幹細胞ベースの遺伝子治療腫瘍モデルとしてBLTヒト化マウスを用いた

要約

ヒト化マウスを用いた腫瘍特異的T細胞の生成および特徴付けは、ここで説明されます。ヒト胸腺組織、遺伝子組み換えヒト造血幹細胞を免疫不全マウスに移植されています。抗腫瘍免疫応答の生体観察を可能に設計されたヒト免疫系の再構成でこの結果。

要約

マウスなどの小動物モデルは広範囲にヒトの疾患を研究するために、新しい治療介入を開発するために使用されている。これらの研究から得られた豊富な情報にもかかわらず、マウスの免疫ならびに、ヒト免疫不全ウイルス（HIV）感染症などのウイルス性疾患の種特異性のユニークな特性は、ヒト化マウスモデルの開発につながった。以前のモデルは、C、B 17のscid / scidマウスと呼ばれるヒト胎児胸腺および胎児肝臓の移植の使用を必要となた/ LIV（SCID-huの^）1、2またはヒト末梢血白血球の養子移植不全（SCID-huPBL ^2）3。両方のモデルは、主にHIV感染の研究のために利用された。

これらのモデルの両方の主な制限の一つは、HIV感染症を研究するための、より生理学的に適切なモデルを作るために周囲の人間の免疫細胞の安定な再構成の欠如だった。この目的を達成するために、BLTハムanizedマウスモデルが開発されました。 BLTは骨髄/肝臓/胸腺の略です。このモデルでは、6から8週齢NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl / SzJ（NSG）は、免疫不全マウスにのみ第二のヒト造血幹細胞移植⁴が続くことに、SCID-huマウスモデルのように、なた/ LIVインプラントを受ける。このシステムの利点は、周囲の人間の免疫システムの完全な再構成である。このモデルは、HIV感染とレイテンシ^5-8を研究するために使用されています。

私達は私達が自家hHSC ^7,9形質導入の注入が続くなた/ LIVインプラントを構築するために遺伝子改変されたヒト造血幹細胞（hHSC）を使用したこのモデルの修正版を作成した。このアプローチでは、遺伝的に修飾された系統の生成をもたらす。さらに重要なことは、我々は、メラノーマ特異的T細胞受容体を発現している機能的な細胞傷害性T細胞（CTL）を生成する可能性を調べるために、このシステムを適応。このモデルを用いて、我々は、腫瘍退縮（9）を決定するために、ライブの陽電子放射断層撮影（PET）イメージングを活用したトランスジェニックCTLの機能を評価することができました。

このプロトコルの目的は、これらのトランスジェニックマウスを作製し、ライブのPETイメージングを用いたin vivoでの有効性の評価のプロセスを記述することである。我々はヒト組織およびレンチウイルスベクターを使用するので、注意点としては、、私たちの施設は特別な予防措置（BSL2 +）のバイオセーフティーレベル2（BSL2）のCDC、NIHのガイドラインに準拠しています。また、NSGマウスは厳しくこうして免疫不全、彼らの住宅とメンテナンスが最も高い衛生基準（に準拠している必要がありhttp://jaxmice.jax.org/research/immunology/005557-housing.html ）。

プロトコル

BLTマウスのAの生成

胎児組織及びCD34ヒト造血幹細胞の調製（1）処理、（2）ヒト組織の移植、および（3）二次移植：BLTマウスの発生が3（3）の部分に分かれています。すべてのプロトコルのために、私たちは試薬情報と表1を提供してきました。

1。 CD34ヒト造血幹細胞の組織の処理と分離

さまざまな臓器調達機関からの氷の上で一晩出荷新鮮胎児組織または組織が使用することができます。メディアを取り巻くミリリットルあたり血液寒天培地上千細菌コロニーの生産によって証明されるように、しばしば胎児組織は、無菌ではありません。我々は日常的に滅菌PBS 40mlに二回ティッシュを洗ってください。これは、すべての細菌を除去するわけではありませんが、それが成功した移植シリーズや中の細菌になるレシピエントマウスのほとんどが負ける結果の違いを作ることができクション。さらなる組織を消毒するために追加のステップとして、我々の文化の抗生物質の存在下で細胞懸濁液。

胎児胸腺組織の1.1処理

1. 漂白剤の入ったビーカーに媒体を流し出すと漂白剤にスライドから組織を防ぐために、メスを用いて胸腺を洗う。 PBSでチューブを埋める。キャップと胸腺を洗うために数回転倒。漂白剤に上清をデカント。繰り返します。
2. 2メスで1.5〜2mmの小片に60 mmディッシュとせん断でRPMI + 10％ウシ胎児血清8mlの胸腺組織を置きます。メスでせん断する引き裂くと組織ビットの損傷を最小限に抑えることができます。損傷を受けた組織は、腫れスティッキー、およびインプラント針に描画することが困難となる傾向にある。得られたビット数は、移植したマウスの最初の上限です。
3. T25フラスコに25mlのピペット（組織の損傷を最小限に抑えるため）で懸ビットを転送する。一夜フラスコや文化にpiptazo（ゾシン）の70μlを添加し、 37℃、5％CO _2で 。これはかなり汚染細菌を減らすことができます。あなたは組織型または他の任意の表現型アッセイを行いたい場合は、セルの1ミリリットルを取り出します。

胎児の肝臓組織の1.2処理

1. ステップ1.1.1のように肝臓を洗ってください。
2. 100ミリメートルペトリ皿にIscove培地をデカントすべての10ミリリットルを追加します。
3. 2メスで、小さい（〜3mm）を粉々に肝臓をサイコロ。あなたが白の結合組織に遭遇した場合は、そこから肝臓をこすりと漂白剤でそれを捨てる。
4. 16ゲージの鈍針3〜4回、50 mlチューブに移す装備12mlのシリンジに、それを吸引することにより、組織をホモジナイズする。
5. 次のように組織消化のための酵素を準備します。コラゲナーゼタイプIV（1 mg / ml）を、ヒアルロニダーゼ（1 mg / ml）を、DNアーゼI（2単位/：イスコフ50mlチューブで10mlに、各200μlを加えるミリリットル）。
6. 12mlのシリンジに酵素を描画し、0.22μフィルターにフィット。 enzyをフィルタリング細胞懸濁液に直接私/媒体。
7. キャップとパラフィルムで細胞を密封します。 90分間37℃で回転する。
8. 100μセルストレーナーで50 mlチューブを設置した。このストレーナーを通してピペットセルダイジェストを。
9. 50mlにボリュームを上げ細胞にPBSを追加します。 25ミリリットルの2管にこれを分割します。
10. フィコール10mlで細胞を下敷き。ブレーキなしの20分間2400 rpmでスピン。
11. インターフェイスは厚くなければならない。 5 mlのピ​​ペットと別のチューブに移すとそれを吸い出す。あなたは、インタフェースの2つのチューブを持っている必要があります。 10分間1200 rpmでそれぞれ、スピンにPBS 50 mlを加える。
12. 1管にペレットを組み合わせて、PBSで2％FCSを含むとさらに3回洗浄する。
13. 最後にトリパンブルーを用いてRPMI +10％FCSとカウント細胞の50ml中に懸濁します。組織の規模に応じて、あなたは10 ^{8〜10 9}総肝細胞に取得することができます。
14. T150フラスコに細胞を移し、RPMI +10％FCS及び0.8メートルの30ミリリットルを追加piptazo lの。
15. 37で1〜1.5時間インキュベート℃で接着細胞を除去すること。

1.3ソートとCD34造血幹細胞の形質導入

1. ステップ1.2.15における細胞の付着した後、バラセルを押しのける分間静かに前後にフラスコを攪拌。線維芽細胞と表面にこのような縮退がたくさんあるでしょう。
2. 1から20まで希釈を用いて再びカウントした細胞の総数を記録します。後染色のミリリットル数十分の一を保存します。あなたの最初の細胞数（ステップ1.2.13）より約30％少ない細胞を持っている必要があります。
3. スピンダウンし、MACSバッファー40mlで2回洗浄する。
4. CD34陽性細胞は、ミルテニーバイオテクのCD34ダイレクトキットを使用してソートされます。私たちは、正確に同じ会社から提供されたLSの列を使用して、製造業者のプロトコールに従ってください。
5. 回収された細胞は、5mlになります。総細胞数をカウントし算出。 CD34 +細胞の収率はあなたのあなたの総細胞数の3-5％であるべきである。これは、目によって異なります胎児肝臓の電子化時代。若い胎児の肝臓は、CD34 +細胞のより高い収率を与える傾向がある。
6. ^{1×10 6}で細胞数を割ります。これは、移植したマウスの2番目の上限を与える。
7. CD34-フラクション（フロースルーと洗浄）をカウントし、リザーブ6マウスあたり×10 ^6が移植される。 RPMI + 10％ウシ胎児血清を50〜80mlの一晩培養これらの細胞+ 1％piptazo。
8. あなたのレンチウイルスベクターを用いた一夜CD34 +細胞を形質導入する。我々は正確にメーカーの指示に従って、タカラレトロネクチンを使用しています。
9. 次の日、収穫CD34-細胞は、トランスフェクトされたCD34 +細胞とカウント。
10. 半分にCD34 +細胞を分割：パートとパートB
11. パートのCD34陽性形質細胞をスピンダウンし、凍結培地の4〜6ミリリットル（0.22μ無菌RPMI +10％FCS +10％DMSOは、フィルタリングされた）で一時停止します。 "huFetalCD34"、バイアル中の細胞数、日付、自分のイニシャルと凍結バイアルラベルに1mlアリコートを置く。
12. 各マウスの0.5×10 ⁶パートBを混ぜるCD34 +ペレット、滅菌スクリューキャップマイクロチューブに細胞や4.5x10 ⁶ CD34-細胞を形質導入し、氷上で保存する。また、氷上でマトリゲルのチューブ（BD Biosciences）を解凍します。 （2.10に進みます）が使用されるまで、すべてのこれらのチューブは氷上で保存する必要があります。

2。組織移植

このステップの目標は、NSGのマウスの腎臓被膜下にヒト胎児胸腺/肝臓オルガノイドを移植することです。ヒト造血幹細胞が異なるT細胞と他のリンパ系統への分化のためのサイトとしてヒト胸腺ではなくマウスを使用するので、これにオルガノイドは良いヒトT細胞選択と成熟プロセスのプロセスを模倣しています。移植プロセスにおけるCD34-細胞の使用は、再生成胎児肝ストロマとインプラントの良い移植と成長を可能にすることである。使用NSGマウスの年齢は6〜8週齢である。

1. SU薬の準備rgery：
   1. イソフルラン：2インチガーゼパッドをロールアップして15mlのスクリューキャップの遠心管にそれを詰め込む。ボトルから直接イソフルラン約1mlに注ぐ。
   2. ケタミン/ zylazine：注射用生理食塩水20mlのバイアルにケタミンの0.52ミリリットル（Ketaset）（100 mg / ml）とキシラジンの0.52ミリリットル（Anased）（100 mg / ml）を追加します。最古の期限切れコンポーネントの有効期限が記載されたラベルと、必要になるまで-20℃で凍結させておく。
   3. カルプロフェン（Rimadyl）。ただ外科手術の前にこれを希釈します。 1mlシリンジと25G針でバイアルから0.1または0.2 mlを引き出すことにより1:100に希釈します。注射用生理食塩水の10または20 ml中に注入します。ラベルと日付。一日だけのために冷蔵庫に保管してください。 25G針を3ミリリットル注射器にロードします。
2. 手術のためにテーブルを設定します。無菌の青パッド、各外科医のための滅菌タオルでそれをカバーしています。 4 "ハサミ、湾曲したブラント鉗子、必要があります：各外科医は、滅菌機器の彼らの箱から取得LE-鼻鉗子、止血剤、16G鈍くトロカール、および創傷クリップアプリケーター。加えて、彼らは湾曲した針VICRYL縫合を必要とし、イソプロパノールのスタックがパケットのPBSを35ミリメートルペトリ皿、およびPBSで満たさ1mlシリンジを拭いてください。
3. テーブルベタジンの2cmと2綿棒でガラスコプリンジャーの真ん中に設定し​​ます。 60ミリメートルペトリ皿に胸腺ビットを注ぐ。
4. 麻酔は別のテーブルの上または滅菌青いパッドで覆われたフード内で行われます。二つの小さなラックとマウスを保持するために、ビーカーを持つ電子のバランスを設定します。カルプロフェン3mlの注射器を保持するために、ケタミン/キシラジンおよび他でロード0.5ミリリットルX 28Gのインスリン注射器を保持するために1つのラックを使用しています。また剃ら毛皮を保持するために近くにバイオハザード廃棄容器を移動する。
5. ケタミン/キシラジンを15μl/ gの用量で平均重量と負荷の注射器を得るためにケージ内のすべてのマウス（6-8週古い）を計量する。ケージ内のすべてのマウスを注入します。
6. マウスの動作が遅くなった後、彼らのLEFを剃る腰から背中の中心と40号ブレードとオスタークリッパーと腹の間の肩にT側。自分の体重を記録し、ナンバリングのために彼らの耳をパンチ。
7. 肩越しに皮下に0.3ミリリットルカルプロフェンを注入します。
8. 足を圧迫することにより、マウスの麻酔レベルをチェックします。マウスflinches場合、約12秒間チューブからイソフルランを投与する。その後、再び足のスクイズを試みる。足の反射が消えるまで、イソフルランのショートショットを与え続ける。左を向いた右側にマウスを置きます。
9. 先端提出ラウンドで16ゲージがんインプラント針は、組織を挿入するために使用されます。トロカールをPBSの皿の中で数回洗浄して下さい。ちょうど先端内側ロッドとは、水平保持。ペンチピンセットで胸腺の部分を追加し、それをインチ吸う
10. ヘルパーはエッペンドルフ容積ピペットで細胞の1管（ステップ1.3.12）に冷たいマトリゲル5μlを追加し、穏やかに撹拌することにより混合する。外科医HOLヘルパーはトロカールにマトリゲルミックスをピペットとしてDSトロカールは、水平方向にゆっくりと戻ってロッドを引っ張る。室温で混合ゲル。
11. ベタジンと綿棒は素肌。その後拭くイソプロパノールでこれを拭き取ってください。繰り返します。
12. 皮膚の下に脾臓を見つけます。それは暗い場所です。マウスの腎臓を剃毛し、皮膚を通して見ることができ、脾臓、背側に約5mmに位置しています。
13. 鈍鉗子でこのスポット上の皮膚を拾い、約15mm長い脾臓にカット並列を作る。下腹膜筋層で同様のカットを行います。男性では、腎臓が直接見えなければならない、あなたは、単にそれを飛び出して腹部を圧迫する必要があります。雌では、止血剤と卵巣をピックアップし、腎臓をドラッグする必要があります。これは、体の外に腎臓を保持するのを助けるかもしれません。男性では、腎臓が露出保つためにあなたの左手で腹部にいくつかの圧力を保持する必要があります。
14. posterioに小さな穴をむしる腎カプセルのrは終わり。それは少し出血することがあります。
15. トロカールのオリフィスが完全腎被膜で覆われるまで、この穴にと腎臓に沿ってトロカールをスライドさせます。その後、右手の小指を使って、組織を注入します。
16. クローズド止血で軽く奥に腎臓を押してください。ダブルノウハウで縛ら腹膜に1ステッチを入れてください。財布のように皮膚をつまんで2創傷クリップを入れます。
17. それぞれの眼にPBSのドロップを入れて、ケージのベッドに横向きにマウスを置く。すべてのマウスは、それらを離れる前に、お腹の上に敷設に戻っていることを確認してください。
18. 翌日、各マウスにカルプロフェンの別の打撃を与える。

3。二次移植

BLTマウスの世代におけるこのステップの目的は、ヒト造血幹細胞を用いて膨れっ面骨髄を移植することです。手順（2）から移植されたインプラントは、番目の完全な再構成をサポートするために十分ではありませんこれらのマウスにおけるeヒト免疫系。二次移植の間に、我々はサブ致死こうしてヒトCD34 +細胞の移植のための "空間"を発生させるマウス骨髄細胞を枯渇させるためにマウスを照射します。

1. 4〜6週間後に2.7 Gyをマウスに照射する。マウスは、パートと同じ日に、CD34 +形質細胞を注入されています。時間枠は、ステップ2に移植なた/ LIVインプラントの確立と成長に基づいています。一般的に、この期間中にインプラントは、私たちは次のステップに進めることができるように大幅に成長してきました。
2. パートのCD34陽性形質導入細胞を解凍し、洗って5×10 ^6個 / mlの濃度になるように培地にサスペンド。
3. マウスの1ケージ用細胞（マウスあたり0.1ミリリットル当たり10 ^{5〜5×10 5}細胞）（各ケージには5匹の最大値を含んでいる）の0.1ミリリットルを持つ負荷0.5ミリリットルX 28Gのインスリン注射器とは反対側のラックの上に横たわっていた。
4. それをscruffingとその保持することによってイソフルラン管が付いているマウスを麻酔約20秒間のチューブで鼻。時間を追跡するためにカウントされます。
5. 次に、右側にそれに直面し、左手の親指と人差し指でタイトな首周りの皮膚を引っ張る。その右目が出て膨らんように、サードファインダーでその顎の下に押します。マウスの頭の長軸に平行に注射器を持ったまま、目の後ろに針を滑り込ませると止まるまで静かにスライドさせます。それ以上押したが、​​約2秒以上の負荷を注入しないでください。
6. 2〜3ヶ月後、マウスretroorbitally EDTAコーティングされたガラスピペットを用いて採血する。あなただけのマウス当たり月額血液200μlの最大値を取ることができます。血液の50〜100μlのFACS分析のために十分であるべきである。代替出血戦略は顔面静脈の出血と尾静脈の出血があります。後者により、複数のアッセイのための十分ではないかもしれない血の非常に少量を与えるだろう。
7. 血液サンプルは、再構成を評価する人間のリンパ球マーカーCD45の発現について染色されています。 Bloodサンプルは、1ミリリットルの赤血球溶解バッファー（160 mMののNH _{4 Cl、100mM}の_{KHCO3、0.01mM}のEDTA）に添加し、室温で5分間インキュベートする。
8. 、溶解緩衝液で細胞を洗う1200 rpmで5分間、必要に応じて繰り返します。
9. 3.8のように、細胞を遠心分離し、3％ウシ胎児血清（FACS-PBS）を添加PBSで洗浄する。
10. 上清を除去し、100μlのFACS-PBS中に再懸濁ペレット。
11. ヒトリンパ球再構成を評価するために、抗体を追加します。我々は通常、B細胞およびNK細胞のCD56については、以下のCD45（ヒトリンパ球マーカー）、CD8、CD4、マクロファージや単球のCD14およびCD16、CD19が含まれています。
12. 30分間、4℃でインキュベートする。
13. ステップ3.9のように洗浄し、FACS分析のために2％パラホルムアルデヒドで細胞を再懸濁する。
14. マウスが再構成されている場合、我々は腫瘍注射を続行します。ヒトリンパ球の再構成レベルは1％未満からの総血液​​細胞の40％に、異なります。 lymphocのレベルおよびタイプyte系統は、1つは、健康なヒトの血液ドナーから期待するものに匹敵する。しかし、非T細胞系列の数の変動を期待しています。数字は12週間の期間内で受け入れられない場合は、ステップ3.1から二次移植手順を繰り返すことができます。
15. 腫瘍細胞株は、メーカーの研究室または推奨事項に従って培養する。細胞が1:1の比率（50μlのcells/50μlのマトリゲル）で、収穫洗浄し、マトリゲルに再懸濁する。サンプルは常に氷上に維持されています。
16. マウスを麻酔し、注射の領域で剃られています。面積はイソプロパノールパッドを使用して滅菌する。プリでヘルパーをロードし、細胞懸濁液は、23G 1ミリリットル注射器を冷却した。腫瘍細胞を皮下注射する。抗生物質軟膏と注射部位を治療する。腫瘍が確立し、4週間で成長して開始する必要があります。

生体陽電子放射断層撮影法（PET）】B.

私たちの研究のために、我々は試験伊根グルコース取り込み^（[18 F]フルオロデオキシグルコース^（[18 F] FDG）このようにしてマウスは前イメージング。microPETを/ CTスキャン〜4-6 hrを絶食させるmicroPETをInveonスキャナ（シーメンス前臨床ソリューション）とMicroCATII CTスキャナを（使用して行われシーメンスPreclinicalSolutions）。画像解析がOsiriXは（Pixmeo、スイス）ソフトウェアを使用して行われます。目標は腫瘍の代謝活性を測定するために、最終的には物理的に腫瘍の退縮を測定することに代わる手段としてPETイメージングを使用することです。 図2に示すように、我々発生している物理的な外観と大きさに基づいて腫瘍が標的が、ライブのPETイメージングは​​広範な組織壊死を明らかにされていません。この方法論は、腫瘍退縮のより高感度かつ正確な指標として機能することができます。

1. 麻酔用1室（2％イソフルラン）マウス、PETスキャン（ "室を待っている"）の前にFDGの60分の取り込みとして1室を指定します。衆参両院で青いパッドを配置。
2. 動物はanesthあるので長期間にわたってetized、それらは電子レンジで温め、熱パッド上にケージを置いて水を満たし手袋を使用することにより30℃に保温する必要があります。
3. この室で用イソフルラン流れを切ります。イソフルランは、チャンバー内に任意のマウスを配置する前に、約5〜10分間麻酔室を埋めるために許可します。ふたがロックされていて、イソフルランリークがないようにしっかりと閉じていることを確認します。
4. 麻酔チャンバー内に最初にマウスを置き、しっかりと蓋をロックします。 5〜10分を許可したり、マウスが無意識になるまで。
5. ^[18 F] FDG（80μCiの）付きのマウスを、麻酔室からマウスを外し、ラベルをマウスの尾（ケージごとに異なる色）と腹腔内に注入します。マウスを注入した時間をメモしておいてください。マウスは、10分にはPETスキャン（60分の合計のためのPETスキャン前に^[18 F] FDGの取り込み）用に設定することが可能になり、再びこの時点から50分麻酔になります。
6. PETスキャンの前に1時間^、[18 F] FDGの取り込みを可能にする、待機室に注入されたマウスを置きます。蓋をロックしません。空気の流れを可能にするために緩い蓋のままにしておきます。
7. 直ちに麻酔チャンバー内にFDGの注射のために次のマウスを置きます。 PETスキャンのプロセスは10分であるため、その後のマウスの注射は、10分間隔を空けなければならない。 1マウスがスキャンされた直後に、スキャンする次のマウスの場合は60分のFDG取り込みは別に正確に10分で準備ができています。
8. 手順7-9で述べたようにマウスを麻酔し、注入を続行します。
9. （まだ麻酔とマウスを注入し続けながら）最初のマウス注入時点から50分後、再び麻酔室に最初に注入されたマウスを置きます。
10. 酸素およびイソフルラン線にマウスのベッドを接続して、ベッドの上でイソフルラン流れを回す。ベッドの上で青いパッドを配置。
11. 腕を伸ばし、ベッドの上にPETスキャンの準備ができてマウスを置いて、脚とテープでこの位置を保持する。目の上に潤滑剤を置きます。動物の位置決めは、イメージングの品質に影響を与えることがあるので、このステップは最も重要です。
12. イソフルランと酸素ラインを切断し、かつ迅速にPETスキャンマシン上でベッドをマウントします。イソフルランと酸素の行を置く。イソフルラン流れはPETスキャンマシンのためにあることを確認します。 PETスキャンケーブルを接続して、スキャンを開始します。
13. PETスキャンが完了したら、次にCTスキャナに動物を移動します。このスキャンは、そのそれぞれのケージに動物を移動するには、次の。

結果

移植のプロセスのフローチャートを図1Aに示されています。なた/ LIVインプラントの写真を図1Bに示されている。胸腺組織は、通常、開発、ヒトCD4とCD8 T細胞の生理的な分布を持っています。再構成後、動物は、CD4、CD8 T細胞などの免疫細胞系譜の正規分布とヒトの免疫システムを運ぶ。

腫瘍の大きさや生きている組織との間の不一致は、 図...

ディスカッション

生体 PETイメージングでと相まって修正BLTヒト化マウスモデルは、慢性的なヒトの疾患を研究するための強力なツールです。このシステムは、BLTのマウスモデルとHIV研究のための限られた範囲を超えて進歩それを取る。また、それは彼らが臨床の現場に到達する前に、我々は様々な遺伝子治療プロトコールならびに診断技術を調べることができる素晴らしいシステムです。マウ?...

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
試薬の名称	会社	カタログ番号	コメント（オプション）
PBS	インビトロジェン	10010049
RPMI 1640		A1049101
イスコフ		12440061
ウシ胎仔血清		16000085
コラゲナーゼタイプIV	シグマアルドリッチ	C5138
ヒアルロニダーゼ		H3506
DNアーゼI	ロシュ·ダイアグノスティックス	10104159001
Piptazo（ゾシン）	ファイザー		ピペラシリン/タゾバクタムの組み合わせ
フィコール（のFicoll-Paqueプラス）	GEヘルスケア·ライフサイエンス	17-1440-02
MACSバッファー	ミルテニーバイオテク	コメントを参照してください	MACSバッファー：0.5％ウシ胎児血清および2 mMクエン酸デキストロース式-添加PBS
CD34マイクロビーズキット		130-046-702
LSの列		130-042-401
レトロネクチン	タカラ	T100A
マトリゲル	BD Biosciences社	354263
イソフルオラン	バクスター		http://www.baxter.com/healthcare_professionals/products/forane.html
カルプロフェン（Rimadyl）	ファイザーアニマルヘルス		https://www.rimadyl.com/default.aspx