海馬および前頭前野における樹状突起脊椎の可視化のための迅速なゴルジ染色

Maya Frankfurt; Rachel Bowman

doi:10.3791/63404

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Method Article

海馬および前頭前野における樹状突起脊椎の可視化のための迅速なゴルジ染色

DOI:

10.3791/63404

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December 3rd, 2021

Maya Frankfurt¹^,², Rachel Bowman²

¹Department of Science Education, Donald and Barbara Zucker School of Medicine at Hofstra/Northwell, ²Department of Psychology, Sacred Heart University

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要約

プロトコルは、ラットの海馬および内側前頭前野のニューロンを染色するための、神経系の任意の部分に適合させることができる迅速ゴルジ法の改変を記載している。

要約

ゴルジ体含浸は、軽微な適応を伴うゴルジ染色キットを使用して、ラット海馬および内側前頭前野の樹状突起棘を含浸させるために使用される。この技術は、予め混合された化学物質がより安全に使用でき、ニューロンが一貫して良好に含浸され、バックグラウンド破片がはるかに少なく、所与の領域について、実験間の脊椎密度の偏差が非常に小さいため、ゴルジ体含浸の以前の方法よりも顕著な改善である。さらに、脳はある時点以降に蓄積され、さらなる処理まで凍結し続けることができます。この方法を用いて、任意の脳の関心領域を研究することができる。一度染色され、カバーが滑ると、樹状突起脊椎密度は、樹状突起の長さに対する棘の数を数えることによって決定され、樹状突起10μmあたりの背骨密度として表される。

概要

ニューロンを標識するために重クロム酸カリウムと硝酸銀を使用する方法は、Camillo Golgi ^1,2によって最初に記載され、続いてサンティアゴ・ラモン・イ・カハールによってニューロンおよびグリアのサブタイプを区別する膨大な量の仕事を生み出すために使用された。最近出版された彼のイラスト入りの本が発売されました³.100年以上前に発表されたラモン・イ・カハールの研究に続いて、ゴルジの含浸はほとんど使用されなかった。ゴルジ体含浸は、光学顕微鏡でニューロンを3次元的に可視化することを可能にする面倒なプロセスです。ゴルジ法には、方法をより簡単にし、染色をより一貫性のあるものにするために、長年にわたって多数の修正が加えられてきました⁴。1984年、GabbottとSomogyi⁵は、より迅速な処理を可能にする単一セクションのゴルジ含浸手順を説明しました。このゴルジ体含浸法では、4%パラホルムアルデヒドと1.5%ピクリン酸による灌流、固定後、3%重クロム酸カリウムの浴にビブラトーム切片が必要です。切片はスライドガラスに取り付けられ、カバースリップの四隅は硝酸銀に浸すと拡散が緩やかになるように接着されています。その後、カバースリップがはじけ、セクションが脱水され、最終的にカバーがマウン....