宿主細胞タンパク質濃縮のためのモノクローナル抗体(mAb)溶液の調製

まず、モノクローナル抗体製剤を適切に希釈して、宿主細胞のタンパク質を濃縮します。1ミリリットルあたり50ミリグラムを超える濃度の医薬品を希釈するには、2ミリリットルのマイクロ遠心チューブ内の15ミリグラムのモノクローナル抗体に脱イオン水を加えます。濃度が50ミリグラム/ミリリットル未満の医薬品の場合は、20ミリグラムを10キロダルトンの遠心フィルター装置に移します。

内容物を室温で 25 分間 14 、 000 G で遠心分離し、約 100 マイクロリットルの溶液をチューブに残します。次に、pH 6 の 10 ミリモルのヒスチジン緩衝液 350 マイクロリットルをフィルターに加え、その後、室温で 25 分間 14 、 000 G で遠心分離する前にチューブをボルテックスします。フィルターをひっくり返して、サンプル採取チューブに入れます。

サンプルを室温で1000 Gで5分間遠心分離し、コレクションチューブ内の溶液全体を回収します。200マイクロリットルの10ミリモルヒスチジンバッファーをフィルターに加え、ピペットで上下させて残りのタンパク質サンプルを回収します。溶液全体を同じコレクションチューブに移します。

前述したように、ボルテックスとスピンダウンを行います。ナノドロップでサンプル濃度を測定した後、ヒスチジン緩衝液を添加して50ミリグラム/ミリリットルに調整します。最後に、300マイクロリットルのサンプルを2ミリリットルのマイクロ遠心チューブに移します。