野外でミツバチを閉じ込めて安全に扱うための迅速な方法

要約

野外で採集したミツバチを安全に取り扱うための試験方法を実演します。この方法により、迅速な操作、同定、遺伝的サンプリング、およびサンプリング中に収集された花粉を介した植物と昆虫の相互作用の確認が可能になります。このアプローチは、簡単に適応でき、希少な昆虫群を研究するための費用対効果の高い非致死的な手段を提供します。

要約

多くの昆虫花粉媒介者、特に専門的または希少な分類群の基本的な生物学と生態学の理解を深めることは、多くの研究者にとって優先事項です。そのため、情報を得たり、追加の研究を支援したりするために、野外で収集された生物を無害な方法で一時的に閉じ込める必要があることがよくあります。このプロトコルは、生物の同定、花粉除去、マーキング、および/または遺伝子分析のための非致死性組織サンプルの収集など、特定のプロジェクトニーズに合わせて簡単に調整できる、保全上の懸念のあるミツバチを安全に取り扱うための徹底的にテストされた、迅速で安価なフィールド方法を表しています。この方法論は、特定のシナリオが発生したときに研究者のツールボックスで使用できる追加のオプションとして機能します。この方法論は、他の昆虫種での使用だけでなく、さまざまな経験やスキルレベルの個人が使用できるようにすることも期待されています。これは、専門のミツバチを研究している研究者や、宿主固有の研究を行っている研究者にとって非常に価値があります。このプロトコルによって可能になったデータ収集は、研究者が多くの花粉媒介者種、植物と花粉媒介者のネットワーク構造、および花粉媒介者の保全と管理イニシアチブの重要なデータギャップに対処するのに非常に役立ちます。

概要

野生のミツバチやその他の花粉媒介者の個体数の減少とそれに伴う花粉媒介者コミュニティの変化を支持する証拠が増えています1,2,3,4。継続的な損失は、生物多様性の維持、生態系機能、および農業生産に不可欠な昆虫の受粉のサービスそのものを脅かします⁵。さらに、多くの野生のミツバチ、特に希少種にとって、適切な管理と保全活動を妨げる可能性のある重大な知識のギャップが存在します^6,7。

これらのデータの欠陥に対処するために、研究者は、昆虫の花粉媒介者、関連する生息地の使用、およびそれらの花の好みを研究するためのさまざまな方法を開発しました。パントラップ、ブルーベーントラップ、マレーズトラップ、エマージェンストラップ、およびハンドネットによる直接収集が一般的に利用されていますが、これらの方法の多くは重大な欠点を持っています8,9,10,11。花粉媒介者を特定するために一般的に使用される方法は、標本を実験室環境(顕微鏡など)で特定する必要があるかどうかに関係なく、生物の死亡率につながる可能性があります。死亡率は、多くの昆虫研究にとって正当化され、必要である可能性があります。しかし、絶滅の危機に瀕している昆虫、希少な昆虫、または研究が進んでいない昆虫を扱う場合、個体群の状況が限られているか不確実な場合、研究者は生物の死亡率、負傷、またはストレスを軽減して、これらの昆虫の個体群に悪影響を与える可能性を減らす必要があります。したがって、リスクのある種や、主要な特徴によって簡単に特定できる種を扱う場合は、可能であれば破壊力の低いサンプリングアプローチを取る必要があります。

ミツバチからの遺伝物質の収集のために提案されている非致死的な方法には、糞便の収集、滲出物¹²、および翼端¹³が含まれる。ただし、野外で収集されたミツバチにこれらの方法を使用することは、必要な時間や翼への影響の可能性、飛行やその他の行動に悪影響を与える可能性があるため、維持できない場合があります。部分的なアンテナ除去は、サンプリングされたユーグロシンミツバチの生存率を損なわないことが示されています¹⁴。同様に、中脚の足根の末端部分のサンプリングは、 Bombus terrestris 労働者の生存率を有意に減少させなかった¹⁵。追加の非致死的サンプリング法は、ミツバチを緩衝液に一時的に浸し、その後それらを放出することによってタンパク質残基を収集することを含む¹⁶。生存分析では、バッファー洗浄されたミツバチと洗浄されていないミツバチとの間に有意差はないことが示されました。各手法には制限があり、特定の研究課題やプロジェクト全体の目標に取り組む際には、この点を考慮する必要があります。

生物の正確な分類学的同定は、効果的な研究にとって重要です。しかし、多くの昆虫花粉媒介者分類群にとって、それは関心のある種と、研究者または観察者の知識と経験レベルに非常に左右されます。多くのミツバチ種を野外で特定できますが、観察を裏付ける証拠を持つことは非常に重要です。ほとんどの花粉媒介者の研究は通常、証拠として個人を収集して保持しますが、写真やビデオの使用、および仮想現実を使用した3次元ビデオ撮影は、観察される個体を犠牲にすることなく特定の種を区別するためのプロキシとして利用できます¹⁷。一部の種間の区別には、特別な注意と特定の形態学的特徴の写真が必要になる場合があります。このような状況では、生物を操作し、複雑な識別特性を確実に撮影できるように、独自の位置に閉じ込めることができなければなりません。

識別のためにミツバチを一時的に閉じ込めることは、標本を冷却する、および/または二酸化炭素を使用してミツバチを遅くするなど、いくつかの方法で行うことができます^18,19。しかし、これらの方法は行動を変える可能性があり、その結果、処理されたミツバチは活動を回復するのが遅くなり、それによって採餌、生物の適応度、または捕食のリスクの増加に影響を与える可能性があります20,21,22。さらに、このような技術は、最終的に生物が閉じ込められて処理される時間を増加させます。これにより、生物のストレスとフィールド処理時間が増加します。したがって、より安全で効率的な方法論が非常に望ましいでしょう。

多くの研究が、ミツバチや他の供給源から収集した花粉を使用して、採餌の好みをよりよく理解し、植物と花粉媒介者の相互作用ネットワークを構築し、環境汚染(残留農薬など)を特定し、栄養生態学を評価しています23,24,25,26,27,28,29.多くのミツバチは、コンテナに閉じ込められていると自分でグルーミングします。したがって、花粉の非致死的なサンプリング方法が利用されてきた³⁰(例えば、微量遠心チューブ)。ただし、セルフグルーミングが行われない場合は、このプロトコルで使用される再封可能なビニール袋など、より触覚的な容器を使用すると、花粉がビニール袋に接触するように特定の体の部分に穏やかな圧力を加えることができ、従来の硬い容器を使用するよりも花粉サンプルを得る可能性が高くなります。

ここでは、リスクのある3つのミツバチ分類群で十分にテストされたプロトコルを紹介します。労働集約的ですが、個々の生物への死亡の脅威を最小限に抑えながら、昆虫の花粉媒介者からの包括的なデータ収集を可能にします。この方法論を使用する全体的な目標は、昆虫を捕獲、識別、および安全に放つための安全で効果的な手段を提供することです。このプロトコルの追加の利点は、従来の昆虫収集の多くの制限を克服することです。これは、個体のマーキング、非致死性の遺伝物質の収集、花粉サンプルの収集を簡単に行う方法を提供し、同時に生物の取り扱い時間とストレスを最小限に抑えます。従来の昆虫収集方法には多くの利点があります^が31、その制限のいくつかを克服するために、迅速かつ安全に放鳥する前に昆虫を特定できるように代替手段を確立しました。プロジェクトの目標によっては、ミツバチが閉じ込められている間に追加の手順を踏んで、他の重要なデータを収集することもできます。

プロトコル

1. フィールド収集の準備

1. プロジェクトの目標を確認します(例:生物の同定、遺伝子組織サンプリングなど)。
2. 資料の表を確認し、プロジェクトの目標に固有のすべての関連項目を収集します。
3. すべてのデジタル機器(スマートフォン、カメラ、ハンドヘルド全地球測位システム(GPS)など)が完全に充電されていること、および予備のバッテリーが充電されて梱包されていることを確認してください。

2. 生物の捕獲と確保

1. フィールドに到着したら、日付、開始時間、フィールドサイト/場所、および必要になる可能性のあるその他の関連情報(気象条件、主要な地被植物、開花中の植物など)など、関心のあるサイトパラメータを記録します(図1)。
2. 適切なネット技術を使用して、関心のある個々のミツバチを捕獲します。空中防虫ネットによる手ネッティングを使用するか、焦点種に基づいてスイープネットを使用します。
   注:バイアル/遠心分離管による収集などの他の捕獲技術も昆虫捕獲に使用できます。
3. ネットバッグを通して標本を視覚的に観察し、対象の分類群に似ているかどうかを判断します。そうでない場合は、試料を安全に解放し、調査を続けます。
4. 標本が焦点種であると思われる場合は、標本が逃げないようにネットバッグ内に固定します(たとえば、ネットバッグの上部をフレームに重ねたり、ネットバッグの首をねじったり閉じ込めたり、潜在的な出口を塞いだりします)。
5. 再封可能なサンプルバッグを集めて、サンプルバッグを開けます。
6. 目的のミツバチがネットバッグの先端近くにあることを確認します。
7. 片手で、標本のすぐ下にあるネットバッグをつかみます。先端(昆虫が閉じ込められている場所)が上を向き、ネットの開口部(つまり、フープ)が下にぶら下がるようにネットバッグを持ちます。
   注:ほとんどの昆虫は光合成性であり、閉じ込められると、一般的に光に向かって飛んだり這ったりします。
8. もう一方の手(つまり、ネットバッグを持っていない手)を使用して、再封可能なサンプルバッグをネット開口部に導き、ネットバッグを通して、サンプルのすぐ下の手に到達するまでガイドします。
9. 手のグリップを慎重に離し、再封可能なサンプルバッグを持っている手が検体と一緒に限られた領域に移動できるように、検体を十分に閉じ込めます。刺されたり、標本を傷つけたり、逃げたりする可能性を減らすために、限られた領域内の標本の位置に注意してください。
10. 再封可能なサンプルバッグを操作して、昆虫標本が入るのに十分な大きさで開きます。これを行うには、シールの両側に圧力をかけるか、親指と中指でシールの下にバッグをひねります。
11. 再封可能なサンプルバッグの開口部を標本の上に置き、昆虫をバッグにそっと動かします。前述のように、ほとんどの昆虫は光合成性であるため、再封可能なサンプルバッグの入った手を太陽/空に向けて、サンプルバッグへの移動を容易にします。
12. 試料が中に入ったら、再封可能なサンプルバッグをしっかりと密封します。
13. 検体が入った再封可能なサンプルバッグを防虫ネットから取り出します。
    注:昆虫は密封された袋の中で迅速かつ致命的に過熱する可能性があるため、標本を直射日光にさらさないように、理想的には日陰の場所または断熱容器に保管してください。

3.生物を特定する

1. 標本を綿密に検査して、関心のある分類群であることを確認します。別の種の場合は、安全に解放して調査を続けてください。
   注意: 標本への害を避けるために、昆虫がバッグの中にある間は、昆虫に直接圧力をかけないでください。プラスチックに穏やかな圧力をかけるか、バッグの周囲を伸ばしてバッグを試験片の周りでピンと張ることで、試験片を固定し、動きを制限することができます。
2. 種の同一性を視覚的に簡単かつ正確に確認できる場合は、写真バウチャーを取ってください(図2)。標本に関する追加の必要な情報(捕獲時間、特定のGPS位置、訪問した植物、固有のマーキング、サイズまたは色の観察、捕獲前の行動など)を記録します。
3. 特定の物理的特徴を検査して身元を確認する必要がある場合は、再封可能なサンプルバッグを通じて、それらの主要な特徴を強調する詳細なマクロ写真を撮ります(図2)。
4. サンプルバッグを通して特徴の識別に十分な品質の写真が得られない場合は、サンプルバッグの2つの密封されていない角の先端(つまり、一緒に縫い合わされているまたは再密封できない角)の1つを切断して、標本の関心のある体部分を綿密な検査のために露出させます。たとえば、頭、腹部、または脚だけが露出するように小さな穴を開けます(図3A-C)。このためには、対象のボディ部分が最初にカット/コーナー穴に向かって移動するように試験片を操作します。
   注意: 必要な写真を撮るには、バッグに開けた穴のサイズと位置、および昆虫の向きを変更する必要がある場合があります。
5. 識別が行われたら、後続の目的の方法に関連するセクションにスキップします。触角セグメントの除去技術についてはセクション4を、昆虫のマーキングについてはセクション5を、花粉サンプルの採取についてはセクション6を参照してください。

4. アンテナから非致死性の遺伝子サンプルを採取する

1. はさみを使用して、再封可能なサンプルバッグの2つの非密封コーナー(つまり、一緒に縫い合わされているまたは再シールできないコーナー)の1つを斜めに切ります。行われたカットがミツバチの頭の幅よりも最小大きくなるようにしてください(図4)。
2. 試験片を操作して、切り口/コーナー穴に向かって頭から移動するようにします。
   注:このステップは、遺伝子解析のために他の組織サンプル(例:脚全体、脚の一部)を採取するように適合させることができます。したがって、必要なサンプルを得るためには、袋に開けられた穴のサイズと位置、および昆虫の向きを変更する必要がある場合があります。
3. ミツバチの頭が袋から突き出たら、周囲のプラスチックにそっと圧力をかけて昆虫の周りをピンと張らせ、動きを制限します(図3A)。
4. 穴が大きすぎる場合は、袋を丸めて穴の開口部をさらに制限し、試料を固定します。適切な穴のサイズがわからない場合は、防虫ネットまたはフライトケージ内で手順4.2および4.3を実行して、標本が完全に逃げないようにします。元のコーナーカットが大きすぎる場合は、追加のバッグを使用してください。
5. 昆虫の頭が収集容器(例えば、緩衝液/エタノールを含む微量遠心チューブ/バイアル)の真上にくるようにバッグを配置し、遺伝子サンプルの容器には、他のすべての標本データに対応する一意の標本IDが適切にマークされるようにします(図3D)。
6. 清潔で滅菌された解剖ハサミを使用して、1つの触角セグメントの一部を切り取ります。容器を目視検査して、サンプルが容器内にあることを確認します。
   注意: 切断するときは、清潔で滅菌された明るい色の基材(Kimwipeなど)で作業すると便利です。これにより、サンプルがサンプル収集容器に落ちない場合でも、汚染のリスクを最小限に抑えながら鉗子で簡単に取り出すことができます。
7. 組織サンプル採取容器の蓋を固定し、サンプルが溶液(緩衝液/エタノールなど)内に浮遊するように容器を回転させます。
8. 組織サンプル採取容器(触角サンプルを含む)は、安全な容器、理想的には直射日光や極端な温度から保護された涼しい日陰の場所(フィールドクーラーなど)に置きます。
9. 標本を元の捕獲点の近くに安全に放出します。
   注:標本は、再視/回収された場合にサンプリングされたことを容易に識別するために、リリース前にマークを付けることもできます(セクション5を参照)。

5.生物のマーキング

1. 検体を再封可能なサンプルバッグに入れた状態で、サンプルバッグの中央に小さな穴を開けます。
   注意: この穴は、セクション 4 で作成した穴に追加されます。穴は昆虫の胸部の面積より大きくてはいけません。穴を開ける場所の位置は、昆虫のサイズと目的のマーキング領域によって異なります。
2. 試料の両側のプラスチックに穏やかな圧力をかけながら、胸部が穴の真下にくるように(つまり、胸部の上部が袋を通して露出するように)昆虫を操作します。穏やかな圧力で続けて、試験片が所定の位置に留まるようにします(図5A)。
   注意: 特定の昆虫には、他のマーキング領域が適している場合があります(図5B)。一部のユーザーは、既存の穴(セクション4から)を大きくし、ミツバチが出てくるときに胸部を保持してミツバチをつかむ方が役立つと感じています(図5C)。このアプローチでは、刺される可能性が高くなる可能性があります。さらに、ミツバチの女王マーキングデバイスは、ユーザーがそれを簡単に見つける場合は、ミツバチを閉じ込めてマーキングするように変更できます。ただし、この方法では別のデバイスに移す必要があり、花粉サンプルを汚染する可能性があります。
3. ペイントマーキングペン(または関心のある分類群に適切と思われる他のマーキング材料)を使用して、所定のプロジェクト固有の方法論に従って標本をマーキングします。
   注:マーキング方法は目標によって異なり、個人が捕捉されたことを示す単純なものもあれば、個人の識別を可能にする複雑なもの(たとえば、固有の色分けやパターン化を使用)があります(図5C)。
4. 貼られたマークが十分に乾くまで、試験片を所定の位置に保持します。
5. マークされた個体を撮影して、固有の色と色の位置を確認します。
   注:再捕獲した個体は、再封可能なサンプルバッグを通じて直接簡単かつ迅速に撮影できます(図5D)。
6. 標本を元の捕獲点の近くに安全に放出します。

6.花粉サンプルコレクション

1. 検体を再封可能なサンプルバッグに入れた状態で、花粉が見えるかどうか注意深く検査します。
   注:花粉の種類と量は大きく異なるため、肉眼では標本に花粉が見えない場合があります。前の手順がすでに完了している場合は、標本の花粉の残りがすでに袋に入っている可能性があります。
2. 試験片に花粉が見える場合は、両側のプラスチックに穏やかな圧力を加えて、試験片の動きを制限します。
3. 指を使って、プラスチックを剛毛または花粉を含む体の部分に優しくこすったり押したりして、花粉の除去を促進します。
4. 標本に花粉が見えない場合は、標本とプラスチックとの接触を最大化して、外皮から小さな花粉の残りが除去されているかどうかを確認します。
5. 可能であれば、花粉が再封可能なサンプルバッグに入っていることを視覚的に確認します(図4)。
6. 標本を元の捕獲点の近くに安全に放出します。
7. 花粉サンプルが入った再封可能なサンプルバッグをしっかりと密封します。
   注:再封可能なサンプルバッグに穴が開けられた場合は、汚染や花粉の損失を避けるために、別の再封可能なサンプルバッグ内に穴を開ける必要があります。
8. 再封可能なサンプルバッグには、個々の昆虫に対応する一意の標本IDおよびその他のデータ(昆虫種ID、日付、場所、時間、性別、花の訪問記録など)をラベル付けします。
9. 再封可能なサンプルバッグには、花粉サンプルを入れた安全な容器、理想的には涼しい場所に置いて、直射日光や極端な温度から保護します。
   注:必要に応じて、フィールドベースの花粉保存のためのプロジェクト固有のプロトコルに従ってください(例:遺伝子分析、花粉形態)。

結果

この方法論は、米国南東部の3つのリスクのあるミツバチ種(Osmia calaminthae、 Caupolicana floridana、 およびC.electa)に使用されています。現在までに、何百匹ものミツバチやハチが無事に集められ、放されています。この方法論を使用している間にミツバチは死にませんでした。バウチャー標本として指定され、適切な管理機関に新しい位置記録として保管されたものは、データ収集後に適切に犠牲にされました。 表1 は、評価された異なる形態学的特徴、ならびにこのプロトコル^{14、32、33、34、35、36}を使用して収集できる他の定量化可能なデータを示す。

図1:現場で収集できるデータを示すデータシートの例。 収集される具体的なデータは、プロジェクトの目標によって異なります。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図2:バウチャーとして使用する写真。 発生のバウチャーとして機能する写真を撮ることは、報告目的で不可欠です。複数の種が類似した特徴を共有する場合、明確な識別特徴の写真が必要です。フロリダで見つかったこの Anthidium maculifrons は、その景観と頭の黄色に基づいて、この属の他のものと区別できます。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図3:再封可能なサンプルバッグに穴を開ける。 再封可能なサンプルバッグの穴の配置は、写真や遺伝子サンプルのために特定の身体部位を露出させるために変更することができます。この合成写真では、(A)ハチの頭、(B)腹部、(C)脚が写真に露出しています。ミツバチが閉じ込められて動けなくなると、多くの場合、休息し、マクロ写真を撮るために位置を合わせることができます。(D)ミツバチがこれらの位置にあるときにも、遺伝子サンプルを採取することができます。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図4:1つの角が斜めにカットされたミツバチのコレクションバッグ。 ミツバチの頭を詳しく観察したい場合は、バッグの角の切り傷のサイズはミツバチの頭のサイズによって異なります。花粉や蜜の分泌物さえも、将来の花粉の識別のためにバッグで見つかるかもしれません。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図5:ミツバチが入った再封可能なサンプルバッグの画像。 ハチに印をつける際に刺されないように、袋に穴を開け、その穴の下に(A)胸部を配置することができます。(B)ミツバチのサイズによっては、腹部に印を付けることもできます。(C)あるいは、ミツバチをコーナーホールから解放し、マーキングのために胸部で圧縮することもできます。この手法は刺される可能性を高める可能性がありますが、ペンの汚れを最小限に抑えるようです。独自のカラーリング/ナンバリングを使用して、個人を区別できます。(D)将来再捕獲された標本は、再封可能なサンプルバッグを通じて迅速かつ容易に撮影し、解放することができます。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

表1:このプロトコルを使用して評価された形態学的特徴。 また、サンプルを操作して、この表に記載されていない多数の形質(例えば、テルガイト/胸骨の形状、全長、重量、歯の数、翼脈、被蓋間距離など)を観察し、文書化することもできます。 この表をダウンロードするには、ここをクリックしてください。

ディスカッション

このプロトコルは、所望の非致死性サンプルまたはバウチャー情報を取得し、焦点となる個体を元の捕獲時点で野生に安全に解放することを最終目標として、希少なミツバチを安全に取り扱い検査するためのフィールド方法を概説しています。バイアルの使用などの他の収集方法よりもこのプロトコルの利点は、標本を安全に閉じ込めて主要な特徴を綿密に調べ、自信を持って識別できるため、昆虫と研究者の両方への害を制限できることです。逆に、他の方法論^18,19の場合と同様に、このプロトコルでは検体に麻酔をかける必要はありません。最小限の操作で迅速にサンプリングおよびリリースできます。再封可能なサンプルバッグは、低コストで入手が容易で、軽量で、携帯性に優れ、リサイクル可能なため、遠心分離管の優れた代替品となっています。一部の代替品(ハヤブサチューブやその他の硬質容器など)の剛性がないため、生きた昆虫標本を取り扱う際には特に注意することが重要です。試験片全体をバウチャーとして受け取る場合は、頑丈な囲いに入れることで、試験片への潜在的な損傷を減らすことができます。

この方法を使用する研究者は、ミツバチや他の昆虫の取り扱い経験があると、袋に入った状態で標本に過度の圧力をかけると怪我や死亡につながる可能性があるため、有益です。ミツバチの取り扱い経験を積むために、初心者の研究者は、より一般的な種(ミツバチなど)を使用してこのプロトコルを実践する必要があります。練習は、昆虫の怪我や死亡を最小限に抑えるのに役立ちます。焦点となる分類群によっては、この方法論に制限がある場合があることに注意することが重要です。特定の分類群のサイズを縮小するには、より高価で特殊なマクロ撮影装置の使用、および/または、この手順にリストされている材料でそれらの特徴を分離して撮影することができないため、フィールド顕微鏡の使用が必要になる場合があり、ターゲットが小さいほど、適切な画像を取得するのが難しくなります³⁷。さらに、アクセスできない身体の部分(舌、性器など)が必要な場合、他の識別方法が正当化される場合があります。生殖器は昆虫の最も有益な診断特性の一つであり、種間で大きく異なり、種内ではある程度安定している可能性がある^38,39。この場合、解剖などの致死的な方法が必要になるかもしれません。しかし、同定が困難な種については、野外採集⁴⁰後の同定のために、小さくて非致死性の遺伝子試料を用いることができ、本明細書に記載の方法論を用いてそのような試料を採取することができる。昆虫同定のためのイメージングとDNAシーケンシングを関連付けるのに役立つ統計モデリングも開発されている⁴¹。

ここで紹介する方法論のもう一つの制限は、このプロトコルを実行するとき、特に袋に穴が開けられているときに刺される可能性に関係しています。ただし、このプロトコルは刺される可能性を最小限に抑えます。著者らは、標本を扱っているときに標本袋に刺されることはめったにありません。また、ミツバチ、カブトムシ、スズメバチの一部の種は下顎骨を使用して袋を切断することができたため、このアプローチが関心のある分類群に有効かどうかを判断する際には注意が必要であり、このような場合は、より厚いビニール袋または他の方法論が推奨されます。いずれの場合も、ユーザーは1回限りのプラスチックの使用を最小限に抑え、可能な場合はリサイクルする必要があります。

このプロトコルの開発の焦点分類群は、青いカラミンタバチ、 Osmia calaminthae (膜翅目:Megachilidae)で、サイズは約10〜11 mmです³²。この方法を開発して以来、著者たちは、より大きな Bombus 種(Hymnenoptera:Apidae)や Caupolicana 種、 C. electa および C. floridana (Hymenoptera:Colletidae)など、さまざまなサイズの他のさまざまな膜翅目でこの方法を採用してきました。 Caupolicana electa は18〜23 mm、 C.floridana は16〜18 mm³³の範囲で変化します。リスクのある種、絶滅の危機に瀕している種、またはリストに掲載されている種への悪影響を最小限に抑えるために、最初に近縁種および/または一般的な代理母で試してみて、経験を積み、習熟度を高めることをお勧めします。ミツバチや他の昆虫の外骨格は異なる場合があるため、堅牢性の低い標本は注意して扱う必要があります。昆虫の体が小さいか柔らかい場合、この方法論では不十分な場合があります。ユーザーは、この方法論のどの部分が自分の焦点分類群に適しているかを判断する必要があります。

野外で採取した生物を同定のために閉じ込めるという主要な目標を超えて、このプロトコルは、ミツバチを安全に閉じ込める必要があるさまざまな研究関連のタスクを実行するように変更することができます。例えば、生物は、再封可能なサンプルバッグの中で現場で計量することができます。研究者は、昆虫が拘束されている間にキャリパーを使用して標本のさまざまな測定を行うこともできます。例えば、ミツバチのホーミング能力の推定は、体型⁴²を用いて行うことができる。私たちの方法論は、そのような推定を容易にするデータを取得するのに役立つ可能性があります。同様に、研究者はキャリパーを使用する代わりに、標本のすぐ後ろに定規/スケールバーやカラーカードを配置して撮影し、後で画像を処理するときに主要な形態学的特徴を測定できます。この手法の将来の応用は、人工知能と機械学習の進歩を活用する可能性があります。現場とラボの両方での識別は、スマートデバイスを使用して合理化できるため、試料の取り扱い時間とストレスを最小限に抑えることができます。

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
30x 60x illuminated jewelers eye loupe magnifier	JARLINK		Hand lens (if necessary) for observing diagnostic characteristics
Aerial hand net
Bleech in wash bottle			Only needed for non-lethal genetic sampling
Blunt-tip kids scissors	Fiskar		Blunt-tip scissors are beneficial because they can safely be kept in pockets
Ethanol in wash bottle			Only needed for non-lethal genetic sampling
FD-1 flash diffuser	Olympus		Flash Diffuser to illuminate specimen while taking voucher photos
Field clipboard
Field cooler
Fine forceps
Fine point oil-based paint marker set	Sharpie		Pens to mark bees
Kimwipes	Kimtech
Microcentrifuge tubes			Only needed for non-lethal genetic sampling
Resealable sample bag	Amazon		Dependent on specimen of interest. We prefer 50.8 mm x 76.2 mm or 50.8 mm x 50.8 mm  - Edvision 2" x 3" Plastic Bags, 200 Count 2 Mil Transparent Resealable Zipper Poly Bags, Reclosable Storage Bags for Jewelry Supplies, Beads, Screws, Small Items  - Soft 'N Style 500 Count Resealable Zipper Poly Bags, 2 by 2-Inch, 50mm by 50mm, Clear
Stainless steel iris dissecting scissors			More precise than blunt-tipped scissors.  Should be kept in a secure location.
TG-7 or similar camera	Olympus		Camera with macro setting to take voucher photos