マウス肺の病理生理学を研究するための非侵襲的気管内挿管

要約

ヒトにおける肺疾患の状態を模倣するモデルの使用は、特定の疾患の病態および/または病因を研究するため、および治療的介入を開発するために重要である。ここで直接マウス肺への外因性材料を提供することができ、非侵襲的気管内挿管法が提示されている。

要約

ヒトにおける肺疾患の状態を模倣するモデルの使用は、特定の疾患の病態および/または病因を研究するため、および治療的介入を開発するために重要である。一緒に遺伝情報の膨大な量のノックアウトおよびトランスジェニック誘導体の増加可用性と、マウスは肺疾患の病態生理学の基礎をなす分子メカニズムを研究するための最良のモデルのいずれかを提供する。吸入、鼻腔内注入、気管内注入、および気管内挿管は、マウスの肺に興味のある資料を管理するための多くの研究者によって、最も広く使用されている技術である。研究の目的に応じて、各技術に対する長所と短所があります。ここで直接マウス肺への外因性材料を提供することができ、非侵襲的気管内挿管法が提示されている。この技術は、肺線維症を研究するためのモデルとして、マウスの肺にブレオマイシンを投与するために適用した。</ pの>

概要

肺は、多くの破壊的な病気は、一般的に診断されている器官である。これらの中でも、肺癌は、男性および女性の両方において二番目に診断される癌、および癌死亡の最も一般的な原因である。また、肺気腫や慢性気管支炎として知られている慢性閉塞性肺疾患は、非常に深刻な病気、米国の死因の第3位である。 2011年に、それは2590万アメリカ人が18歳未満の710万子どもを含む、喘息を持っていたと推定された。喘息は、15（米国肺協会、歳未満の子供たちの間で入院の3番目の主要な原因であるhttp://www.lung.org ）。これらの壊滅的な疾患やその基礎となるメカニズムの病態生理および/または病因を研究するために、正確なモデルを使用すると、肺への関心のある様々な材料の簡便かつ非侵襲的投与とともに重要です。マウスはに最高のモデルのいずれかを提供なぜならノックアウトおよびトランスジェニックマウスの増加可用性と利用可能な遺伝情報の膨大な量の肺疾患の病態生理学の基礎をなす分子メカニズムを研究。

様々な方法は、吸入、鼻腔内注入、気管内注入、および気管内挿管^1-4を含むマウス肺への関心の資料を提供するために様々な設定で多くの研究者によって使用されている。それは実行するためにはかなり難しいと考えられているので、後者の方法は、日常的に使用されていない。ここに記載さ気管内挿管は、遺伝子発現パターン、病理学および/ ​​または肺⁵の生理学上の納入材料の効果を研究するために、マウスの肺に興味のある材料を提供する、非侵襲的、シンプルかつ迅速な方法である。この技術は、肺全体に外因性物質の送達を保証する、任意の生存手術を伴わないのでlikelうYは任意の制度上の動物のケアと使用委員会の承認を得なければ。

プロトコル

次のプロトコルは、マウスの肺に興味のある材料を提供する、非侵襲的、シンプルかつ迅速な方法について説明します。この手順は、国立がん研究所動物実験委員会によって承認された。

1。麻酔

1. まず、ケタミンおよびキシラジン（それぞれ100 mg / kg体重〜10 mg / kg体重）の混合物を使用して、マウスを麻酔。これはACUCお勧め麻酔および用量である。この量で、マウスは、少なくとも約20分間意識不明である。
2. 麻酔中、目の乾燥を防ぐために、マウスの目に獣医軟膏を適用します。
3. 数分後、意識を確認するために、マウスの足を挟ま。一度意識不明が確認され、約60°の角度をなす挿管スタンドにマウスを置き、スタンドの上部にある小さなゴムバンドの上の上顎をフックして所定の位置に保持する。

2。気管内挿管

1. 静かに、Q-ティップを使用して一方の側にマウスの舌を引っ込める。
2. BioLITE挿管照明システムを使用する際に喉頭を光ファイバーライトガイドを用いて可視化されるまで、慎重に挿管システムを挿入します。
3. 喉頭蓋や披裂軟骨が可視化されるとカテーテルの適切な長さが挿入されるまで、喉頭蓋の上および披裂軟骨間のファイバを挿入し、前進。

注：挿入するカテーテルの適切な長さを得るためには、最初に事前に同様のサイズの実践マウス（ 図1）を用いて口や気管支の分岐点との間の長さを測定する。長さは、主にマウスのサイズによって異なります。カテーテルの挿入は、分岐点（体重〜25グラムとマウス用の約1.5 CM）の上に停止する必要があります。これは挿管された物質は、すべての葉に行くことが保証されます。少なくとも50の練習MICeは（熟練が挿管の成功率は95％以上であることを意味する）技術で習熟する挿管を行う人に必要とされ得る。

4. カテーテルが挿入されると、すぐに動物が普通に呼吸できるようにするために、カテーテルから光ファイバーライトガイドを取り外します。挿管照明システムを使用しない場合、直接に記載されるようにカテーテルを挿入する。
5. カテーテルへの関心のある物質を含有する溶液を加える。溶液を添加直後の肺に吸入されていることを確認してください。 〜25gのマウス体重のための50マイクロリットルを、日常的に使用される。

3。動物の回復

1. とすぐに溶液が肺に吸い込まれるように、スタンドからマウスをダウンさせると、元のケージに戻します。
2. それが動き始めるまで、マウスを観察します。
3. 一度マウスが良好な状態であることが確認でき、ラックにケージを戻す。

結果

最初に、緑色の染色溶液を練習するためのマウスに挿管するために使用した。肺は、色が肺（ 図2）で配布されたかを均等に検討すること挿管直後に切除した。この技術は、C57BL / 6マウスを用いたブレオマイシン誘発肺線維症を研究するために適用した。マウスを気管内に制御のようブレオマイシンまたは生理食塩水の1.2 U / kgの挿管し、3週間後に剖検したときに、マウスは組織?...

ディスカッション

ここで説明する気管内挿管は、均等に、マウスの肺に興味のある材料を提供する、シンプルでありながら優れた非侵襲的な方法です。この方法は、効果および/または生理学および/または肺の病理に投与物質の役割の研究を可能にする。投与物質は、このような生体異物化学/医薬品、発がん性物質、汚染物質、アレルゲン、または^6月10日 、様々なヒト疾患を研究するためのモデルを?...

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
KetaVed	Vedco		Ketamine
AnaSed Injection 20 mg	LLOYD		Xylazine
BioLite Stand	Braintree Scientific	RIS100	For mice
BioLite Intubation Illumination System	Braintree Scientific	BIO MI-KIT	For mice
22 G, 1 inch i.v. catheter	Terumo	SR-OX2225CA	For mice below 30 g. Catheter is used only for the case where the Intubation Illumination System is not used.
20 G, 1 inch i.v. catheter	Terumo	SR-OX2025CA	For mice over 30 g. Catheter is used only for the case where the Intubation Illumination System is not used.