B0;&#x5206;&#x914D;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x6539;&#x9020;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF1A; T &#x7BA1;&#x5F0F;&#x819C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x9010;&#x6E10;&#x8FF7;&#x5931;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x79F0;&#x4E3A;&quot;&#x5E8F;&#x8D2F;&#x6390;&#x6389;&quot;&#xFF0C;&#x5728;&#x5411;&#x5916;&#x65B9;&#x5411;&#x3002;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x4E0B;&#x8DCC;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7C7B;&#xFF0C;&#x5F88;&#x5C0F; &#xFF08;0.9 microm &#x957F;&#x5EA6;&#xFF09;&#x3001; &#x4E2D;&#x578B;&#x957F; (1.8 microm&#xFF09; &#x6216;&#x6269;&#x5C55;&#x7684;&#x5F62;&#x72B6; &#xFF08;3.6 microm&#xFF09; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x968F;&#x7740;&#x57F9;&#x517B;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x63A8;&#x79FB;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x9010;&#x6E10;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x6F02;&#x767D;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x900F;&#x9732;&#x663E;&#x7136;&#x5206;&#x79BB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7684;&#x5CA9;&#x5C42;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x7BA1;&#x901A;&#x8FC7;&quot;&#x96A7;&#x9053;&quot;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x96A7;&#x9053;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x968F;&#x7740;&#x57F9;&#x517B;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x63A8;&#x79FB;&#x800C;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x4EA4;&#x53C9;&#x6761;&#x7EB9;&#x5B89;&#x6392;&#x5185;&#x8D28;/&#x808C;&#x6D46;&#x7F51;&#x7684;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x4E2D;&#x9010;&#x6E10;&#x4E27;&#x5931;&#x4E86;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x6765;&#x3002;&#x5927;&#x91CF;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x7ECF;&#x5206;&#x6790;&#x706B;&#x82B1;&#x7684;&#x89C6;&#x9891;&#x7387;&#x5171;&#x7126; 2D &#x626B;&#x63CF;&#x63ED;&#x793A;&#x91CD;&#x5927;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5C0F;&#x53D8;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0E; SR-Ca(2+) &#x5185;&#x5BB9;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x4F11;&#x606F;&#x7ECF;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C0F;&#x5B66; SR-Ca(2+) &#x91CA;&#x653E;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x6210;&#x4EBA;&#x7684;&#x5185;&#x5FC3;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x660E;&#x786E;&#x754C;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EF;&#x91CD;&#x73B0;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CD;&#x6784;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x957F;&#x671F;&#x57F9;&#x517B;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

&#x957F;&#x671F;&#x57F9;&#x517B;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x91CD;&#x6784;&#x7684;&#x6210;&#x5E74;&#x5927;&#x9F20;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185; Ca2 + &#x5904;&#x7406;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x3002;

It is well known that for cardiomyocytes, isolation and culturing induce largely unknown remodelling processes. We analysed changes in the structure of cell compartments with optical techniques such as confocal microscopy and fluorescence redistribution after photobleaching employing adenoviral-mediated transduction of targeted fluorescent proteins and small molecule dyes. We identified characteristic remodelling processes: the T-tubular membrane system was gradually lost by a process referred to as "sequential pinching off", in an outward direction. Mitochondria fell in one of three classes, very small (0.9 microm length), medium long (1.8 microm) or extended shape (3.6 microm) organelles. Over the culturing time mitochondria gradually fused. Bleaching of individual mitochondria revealed association between apparently separated mitochondria by "tunnelling" via sub-resolution organelle-tubes. This tunnelling process was increasing over the culturing time. A gradual loss of the cross-striation arrangement in the endoplasmic/sarcoplasmic reticulum was visualised. Analysis of large populations of Ca(2+) sparks by video-rate confocal 2D-scanning revealed significant albeit small changes of these elementary SR-Ca(2+) release events in adult cardiomyocytes that could be related to changes in SR-Ca(2+) content rather than resting Ca(2+) concentration. In conclusion, primary isolated cardiomyocytes from adult hearts undergo a well-defined, but reproducible subcellular remodelling during optimised long term culture.

Remodelling of Ca2+ handling organelles in adult rat ventricular myocytes during long term culture.

Il est bien connu que, pour les cardiomyocytes, l&#x26;#39;isolement et la culture induire des processus de remodelage en grande partie inconnus. Nous avons analys&#xE9; les changements dans la structure des compartiments cellulaires avec des techniques optiques telles que la microscopie confocale et la redistribution de fluorescence apr&#xE8;s photoblanchiment employant ad&#xE9;noviral-la transduction des prot&#xE9;ines fluorescentes cibl&#xE9;es et des colorants de petites mol&#xE9;cules. Nous avons identifi&#xE9; caract&#xE9;ristiques des processus de remodelage: le syst&#xE8;me de membrane T-tubulaire a &#xE9;t&#xE9; peu &#xE0; peu perdu par un processus appel&#xE9; &#x26;quot;pincement s&#xE9;quentielle off&#x26;quot;, dans une direction vers l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur. Les mitochondries est tomb&#xE9; dans l&#x26;#39;une des trois classes, tr&#xE8;s faible (0,9 microm&#xE8;tre de longueur), de longueur moyenne (1,8 microm&#xE8;tre) ou de la forme &#xE9;tendue (3,6 microm&#xE8;tre) organites. Au cours de la dur&#xE9;e de la culture mitochondries progressivement fusionn&#xE9;. Blanchiment de l&#x26;#39;individu association r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; mitochondries entre apparemment s&#xE9;par&#xE9;s mitochondries par &#x26;quot;tunneling&#x26;quot; via des sous-r&#xE9;solution des organites des tubes. Ce processus a &#xE9;t&#xE9; croissante tunnel sur le temps de culture. Une perte progressive de l&#x26;#39;accord inter-stries dans le r&#xE9;ticulum endoplasmique / sarcoplasmique a &#xE9;t&#xE9; visualis&#xE9;e. L&#x26;#39;analyse de grandes populations de Ca (2 +) des &#xE9;tincelles par vid&#xE9;o-taux confocale &#xE0; balayage a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; 2D-significatifs, mais de petits changements de ces &#xE9;l&#xE9;mentaire SR-Ca (2 +) des &#xE9;v&#xE9;nements de rel&#xE2;chement dans les cardiomyocytes adultes qui pourraient &#xEA;tre li&#xE9;s &#xE0; des changements dans Sr-Ca ( 2 + contenu) plut&#xF4;t que de se reposer Ca (2 +) de concentration. En conclusion, primaires cardiomyocytes isol&#xE9;s de coeurs adultes subissent un remodelage bien d&#xE9;fini, mais reproductible au cours subcellulaire optimis&#xE9; culture &#xE0; long terme.

Transformations de Ca2 + Manipulation Organelles dans myocytes ventriculaires de rat au cours de la culture &#xE0; long terme

Es ist bekannt, dass f&uuml;r Cardiomyocytes, Isolierung und Kultivierung weitgehend unbekannte Filialumbauten Prozesse ausl&ouml;sen. Analysieren wir Ver&auml;nderungen in der Struktur der Zelle Abteile mit optischen Techniken wie konfokale Mikroskopie und Fluoreszenz Umverteilung nach Photobleaching adenoviral-vermittelte Transduktion gezielte fluoreszierende Proteine und niedermolekularer Farbstoffe besch&auml;ftigt. Wir haben charakteristische Filialumbauten Prozesse identifiziert: die T-Membran R&ouml;hrensystem wurde nach und nach verloren, durch einen Prozess, genannt &quot;sequenzielle Kneifen Weg&quot;, nach au&szlig;en. Mitochondrien verliebte sich in eine der drei Klassen, sehr klein (0,9 Microm L&auml;nge), mittellang (1,8 Microm) oder erweiterter Form (3,6 Microm) Organellen. &Uuml;ber die Kultivierung Zeit Mitochondrien allm&auml;hlich verschmolzen. Bleichen von einzelnen Mitochondrien offenbart Assoziation zwischen scheinbar getrennte Mitochondrien durch &quot;Tunneling&quot; &uuml;ber Sub-resolution Organell-Leitungen. Tunnelling dabei war die culturing Zeit erh&ouml;hen. Ein allm&auml;hlicher Verlust der Kreuz-Rasterung Anordnung in den sarcoplasmic/endoplasmic Reticulum visualisiert wurde. Analyse von gro&szlig;en Populationen von Ca(2+) Funken von Video-konfokale 2D-Scan offenbarte erhebliche, wenn auch geringen Tarif&auml;nderungen dieser elementaren SR-Ca(2+) Freigabe-Ereignisse in den Erwachsenen Cardiomyocytes, die auf &Auml;nderungen der SR-Ca(2+) Inhalten anstatt Ruhe Ca(2+) Konzentration bezogen werden konnte. Abschlie&szlig;end werden prim&auml;re isolierte Cardiomyocytes von Erwachsenen Herzen eine klar definierte, aber reproduzierbare subzellulare Umbau w&auml;hrend optimierte langfristige Kultur unterzogen.

Umbau von Ca2 + Handhabung Organellen in den Erwachsenen Ratte ventrikul&auml;re Myocytes w&auml;hrend der langfristigen Kultur.

&Egrave; noto che per cardiomyocytes, isolamento e coltura indurre processi di rimodellamento in gran parte sconosciuti. Abbiamo analizzato i cambiamenti nella struttura dei compartimenti cellulari con tecniche ottiche come la ridistribuzione di fluorescenza e microscopia confocale dopo photobleaching impiegando trasduzione adenovirali-mediata delle proteine fluorescenti mirate e piccole molecole coloranti. Abbiamo identificato i processi di rimodellamento caratteristici: il sistema T-tubolare membrana gradualmente persa da un processo definito &quot;sequenziale intrappolandosi fuori&quot;, in una direzione verso l&#39;esterno. I mitocondri sono caduto in una delle tre classi, molto piccole (lunghezza 0,9 microm), medio lungo (1,8 microm) o organelli di forma estesa (3,6 microm). Sopra la coltura tempo mitocondri gradualmente fuse. Sbiancamento di singoli mitocondri rivelato associazione tra mitocondri apparentemente separati da &quot;tunnel&quot; via sub-resolution organello-tubi. Questo processo tunnel stava aumentando il tempo di coltura. Una perdita graduale della disposizione striatura trasversale nel reticolo sarcoplasmatico/endoplasmic &egrave; stata visualizzata. Analisi di grandi popolazioni di Ca(2+) scintille da video-tasso confocali scansione 2D rivelati seppur piccoli cambiamenti significativi di questi eventi di rilascio SR-Ca(2+) elementari in cardiomiociti adulti che potrebbero essere correlati ai cambiamenti di contenuto piuttosto che di riposo la concentrazione di Ca(2+) SR-Ca(2+). In conclusione, primarie cardiomiociti isolati dai cuori adulti subiscono sottocellulari ben definiti, ma riproducibile rimodellamento durante la cultura ottimizzata a lungo termine.

Rimodellamento di Ca2 + gestione degli organelli nel ratto adulto miociti ventricolari durante la cultura di lungo termine.

&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x96E2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x57F9;&#x990A;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x7D5E;&#x3063;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x8272;&#x7D20;&#x306E;&#x63A1;&#x7528;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5A92;&#x4ECB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5149;&#x9000;&#x8272;&#x5F8C;&#x306E;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x914D;&#x5E03;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x5149;&#x5B66;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x30BB;&#x30EB;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x6027;&#x6539;&#x9020;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;T-&#x7BA1;&#x72B6;&#x819C;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x5F90;&#x3005;&#x306B;&#x5916;&#x5074;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x3001; &#x26;quot;&#x9806;&#x6B21;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C1;&#x30AA;&#x30D5;&#x26;quot;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x5931;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x3001;&#xFF08;0.9&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#xFF09;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x9577;&#x3044;&#x57F9;&#x5730;&#xFF08;1.8&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x62E1;&#x5F35;&#x5F62;&#xFF08;3.6&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xFF09;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x3001;3&#x3064;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x57F9;&#x990A;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x7D4C;&#x904E;&#x3068;&#x3068;&#x3082;&#x306B;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x304C;&#x5F90;&#x3005;&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3001;&#x30B5;&#x30D6;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x30AA;&#x30EB;&#x30AC;&#x30CD;&#x30E9;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; &#x26;quot;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x26;quot;&#x3067;&#x533A;&#x5207;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x5354;&#x4F1A;&#x306E;&#x6F02;&#x767D;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#xB7;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x57F9;&#x990A;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x7D4C;&#x904E;&#x3068;&#x3068;&#x3082;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;/&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x914D;&#x7F6E;&#x304C;&#x5F90;&#x3005;&#x306B;&#x640D;&#x5931;&#x304C;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; SR-Ca&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5C0F;&#x5B66;&#x6821;SR-Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;Ca&#x306E;&#x5927;&#x96C6;&#x56E3;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;2&#x6B21;&#x5143;&#x8D70;&#x67FB;&#x578B;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x30D3;&#x30C7;&#x30AA;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x706B;&#x82B1;&#xFF08; 2 +&#xFF09;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x4F11;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5185;&#x5BB9;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x5FC3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9577;&#x671F;&#x57F9;&#x990A;&#x4E2D;&#x306B;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x518D;&#x73FE;&#x6027;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x6539;&#x9020;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CA2&#x306E;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;+&#x9577;&#x671F;&#x57F9;&#x990A;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x6210;&#x4F53;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AA;&#x30EB;&#x30AC;&#x30CD;&#x30E9;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x6271;&#x3044;

&#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC798; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB294; cardiomyocytes&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xBC30;&#xC591; &#xC720;&#xB3C4; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xC7AC;&#xBC30;&#xD3EC; photobleaching &#xD0C0;&#xAC9F; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658; adenoviral &#xC911;&#xC7AC; &#xCC44;&#xC6A9; &#xD6C4; &#xAC19;&#xC740; &#xAD11;&#xD559; &#xAE30;&#xC220;&#xB85C; &#xC140; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC11D;. &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC801;&#xC778; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC2DD;&#xBCC4;: T &#xAD00; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &quot;&#xC21C;&#xCC28; &#xACE4;&#xB780; &#xB5A8;&#xC5B4;&#xC838;&quot;, &#xB77C;&#xACE0; &#xD558;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC810;&#xCC28;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC783; &#xC5C8; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C;. &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; 3 &#xC544;&#xC8FC; &#xC791;&#xC740; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; (0.9 microm &#xAE38;&#xC774;), &#xBCF4;&#xD1B5; &#xAE34; (1.8 microm) &#xB610;&#xB294; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C; &#xBAA8;&#xC591; (3.6 microm) organelles &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xC5D0; &#xBE60;&#xC84C;&#xB2E4;. &#xBC30;&#xC591;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xB97C; &#xC810;&#xCC28;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC735;&#xD569;. &#xAC1C;&#xBCC4; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC758; &#xD45C;&#xBC31; sub-resolution &#xD2B8;&#xB294; &#xD29C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &quot;&#xD130;&#xB110;&#xB9C1;&quot; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xBA85;&#xD788; &#xAD6C;&#xBD84; &#xB41C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xC0AC;&#xC774; &#xD611;&#xD68C;&#xB97C; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD130;&#xB110;&#xB9C1; &#xACFC;&#xC815; &#xC790;&#xB780; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. Endoplasmic sarcoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC2ED;&#xC790;&#xAC00;-&#xC904;&#xBB34;&#xB2AC; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; &#xC810;&#xC9C4;&#xC801; &#xC0C1;&#xC2E4; visualised &#xD588;&#xB2E4;. Ca(2+)&#xC758; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xC778;&#xAD6C;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xBE44;&#xB514;&#xC624; &#xC18D;&#xB3C4; confocal 2D &#xAC80;&#xC0AC; &#xACC4;&#xC2DC; &#xB098; &#xB9C8; &#xC791;&#xC740; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; SR-Ca(2+) Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4; &#xD734;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xC2E0; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xBCC0;&#xACBD; &#xAD00;&#xB828;&#xC774; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC131;&#xC778; cardiomyocytes&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCD08;&#xB4F1; SR-Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xBD88;&#xAF43;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC131;&#xC778; &#xB9C8;&#xC74C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xACA9;&#xB9AC; cardiomyocytes&#xB294; &#xC798; &#xC815;&#xC758; &#xB41C;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC7AC;&#xD604; subcellular &#xAC1C;&#xC7A5; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xC7A5;&#xAE30; &#xBB38;&#xD654; &#xC911; &#xBC1B; &#xB2E4;.

&#xC7A5;&#xAE30;&#xC801;&#xC778; &#xBB38;&#xD654; &#xC911; &#xC131;&#xC778; &#xC950; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; Ca2 + &#xCC98;&#xB9AC; organelles&#xC758; &#xAC1C;&#xC7A5;.

Es bien sabido que para cardiomiocitos, el aislamiento y cultivo de inducir procesos de remodelaci&#xF3;n en gran parte desconocidos. Se analizaron los cambios en la estructura de los compartimentos celulares con t&#xE9;cnicas &#xF3;pticas tales como la microscop&#xED;a confocal y redistribuci&#xF3;n de fluorescencia despu&#xE9;s de photobleaching empleando adenov&#xED;rico mediada por transducci&#xF3;n de prote&#xED;nas fluorescentes espec&#xED;ficas y tintes de mol&#xE9;culas peque&#xF1;as. Se identificaron caracter&#xED;sticas de los procesos de remodelaci&#xF3;n: el sistema de membrana T-tubular se fue perdiendo por un proceso conocido como &#x26;quot;pellizcos secuencial off&#x26;quot;, en una direcci&#xF3;n externa. Las mitocondrias cay&#xF3; en una de las tres clases, muy peque&#xF1;o (0,9 micras de longitud), de largo mediano (1,8 micras) o de forma prolongada (3,6 micras) org&#xE1;nulos. Durante el tiempo de cultivo mitocondrias gradualmente fusionados. El blanqueamiento de los individuos de asociaci&#xF3;n entre la mitocondria revel&#xF3; mitocondrias aparentemente separados por el &#x26;quot;t&#xFA;nel&#x26;quot; a trav&#xE9;s de sub-resoluci&#xF3;n org&#xE1;nulos tubos. Este proceso fue aumentando con el t&#xFA;nel del tiempo de cultivo. Una p&#xE9;rdida gradual de la disposici&#xF3;n transversal estr&#xED;as en el ret&#xED;culo endoplasm&#xE1;tico / sarcopl&#xE1;smico se visualiz&#xF3;. An&#xE1;lisis de las grandes poblaciones de Ca (2 +) por las chispas de v&#xED;deo de tipo confocal de barrido 2D revel&#xF3; importantes aunque peque&#xF1;os cambios de estos elementales SR-Ca (2 +) eventos de liberaci&#xF3;n en cardiomiocitos adultos que podr&#xED;an estar relacionados a cambios en la SR-Ca ( 2 + contenidos) en lugar de descansar Ca (2 +) de concentraci&#xF3;n. En conclusi&#xF3;n, primaria cardiomiocitos aislados de corazones adultos someterse a una remodelaci&#xF3;n subcelular bien definido, pero reproducible en optimizar la cultura a largo plazo.

Remodelaci&#xF3;n de Ca2 + Manejo de org&#xE1;nulos en adultos miocitos ventriculares de rata Durante cultivo a largo plazo

&#x5728;&#x5FC3;&#x91CC;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684; L &#x578B;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x6027;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684; &alpha;1C &#xFF08;&#x4E9A; Ca(V)1.2) &#x5355;&#x4F4D;&#x901A;&#x5E38;&#x5173;&#x8054;&#x8F85;&#x52A9; &beta; &#x4E9A;&#x57FA; (Ca(V)&beta;2)&#x3002;&#x80DA;&#x80CE;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5B8C;&#x6574;&#x548C;&#x5FC3;&#x810F;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x5B9A; Ca (V) &beta; 2 &#x7684;&#x7A7A;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5BFC;&#x81F4;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684; L-&#x578B;&#x9499;&#x7535;&#x6D41;&#x8FBE; 75%&#xFF0C;&#x635F;&#x5BB3;&#x5FC3;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7F3A;&#x9677;&#x91CD;&#x6784;&#x7684; embryonic &#x5916;&#x8840;&#x7BA1;&#x540E;&#x80DA;&#x80CE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x6761;&#x4EF6;&#x5730;&#x5207;&#x9664; Ca (V) &beta; 2 &#x57FA;&#x56E0; (cacnb2) &#x4E13;&#x95E8;&#x5728;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6210;&#x5E74;&#x5C0F;&#x9F20; (KO)&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F3A;&#x5931;&#x540E; Ca (V) &beta; 2 &#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0B;&#x964D; &gt; 96%&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7531; &gt; &#x4E2D;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5206;&#x4ECE;&#x5FC3;&#x7684; 74%&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x540E;&#x8005;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5206;&#x5305;&#x62EC; Ca (V) &beta; 2 &#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x5FC3;&#x810F;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6CA1;&#x6709;&#x663E;&#x793A;&#x4EFB;&#x4F55;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; cacnb2 &#x5207;&#x9664;&#x53C8;&#x4E0D;&#x7ED9;&#x62A5;&#x916C;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6; Ca (V) &beta; &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6216; Ca (V) 1.2 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x9499;&#x7535;&#x6D41;&#x4ECD;&#x6709;&#x4E8C;&#x6C22;&#x5421;&#x5576;&#x7C7B;&#x654F;&#x611F;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5728; 0 mV &#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x7535;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6; &lt; 29%&#x3002;&#x534A;-&#x6781;&#x5927;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7535;&#x538B;&#x7A0D;&#x6709;&#x8F6C;&#x5230;&#x66F4;&#x591A;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x7535;&#x4F4D;&#x7684; KO &#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5DEE;&#x8DDD;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5927;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;Ca (V) &beta; 2 &#x4F3C;&#x4E4E;&#x66F4;&#x5F3A;&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#x7684; L-&#x578B;&#x9499;&#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x6BD4;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x751F;&#x5B58;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#xFF0C;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185; Ca (V) &beta; 2 &#x4E0B;&#x8C03;&#x88AB;&#x8010;&#x53D7;&#x6027;&#x826F;&#x597D;&#x6210;&#x5E74;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;

&#x6210;&#x5E74;&#x5C0F;&#x9F20; cacnb2 &#x57FA;&#x56E0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x5B9A;&#x5207;&#x9664;&#x6E29;&#x548C;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x529F;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#x3002;

The major L-type voltage-gated calcium channels in heart consist of an Î±1C (Ca(V)1.2) subunit usually associated with an auxiliary Î² subunit (Ca(V)Î²2). In embryonic cardiomyocytes, both the complete and the cardiac myocyte-specific null mutant of Ca(V)Î²2 resulted in reduction of L-type calcium currents by up to 75%, compromising heart function and causing defective remodeling of intra- and extra-embryonic blood vessels followed by embryonic death. Here we conditionally excised the Ca(V)Î²2 gene (cacnb2) specifically in cardiac myocytes of adult mice (KO). Upon gene deletion, Ca(V)Î²2 protein expression declined by >96% in isolated cardiac myocytes and by >74% in protein fractions from heart. These latter protein fractions include Ca(V)Î²2 proteins expressed in cardiac fibroblasts. Surprisingly, mice did not show any obvious impairment, although cacnb2 excision was not compensated by expression of other Ca(V)Î² proteins or changes of Ca(V)1.2 protein levels. Calcium currents were still dihydropyridine-sensitive, but current density at 0 mV was reduced by <29%. The voltage for half-maximal activation was slightly shifted to more depolarized potentials in KO cardiomyocytes when compared with control cells, but the difference was not significant. In summary, Ca(V)Î²2 appears to be a much stronger modulator of L-type calcium currents in embryonic than in adult cardiomyocytes. Although essential for embryonic survival, Ca(V)Î²2 down-regulation in cardiomyocytes is well tolerated by the adult mice.

Moderate calcium channel dysfunction in adult mice with inducible cardiomyocyte-specific excision of the cacnb2 gene.

Les principaux canaux de type L calciques voltage-d&#xE9;pendants dans le coeur se composent d&#x26;#39;un &#x3B1;1C (Ca (V) 1.2) sous-unit&#xE9; habituellement associ&#xE9;e &#xE0; une sous-unit&#xE9; &#x3B2; auxiliaire (Ca (V) &#x3B2;2). Dans les cardiomyocytes embryonnaires, &#xE0; la fois le compl&#xE8;te et le mutant nul myocytes cardiaques sp&#xE9;cifique de Ca (V) &#x3B2;2 entra&#xEE;n&#xE9; une r&#xE9;duction des courants calciques de type L de plus de 75%, ce qui compromet la fonction cardiaque et le remodelage de causer d&#xE9;fectueux intra-et extra-embryonnaire vaisseaux sanguins suivie de la mort embryonnaire. Ici, nous conditionnellement excis&#xE9; du Ca (V) du g&#xE8;ne &#x3B2;2 (cacnb2) sp&#xE9;cifiquement dans les myocytes cardiaques de souris adultes (KO). Sur une d&#xE9;l&#xE9;tion du g&#xE8;ne, Ca (V) &#x3B2;2 expression de la prot&#xE9;ine a diminu&#xE9; de&#x26;gt; 96% en myocytes cardiaques isol&#xE9;s et par&#x26;gt; 74% dans les fractions prot&#xE9;iques du coeur. Ces derniers comprennent des fractions prot&#xE9;iques Ca (V) &#xDF;2 prot&#xE9;ines exprim&#xE9;es dans les fibroblastes cardiaques. &#xC9;tonnamment, les souris n&#x26;#39;ont montr&#xE9; aucune d&#xE9;ficience &#xE9;vidente, bien que cacnb2 excision n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; compens&#xE9;e par l&#x26;#39;expression de prot&#xE9;ines Ca autres &#xDF; (V) ou des changements de Ca (V) 1.2 niveaux de prot&#xE9;ines. Courants de calcium &#xE9;taient encore dihydropyridine-sensible, mais la densit&#xE9; de courant &#xE0; 0 mV a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;duite de &#x26;lt;29%. La tension de demi-activation maximale a &#xE9;t&#xE9; l&#xE9;g&#xE8;rement d&#xE9;cal&#xE9;e vers des potentiels plus d&#xE9;polaris&#xE9;es dans les cardiomyocytes KO par rapport aux cellules contr&#xF4;les, mais la diff&#xE9;rence n&#x26;#39;&#xE9;tait pas significative. En r&#xE9;sum&#xE9;, Ca (V) &#x3B2;2 semble &#xEA;tre un modulateur beaucoup plus forte des courants calciques de type L dans l&#x26;#39;embryon que dans les cardiomyocytes adultes. Bien qu&#x26;#39;elle soit essentielle pour la survie embryonnaire, Ca (V) &#x3B2;2 r&#xE9;gulation &#xE0; la baisse dans les cardiomyocytes est bien tol&#xE9;r&#xE9;e par les souris adultes.

Mod&#xE9;r&#xE9; dysfonctionnement des canaux calciques chez des souris adultes avec inductible cardiomyocytes sp&#xE9;cifique excision du g&#xE8;ne Cacnb2

Die wichtigen L-Typ-Spannung-Gating Kalzium-Kan&auml;le im Herzen bestehen aus einer &alpha;1C (Ca(V)1.2)-Untereinheit gew&ouml;hnlich verbunden mit einer zus&auml;tzlichen &beta;-Untereinheit (Ca(V)&beta;2). In embryonalen Cardiomyocytes f&uuml;hrte sowohl die vollst&auml;ndige als auch der kardialen Muskelfaser-spezifische null Mutant von Ca (V) &beta;2 Reduktion der L-Typ-Kalzium-Str&ouml;me von bis zu 75 %, Herzfunktion beeintr&auml;chtigen und verursacht fehlerhafte Umbau der Intra- und extra embryonic Blutgef&auml;&szlig;e gefolgt von embryonalen Tod. Hier herausgeschnitten wir bedingt das Ca (V)-&szlig;2-gen (cacnb2) speziell in kardialen Myozyten der Erwachsenen M&auml;usen (KO). Beim gen l&ouml;schen, Ca (V) &beta;2-Proteinexpression sank um &gt; 96 % in isolierten kardialen Myozyten und in &gt; 74 % Protein Fraktionen von Herzen. Diese letztere Protein-Fraktionen enthalten Proteine, Ca (V) die &szlig;2 in kardialen Fibroblasten. &Uuml;berraschenderweise zeigten M&auml;use keiner offensichtliche Beeintr&auml;chtigung, obwohl cacnb2 Exzision durch Ausdruck anderer Ca (V)-&beta;-Proteine oder &Auml;nderungen von Ca (V) 1.2 Protein-Ebene nicht entsch&auml;digt wurden. Kalzium Str&ouml;me waren noch Dihydropyridin-Sensitive, aber Stromdichte bei 0 mV sich um reduzierte &lt; 29 %. Die Spannung f&uuml;r die H&auml;lfte-maximale Aktivierung war leicht verschoben, um mehr ersch&uuml;tterten Potenziale in KO Cardiomyocytes Steuerelement Zellen gegen&uuml;ber, aber der Unterschied war nicht bedeutend. Zusammenfassend l&auml;sst sich sagen, Ca (V) &beta;2 scheint viel st&auml;rker Modulator des L-Typ-Kalzium-Str&ouml;me im embryonalen als in den Erwachsenen Cardiomyocytes. Obwohl zum embryonalen &Uuml;berleben unverzichtbar, ist Ca (V) &beta;2 Herunterregulation in den Cardiomyocytes von den Erwachsenen M&auml;usen gut vertragen.

M&auml;&szlig;ige Kalzium-Kanal-Dysfunktion bei Erwachsenen M&auml;usen mit Induktion Cardiomyocyte-spezifische Exzision des cacnb2-Gens.

I principali canali del calcio voltaggio-dipendenti di tipo L nel cuore consistono di un &alpha;1C (subunit&agrave; Ca(V)1.2) solitamente associata con una subunit&agrave; &beta; ausiliario (Ca(V)&beta;2). Nei cardiomyocytes embrionale, il completo e specifico del miocita cardiaco mutante null di &beta;2 Ca (V) portato in riduzione delle correnti di calcio tipo L fino al 75%, compromettere la funzione del cuore e provocando rimodellamento difettoso di intra - ed extra - embryonic vasi sanguigni seguite da morte embrionale. Qui abbiamo asportato condizionalmente il gene &beta;2 Ca (V) (cacnb2) specificamente nei miociti cardiaci di topi adulti (KO). Alla delezione di un gene, l&#39;espressione della proteina Ca (V) &beta;2 &egrave; diminuito da &amp;gt; 96% in miociti cardiaci isolati e da &amp;gt; 74% nelle frazioni proteiche dal cuore. Queste frazioni di quest&#39;ultima proteina includono proteine &beta;2 Ca (V) espresse in fibroblasti cardiaci. Sorprendentemente, topi non hanno mostrato alcun danno evidente, anche se cacnb2 l&#39;escissione non &egrave; stata compensata dall&#39;espressione di altre proteine &beta; Ca (V) o cambiamenti dei livelli di proteina Ca (V) 1.2. Correnti di calcio erano ancora sensibili diidropiridinico, ma la densit&agrave; di corrente a 0 mV &egrave; stato ridotto da &lt; 29%. La tensione per l&#39;attivazione del met&agrave;-maximal era leggermente spostata a pi&ugrave; depolarized potenziali nei cardiomyocytes KO rispetto alle cellule di controllo, ma la differenza non era significativa. In sintesi, &beta;2 Ca (V) sembra essere un modulatore molto pi&ugrave; forte delle correnti di calcio L-tipo in embrionale rispetto nei cardiomyocytes adulto. Anche se essenziale per la sopravvivenza embrionale, Ca (V) &beta;2 down-regulation nei cardiomyocytes &egrave; ben tollerato dai topi adulti.

Moderata disfunzione canale calcio in topi adulti con viscoelastico escissione cardiomyocyte specifici del gene cacnb2.

&#x4E2D;&#x5FC3;&#x90E8;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;L&#x578B;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3B1;1C&#xFF08;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x88DC;&#x52A9;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;2&#xFF09;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x80DA;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x200B;&#x200B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x3068;Ca&#x306E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x7279;&#x6709;&#x306E;&#x30CC;&#x30EB;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#xFF08;V&#xFF09;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306F;&#x3001;&#x3B2;2&#x306F;&#x5FC3;&#x81D3;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x3068;&#x5185;&#x3068;&#x5916;&#x80DA;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x3001;75&#xFF05;&#x307E;&#x3067;L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x8840;&#x7BA1;&#x304C;&#x80DA;&#x306E;&#x6B7B;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6761;&#x4EF6;&#x4ED8;&#x304D;&#x3067;&#x6210;&#x4F53;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#xFF08;KO&#xFF09;&#x306E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;2&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#xFF08;cacnb2&#xFF09;&#x3092;&#x5207;&#x9664;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6B20;&#x5931;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;2&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5FC3;&#x81D3;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x753B;&#x5206;&#x306E;&#x26;gt; 74&#xFF05;&#x26;gt; 96&#xFF05;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5F8C;&#x8005;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x753B;&#x5206;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;2&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; cacnb2&#x5207;&#x9664;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x307E;&#x305F;&#x306F;Ca&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x88DC;&#x511F;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x969C;&#x5BB3;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x96FB;&#x6D41;&#x306F;&#x4F9D;&#x7136;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;0 mV&#x3067;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x26;lt;29&#xFF05;&#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x534A;&#x6700;&#x5927;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x96FB;&#x5727;&#x306F;&#x308F;&#x305A;&#x304B;&#x306B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;KO&#x306E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5DEE;&#x306F;&#x6709;&#x610F;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8981;&#x7D04;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;2&#x306F;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5F37;&#x3044;&#x5909;&#x8ABF;&#x5668;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x80DA;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;V&#xFF09;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3B2;2&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x4F53;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x4E95;&#x6238;&#x3092;&#x5BB9;&#x8A8D;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Cacnb2&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5207;&#x9664;&#x3068;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x4E2D;&#x7B49;&#x5EA6;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x5168;

&#xB9C8;&#xC74C;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC694; L &#xD615; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &alpha;1C (Ca(V)1.2) &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBCF4;&#xC870; &beta; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; (Ca(V)&beta;2). &#xBC30;&#xC544; cardiomyocytes&#xB294; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; Ca (V) &beta;2&#xC758; &#xC2EC;&#xC7A5; myocyte &#xD2B9;&#xC815; null &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xACB0;&#xACFC; L &#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xC804;&#xB958; &#xAC10;&#xC18C; 75%, &#xC2EC;&#xC7A5; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC800;&#xD558; &#xBC0F; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC0F; &#xCD94;&#xAC00; embryonic &#xD608;&#xAD00; &#xBC30;&#xC544; &#xC8FD;&#xC74C; &#xB4A4;&#xC758; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC131;&#xC778; &#xC950; (&#xCF54;)&#xC758; &#xC2EC;&#xC7A5; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xD788; Ca (V) &beta;2 &#xC720;&#xC804;&#xC790; (cacnb2) excised. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB418; &#xBA74; Ca (V) &beta;2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xD604; &#xAC10;&#xC18C; &amp;gt; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xC2EC;&#xC7A5; myocytes&#xB85C; 96% &amp;gt; &#xB9C8;&#xC74C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; 74%. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6C4;&#xC790;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xC218; Ca (V) &beta;2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xAC8C;&#xC7AC; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xB294; cacnb2 &#xC808;&#xB2E8; &#xB2E4;&#xB978; Ca (V) &beta; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD;&#xC774;&#xB098; Ca (V) 1.2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCF4;&#xC0C1;&#xC744; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294; &#xC54A;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xBD84;&#xBA85; &#xD55C; &#xC7A5;&#xC560;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xCE7C;&#xC298; &#xC804;&#xB958; &#xD588;&#xB2E4; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; dihydropyridine &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; mV &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4; 0 &#xC804;&#xB958; &#xBC00;&#xB3C4; &lt; 29%. &#xBC18; &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC804;&#xC555;&#xC744; &#xC57D;&#xAC04; &#xC774;&#xB3D9; &#xD588;&#xB2E4; &#xB354; depolarized &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xC140;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xCF54; cardiomyocytes&#xC5D0; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCC28;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC694;&#xC57D;, Ca (V) &beta;2&#xC758; L &#xD615; &#xCE7C;&#xC298; &#xC804;&#xB958;&#xC5D0; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30; &#xB420; &#xB4EF;&#xD558;&#xB2E4; &#xC131;&#xC778; cardiomyocytes&#xC5D0; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xBC30;&#xC544;. &#xBE44;&#xB85D; &#xBC30;&#xC544; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778;, Ca (V) &beta;2 &#xB2E4;&#xC6B4;-&#xADDC;&#xC81C; cardiomyocytes &#xC131;&#xC778; &#xC950;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC798; &#xC6A9;&#xB0A9;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; cardiomyocyte &#xAD00;&#xB828; &#xC808;&#xB2E8; cacnb2 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xC131;&#xC778; &#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC801;&#xB2F9; &#xD55C; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC7A5;&#xC560;.

Los principales tipo L dependientes de voltaje canales de calcio en el coraz&#xF3;n consisten en un &#x3B1;1C (Ca (V) 1.2) subunidad por lo general asociado con una subunidad &#x3B2; auxiliar (Ca (V) &#x3B2;2). En cardiomiocitos embrionarios, tanto la completa y la cardiomiocitos espec&#xED;fico mutante nulo de Ca (V) &#x3B2;2 result&#xF3; en una reducci&#xF3;n de las corrientes de calcio tipo L-hasta en un 75%, lo que compromete la funci&#xF3;n del coraz&#xF3;n y causar defectos de remodelaci&#xF3;n del comercio intra y extra-embrionario los vasos sangu&#xED;neos seguida por la muerte del embri&#xF3;n. Aqu&#xED; condicional extirp&#xF3; el Ca (V) de genes &#x3B2;2 (cacnb2), espec&#xED;ficamente en los miocitos card&#xED;acos de ratones adultos (KO). Despu&#xE9;s de la deleci&#xF3;n del gen, Ca (V) &#x3B2;2 expresi&#xF3;n de la prote&#xED;na se redujo en&#x26;gt; 96% en los miocitos card&#xED;acos aislados y&#x26;gt; 74% en las fracciones de prote&#xED;na de coraz&#xF3;n. Estos &#xFA;ltimos incluyen fracciones de prote&#xED;na de Ca (V) &#xDF;2 prote&#xED;nas expresadas en los fibroblastos cardiacos. Sorprendentemente, los ratones no mostraron ning&#xFA;n deterioro evidente, aunque cacnb2 escisi&#xF3;n no fue compensada por la expresi&#xF3;n de otras prote&#xED;nas beta Ca (V) o cambios de Ca (V) 1,2 niveles de prote&#xED;na. Las corrientes de calcio eran todav&#xED;a dihidropiridina-sensible, pero la densidad de corriente a 0 mV se redujo en un &#x26;lt;29%. La tensi&#xF3;n de mitad de la m&#xE1;xima activaci&#xF3;n se desplaza ligeramente a potenciales m&#xE1;s despolarizados en cardiomiocitos KO en comparaci&#xF3;n con las c&#xE9;lulas de control, pero la diferencia no era significativa. En resumen, Ca (V) &#x3B2;2 parece ser un modulador mucho m&#xE1;s fuerte de las corrientes de calcio tipo L en embrionario que en cardiomiocitos adultos. Si bien es esencial para la supervivencia embrionaria, Ca (V) &#x3B2;2 regulaci&#xF3;n a la baja en los cardiomiocitos es bien tolerado por los ratones adultos.

El calcio moderada disfunci&#xF3;n del canal en ratones adultos con inducible cardiomiocitos espec&#xED;ficos de escisi&#xF3;n del gen Cacnb2

QT &#x95F4;&#x671F;&#x5C4F;&#x5E55;&#x90FD;&#x662F;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x5FC3;&#x810F;&#x5B89;&#x5168;&#x5BF9;&#x6240;&#x6709;&#x65B0;&#x7684;&#x836F;&#x54C1;&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x8C03;&#x67E5;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x52A8;&#x7269;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6216;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5C4F;&#x5E55;&#x53EA;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7684;&#x7535;&#x5BFC;&#x7387;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x8868;&#x793A; hERG &#x901A;&#x9053;&#x5141;&#x8BB8;&#x81EA;&#x52A8;&#x5316;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x9AD8;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x3002;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0D;&#x80FD;&#x7531;&#x81EA;&#x52A8;&#x7684;&#x819C;&#x7247;&#x94B3;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x5904;&#x7406;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x5149;&#x7B5B;&#x67E5;&#x7684;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8BA1;&#x91CF;&#x6D4B;&#x91CF;&#x62A5;&#x544A;&#x4E86;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5149;&#x5B66;&#x7535;&#x538B;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x90FD;&#x5F71;&#x54CD;&#x5E7C;&#x7A1A;&#x7684;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x63A2;&#x8BA8;&#x5F55;&#x5236;&#x6761;&#x4EF6;&#x548C;&#x5B9A;&#x4E49;&#x5141;&#x8BB8;&#x5149;&#x5B66; QT &#x95F4;&#x671F;&#x5C4F;&#x5E55;&#x7684;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x3002;

&#x4F5C;&#x4E3A;&#x66FF;&#x4EE3;&#x7684; QT &#x5C4F;&#x5E55;&#x5149;&#x5B66;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x7B5B;&#x67E5;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

QT-interval screens are increasingly important for cardiac safety on all new medications. So far, investigations rely on animal experiments or cell-based screens solely probing for conductance alterations in heterologously expressed hERG-channels in cell lines allowing for a high degree of automation. Adult cardiomyocytes can not be handled by automated patch-clamp setups. Therefore optical screening of primary isolated ventricular myocytes is regarded as an alternative. Several optical voltage sensors have been reported for ratiometric measurements, but they all influenced the naÃ¯ve action potential. The aim of the present study was to explore the recording conditions and define settings that allow optical QT-interval screens.

Optical action potential screening on adult ventricular myocytes as an alternative QT-screen.

Intervalle QT &#xE9;crans sont de plus en plus important pour la s&#xE9;curit&#xE9; cardiaque sur tous les nouveaux m&#xE9;dicaments. Jusqu&#x26;#39;&#xE0; pr&#xE9;sent, les enqu&#xEA;tes s&#x26;#39;appuient sur l&#x26;#39;exp&#xE9;rimentation animale ou &#xE0; base de cellules &#xE9;crans uniquement de sondage pour les modifications de conductance dans h&#xE9;t&#xE9;rologue exprim&#xE9;es hERG-canaux dans des lign&#xE9;es cellulaires permettant un degr&#xE9; &#xE9;lev&#xE9; d&#x26;#39;automatisation. Cardiomyocytes adultes ne peuvent pas &#xEA;tre trait&#xE9;es par patch-clamp automatis&#xE9;s configurations. Par cons&#xE9;quent le d&#xE9;pistage optique de myocytes ventriculaires isol&#xE9;s primaires est consid&#xE9;r&#xE9;e comme une alternative. Plusieurs capteurs optiques de tension ont &#xE9;t&#xE9; signal&#xE9;s pour les mesures ratiom&#xE9;triques, mais ils ont tous influenc&#xE9; le potentiel d&#x26;#39;action na&#xEF;ve. Le but de la pr&#xE9;sente &#xE9;tude &#xE9;tait d&#x26;#39;explorer les conditions d&#x26;#39;enregistrement et de d&#xE9;finir les param&#xE8;tres qui permettent optiques intervalle QT &#xE9;crans.

Action optique de d&#xE9;pistage potentiel sur les myocytes ventriculaires adultes comme alternative QT &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;cran

QT-Intervall-Bildschirme werden immer wichtiger f&uuml;r kardiale Sicherheit auf alle neuen Medikamente. Bisher Vertrauen Untersuchungen auf Tierversuche oder Zell-basierte Bildschirme hERG-Kan&auml;le in Zelllinien, die ein hohes Ma&szlig; an Automatisierung erm&ouml;glicht ausschlie&szlig;lich Sondierung f&uuml;r Leitwert &Auml;nderungen in heterologously ausgedr&uuml;ckt werden. Erwachsene Cardiomyocytes k&ouml;nnen nicht durch automatisierte Patch-Clamp-Konfigurationen behandelt werden. Daher gilt die optische &Uuml;berpr&uuml;fung der prim&auml;ren isolierten ventrikul&auml;ren Myozyten als Alternative. Mehrere optische Spannungssensoren ratiometrisch Messungen berichtet worden, aber sie alle beeinflusst die naiv-Aktionspotential. Ziel der vorliegenden Studie war zu erforschen die Aufnahmebedingungen und Einstellungen, mit denen optische QT-Intervall-Bildschirme zu definieren.

Optische Aktionspotential Screening auf Erwachsene ventrikul&auml;ren Myozyten als eine alternative QT-Bildschirm.

Intervallo QT schermi sono sempre pi&ugrave; importanti per la sicurezza cardiaca su tutti i nuovi farmaci. Finora, le indagini si basano su esperimenti sugli animali o basati su celle schermate unicamente di tastatura per alterazioni della conduttanza in heterologously espresso hERG-canali in linee cellulari consentendo un elevato grado di automazione. Cardiomiociti adulti non possono essere gestito da Setup automatizzato patch-clamp. Pertanto ottico screening dei miociti ventricolari isolate primario &egrave; considerato come un&#39;alternativa. Diversi sensori ottici di tensione sono stati segnalati per le misurazioni raziometrici, ma tutti hanno influenzato il potenziale di azione ingenua. Lo scopo del presente studio era di esplorare le condizioni di registrazione e definire le impostazioni che permettono di schermi ottici di intervallo QT.

Potenziale d&#39;azione ottica dello screening su miociti ventricolari adulti come un&#39;alternativo QT-schermo.

QT&#x9593;&#x9694;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x85AC;&#x3067;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x5B89;&#x5168;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x307E;&#x3059;&#x307E;&#x3059;&#x91CD;&#x8981;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x3068;&#x3053;&#x308D;&#x3001;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x306B;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306A;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7570;&#x7A2E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;hERG&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x52D5;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x51E6;&#x7406;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3068;&#x898B;&#x306A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5149;&#x96FB;&#x5727;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30B7;&#x30AA;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC; - &#x5168;&#x66F2;&#x7121;&#x6599;&#x8A66;&#x8074;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x8A18;&#x9332;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x63A2;&#x7D22;&#x3057;&#x3001;&#x5149;QT&#x9593;&#x9694;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

QT-&#x753B;&#x9762;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x306E;&#x5149;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;

QT &#xAC04;&#xACA9; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0;&#xC740; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC57D;&#xD488;&#xC5D0; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC548;&#xC804;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC810;&#xC810; &#xB354; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC870;&#xC0AC; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xD654;&#xBA74; hERG-&#xCC44;&#xB110;, &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC790;&#xB3D9;&#xD654;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xC804;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; heterologously&#xC5D0; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD504;&#xB85C; &#xBE59;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874;. &#xC131;&#xC778; cardiomyocytes &#xC790;&#xB3D9;&#xB41C; &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xC124;&#xCE58; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes &#xAE30;&#xBCF8; &#xC808;&#xC5F0;&#xB41C;&#xC758; &#xAD11;&#xD559; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xB300; &#xC548;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xC728; &#xD658;&#xC0B0; &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAD11; &#xC804;&#xC555; &#xC13C;&#xC11C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xBAA8;&#xB450; na&iuml; ve &#xD65C;&#xB3D9; &#xC804;&#xC704;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xB179;&#xC74C; &#xC870;&#xAC74; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xAD11;&#xD559; QT &#xAC04;&#xACA9; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC124;&#xC815;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xAD11;&#xD559; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC804;&#xC704; &#xB300;&#xCCB4; QT &#xD654;&#xBA74;&#xC73C;&#xB85C; &#xC131;&#xC778; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2EC;&#xC0AC;.

Intervalo QT-pantallas son cada vez m&#xE1;s importante para la seguridad card&#xED;aca de todos los medicamentos nuevos. Hasta ahora, las investigaciones se basan en experimentos con animales o pantallas a base de c&#xE9;lulas exclusivamente de sondeo para las alteraciones en la conductancia heter&#xF3;loga expresada hERG canales en l&#xED;neas celulares que permiten un alto grado de automatizaci&#xF3;n. Cardiomiocitos adultos no pueden ser manejados por automatizadas configuraciones de patch-clamp. Por lo tanto detecci&#xF3;n &#xF3;ptica de primarias miocitos ventriculares aislados se considera como una alternativa. Varios sensores &#xF3;pticos de tensi&#xF3;n se ha informado de las medidas ratiometric, pero todos ellos influyeron en el potencial de acci&#xF3;n ingenua. El objetivo del presente estudio fue explorar las condiciones de grabaci&#xF3;n y definir los ajustes que permiten a los &#xF3;pticos-pantallas del intervalo QT.

Acci&#xF3;n &#xF3;ptico de detecci&#xF3;n potencial en los miocitos ventriculares de adultos como alternativa de QT de pantalla

&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE; cytochalasin D (CytoD) &#x636E;&#x62A5;&#x5145;&#x5F53;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5E72;&#x6270;&#x548C;&#x673A;&#x68B0;&#x89E3;&#x5076;&#x8054;&#x5242;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x5171;&#x7126;&#x548C;&#x8D85;&#x5206;&#x8FA8;&#x5F97;&#x94A2;&#x955C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; CytoD &#x4FDD;&#x7559;&#x6210;&#x5E74;&#x5927;&#x9F20;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x4E2D;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E1D;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x4E94;&#x767E;&#x5E74; nanomolar CytoD &#x662F;&#x6700;&#x4F73;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8FC7;&#x7A0B; 3 &#x5929;&#x6587;&#x5316;&#x671F;&#x548C;&#x517B;&#x62A4;&#x7B49;&#x9499;&#x77AC;&#x53D8;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x529F;&#x80FD;&#x7279;&#x70B9;&#x548C;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5355;&#x4E2A;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6536;&#x7F29;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; T &#x7BA1;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA; CytoD &#x52A0;&#x5165;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x786E;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x751F;&#x6210;&#x56FA;&#x4F53;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6A21;&#x578B;&#x4FDD;&#x7559;&#x65B0;&#x9C9C;&#x79BB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x5F62;&#x6001;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F1A;&#x6CC4;&#x9732;&#x9AA8;&#x67B6;&#x548C; T &#x7BA1;&#x72B6;&#x91CD;&#x6784;&#x7684;&#x5047;&#x5B9A;&#x5B58;&#x5728;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709; CytoD &#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230; T &#x5C0F;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x91CD;&#x5927; dyssynchronous Ca(2+) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E; &#xFF08;&#x51DD;&#x805A;&#xFF09;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5B58;&#x5728; 0.5 &mu; M &#x7684;&#x635F;&#x5931; CytoD&#xFF0C;T-&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x53CA;&#x5747;&#x8D28;&#x51DD;&#x805A;&#x7B49;&#x88AB;&#x4FDD;&#x7559;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#xFF0C;T-&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x53CA;&#x540C;&#x6B65;&#x3001; &#x53EF;&#x9760;&#x52B1;&#x78C1;-&#x6536;&#x7F29;-&#x8026;&#x5408;&#x4E4B;&#x95F4;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;T &#x94A2;&#x7BA1;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x4E2D;&#x7684;&#x9610;&#x660E;&#x4E86;&#x9644;&#x52A0;&#x5230;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x5FC3;&#x810F;&#x75BE;&#x75C5;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x80FD;&#x5C06;&#x9AA8;&#x67B6;&#x6539;&#x5EFA;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x75C5;&#x7406;&#x751F;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x5F62;&#x6001;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6587;&#x5316;&#x7684; sub micromolar cytochalasin D &#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8865;&#x5145;&#x3002;

In cardiac myocytes, cytochalasin D (CytoD) was reported to act as an actin disruptor and mechanical uncoupler. Using confocal and super-resolution STED microscopy, we show that CytoD preserves the actin filament architecture of adult rat ventricular myocytes in culture. Five hundred nanomolar CytoD was the optimal concentration to achieve both preservation of the T-tubular structure during culture periods of 3 days and conservation of major functional characteristics such as action potentials, calcium transients and, importantly, the contractile properties of single myocytes. Therefore, we conclude that the addition of CytoD to the culture of adult cardiac myocytes can indeed be used to generate a solid single-cell model that preserves both morphology and function of freshly isolated cells. Moreover, we reveal a putative link between cytoskeletal and T-tubular remodeling. In the absence of CytoD, we observed a loss of T-tubules that led to significant dyssynchronous Ca(2+)-induced Ca(2+) release (CICR), while in the presence of 0.5 Î¼M CytoD, T-tubules and homogeneous CICR were majorly preserved. Such data suggested a possible link between the actin cytoskeleton, T-tubules and synchronous, reliable excitation-contraction-coupling. Thus, T-tubular re-organization in cell culture sheds some additional light onto similar processes found during many cardiac diseases and might link cytoskeletal alterations to changes in subcellular Ca(2+) signaling revealed under such pathophysiological conditions.

Functional and morphological preservation of adult ventricular myocytes in culture by sub-micromolar cytochalasin D supplement.

Dans les myocytes cardiaques, la cytochalasine D (CytoD) a &#xE9;t&#xE9; signal&#xE9; &#xE0; agir comme un perturbateur d&#x26;#39;actine et de d&#xE9;coupleur m&#xE9;canique. Utilisation confocale et de super-r&#xE9;solution microscopie STED, nous montrons que CytoD pr&#xE9;serve l&#x26;#39;architecture filament d&#x26;#39;actine des myocytes ventriculaires de rat en culture. Cinq cents nanomolaire CytoD &#xE9;tait la concentration optimale pour atteindre &#xE0; la fois la pr&#xE9;servation de la structure tubulaire T-pendant les p&#xE9;riodes de culture de 3 jours et la conservation des principales caract&#xE9;ristiques fonctionnelles telles que les potentiels d&#x26;#39;action, les transitoires de calcium et, surtout, les propri&#xE9;t&#xE9;s contractiles des myocytes isol&#xE9;s. Par cons&#xE9;quent, nous concluons que l&#x26;#39;ajout de CytoD &#xE0; la culture de myocytes cardiaques adultes peuvent en effet &#xEA;tre utilis&#xE9; pour g&#xE9;n&#xE9;rer un solide cellule unique mod&#xE8;le qui pr&#xE9;serve &#xE0; la fois la morphologie et la fonction de cellules isol&#xE9;es fra&#xEE;chement. En outre, nous r&#xE9;v&#xE8;lent un lien pr&#xE9;sum&#xE9; entre le remodelage du cytosquelette et T-tubulaire. En l&#x26;#39;absence de CytoD, nous avons observ&#xE9; une perte de T-tubules qui a conduit &#xE0; dyssynchronous significative Ca (2 +)-induite par le Ca (2 +) communiqu&#xE9; (CICR), tandis que dans la pr&#xE9;sence de 0,5 uM CytoD, T-tubules et homog&#xE8;ne ICRC ont &#xE9;t&#xE9; conserv&#xE9;s majorly. Ces donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent un lien possible entre le cytosquelette d&#x26;#39;actine, T-tubules et synchrone, fiable excitation-contraction de couplage. Ainsi, T-tubulaire r&#xE9;organisation en culture cellulaire jette une certaine lumi&#xE8;re suppl&#xE9;mentaire sur des processus similaires trouv&#xE9;es au cours de nombreuses maladies cardiaques et pourrait relier les modifications du cytosquelette &#xE0; des changements dans subcellulaire Ca (2 +) de signalisation a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; dans ces conditions physiopathologiques.

Pr&#xE9;servation fonctionnelle et morphologique des myocytes ventriculaires adultes dans la culture par le Sous-micromolaire cytochalasine D Suppl&#xE9;ment

Im kardialen Myozyten wurde Cytochalasin D (CytoD) berichtet, als ein Aktin-Disruptor und mechanischen Entkuppler. Konfokale verwenden und superaufl&ouml;sende STED-Mikroskopie, zeigen wir, dass CytoD die Aktin-Filament-Architektur der Erwachsene Ratte ventrikul&auml;ren Myozyten in Kultur bewahrt. F&uuml;nfhundert Nanomolar CytoD war die optimale Konzentration beider Erhaltung der T-tubul&auml;re Struktur w&auml;hrend der Kultur Perioden von 3 Tagen und Erhaltung der wichtigsten funktionellen Eigenschaften wie Aktionspotentiale, Kalzium-Transienten und allem der kontraktilen Eigenschaften der einzelnen Myocytes zu erreichen. Daher schlie&szlig;en wir, dass der Zusatz von CytoD zur Kultur der Erwachsenen kardialen Myozyten tats&auml;chlich verwendet werden kann, ein Volumenmodell einzellige generieren, die Morphologie und Funktion des frisch isolierten Zellen bewahrt. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir einen vermeintlichen Zusammenhang zwischen Zytoskelett und T-tubul&auml;re Umbau. Ohne CytoD, wir beobachteten einen Verlust von T-Tubuli, die zu erheblichen Dyssynchronous Ca(2+) Ca(2+)-induzierte Freisetzung (CICR), in Gegenwart von 0,5 &mu;M gef&uuml;hrt CytoD, T-Tubuli und homogene CICR majorly beibehalten wurden. Solche Daten vorgeschlagen, einen m&ouml;glichen Zusammenhang zwischen der Aktin-Zytoskeletts, T-Tubuli und synchrone, zuverl&auml;ssige Erregung-Kontraktion-Kopplung. Also T-Pellets Reorganisation in der Zellkultur zus&auml;tzliche beleuchtet auf &auml;hnliche Prozesse bei vielen Herzerkrankungen gefunden und Zytoskelett &Auml;nderungen mit &Auml;nderungen in subzellul&auml;ren Ca(2+) Signalisierung offenbart unter pathophysiologischen Bedingungen verkn&uuml;pfen.

Funktionelle und morphologische Erhaltung der Erwachsenen ventrikul&auml;ren Myozyten in der Kultur von Sub-micromolar Cytochalasin D erg&auml;nzen.

Nei miociti cardiaci, citocalasina D (CytoD) &egrave; stato segnalato per agire come un disgregatore di actina e sono meccanico. Utilizzando confocale e microscopia di STED Super-risoluzione, mostriamo che CytoD conserva l&#39;architettura di filamenti di actina dei miociti ventricolari ratto adulto nella cultura. Cinquecento nanomolari CytoD era la concentrazione ottimale per raggiungere sia conservazione della struttura tubolare T durante periodi di 3 giorni di cultura e conservazione delle caratteristiche funzionali principali quali potenziali d&#39;azione, transitori di calcio e, soprattutto, le propriet&agrave; contrattili dei singoli miociti. Pertanto, possiamo concludere che l&#39;aggiunta di CytoD per la coltura dei miociti cardiaci adulto infatti pu&ograve; essere utilizzato per generare un modello solido a cella singola che preserva la morfologia e la funzione delle cellule appena isolate. Inoltre, ci rivelano un putativo link tra il rimodellamento del citoscheletro e T-tubolare. In assenza di CytoD, abbiamo osservato una perdita dei tubuli T che ha portato a significativi dyssynchronous Ca(2+) Ca(2+)-induced release (CICR), mentre in presenza di 0,5 &mu;M CytoD, tubuli T e omogeneo CICR majorly furono conservate. Tali dati ha suggerito un possibile legame tra il citoscheletro di actina, tubuli T e sincrono, affidabile di eccitazione-contrazione-accoppiamento. Cos&igrave;, T-tubolare riorganizzazione in coltura cellulare getta qualche luce supplementare sui processi simili trovati nel corso di molte malattie cardiache e potrebbe linkare cambiamenti nella sottocellulari Ca(2+) segnalazione ha rivelato in tali condizioni patofisiologiche alterazioni del citoscheletro.

Conservazione morfologica e funzionale dei miociti ventricolari adulti nella cultura di sub-micromolare citocalasina D supplemento.

&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30E9;&#x30B7;&#x30F3;D&#xFF08;CytoD&#xFF09;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x304B;&#x304F;&#x4E71;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x8131;&#x5171;&#x5F79;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x8D85;&#x89E3;&#x50CF;STED&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;CytoD&#x306F;&#x3001;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x6210;&#x4F53;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x4E94;&#x767E;&#x30CA;&#x30CE;&#x30E2;&#x30EB;CytoD&#x306F;3&#x65E5;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x7279;&#x6027;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x4FDD;&#x5168;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x671F;&#x9593;&#x4E2D;&#x306B;T-&#x7BA1;&#x72B6;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x4FDD;&#x5168;&#x306E;&#x4E21;&#x7ACB;&#x3092;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x304C;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;CytoD&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x78BA;&#x304B;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x56FA;&#x4F53;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3068;T-&#x7BA1;&#x72B6;&#x306E;&#x6539;&#x9020;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; CytoD&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x306F;&#x3001;0.5&#x3BC;MCytoD&#x3001;T-&#x7D30;&#x7BA1;&#x3068;&#x5747;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;T-&#x7D30;&#x7BA1;&#x91CD;&#x8981;dyssynchronous CA&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x8A98;&#x767A;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#xFF08;CICR&#xFF09;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;CICR&#x306F;&#x3059;&#x304E;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3001;T-&#x7D30;&#x7BA1;&#x3068;&#x540C;&#x671F;&#x3001;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x8208;&#x596E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;T-&#x7D30;&#x7BA1;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5FC3;&#x75BE;&#x60A3;&#x4E2D;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x4E0A;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x5149;&#x3092;&#x6295;&#x3052;&#x304B;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x75C5;&#x614B;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B5;&#x30D6;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30E9;&#x30B7;&#x30F3;D&#x30B5;&#x30D7;&#x30EA;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5F62;&#x614B;&#x4FDD;&#x5B58;

&#xC2EC;&#xC7A5; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; cytochalasin D (CytoD) &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC29;&#xD574;&#xC640; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; uncoupler &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC84C;&#xB2E4;. &#xACF5;&#xCD08;&#xC810; &#xB808;&#xC774;&#xC800;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC288;&#xD37C; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; STED &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;, &#xC6B0;&#xB9AC; CytoD &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes &#xC131;&#xC778; &#xC950;&#xC758; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xAD6C;&#xC870; &#xC720;&#xC9C0; &#xB428;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. 5 &#xBC31; nanomolar Cytod&#xB294; 3 &#xC77C;&#xC758; &#xBB38;&#xD654; &#xAE30;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC561;&#xC158; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;, &#xCE7C;&#xC298; &#xACFC;&#xB3C4; &#xAC19;&#xC740; &#xC8FC;&#xC694; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD2B9;&#xC131;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874; &#xBC0F; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xB2E8;&#xC77C; myocytes&#xC758; &#xC218;&#xCD95; &#xC131;&#xC758; &#xC18D;&#xC131; &#xC911; T &#xAD00; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xB450; &#xBCF4;&#xC874;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCD5C;&#xC801; &#xB18D;&#xB3C4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Cytod&#xC758; &#xC131;&#xC778; &#xC2EC;&#xC7A5; myocytes &#xBB38;&#xD654; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xD615;&#xD0DC;&#xC640; &#xAC13; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xB2E8;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C; &#xACB0;&#xB860; &#xC9C0;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, cytoskeletal &#xBC0F; T &#xAD00; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xC0AC;&#xC774; &#xC0C1; &#xB9C1;&#xD06C;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; dyssynchronous Ca(2+) &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; (CICR), 0.5 &mu; M &#xC55E;&#xC5D0; T tubules &#xC190;&#xC2E4;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; Cytod&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;, CytoD, T tubules &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADE0;&#xC9C8; CICR majorly &#xBCF4;&#xC874; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; T tubules &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB3D9;&#xAE30;, &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xC6D0; &#xACF5;&#xAE09;-&#xC218;&#xCD95;-&#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton &#xC0AC;&#xC774; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, T &#xAD00; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC870;&#xC9C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0; &#xB9CE;&#xC740; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC9C8;&#xD658; &#xC911;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xCD94;&#xAC00; &#xBE5B;&#xC774; &#xB098; &#xACE0; pathophysiological &#xAC19;&#xC740; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1D;&#xD600; subcellular Ca(2+) &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD654; cytoskeletal &#xBCC0;&#xACBD; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD560; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC131;&#xC778; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes &#xBB38;&#xD654; &#xD558;&#xC704; micromolar cytochalasin D&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xBC0F; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBCF4;&#xC874; &#xBCF4;&#xC644;.

En los miocitos card&#xED;acos, citocalasina D (CytoD) se inform&#xF3; de actuar como un disruptor de actina y desacoplador mec&#xE1;nico. Usando confocal y microscop&#xED;a de super-resoluci&#xF3;n STED, nos muestran que CytoD conserva la arquitectura de filamentos de actina de los adultos miocitos ventriculares de rata en cultivo. Quinientos nanomolar CytoD fue la concentraci&#xF3;n &#xF3;ptima para lograr tanto la preservaci&#xF3;n de la estructura tubular de T-durante los per&#xED;odos de cultivo de 3 d&#xED;as y de conservaci&#xF3;n de las principales caracter&#xED;sticas funcionales, tales como los potenciales de acci&#xF3;n, transitorios de calcio y, sobre todo, las propiedades contr&#xE1;ctiles de miocitos individuales. Por lo tanto, se concluye que la adici&#xF3;n de CytoD a la cultura de adultos miocitos card&#xED;acos de hecho puede ser utilizado para generar un s&#xF3;lido de una sola c&#xE9;lula modelo que conserva la morfolog&#xED;a y la funci&#xF3;n de c&#xE9;lulas reci&#xE9;n aisladas. Por otra parte, nos revelan un v&#xED;nculo entre la supuesta remodelaci&#xF3;n del citoesqueleto y T tubular. En ausencia de CytoD, se observ&#xF3; una p&#xE9;rdida de t&#xFA;bulos T-que llev&#xF3; a importantes Ca asincr&#xF3;nica (2 +) inducida por Ca (2 +) de liberaci&#xF3;n (CICR), mientras que en presencia de 0,5 mM CytoD, T de t&#xFA;bulos y homog&#xE9;nea CICR se han conservado mayormente. Estos datos sugieren un posible v&#xED;nculo entre el citoesqueleto de actina, los t&#xFA;bulos T y sincr&#xF3;nica, fiable acoplamiento excitaci&#xF3;n-contracci&#xF3;n. Por lo tanto, T-tubular de reorganizaci&#xF3;n en el cultivo celular arroja alguna luz adicional en los procesos similares que se encuentran en muchas de las enfermedades card&#xED;acas y alteraciones del citoesqueleto podr&#xED;a vincular a los cambios en subcelular Ca (2 +) de se&#xF1;alizaci&#xF3;n revel&#xF3; bajo tales condiciones fisiopatol&#xF3;gicas.

La preservaci&#xF3;n funcional y morfol&#xF3;gica de los miocitos ventriculares adultos en Cultura por el Sub-micromolar citocalasina D Suplemento

&#x4ECE;&#x901A;&#x8FC7;&#x5FC3;&#x810F;&#x5170;&#x5C3C;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53; &#xFF08;RYR2) &#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x808C;&#x6D46;&#x7F51; (SR) &#x9499; (&#x7ECF;) &#x534F;&#x8C03;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x5BF9;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x4E2D;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x591A;&#x5F62;&#x6027;&#x5BA4;&#x6027;&#x5FC3;&#x52A8;&#x8FC7; (CPVT) &#x7ED3;&#x6784;&#x6B63;&#x5E38;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x5E74;&#x8F7B;&#x60A3;&#x8005;&#x5E94;&#x6FC0;&#x8BF1;&#x53D1;&#x5BA4;&#x6027;&#x5FC3;&#x5F8B;&#x5931;&#x5E38;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x9057;&#x4F20;&#x75BE;&#x75C5; RYR2 &#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x663E;&#x6027;&#x9057;&#x4F20;&#x6027;&#x663E;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8;&#x6216; calsequestrin &#x9690;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5F02;&#x5E38;&#x8212;&#x5F20;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x4ECE;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x540E; depolarizations (&#x7238;&#x7238;) &#x7684;&#x81F4;&#x5FC3;&#x5F8B;&#x5931;&#x5E38;&#x7684; SR&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECE; CPVT &#x60A3;&#x8005;&#x643A;&#x5E26;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684; RYR2 S406L &#x7A81;&#x53D8;&#x62A5;&#x544A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x9B54;&#x9B3C;&#xFF09; &#x7684;&#x751F;&#x6210;&#x3002;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x5E94;&#x529B;&#x5728;&#x75C5;&#x4EBA;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E86;&#x9AD8;&#x67B6;&#x8212;&#x5F20;&#x7ECF;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3001; &#x51CF;&#x5C11;&#x7684; SR &#x7ECF;&#x5185;&#x5BB9;&#x548C;&#x7238;&#x7238;&#x548C;&#x5FC3;&#x5F8B;&#x4E0D;&#x9F50;&#x800C;&#x63A7;&#x5236;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x56E0;&#x4E3A;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x9891;&#x7387;&#x548C;&#x6301;&#x7EED;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x5C0F;&#x5B66;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x4E8B;&#x4EF6; &#xFF08;&#x7ECF;&#x706B;&#x82B1;&#xFF09;&#x3002;Dantrolene&#xFF0C;&#x836F;&#x7269;&#x5BF9;&#x6076;&#x6027;&#x9AD8;&#x70ED;&#xFF0C;&#x6709;&#x6548;&#x6062;&#x590D;&#x6B63;&#x5E38;&#x7ECF;&#x661F;&#x706B;&#x5C5E;&#x6027;&#x548C;&#x6551;&#x51FA;&#x7684;&#x81F4;&#x5FC3;&#x5F8B;&#x5931;&#x5E38;&#x6027;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; RYR2 &#x901A;&#x9053;&#x5185;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x57DF;&#x95F4;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4F5C;&#x4E3A; S406L &#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x75C5;&#x7406;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x6A21;&#x578B;&#x6765;&#x7814;&#x7A76;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5FC3;&#x5F8B;&#x5931;&#x5E38;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x4E3A; CPVT &#x5F00;&#x53D1;&#x65B0;&#x578B;&#x7597;&#x6CD5;&#x3002;

Dantrolene &#x6551;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x591A;&#x5F62;&#x6027;&#x5BA4;&#x6027;&#x5FC3;&#x52A8;&#x8FC7;&#x901F;&#x75C5;&#x4EBA;&#x7279;&#x5B9A;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x7684;&#x81F4;&#x5FC3;&#x5F8B;&#x5931;&#x5E38;&#x6027; RYR2 &#x7F3A;&#x9677;&#x3002;

Coordinated release of calcium (Ca(2+) ) from the sarcoplasmic reticulum (SR) through cardiac ryanodine receptor (RYR2) channels is essential for cardiomyocyte function. In catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia (CPVT), an inherited disease characterized by stress-induced ventricular arrhythmias in young patients with structurally normal hearts, autosomal dominant mutations in RYR2 or recessive mutations in calsequestrin lead to aberrant diastolic Ca(2+) release from the SR causing arrhythmogenic delayed after depolarizations (DADs). Here, we report the generation of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from a CPVT patient carrying a novel RYR2 S406L mutation. In patient iPSC-derived cardiomyocytes, catecholaminergic stress led to elevated diastolic Ca(2+) concentrations, a reduced SR Ca(2+) content and an increased susceptibility to DADs and arrhythmia as compared to control myocytes. This was due to increased frequency and duration of elementary Ca(2+) release events (Ca(2+) sparks). Dantrolene, a drug effective on malignant hyperthermia, restored normal Ca(2+) spark properties and rescued the arrhythmogenic phenotype. This suggests defective inter-domain interactions within the RYR2 channel as the pathomechanism of the S406L mutation. Our work provides a new in vitro model to study the pathogenesis of human cardiac arrhythmias and develop novel therapies for CPVT.

Dantrolene rescues arrhythmogenic RYR2 defect in a patient-specific stem cell model of catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia.

Lib&#xE9;ration coordonn&#xE9;e de calcium (Ca (2 +)) &#xE0; partir du r&#xE9;ticulum sarcoplasmique (SR) par le biais du r&#xE9;cepteur ryanodine cardiaque (RYR2) canaux est essentielle pour la fonction des cardiomyocytes. Dans une tachycardie ventriculaire polymorphe cat&#xE9;cholaminergique (TVPC), une maladie h&#xE9;r&#xE9;ditaire caract&#xE9;ris&#xE9;e par des arythmies ventriculaires induites par le stress chez les patients jeunes avec des coeurs structurellement normales, mutations autosomiques dominantes dans RYR2 ou mutations r&#xE9;cessives dans le plomb cals&#xE9;questrine &#xE0; aberrante diastolique Ca (2 +) la lib&#xE9;ration de la SR arythmog&#xE8;ne causant retard&#xE9;e apr&#xE8;s d&#xE9;polarisations (DADS). Ici, nous rapportons la production de cellules souches pluripotentes induites (CISP) d&#x26;#39;un patient porteur d&#x26;#39;un roman TVPC RYR2 mutation S406L. Dans des patients iPSC d&#xE9;riv&#xE9;s cardiomyocytes, le stress conduit &#xE0; cat&#xE9;cholaminergique &#xE9;lev&#xE9;e diastolique Ca (2 +), une concentration r&#xE9;duite SR Ca (2 +) contenu et une susceptibilit&#xE9; accrue aux p&#xE8;res et de l&#x26;#39;arythmie par rapport &#xE0; contr&#xF4;ler les myocytes. Cela &#xE9;tait d&#xFB; &#xE0; une fr&#xE9;quence accrue et la dur&#xE9;e du primaire Ca (2 +) des &#xE9;v&#xE9;nements de rel&#xE2;chement (Ca (2 +) des &#xE9;tincelles). Le dantrol&#xE8;ne, un m&#xE9;dicament efficace sur l&#x26;#39;hyperthermie maligne, restaur&#xE9; normales Ca (2 +) des propri&#xE9;t&#xE9;s d&#x26;#39;allumage et a sauv&#xE9; le ph&#xE9;notype arythmog&#xE8;ne. Ceci sugg&#xE8;re d&#xE9;fectueux interactions inter-domaines dans le canal RYR2 que le m&#xE9;canisme pathologique de la mutation S406L. Notre travail fournit un nouveau mod&#xE8;le in vitro pour &#xE9;tudier la pathogen&#xE8;se de l&#x26;#39;homme des arythmies cardiaques et de d&#xE9;velopper de nouvelles th&#xE9;rapies pour TVPC.

Le dantrol&#xE8;ne Rescues arythmog&#xE8;ne RYR2 d&#xE9;fauts dans un mod&#xE8;le sp&#xE9;cifique au patient les cellules souches de la tachycardie ventriculaire polymorphe cat&#xE9;cholaminergique

Koordinierten Freisetzung von Kalzium (Ca(2+)) aus dem sarkoplasmatischen Retikulum (SR) durch kardiale Ryanodin-Rezeptor (RYR2)-Kan&auml;le ist essentiell f&uuml;r Cardiomyocyte-Funktion. In Catecholaminergic polymorphe ventrikul&auml;ren Tachykardie (CPVT), eine vererbte Krankheit, charakterisiert durch Stress-induced ventrikul&auml;re Arrhythmien bei jungen Patienten mit strukturell normalen Herzen, f&uuml;hren autosomal dominante Mutationen im RYR2 oder rezessive Mutationen im Calsequestrin zu abweichenden diastolische Ca(2+) Entlassung aus der SR verursacht Arrhythmogenic verz&ouml;gert nach Depolarizations (V&auml;ter). Hier berichten wir die Generation der induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs) aus einem CPVT Patienten tragen eine neuartige RYR2-S406L-Mutation. Patienten iPSC abgeleiteten Cardiomyocytes f&uuml;hrte Catecholaminergic Stress und erh&ouml;hten diastolischen Ca(2+) Konzentrationen, eine reduzierte SR Ca(2+) Inhalt und eine erh&ouml;hte Anf&auml;lligkeit f&uuml;r V&auml;ter und Arrhythmie im Vergleich zur Kontrolle Myocytes. Dies ist auf erh&ouml;hte H&auml;ufigkeit und Dauer der elementaren Ca(2+) Freigabe Ereignisse (Ca(2+) Funken). Dantrolen, eine Droge, die effektiv auf Maligne Hyperthermie, normale Ca(2+) Funken Eigenschaften wiederhergestellt und der arrhythmogenen Ph&auml;notyp gerettet. Dies schl&auml;gt defekte Inter Wechselwirkungen innerhalb der RYR2-Kanal als die Pathomechanism der S406L-Mutation. Unsere Arbeit stellt ein neues in-vitro-Modell zum Studium der Pathogenese des menschlichen Herzrhythmusst&ouml;rungen und neuartige Therapien f&uuml;r CPVT entwickeln.

Dantrolen rettet Arrhythmogenic RYR2 Defekt in einem Patienten-spezifischen Stammzell-Modell der Catecholaminergic polymorphe ventrikul&auml;re Tachykardie.

Rilascio coordinato di calcio (Ca(2+)) dal reticolo sarcoplasmico (SR) attraverso canali (RYR2) recettore rianodinico cardiaco &egrave; essenziale per la funzione del cardiomyocyte. Nella tachicardia ventricolare polimorfica catecholaminergic (CPVT), una malattia ereditaria caratterizzata da aritmie ventricolari stress-induced in giovani pazienti con cuore strutturalmente normale, mutazioni autosomiche dominanti in RYR2 o mutazioni recessive in calsequestrin portano a aberrante diastolica Ca(2+) rilascio da SR causando aritmogena del ritardato dopo depolarizations (pap&agrave;). Riportiamo la generazione di cellule staminali pluripotenti indotte (iPSCs) da un paziente CPVT un romanzo mutazione RYR2 S406L. Nel paziente cardiomiociti derivati iPSC, catecholaminergic stress ha portato a concentrazioni elevate di Ca(2+) diastole, un ridotto contenuto di SR Ca(2+) e un aumento della suscettibilit&agrave; a pap&agrave; e aritmia rispetto al controllo miociti. Questo era a causa di aumento della frequenza e durata degli eventi di rilascio Ca(2+) elementari (Ca(2+) scintille). Dantrolene, un farmaco efficace su ipertermia maligna, ripristinato il normale Ca(2+) propriet&agrave; di scintilla e salvato il fenotipo aritmogena. Questo suggerisce difettose interdominio interazioni all&#39;interno del canale RYR2 come il pathogener della mutazione S406L. Il nostro lavoro fornisce un nuovo modello in vitro per studiare la patogenesi delle aritmie cardiache umane e sviluppare nuove terapie per CPVT.

Dantrolene salv&ograve; aritmogena RYR2 difetto in un modello delle cellule staminali del paziente-specifici di catecholaminergic tachicardia ventricolare polimorfica.

&#x5FC3;&#x81D3;&#x30EA;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B8;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;RYR2&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7B4B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x5354;&#x8ABF;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#xFF08;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF09;&#xFF08;SR&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; SR&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x62E1;&#x5F35;&#x671F;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30BB;&#x30AF;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;RYR2&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x52A3;&#x6027;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3067;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x591A;&#x5F62;&#x6027;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x983B;&#x62CD;&#xFF08;CPVT&#xFF09;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x5FC3;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x82E5;&#x3044;&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x6027;&#x4E0D;&#x6574;&#x8108;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x75C5;&#x3001;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x512A;&#x6027;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#xFF08;DAD&#xFF09;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x9045;&#x308C;&#x3066;&#x4E0D;&#x6574;&#x8108;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x8AAC;RYR2 S406L&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;CPVT&#x60A3;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;&#x6027;IPSC&#xFF09;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x60A3;&#x8005;IPSC&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x6607;&#x683C;&#x62E1;&#x5F35;&#x671F;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x3001;&#x524A;&#x6E1B;SR&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x542B;&#x6709;&#x91CF;&#x3068;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;DAD&#x3068;&#x4E0D;&#x6574;&#x8108;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306E;&#x4E0A;&#x6607;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x5C0F;&#x5B66;&#x6821;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x983B;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x6301;&#x7D9A;&#x6642;&#x9593;&#xFF08;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x706B;&#x82B1;&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30C0;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30EC;&#x30F3;&#x3001;&#x60AA;&#x6027;&#x9AD8;&#x71B1;&#x75C7;&#x306B;&#x6709;&#x52B9;&#x306A;&#x85AC;&#x5264;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x706B;&#x82B1;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3057;&#x3001;&#x4E0D;&#x6574;&#x8108;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x6551;&#x52A9;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;S406L&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x767A;&#x75C7;&#x6A5F;&#x5E8F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;RYR2&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x5185;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x4E0D;&#x6574;&#x8108;&#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3057;&#x3001;CPVT&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C0;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30EC;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x591A;&#x5F62;&#x6027;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x983B;&#x62CD;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x7279;&#x6709;&#x306E;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x4E0D;&#x6574;&#x8108;RYR2&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x6551;&#x52A9;

&#xC2EC;&#xC7A5; ryanodine &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (RYR2) &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; sarcoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (SR)&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE7C;&#xC298; (Ca(2+))&#xC758; &#xC870;&#xC728; &#xB41C; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; cardiomyocyte &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. Catecholaminergic &#xB2E4;&#xD615;&#xC131; &#xC2EC; &#xC2E4; tachycardia (CPVT), &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xB9C8;&#xC74C;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC80A;&#xC740; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC720;&#xBC1C; &#xC2EC; &#xC2E4; &#xBD80;&#xC815;&#xB9E5;&#xC774; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC778; &#xC0C1;&#xC18D; &#xB41C; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; RYR2 &#xB610;&#xB294; calsequestrin&#xC758; &#xC5F4;&#xC131; &#xBCC0;&#xC774; arrhythmogenic depolarizations (&#xC544;&#xBE60;) &#xD6C4; &#xC9C0;&#xC5F0; &#xBC1C;&#xC0DD; SR&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0C8; &#xC120; &#xD655;&#xC7A5;&#xAE30; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC18C;&#xC124; RYR2 S406L &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB4E4;&#xACE0; CPVT &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (iPSCs)&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD658;&#xC790; iPSC &#xD30C;&#xC0DD; cardiomyocytes catecholaminergic &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB41C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xD655;&#xC7A5; Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; SR Ca(2+) &#xB0B4;&#xC6A9;, &#xC544;&#xBE60;&#xC640; &#xC81C;&#xC5B4; myocytes&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xBD80;&#xC815;&#xB9E5;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC790;&#xD654; &#xC728;&#xC744; &#xC774;&#xB04C;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xC640; &#xCD08;&#xB4F1;&#xD559;&#xAD50; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; (Ca(2+) &#xC2A4;&#xD30C;&#xD06C;)&#xC758; &#xAE30;&#xAC04; &#xC774;&#xC5C8;&#xB2E4;. Dantrolene, &#xC545;&#xC131; &#xACE0; &#xC5F4;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC77C;&#xBC18; Ca(2+) &#xBD88;&#xAF43; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xD558; &#xACE0; arrhythmogenic &#xD615; &#xAD6C;&#xC870;. &#xC774; S406L &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; pathomechanism&#xC73C;&#xB85C; RYR2 &#xCC44;&#xB110; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAC04; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC791;&#xC5C5; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBD80;&#xC815;&#xB9E5;&#xC758; pathogenesis &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; CPVT&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCE58;&#xB8CC;&#xBC95; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCCB4; &#xC678; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Dantrolene&#xB294; catecholaminergic &#xB2E4;&#xD615; &#xC2EC; &#xC2E4; &#xC2EC; &#xBC15; &#xAE09;&#xC9C4;&#xC758; &#xD658;&#xC790; &#xAD00;&#xB828; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; arrhythmogenic RYR2 &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xAD6C;&#xCD9C;.

La liberaci&#xF3;n coordinada de calcio (Ca (2 +)) desde el ret&#xED;culo sarcopl&#xE1;smico (SR) a trav&#xE9;s del receptor card&#xED;aco de la rianodina (RYR2) canales es esencial para la funci&#xF3;n de los cardiomiocitos. En la taquicardia ventricular polim&#xF3;rfica catecolamin&#xE9;rgica (TVPC), una enfermedad hereditaria caracterizada por arritmias ventriculares inducidas por el estr&#xE9;s en pacientes j&#xF3;venes con corazones estructuralmente normales, mutaciones autos&#xF3;micas dominantes en RYR2 o mutaciones recesivas en la derivaci&#xF3;n de calsecuestrina aberrante diast&#xF3;lica Ca (2 +) la liberaci&#xF3;n de la SR arritmog&#xE9;nica causando retrasado despu&#xE9;s de despolarizaciones (DADS). Aqu&#xED;, se presenta la generaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas madre pluripotentes inducidas (iPSCs) de un paciente que lleva una novela de TVPC RYR2 mutaci&#xF3;n S406L. En los pacientes derivados de IPSC cardiomiocitos, el estr&#xE9;s catecolamin&#xE9;rgica llevado a elevada diast&#xF3;lica Ca (2 +), una reducci&#xF3;n de las concentraciones de Ca 2 + (SR) de contenido y una mayor susceptibilidad a los pap&#xE1;s y las arritmias en comparaci&#xF3;n con el control de los miocitos. Esto se debi&#xF3; al aumento de la frecuencia y duraci&#xF3;n de la primaria Ca (2 +) eventos de liberaci&#xF3;n (Ca (2 +) chispas). El dantroleno, un f&#xE1;rmaco eficaz en la hipertermia maligna, restaurado normales de Ca (2 +) las propiedades de la chispa y rescat&#xF3; el fenotipo arritmog&#xE9;nica. Esto sugiere defectuosos interacciones entre dominios en el canal RYR2 como el mecanismo patog&#xE9;nico de la mutaci&#xF3;n S406L. Nuestro trabajo proporciona un nuevo modelo in vitro para estudiar la patogenia de las arritmias cardiacas humanas y desarrollar nuevas terapias para la TVPC.

El dantroleno Rescates arritmog&#xE9;nica RYR2 Defecto en un modelo de madre del paciente-espec&#xED;fica de la c&#xE9;lula de la taquicardia ventricular polim&#xF3;rfica catecolamin&#xE9;rgica

Sandra Ruppenthal

Institute for Molecular Cell Biology

Universty of Saarland

Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging