ラットに麻酔と滅菌を行い、12.5倍の手術用顕微鏡の下で15枚刃のメスで剣状突起を水平に切開することにより、新生児ドナーの心臓の採取を開始します。次に、ハサミを使用して、腋窩の両側まで横方向に垂直に切開します。首の下の別の水平切開で前胸壁を取り除きます。
下大静脈(IVC)、左右の上大静脈(SVC)、肺血管をハサミで解剖します。鈍い血管を囲み、7-0の絹縫合糸を使用して結紮します。鉗子で横隔膜をわずかに押し下げ、30ゲージの針でIVCに穴を開けて、3ミリリットルの氷冷した高カリウム修飾クレブスヘンセライト溶液を右心房に投与します。
IVC、SVC、肺血管をハサミで切断します。11番のブレードメスを使用して、肺動脈を可能な限り通過し、腕頭幹から遠位の大動脈を切断することにより、適切な長さを確保します。3ミリリットルの注射器を使用して、氷のように冷えた心筋麻痺溶液で心臓を洗い流します。
麻酔をかけたラットを斜めの棚に置きます。前歯を紐で固定し、頭を外科医の方に向けます。首の外側のライトを声帯の領域に置きます。
2本の指で舌をつかみ、挿管の視認性を最適化するために、舌を上と左にそっと押します。次に、100〜150グラムのラットに18ゲージの2インチのカニューレを使用し、気管内チューブをテープで固定します。挿管カニューレを小動物用人工呼吸器に接続し、製造元の指示に従って、動物のサイズに基づいて設定を調整します。
ラットに挿管した後、15枚刃のメスを使用して正中開腹術を行い、皮膚を切開します。前腹壁をハサミで開き、腸を右上象限に向かって動かします。次に、綿の先端アプリケーターを使用して、後腹膜腹部大動脈とIVCを露出させます。
生理食塩水を染み込ませた温かいガーゼで腸を覆い、リトラクターを使用してIVCと腹部大動脈の最適な露出を維持します。次に、分岐部までの腎下IVCと腹部大動脈の鈍解剖を行います。鈍い腎下分岐動脈と静脈を10-0ナイロン縫合糸で結紮します。
採取したドナーの心臓を、Krebs-Heneseleit緩衝液を含む滅菌手術用洗面器に入れて手術野に輸送します。ドナーの心臓に氷冷した心臓麻痺溶液を断続的に灌漑してください。次に、マイクロハサミを使用して肺幹と下行大動脈を分離し、氷冷した心筋麻痺溶液でドナーの心臓を洗浄します。
次に、4つの非外傷性血管クランプを、腎下大動脈とIVCの遠位および近位セグメントに適用します。マイクロハサミを使用して大動脈切開を行い、2つの小さな水平切断を行います。次に、ドナーの心臓を大動脈の左側に配置します。
レシピエントの尿内大動脈とドナーの上行大動脈を固定し、大動脈切開術の12時位置と6時位置を縫合糸で横に固定します。3時と9時の位置で3番目と4番目の縫合を行い、3回目の縫合の後に心臓を大動脈の左側に静かに反転させます。各間隙に1〜2本の縫合糸を追加して、動脈吻合を完成させます。
次に、ラットを反時計回りに回転させて、頭が外科医の左手を向くようにします。ドナーの心臓を腹部大動脈の左側に移動させて、IVCを最適に見ることができます。大動脈吻合のわずかに近位のIVCで静脈切開を行います。
穿刺用の11枚刃とマイクロハサミを使用して、ドナーの肺幹の直径に応じてサイズを調整し、ヘパリン処理生理食塩水で内腔内腔を洗い流します。次に、レシピエントのIVCとドナーの肺幹の間の静脈吻合術を、12時と6時の位置から血管の後壁に中断された11-0ナイロン縫合糸を配置します。前壁に連続した11-0ナイロン縫合糸を配置し、吸収性ゼラチンスポンジストリップを吻合部の上に置き、遠位から始めて微小血管クランプを取り外します。
冠状動脈血管が満ち、近位クランプが解放されるとすぐにドナーの心臓が鼓動し始めることを確認します。綿の先端アプリケーターを使用してスポンジに軽く圧力をかけ、最適な止血を実現します。動脈と静脈の吻合を歪めないように注意しながら、腸を慎重に腹部に戻します。
腹壁を閉じ、動物が回復するのを待ちます。右心室および左心室の心室中央レベルで切除されたドナー移植片の水平スライスが示されている。組織学的分析により、心内膜線維弾性症組織には大量の組織化されたコラーゲンとエラスチン繊維があることが示されました。
心内膜線維弾性症組織、VE-カドヘリンとα-SMAの二重染色。CD-31、リン酸化SMAD2およびSMAD3、CD-31およびナメクジまたはカタツムリは、内皮から間葉への移行を示しました。
