まず、実行可能ファイルのアイコンをダブルクリックしてソフトウェアアプリケーションを開きます。重鎖と軽鎖のシーケンスを 1 列の下のテキスト ボックスにスペースなしで入力します。二重特異性抗体の場合は、2列の下の2番目のテキストボックスに重鎖または軽鎖を追加します。
重鎖と軽鎖が同一のモノクローナル抗体については、これらのボックスを空白のままにします。これらの重鎖末端バリアントが該当する場合は、[End terminal cyclization] チェックボックスと [C terminal clipping] チェックボックスをオンにします。塩化カルシウムなどの元素組成を用いて、重鎖および軽鎖の化学修飾ボックスに、抗体薬物複合体のリンカーやペイロードなどの化学修飾を添加します。
これらの修飾は、それぞれのタンパク質サブユニットまたは鎖に付加されます。ジスルフィドの総数とマークされたテキストボックスに、タンパク質分子中のジスルフィド結合の数を指定します。還元の程度に応じて、未還元の重鎖ジスルフィド結合の数を未還元の重鎖ジスルフィドテキストボックスに入力し、未還元の軽鎖ジスルフィド結合の数を未還元の軽鎖ジスルフィドテキストボックスに入力します。
モノクローナル抗体の軽鎖にグリコシル化が見られる場合は、軽鎖がグリコシル化されているチェックボックスにチェックを入れます。[参照]ボタンをクリックして、出力フォルダーテキストボックスの出力フォルダーを選択し、ファイル拡張子のない出力ファイル名をExcelファイルの拡張子なしテキストボックスに入力します。次に、[送信]ボタンをクリックします。
質量計算レポートが作成されましたというメッセージが画面に表示され、出力ファイルはユーザー指定のフォルダーにあります。アプリは自動的に閉じます。この表は、さまざまなモノクローナル抗体の化学組成、計算質量、測定質量、質量誤差をまとめたものです。
市販のモノクローナル抗体標準試料は、同一の重鎖、同一の軽鎖、およびFC領域に1つのN-結合型グリコシル化部位を有する従来のモノクローナル抗体を表すために選択されました。また、軽鎖N-結合型グリコシル化付加型モノクローナル抗体、二重特異性モノクローナル抗体、抗体薬物複合型モノクローナル抗体も選択し、用途を拡大しました。計算質量と測定質量の間の小さな質量誤差は、通常の質量誤差の許容基準内であり、計算された質量が正確であることを示唆しています。
