まず、8週齢から10週齢の麻酔をかけたC57 black 6マウスを手術台に寝かせます。鈍鉗子を使用して、舌を引き出し、保持します。喉頭鏡を口に挿入し、声帯を視覚化します。
ガイドワイヤーを20ゲージの静脈内カテーテルに挿入します。次に、カテーテルを気管にそっと押し込み、翼部分が鼻先と平らになるまで押し込みます。マウスを人工呼吸器に接続し、ヒートランプの下に仰臥位で置きます。
直腸温を摂氏37度に維持します。手術部位を剃って消毒した後、左右の鼠径部を1センチの皮膚切開して大腿動脈にアクセスします。次に、大腿遠位動脈を消毒して結紮し、リドカインを1滴塗布します。
大腿骨近位動脈にクリップを置き、クリップの遠位の動脈に小さな切り込みを入れます。ポリエチレン10カテーテルを左右両方の大腿動脈に挿入します。50マイクロリットルの1〜10ヘパリン化生理食塩水を各動脈ラインに注射します。.
ラインの凝固を防ぐために、マウスを腹臥位に回し、脳定位固定装置ヘッドフレームに取り付けます。左腕、左脚、右腕に3本の針電極を接続し、心電図をモニタリングします。次に、頭のてっぺんを剃り、ヨウ素とアルコールの綿棒を交互に3回交互に消毒します。
2.5センチの正中線皮膚切開を行い、4つの小さなリトラクターを使用して頭蓋骨表面全体を露出させ、脳画像化を行います。次に、レーザースペックルコントラストイメージャーを頭の上に置きます。レーザースペックルイメージャーを調整して、心停止前の脳血管のベースラインを確認します。
心停止を誘発する前に、1ミリリットルのプラスチックシリンジに26マイクロリットルの蘇生カクテルストック溶液を入れます。.体温が摂氏37度に達したら、酸素計を100%に調整して、血液を2分間酸素化します。次に、右大腿動脈から蘇生カクテルが入ったプラスチック製の注射器に最大200マイクロリットルの血液を吸い込みます。
心停止を誘発するには、酸素をオフにし、窒素を100%に増やして酸素欠乏を誘発します。換気装置、イソフルラン気化器、温度コントローラー、窒素流量計の電源を切ります。心停止時に脳血流がないことを確認します。
レーザースペックル画像を観察して、酸素を100%に調整し、心停止開始から8分後に人工呼吸器をオンにします。蘇生カクテルと混合した酸素化された血液をすぐに右大腿動脈の血液循環に注入し、心拍数や血圧などのバイタルを回復させます。レーザースペックル画像を参照して、脳の再灌流が成功したことを確認します。
術後の回復のために、頭部からリトラクターを取り外し、0.25%ブピバカインを皮膚切開部に塗布し、6-0ナイロン縫合糸を使用して切開部を閉じます。次に、閉じた皮膚切開面に抗生物質軟膏を塗布します。マウスの心停止の誘導は、45秒以内に重度の徐脈を引き起こしました。
2分間の無酸素状態の後、心拍数は大幅に低下しました。血圧は水銀柱20ミリメートル以下に低下し、脳血流は停止した。また、心停止の最後には体温が約32°Cまでゆっくりと下がりました。
血液蘇生混合物を注入した後、すべての重要な機能が回復し始めました。レーザースペックルコントラストイメージングは、心停止中の脳内の血流が完全にないことを確認し、光音響画像により、心停止処置中の血流、構造、および酸素化の変化を特定することができました。
